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99mTc-HYNIC-siRNA靶向分子探针制备及其在肺腺癌CXCR4mRNA表达的显像实验研究 预览
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作者 赵钰鋆 杨光杰 +3 位作者 王振光 龚爱迪 颜蕾 苗文杰 《精准医学杂志》 2019年第1期34-38,共5页
目的制备基于小干扰RNA(siRNA)的放射性分子探针,探讨其在肺腺癌模型中靶向检测趋化因子受体4(CXCR4)信使RNA(mRNA)的SPECT显像价值。方法 以双功能螯合剂肼基烟酰胺(HYNIC)进行99mTc放射性标记,制备CXCR4mRNA靶向的干扰组探针及无关序... 目的制备基于小干扰RNA(siRNA)的放射性分子探针,探讨其在肺腺癌模型中靶向检测趋化因子受体4(CXCR4)信使RNA(mRNA)的SPECT显像价值。方法 以双功能螯合剂肼基烟酰胺(HYNIC)进行99mTc放射性标记,制备CXCR4mRNA靶向的干扰组探针及无关序列的对照组探针99mTc-HYNIC-siRNA,测定标记率、放化纯度及体外稳定性。干扰组及对照组探针经尾静脉注射荷瘤鼠体内(各5只)120min后进行SPECT显像。计算肿瘤与对侧肩部本底放射性摄取比值(T/NT)。显像后处死小鼠,进行肿瘤、肝、肾、脾、心脏、肺体外组织显像。结果 成功制备了99mTc-HYNIC-siRNA探针,干扰组以及对照组的标记率分别为(55.09±2.81)%、(54.38±2.94)%,放化纯度均大于90%。探针在人血清以及生理盐水中120min内可以保持稳定。注射探针后120minSPECT显像可见干扰组肿瘤部位明显放射性浓聚,而对照组肿瘤部位放射性稀疏。干扰组与对照组T/NT比值分别为3.190±0.029、1.153±0.049,差异有显著统计学意义(t=57.68,P<0.01)。体外组织显像同样显示,干扰组肿瘤放射性摄取明显高于对照组肿瘤。结论 99mTc-HYNIC-siRNA靶向探针制备简单,在肺腺癌模型中具有靶向CXCR4mRNA的SPECT显像性能,有望为临床肺癌及其他肿瘤活体内靶基因检测提供有效手段。 展开更多
关键词 肺肿瘤 肿瘤 实验性 RNA 小分子干扰 RNA探针 受体 CXCR4 单光子发射计算机体层摄影术 小鼠
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辣椒轻斑驳病毒葫芦岛分离物RNA杂交检测体系的建立
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作者 周涛 于曼 +2 位作者 张鑫宇 安梦楠 吴元华 《中国植保导刊》 北大核心 2018年第12期8-13,共6页
辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMoV)可引起辣椒叶片以及果实的花叶和畸形症状,造成相当的经济损失。为了建立辣椒轻斑驳病毒的高特异性和灵敏度的分子检测体系,采用非放射性的化合物地高辛(DIG)标记检测PMMoV正义链的RNA探... 辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMoV)可引起辣椒叶片以及果实的花叶和畸形症状,造成相当的经济损失。为了建立辣椒轻斑驳病毒的高特异性和灵敏度的分子检测体系,采用非放射性的化合物地高辛(DIG)标记检测PMMoV正义链的RNA探针,建立了该病毒Dot blot杂交和Northern blot杂交检测体系,并通过RT-PCR法验证了杂交体系的检测特异性。结果表明,RNA探针对PMMoV具有很高的检测特异性和灵敏度,适用于病毒的早期检测以及相关分子研究。 展开更多
关键词 辣椒轻斑驳病毒 特异性检测 DOT blot杂交 NORTHERN blot杂交 RNA探针
地高辛标记Ucp2基因RNA探针的制备和应用
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作者 刘志贞 加三三 +5 位作者 张凯丽 孙雨晴 赵虹 郝宇卉 牛勃 李美宁 《中国生物工程杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期55-58,共4页
目的:制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法:提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT-PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM-T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通... 目的:制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法:提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT-PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM-T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通过Sp6及T7 RNA聚合酶,获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后,通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果:成功获得Ucp2基因正义、反义探针,反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达,而正义探针未能检测到表达信号。结论:成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA原位杂交探针,为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达,尤其在神经组织的定位奠定基础。 展开更多
关键词 UCP2 RNA探针 全胚胎原位杂交
烟草花叶病毒辽宁分离物Northern杂交检测体系的建立 预览
4
作者 李艳丽 安梦楠 +1 位作者 王冠中 吴元华 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2017年第4期137-142,共6页
为了建立烟草花叶病毒辽宁分离物(TMV-LN)的高特异性、高灵敏度的分子杂交检测体系,从粗提纯的TMV-LN粒子中提取RNA,设计特异性引物通过RT-PCR扩增TMV-LN的CP和3'端非翻译区域,将片段连至p UC119载体获得重组质粒p UCTMV-PP,体外转... 为了建立烟草花叶病毒辽宁分离物(TMV-LN)的高特异性、高灵敏度的分子杂交检测体系,从粗提纯的TMV-LN粒子中提取RNA,设计特异性引物通过RT-PCR扩增TMV-LN的CP和3'端非翻译区域,将片段连至p UC119载体获得重组质粒p UCTMV-PP,体外转录获得地高辛(DIG)标记的TMV-LN正义链RNA杂交检测探针,同时构建DNA检测探针作为对照。采用点印迹(Dot-blot)杂交和Northern杂交对比RNA探针和DNA探针对TMV-LN的检测特异性和灵敏性。检测结果表明,RNA探针和DNA探针在点印记杂交和Northern杂交中均表现出良好的检测特异性,RNA探针在检测灵敏度方面要略好于DNA探针,且点印迹杂交体系在病毒定性方面较为快捷,Northern杂交体系在病毒基因组RNA的定量方面具有明显优势。 展开更多
关键词 烟草花叶病毒辽宁分离物 RNA探针 DNA探针 点印迹杂交 NORTHERN杂交
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Irx5a在野生型斑马鱼早期发育中的表达 预览
5
作者 舒莉萍 何志旭 +1 位作者 许威 丁可军 《贵阳医学院学报》 CAS 2016年第7期755-759,共5页
目的:观测Irx5a基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:利用Trizol法提取斑马鱼胚胎的总RNA,应用RT-PCR方法扩增Irx5a 基因,将其克隆入pCS^2+质粒中,经菌落PCR、双酶切法及DNA测序鉴定正确后,利用体外转录体系... 目的:观测Irx5a基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:利用Trizol法提取斑马鱼胚胎的总RNA,应用RT-PCR方法扩增Irx5a 基因,将其克隆入pCS^2+质粒中,经菌落PCR、双酶切法及DNA测序鉴定正确后,利用体外转录体系制备Irx5a的反义mRNA探针;用该反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交。结果:构建和鉴定了Irx5a-pCS^2+重组质粒,经斑马鱼全胚胎原位杂交检测Irx5a基因的表达,发现从3.7 hpf开始有表达,并且在胚胎神经系统和造血系统都有明显表达。结论:Irx5a基因可能参与了Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育早期的神经系统和造血系统的发育。 展开更多
关键词 Irx5a pCS^2+质粒 DNA 重组 RNA探针 全胚胎原位杂交技术
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地高辛标记的黄鳝F64基因cRNA探针的制备及其应用 预览 被引量:1
6
作者 蒋骄云 田文斐 +1 位作者 冯龙 曲宪成 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期137-141,共5页
以黄鳝F64基因序列为模板设计引物,扩增用于c RNA探针合成的模板,构建F64/p GM-T重组质粒并线性化,利用RNA聚合酶体外转录合成正、反义c RNA探针,并对其进行地高辛标记,利用原位杂交方法检测F64基因在黄鳝性腺发育过程中的表达变化情况... 以黄鳝F64基因序列为模板设计引物,扩增用于c RNA探针合成的模板,构建F64/p GM-T重组质粒并线性化,利用RNA聚合酶体外转录合成正、反义c RNA探针,并对其进行地高辛标记,利用原位杂交方法检测F64基因在黄鳝性腺发育过程中的表达变化情况。结果显示,正义探针未检测到阳性信号,反义探针检测到该基因在黄鳝性腺发育早期不表达,于V期性腺开始表达。研究结果表明,体外转录法可以有效合成c RNA探针,制备的c RNA探针可以准确检测F64基因的时空表达。 展开更多
关键词 黄鳝F64基因 性腺发育 c RNA探针 原位杂交
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小鼠xist探针载体的构建及鉴定
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作者 白光宇 申景岭 +1 位作者 孙瑞珍 雷蕾 《解剖科学进展》 CAS 2015年第4期364-366,共3页
目的构建xist探针载体并检验其合成出的探针效果。方法 B6D2F1 BAC(R3026)经PCR扩增获得xist基因,与双酶切的pSPT19质粒连接,经转化及测序鉴定pSPT19-xist载体构建成功。将构建好的pSPT19-xist载体线性化,并体外转录为RNA探针,应用荧... 目的构建xist探针载体并检验其合成出的探针效果。方法 B6D2F1 BAC(R3026)经PCR扩增获得xist基因,与双酶切的pSPT19质粒连接,经转化及测序鉴定pSPT19-xist载体构建成功。将构建好的pSPT19-xist载体线性化,并体外转录为RNA探针,应用荧光原位杂交检测雌性B6D2F1小鼠成纤维细胞内的xist表达。结果经琼脂糖凝胶电泳,获得目的基因xist条带。基因测序证实所检测重组质粒序列与xist基因序列完全一致。体外雌性小鼠成纤维细胞检测到xist阳性表达。结论成功构建xist基因pSPT19-xist重组质粒和RNA探针,并在成纤维细胞阳性表达。 展开更多
关键词 B6D2F1鼠 载体构建 RNA探针 成纤维细胞
鸡整胚原位杂交RNA探针的制备 预览
8
作者 陈丽 陀杨娟 孙晋虎 《广西医科大学学报》 CAS 2015年第1期8-10,共3页
目的:建立一种快速、简便、高效的鸡胚整胚原位杂交地高辛标记的RNA探针的制备方法。方法:应用RT-PCR方法从鸡胚总RNA中扩增目的片段,连接到PGM-T克隆载体上,分别利用PGM-T载体中的SP6和T7 RNA 聚合酶上的启动子,以线性化的DNA为... 目的:建立一种快速、简便、高效的鸡胚整胚原位杂交地高辛标记的RNA探针的制备方法。方法:应用RT-PCR方法从鸡胚总RNA中扩增目的片段,连接到PGM-T克隆载体上,分别利用PGM-T载体中的SP6和T7 RNA 聚合酶上的启动子,以线性化的DNA为模板体外转录成地高辛标记的正反义 RNA探针。结果:成功得到地高辛标记的 RNA 探针,探针在鸡整胚原位杂交中有杂交信号。结论:成功转录得到地高辛标记的正反义探针,为后续的以鸡胚为模型整胚原位杂交试验做好了探针的准备。 展开更多
关键词 鸡胚 RNA探针 整胚原位杂交 地高辛
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东亚三角涡虫Djtraf3基因的时空表达模式 预览 被引量:1
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作者 范晓静 周鲁明 +1 位作者 刘殿辰 赵博生 《生物加工过程》 CAS 2015年第2期47-52,共6页
肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)作为TRAF家族的成员之一,通过介导TLRs信号通路,参与动物的免疫反应。通过构建东亚三角涡虫Djtraf3的cDNA文库获得Djtraf3基因并分析基因结构。结果发现,该最大开放阅读框为564bp,编码的蛋白质含187... 肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)作为TRAF家族的成员之一,通过介导TLRs信号通路,参与动物的免疫反应。通过构建东亚三角涡虫Djtraf3的cDNA文库获得Djtraf3基因并分析基因结构。结果发现,该最大开放阅读框为564bp,编码的蛋白质含187个氨基酸,含有1个TRAF结构域。进化分析表明,DjTRAF3和果蝇的TRAF3聚群,位于进化树的基部;整体原位杂交结果显示,在涡虫成体及不同再生阶段,Djtraf3在整个肠部表达。这些结果为进一步探究其功能提供了依据和方向。 展开更多
关键词 东亚三角涡虫 Djtraf3 DIG-labeling RNA探针 原位杂交
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RNA探针的化学修饰及其应用研究
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作者 王莎莎 顾大勇 《热带医学杂志》 CAS 2015年第2期267-271,共5页
RNA探针技术是指能够识别特异核苷酸序列的一段带标记或不带标记的单链RNA分子,通过碱基互补配对原则对特异核酸序列进行杂交检测的一种方法。它是研究核酸结构与功能的重要手段,在分子生物学中具有相当重要的作用。基于RNA分子的不稳定... RNA探针技术是指能够识别特异核苷酸序列的一段带标记或不带标记的单链RNA分子,通过碱基互补配对原则对特异核酸序列进行杂交检测的一种方法。它是研究核酸结构与功能的重要手段,在分子生物学中具有相当重要的作用。基于RNA分子的不稳定性,RNA探针技术的实际应用受到了极大限制。为了提高RNA分子的生物稳定性,人们提出了各种化学修饰方法,如核糖环修饰、磷酸二酯键修饰、碱基修饰等。 展开更多
关键词 RNA探针 化学修饰 稳定性
定量表达和整体原位杂交研究Doublesex基因在不同生殖状态蚤状溞的表达 预览
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作者 周伟 陈萍 +4 位作者 邱成功 周健凯 郭晓鸽 王丹丽 赵云龙 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1655-1662,共8页
为研究doublesex(dsx)基因在不同生殖状态的蚤状溞的时空表达状况,提取不同生殖状态的蚤状溞RNA,采用RT-PCR和Quantitative real-timePCR检测了dsx在不同生殖状态溞体的表达差异,并通过体外转录制备DIG标记的Doublesex的RNA探针;... 为研究doublesex(dsx)基因在不同生殖状态的蚤状溞的时空表达状况,提取不同生殖状态的蚤状溞RNA,采用RT-PCR和Quantitative real-timePCR检测了dsx在不同生殖状态溞体的表达差异,并通过体外转录制备DIG标记的Doublesex的RNA探针;采用整体原位杂交方法研究dsx基因在不同生殖状态的蚤状溞的时空表达状况。结果显示,RT-PCR检测发现dsx在雌雄溞体没有性别特异性的选择性拼接,只有一种相同的转录产物。Real-time PCR显示,dsx在雄溞中表达水平最高,是孤雌溞的2.6倍,两性雌溞的4.9倍,三者之间有显著性差异,表现出性别差异性表达。整体原位杂交发现,在所取样的不同生殖状态溞体中dsx基因也均有表达,但其部位与表达量不同,且在雌雄溞体中表现出性别差异。在雄溞的第一触角和第一胸肢显现得尤为明显,且在复眼中也有表达。孤雌溞和两性雌溞对应部位表达则相对较弱。结果表明,dsx基因很有可能在调控蚤状溞生殖转换和性别分化上起到很大作用。 展开更多
关键词 蚤状溞 doublesex基因 RNA探针 整体原位杂交
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Tex13基因非放射性原位杂交探针的制备 预览
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作者 霍涌玮 邱曙东 +6 位作者 周庆 李莹 聂蓉 FRIEL P MITCHELL D SMALL C GRISWOLD MD 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期 131-134,共4页
目的研究制备地高辛(DIG)标记的Tex13(testis expressed gene 13)基因非放射性原位杂交探针,用于检测小鼠性腺Tex13基因的表达。方法采用RT-PCR方法扩增Tex13靶序列,将其插入带SP6和T7 RNA聚合酶启动子的pGEM-T Easy质粒,转入大肠杆... 目的研究制备地高辛(DIG)标记的Tex13(testis expressed gene 13)基因非放射性原位杂交探针,用于检测小鼠性腺Tex13基因的表达。方法采用RT-PCR方法扩增Tex13靶序列,将其插入带SP6和T7 RNA聚合酶启动子的pGEM-T Easy质粒,转入大肠杆菌DH10B,经蓝白斑筛选获得重组质粒,用T7和SP6引物对重组质粒进行PCR扩增,以此PCR产物为模板,以DIG RNA Labeling Mix为底物,经SP6 RNA聚合酶和T7 RNA聚合酶体外转录,分别制备DIG标记的反义链和正义链RNA探针。结果应用正常小鼠睾丸组织非放射性原位杂交实验,证实制备的探针具有较高的特异性和敏感性。结论 DIG标记Tex13基因杂交探针的成功制备,为进一步研究Tex13基因在小鼠性腺中的表达定位和发育规律以及它在减数分裂过程中的作用提供了实验基础。 展开更多
关键词 Tex13 生殖细胞 减数分裂 RNA探针 原位杂交
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用RNA-RNA原位杂交技术研究Robo2在早期鸡胚发育中的表达 预览 被引量:1
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作者 林艳青 亓翠玲 +6 位作者 吴婷 徐涛 韩哲 王尽淘 耿建国 杨雪松 王丽京 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期 2368-2372,共5页
目的:探讨Robo2(roundabout homolog 2)在早期鸡胚发育中的表达。方法:利用分子生物学手段,构建Robo2/pSPT18重组质粒,并且制备地高辛标记的Robo2 RNA探针,进而通过RNA-RNA原位杂交技术检测Robo2在早期鸡胚发育中的表达。结果:原... 目的:探讨Robo2(roundabout homolog 2)在早期鸡胚发育中的表达。方法:利用分子生物学手段,构建Robo2/pSPT18重组质粒,并且制备地高辛标记的Robo2 RNA探针,进而通过RNA-RNA原位杂交技术检测Robo2在早期鸡胚发育中的表达。结果:原条发生前Robo2表达较弱,原条发生后主要表达在原条和神经板。体节期Robo2主要表达在脊索、神经管、体节和血岛部位。冰冻切片后观察到Robo2主要表达在外胚层,而在中胚层和内胚层只有部分表达。结论:阐明了Robo2在早期鸡胚发育中的表达,为进一步研究Robo2在正常生理和病理条件下的功能及作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 ROUNDABOUT homolog2 早期鸡胚 RNA探针 原位杂交
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整体原位杂交检测ERα基因在小鼠胚胎发育中的表达 预览 被引量:4
14
作者 张子峰 樊少华 +4 位作者 陆军 吴冬梅 单群 胡斌 郑元林 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期 39-44,共6页
为制备地高辛标记的小鼠雌激素受体α(ERα)RNA探针,用其研究ERα在小鼠胚胎发育过程中的表达。通过RT-PCR,获得ERα基因片段,构建ERα/pGEM-3Z重组质粒,分别用Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ进行酶切得到线性化DNA片段,以T7和Sp6聚合酶合成... 为制备地高辛标记的小鼠雌激素受体α(ERα)RNA探针,用其研究ERα在小鼠胚胎发育过程中的表达。通过RT-PCR,获得ERα基因片段,构建ERα/pGEM-3Z重组质粒,分别用Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ进行酶切得到线性化DNA片段,以T7和Sp6聚合酶合成地高辛标记的正反义RNA探针,然后通过胚胎整体原位杂交技术分析ERα在小鼠胚胎中的表达。结果构建了ERα/pGEM-3Z质粒,获得高效价的正反义dig-ERαRNA探针。运用该探针检测到ERα在10.5dpc胚胎的前脑、脊神经管、生殖嵴、肢芽及颌弓中表达,在13.5dpc胚胎的端脑、中脑、脊髓、肢芽及生殖系统中表达,为进一步研究ERα在小鼠胚胎发育中的功能打下了基础。 展开更多
关键词 雌激素受体α(ERα) RNA探针 整体原位杂交 小鼠胚胎
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应用体外转录法和荧光素制备RNA探针的技术 预览
15
作者 宁俊红 孙文夏 陈东戎 《药物生物技术》 CAS CSCD 2008年第1期 28-30,共3页
为建立一种快速制备RNA探针的方法,以研究不同的RNA与RNA之间的相互作用,介绍一种用体外转录法制备RNA,然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)纯化得到纯化的RNA,最后用荧光素标记得到RNA探针的新方法,用该方法制备RNA探针简便、高... 为建立一种快速制备RNA探针的方法,以研究不同的RNA与RNA之间的相互作用,介绍一种用体外转录法制备RNA,然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)纯化得到纯化的RNA,最后用荧光素标记得到RNA探针的新方法,用该方法制备RNA探针简便、高效、安全,尤其适合小剂量RNA探针的制备。 展开更多
关键词 体外转录法 荧光素 RNA探针 制备技术
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鸡SP-mRNA探针制备及其在INR的杂交反应 预览 被引量:3
16
作者 冯亚玫 柳金雄 +1 位作者 刘仪 陈秋生 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期 117-122,共6页
应用RT-PCR方法从鸡脑中扩增P物质(Substance P,SP)基因片段,将其连接于pGM-T质粒并转化大肠杆菌,挑取阳性克隆,测序鉴定为目的片段。分别利用pGM-T质粒中T7和SP6启动子及T7和SP6RNA聚合酶,以线性化的SP/pGM-T为模板转录合成正、反义... 应用RT-PCR方法从鸡脑中扩增P物质(Substance P,SP)基因片段,将其连接于pGM-T质粒并转化大肠杆菌,挑取阳性克隆,测序鉴定为目的片段。分别利用pGM-T质粒中T7和SP6启动子及T7和SP6RNA聚合酶,以线性化的SP/pGM-T为模板转录合成正、反义DIG标记RNA探针。通过原位杂交(in situ hybridization histochemistry,ISHH)技术,用新合成的探针探查SP-mRNA在鸡肠Remak神经(Intestinal nerve of Remak,INR)中的分布情况。结果表明,鸡INR中SP-mRNA阳性神经元数量众多,在空、回肠段和直肠段INR中的阳性细胞分别占总神经元的82.98%和98.01%。阳性细胞呈多突起的椭圆形或梭形,在INR神经节中较有规律地层状分布或成群出现,在神经节边缘分布更为密集,并且在节间束也有少量的阳性细胞分布。本研究从基因水平证明INR中大部分神经元有SP的mRNA转录,这些神经元作为外来的SP神经纤维可以支配到肠道和输卵管。 展开更多
关键词 肠Remak神经 P物质 RNA探针 原位杂交
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应用MTD试剂盒对结核分枝杆菌复合群进行快速检测的评价 预览 被引量:2
17
作者 桂晓虹 梅建 王奕峰 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期 805-808,共4页
目的应用结核分枝杆菌直接检测(MTD)试剂盒对临床痰液样本及分离的结核分枝杆菌复合群,进行检出率和常规菌型鉴定法符合率的比较和评价。方法将10株标准菌种(其中1株为H37Rv、9株为非结核分枝杆菌)、94株临床分离菌株(其中48株经... 目的应用结核分枝杆菌直接检测(MTD)试剂盒对临床痰液样本及分离的结核分枝杆菌复合群,进行检出率和常规菌型鉴定法符合率的比较和评价。方法将10株标准菌种(其中1株为H37Rv、9株为非结核分枝杆菌)、94株临床分离菌株(其中48株经常规生化方法分型鉴定为结核分枝杆菌,46株分型法鉴定为非结核分枝杆菌)和40份临床痰标本分别用法国生物梅里埃公司生产的AMPLIFIED—MTD试剂盒进行检测。结果结核分枝杆菌复合群检测均呈阳性,非结核分枝杆菌检测均呈阴性,符合率均达到100%。临床痰标本用MTD检测的阳性检出率为65%(26/40),明显高于直接涂片法的12%(5/40)、培养方法的12%(5/40)、集菌涂片法的25%(10/40)。结论MTD试验是一套新的生物学检测技术,具有快速、灵敏的特点。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 RNA探针 核酸扩增技术
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生长抑素前体蛋白1和前脑啡肽原mRNA在鸡肠Remak神经中的分布 预览 被引量:2
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作者 柳金雄 冯亚枚 陈秋生 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第2期 294-302,共9页
肠Remak神经(Intestinal nerve of Remak,INR)是禽类特有的一根自主神经节链,但INR中肽类递质的分布至今仍然存在许多疑问。本文应用RT-PCR方法从鸡脑组织提取的RNA中扩增生长抑素前体蛋白1(Somatostatin precursor 1,PSS1)和前... 肠Remak神经(Intestinal nerve of Remak,INR)是禽类特有的一根自主神经节链,但INR中肽类递质的分布至今仍然存在许多疑问。本文应用RT-PCR方法从鸡脑组织提取的RNA中扩增生长抑素前体蛋白1(Somatostatin precursor 1,PSS1)和前脑啡肽原(Preproenkephalin,PPE)基因片段,将其连接于pGM-T easy质粒,经过转化大肠杆菌、挑取阳性克隆和测序鉴定,确定为目的片段。分别以线性化的SS1/pGM-T easy和PPE/pGM-T easy质粒为模板,用体外转录的方法合成正反义地高辛标记RNA探针。通过原位杂交方法将合成的探针用于探查PPE和PSS1 mRNA在鸡空回肠段和直肠段INR中的分布情况。结果表明:INR中大部分神经细胞中有PPE和PSS1的mRNA的转录,其中PPE探针杂交阳性细胞在空回肠段和直肠段INR分别占83.79%±7.96%和96.04%±4.53%,而PSS1探针在空回肠段和直肠段INR中的杂交阳性细胞分别占86.98%±7.93%和86.07%±6.11%;在整个INR中都可能有PPE和PSS1 mRNA共存于同一神经细胞的现象;原位杂交阳性神经细胞胞体呈有突起的梭形或椭圆形,其纵轴与INR延伸的方向平行;阳性神经细胞胞体在INR神经节中呈层状或成群分布,在节间束也有少量的阳性细胞分布。本文从基因水平证明INR中大量神经细胞进行PPE或PSS1的mRNA的转录,并可能作为外源性生长抑素1和脑啡肽能神经纤维支配到肠壁和输卵管. 展开更多
关键词 鸡肠Remak神经 生长抑素前体蛋白1 前脑啡肽原 原位杂交 RNA探针
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鸡血管活性肠肽RNA探针制备及其在鸡肠Remak神经的原位杂交反应 预览 被引量:3
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作者 柳金雄 冯亚玫 +1 位作者 张晖 陈秋生 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期 111-115,共5页
应用RT-PCR方法从鸡脑中扩增血管活性肠肽(VIP)基因片段,将其连接于pGM-T easy。分别利用pGM-T easy中T7和SP6启动子及其RNA聚合酶,以线性化的VIP/pGM-Teasy为模板转录合成正、反义DIG标记RNA探针。通过原位杂交方法将合成的探针用于... 应用RT-PCR方法从鸡脑中扩增血管活性肠肽(VIP)基因片段,将其连接于pGM-T easy。分别利用pGM-T easy中T7和SP6启动子及其RNA聚合酶,以线性化的VIP/pGM-Teasy为模板转录合成正、反义DIG标记RNA探针。通过原位杂交方法将合成的探针用于探查VIP-mRNA在鸡肠Remak神经(INR)中的分布情况。结果表明,INR的神经元胞体中有VIP-mRNA的转录,且这种神经元数量众多;原位杂交阳性神经元胞体大部分是大型神经元细胞,呈圆形或椭圆形;阳性神经元胞体在INR神经节中呈层状或成群分布。INR的神经纤维呈弱阳性。在节间束也有少量的阳性细胞分布。本研究从基因水平证明INR中有VIP神经元存在。 展开更多
关键词 鸡肠Remak神经 血管活性肠肽(VIP) 原位杂交 RNA探针
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核酸探针技术 预览 被引量:2
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作者 岳朝宽 《中学生物学》 2006年第6期 7-8,共2页
着重对核酸探针的标记物、种类、检测原理等作出总结,并对它的应用前景作出展望。
关键词 RNA探针 单链DNA探针 双链DNA探针 核酸探针技术 中学 生物学 应用前景 检测原理 标记物
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