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糖尿病模型小鼠拔牙后对颌牙牙合向伸长过程中 根周骨密度及相关因子的变化 预览
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作者 杨晓叶 李文晋 +2 位作者 朱莉 王瑜 张双元 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第2期242-247,共6页
背景:牙列缺失是常见的口腔疾病,若得不到及时有效的治疗,就会出现邻牙倾斜、对颌牙伸长等不良影响,造成牙合紊乱以及牙合干扰,严重影响后期修复。尤其是糖尿病患者牙列缺失后,对颌牙在牙合向伸长过程中,糖尿病对其有何影响?骨连接蛋白... 背景:牙列缺失是常见的口腔疾病,若得不到及时有效的治疗,就会出现邻牙倾斜、对颌牙伸长等不良影响,造成牙合紊乱以及牙合干扰,严重影响后期修复。尤其是糖尿病患者牙列缺失后,对颌牙在牙合向伸长过程中,糖尿病对其有何影响?骨连接蛋白在此过程如何变化?目前尚不清楚。目的:通过建立糖尿病小鼠对颌牙牙合向伸长运动实验模型,研究糖尿病对小鼠牙齿牙合向伸长运动过程的影响。方法:向C57 BL/6J小鼠(购买于山西医科大学动物实验中心)腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,以腹腔注射柠檬酸钠缓冲液的小鼠为对照。取建模成功的糖尿病小鼠与对照组小鼠各30只,拔除右上颌3颗磨牙建立对颌牙牙合向伸长运动实验模型,术后0,3,6,9,12 d,取右侧下颌骨,利用Micro CT测量骨密度,抗酒石酸酸性磷酸酶染色计数破骨细胞数量,RT-qPCR检测骨连接蛋白基因的表达。实验方案经山西医科大学伦理委员会批准。结果与结论:①随着时间的延长,两组右侧下颌骨的骨密度逐渐增加,糖尿病组术后3,6,9,12 d的骨密度低于对照组(P<0.05);②随着时间的延长,两组右侧下颌骨的破骨细胞数量逐渐增多,糖尿病组术后3,6,9,12 d的破骨细胞数量少于对照组(P<0.05);③随着时间的延长,两组右侧下颌骨的骨连接蛋白基因表达量逐渐升高,糖尿病组术后0,3,6,9,12 d的骨连接蛋白基因表达量高于对照组(P<0.05);④结果表明,糖尿病可降低牙齿牙合向伸长运动过程中的骨改建能力并提高骨连接蛋白基因表达。 展开更多
关键词 糖尿病小鼠 牙齿牙合向伸长 Micro CT 骨密度 破骨细胞 抗酒石酸酸性磷酸酶染色 骨连接蛋白 RT-QPCR
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TRV介导的E3泛素连接酶基因NbE 3R14沉默对烟草基础免疫及南方根结线虫寄生的影响 预览
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作者 刘琳硕 贺祥 +2 位作者 李红梅 元青 王暄 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期65-71,共7页
[目的]本文旨在研究E3泛素连接酶基因的沉默对植物基础免疫及线虫寄生的影响,为揭示植物寄生线虫侵染寄主的分子机制提供理论依据。[方法]利用烟草脆裂病毒(TRV)介导的基因沉默技术(VIGS)沉默本氏烟E3泛素连接酶基因NbE 3R14,用flg22处... [目的]本文旨在研究E3泛素连接酶基因的沉默对植物基础免疫及线虫寄生的影响,为揭示植物寄生线虫侵染寄主的分子机制提供理论依据。[方法]利用烟草脆裂病毒(TRV)介导的基因沉默技术(VIGS)沉默本氏烟E3泛素连接酶基因NbE 3R14,用flg22处理基因沉默烟草叶片,RT-qPCR检测PTI(病原相关分子模式触发免疫,PAMPs-triggered immunity)相关基因的表达水平;接种辣椒疫霉于基因沉默烟草叶片,观察叶片病斑症状;采用室内人工接种法测定靶基因的沉默对南方根结线虫寄生的影响。[结果]RT-qPCR检测显示:农杆菌转化的烟草植株中NbE 3R14基因已被成功沉默,flg22处理基因沉默烟草叶片激发的PTI相关基因GRAS 2、WRKY7及WRKY8表达量分别下降41.3%、63.9%及61.8%,与野生型对照(WT)相比均有显著性差异(P<0.05);接种辣椒疫霉36 h后,TRV∷NbE 3R14处理烟草叶片的病斑比WT增大28.5%;南方根结线虫在TRV∷NbE 3R14处理植株上产生的根结数、雌虫数及卵块数与WT相比分别显著增加22.1%、27.4%和17.2%(P<0.05),单卵块卵量则没有差异;而在TRV∷GFP处理植株上产生的根结数、雌虫数、卵块数以及单卵块卵量与WT均无明显差异。[结论]沉默NbE 3R14基因能干扰植物基础免疫,从而导致烟草对辣椒疫霉及南方根结线虫的侵染更为感病。 展开更多
关键词 E3泛素连接酶 病毒介导的基因沉默 RT-QPCR 辣椒疫霉 南方根结线虫
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应用实时荧光定量RT-PCR高效检测葡萄病毒B
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作者 任芳 张尊平 +3 位作者 范旭东 胡国君 张梦妍 董雅凤 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期569-576,共8页
本研究建立了葡萄病毒B的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测技术。该技术标准曲线扩增效率102.4%,相关系数0.999,最低检测限达10-4倍稀释cDNA,灵敏度为常规RT-PCR的100倍。重复性试验组内和组间变异系数分别为0.00%~0.65%和0... 本研究建立了葡萄病毒B的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测技术。该技术标准曲线扩增效率102.4%,相关系数0.999,最低检测限达10-4倍稀释cDNA,灵敏度为常规RT-PCR的100倍。重复性试验组内和组间变异系数分别为0.00%~0.65%和0.02%~2.00%,表明检测稳定性好。该技术对田间葡萄样品检测适用范围广,对枝条和老叶柄检测效果最好,冬季枝条和春夏秋季所有老叶柄样品检出率均为100%,与常规RT-PCR检测结果一致。对于其他季节或部位样品,RT-qPCR检出率(43%~74%)则普遍高于常规RT-PCR(5%~71%),特别是春季样品和春夏秋季所有嫩叶样品,检出率比常规RT-PCR分别高31%和38%。对来自我国13个省21个品种的52份田间葡萄样品检测结果表明,RT-qPCR共检测到6个样品为阳性,检出率11.5%,为常规RT-PCR(检出率5.8%)的2倍。 展开更多
关键词 葡萄 葡萄病毒B 实时荧光定量RT-PCR 常规RT-PCR
新型血浆外参照设计及核酸检测分析的研究
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作者 古骄阳 牛凯 +4 位作者 余永新 郑林鹏 杨峤 张露萍 孙建国 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期1239-1245,共7页
目的设计新型血浆外参照(plasma external reference,PLACON),用于人类血浆mRNA、miRNA的检测分析。方法从低级别物种秀丽隐杆线虫基因组中选取一段保守序列,利用BLAST检索PLACON序列的特异性,设计成为新型血浆外参照。以恶性肿瘤患者... 目的设计新型血浆外参照(plasma external reference,PLACON),用于人类血浆mRNA、miRNA的检测分析。方法从低级别物种秀丽隐杆线虫基因组中选取一段保守序列,利用BLAST检索PLACON序列的特异性,设计成为新型血浆外参照。以恶性肿瘤患者血浆样品及癌细胞株上清液,利用实时荧光定量PCR法,在血浆或细胞上清液中分别以PLACON、β-actin、GAPDH、U6为参照,检测血浆mRNA、miRNA和细胞上清液mRNA并进行对比分析。结果 BLAST检索出PLACON序列具有较好的特异性,与人类基因组无交叉性。熔解曲线均显示RT-qPCR反应特异性较高,PLACON在血浆中mRNA水平扩增的循环阈值(cycle threshold,CT)均显著低于GAPDH、β-actin(P<0.01),在血浆中miRNA水平扩增的CT值显著低于U6(P<0.01)。PLACON在癌细胞上清中进行mRNA扩增实验的验证,得到相似的结果。结论 PLACON序列特异性好,在血浆中比内参照更有优势,稳定性更高,扩增效率更高,可用于血浆mRNA、miRNA的定量检测。 展开更多
关键词 外参照 内参照 RT-QPCR 血浆miRNA
半滑舌鳎gata5基因的克隆及表达分析 预览
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作者 董忠典 张宁 +2 位作者 崔忠凯 徐文腾 陈松林 《广东海洋大学学报》 CAS 2019年第3期6-14,共9页
【目的】研究半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)gata5基因(csgata5)的序列特征及该基因在半滑舌鳎性腺分化、成熟过程中的表达模式。【方法】通过克隆获得csgata5编码区序列,利用荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测csgata5 mRNA在不同类型性... 【目的】研究半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)gata5基因(csgata5)的序列特征及该基因在半滑舌鳎性腺分化、成熟过程中的表达模式。【方法】通过克隆获得csgata5编码区序列,利用荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测csgata5 mRNA在不同类型性腺、胚胎和性腺发育中的表达模式,借助原位杂交技术定位csgata5 mRNA表达的细胞类型。【结果】克隆获得csgata5 cDNA序列1 777 bp,包含1 167 bp的编码区(Coding sequence,CDS),262 bp的5′UTR和348 bp的3′UTR区,预测csgata5编码388个氨基酸残基(aa),分子质量为41.9 ku,等电点为8.90,在C端含有两个典型的GATA锌指结构域;基因组分析显示csgata5位于半滑舌鳎10号染色体上,包含7个外显子和6个内含子区。RT-qPCR分析显示csgata5 mRNA在2龄雄鱼和伪雄鱼精巢中表达高于卵巢;csgata5m RNA主要定位在卵母细胞、精原细胞和精子中。胚胎发育过程中,csgata5m RNA表达在1细胞期至囊胚期呈下降趋势,之后上升,至原肠胚期达到峰值,随后降低并维持较低水平至孵化出膜。在精巢发育过程中,csgata5m RNA表达水平呈升高趋势,在1龄达到检测的峰值;在卵巢发育过程中,csgata5m RNA表达趋势类似精巢,表达水平低于同期精巢。【结论】csgata5参与半滑舌鳎原肠胚期的组织器官分化,具有促进原始生殖细胞向雄性生殖细胞分化及雄性生殖细胞发育的作用。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 gata5 RT-QPCR 原位杂交 性腺分化
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蓖麻WOX转录因子家族成员的全基因组分析及逆境胁迫响应 预览
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作者 韩雯毓 李国瑞 +5 位作者 风兰 闫星伊 白英俊 李孟建 孙佳欣 陈永胜 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1921-1927,共7页
WOX是植物中特有的一类转录因子,参与植物发育和应激反应。为探究蓖麻基因组WOX转录因子信息,本研究通过生物信息学方法鉴定出11个蓖麻WOX转录因子家族成员,并对其系统发育、基因结构、保守基序及理化性质等基本信息进行鉴定与分析。结... WOX是植物中特有的一类转录因子,参与植物发育和应激反应。为探究蓖麻基因组WOX转录因子信息,本研究通过生物信息学方法鉴定出11个蓖麻WOX转录因子家族成员,并对其系统发育、基因结构、保守基序及理化性质等基本信息进行鉴定与分析。结果显示,11个WOX成员被分为三个进化支,在古代进化支、中间进化支和现在进化支分别有2、2和7个成员,同一进化支成员的外显子、基因结构具有相似性,但理化性质差异较大。利用RT-qPCR检测根、茎、叶不同组织中5个蓖麻RcWOXs基因在干旱与盐胁迫下表达情况,结果表明,RcWOXs在不同组织中的表达具有特异性;除RcWOX10受干旱胁迫抑制外,RcWOX2、RcWOX4、RcWOX8和RcWOX9在干旱和盐胁迫下均被诱导表达,表明RcWOX转录因子在蓖麻逆境胁迫中起调控作用。本研究结果为进一步探究蓖麻WOX转录因子家族在逆境胁迫中的功能提供了一定的理论参考。 展开更多
关键词 蓖麻 WOX转录因子 生物信息学分析 逆境胁迫 RT-QPCR
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黄野螟精氨酸激酶基因的鉴定与表达分析 预览 被引量:1
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作者 王春燕 吕子豪 林同 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期39-46,共8页
为了探索精氨酸激酶(arginine kinase,AK)在昆虫中的功能,经筛选黄野螟(Heortia vitessoides)成虫转录组数据库获得黄野螟精氨酸激酶基因,命名为HvAK(GenBank:MH794282),对其进行生物信息学、各虫态和幼虫组织的定量分析,并通过检测HvA... 为了探索精氨酸激酶(arginine kinase,AK)在昆虫中的功能,经筛选黄野螟(Heortia vitessoides)成虫转录组数据库获得黄野螟精氨酸激酶基因,命名为HvAK(GenBank:MH794282),对其进行生物信息学、各虫态和幼虫组织的定量分析,并通过检测HvAK在高温及低温胁迫条件下的表达水平,揭示HvAK基因在黄野螟生长发育中的作用。结果显示:该序列开放阅读框长1 068 bp,共编码355个氨基酸;同源比对结果表明HvAK与家蚕(Bombyx mori)AK基因同源性最高,为94.10%;实时荧光定量PCR结果显示,黄野螟在所检测的各幼虫组织和发育阶段均有表达,其中在头部的表达量较高,在5龄幼虫阶段到达表达量最高峰;此外,高、低温均诱导HvAK表达量上调,推测HvAK基因在黄野螟生长发育过程中可能参与抵御外界不良环境。 展开更多
关键词 黄野螟 精氨酸激酶 RT-QPCR 基因表达谱 温度胁迫
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RT-PCR检测HUTP14A mRNA时排除假基因HUTP14C干扰的方法
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作者 许阁阁 刘小锋 +1 位作者 张春凤 杜晓娟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1155-1165,共11页
人类U3蛋白14C基因(HUTP14C)是人类U3蛋白14A基因(HUTP14A)的假基因。两者转录本序列同源性高达95%。常规RT-qPCR技术在检测HUTP14A mRNA丰度时,HUTP14C的存在会影响检测结果。本研究旨在建立检测HUTP14A mRNA时排除HUTP14C干扰的RT-PC... 人类U3蛋白14C基因(HUTP14C)是人类U3蛋白14A基因(HUTP14A)的假基因。两者转录本序列同源性高达95%。常规RT-qPCR技术在检测HUTP14A mRNA丰度时,HUTP14C的存在会影响检测结果。本研究旨在建立检测HUTP14A mRNA时排除HUTP14C干扰的RT-PCR方法。本研究设计出能分别从多种肿瘤细胞DNA和RNA中特异性扩增HUTP14A和HUTP14C的引物,避免假基因HUTP14C对其同源基因HUTP14A检测的干扰。在检测细胞系HUTP14A mRNA时,通过DNaseⅠ消除RNA中污染的HUTP14C DNA,用靶向HUTP14C 3'-UTR的siRNA沉默HUTP14C mRNA后,再用RT-PCR检测HUTP14A mRNA丰度,使结果更加准确。在18对肝癌及癌旁组织中,利用特异性引物进行RT-PCR检测,HUTP14A和HUTP14C mRNA的表达略高于癌旁组织。本研究提示,针对有假基因存在的功能基因,对其mRNA丰度进行检测时,在提取细胞或组织总RNA后,用DNaseⅠ处理,再用RNA直接进行PCR扩增,排除DNA污染后,再进行RT-PCR或RT-qPCR扩增。大多假基因具有较长的3'-UTR区,在该区域设计siRNA特异性沉默假基因的mRNA后,用RT-qPCR检测功能基因的mRNA丰度,可以排除假基因mRNA的影响。在病理组织中检测功能基因的mRNA丰度时,可以根据假基因和其功能基因的序列差异设计出特异扩增功能基因的引物,从假基因的3'-UTR区设计特异扩增假基因的引物,通过RT-qPCR技术分别检测二者的mRNA。 展开更多
关键词 人类U3蛋白14A基因 人类U3蛋白14C基因(HUTP14C) 假基因 RT-QPCR 肝癌
不结球白菜BcCNL基因的克隆及功能分析 预览
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作者 刘唱 杨洋 +5 位作者 俞静 李燕 刘海龙 张昌伟 侯喜林 李英 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期229-235,共7页
[目的]CC-NBS-LRR(卷曲螺旋-核苷酸结合位点-富含亮氨酸重复,CNL)是高度保守的植物抗病蛋白家族。本文旨在克隆和研究CNL基因在不结球白菜抗霜霉病中的作用。[方法]以‘苏州青’cDNA为模板克隆获得BcCNL基因全长,并进行生物信息学分析... [目的]CC-NBS-LRR(卷曲螺旋-核苷酸结合位点-富含亮氨酸重复,CNL)是高度保守的植物抗病蛋白家族。本文旨在克隆和研究CNL基因在不结球白菜抗霜霉病中的作用。[方法]以‘苏州青’cDNA为模板克隆获得BcCNL基因全长,并进行生物信息学分析、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测、亚细胞定位及病毒诱导基因沉默(VIGS)验证。[结果]BcCNL基因含有2790bp开放阅读框,编码929个氨基酸,蛋白质相对分子质量为226.7,等电点为2.7。系统进化树结果显示,不结球白菜BcCNL蛋白与野甘蓝的进化关系最近,含有RX-CC、NB-ARC和LRR-3结构域;亚细胞定位显示其定位于细胞膜上。霜霉菌侵染后,BcCNL基因在抗病品种‘苏州青’中的表达量高于感病品种‘矮脚黄’;BcCNL基因的沉默降低了‘苏州青’对霜霉病的抗性。[结论]BcCNL蛋白在进化过程中保守性较高,定位于细胞膜上,BcCNL基因的沉默降低了‘苏州青’对霜霉病的抗性。 展开更多
关键词 不结球白菜 BcCNL RT-QPCR 亚细胞定位 病毒诱导基因沉默(VIGS)
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宫颈癌中卵泡抑素样蛋白过表达对下游基因的影响及生物信息学分析 预览
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作者 张红 洛若愚 +2 位作者 胡晓霞 陈欢 王琳琳 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2019年第1期26-31,共6页
目的利用基因芯片技术对卵泡抑素样蛋白(FSTL1)下游基因及信号转导通路进行生物信息学分析,探讨FSTL1在宫颈癌中的调控机制。方法采用基因芯片筛选转染FSTL1后HeLa细胞中的差异表达基因;运用生物信息学分析方法寻找FSTL1在宫颈癌中的差... 目的利用基因芯片技术对卵泡抑素样蛋白(FSTL1)下游基因及信号转导通路进行生物信息学分析,探讨FSTL1在宫颈癌中的调控机制。方法采用基因芯片筛选转染FSTL1后HeLa细胞中的差异表达基因;运用生物信息学分析方法寻找FSTL1在宫颈癌中的差异表达基因及调控机制;用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)对29个差异表达基因加以验证。结果与阴性对照组相比,实验组中有881个差异表达基因,这些差异表达基因主要富集在转录调控、细胞增殖、凋亡、黏附等生物学过程以及癌症的转录误调节、丝裂源活化的蛋白激酶(MAPK)、P53等信号通路;RTqPCR验证结果显示FSTL1上调PI3K/AKT/Bax/Bcl-2和P53信号相关通路因子,这与基因芯片结果基本符合。结论FSTL1的差异基因富集于转录调控、细胞增殖、凋亡、黏附等生物学过程,可能通过调控PI3K/AKT/Bax/Bcl-2和P53信号通路来参与宫颈癌的发生发展。 展开更多
关键词 宫颈癌 卵泡抑素样蛋白 基因芯片 生物信息学 RT-QPCR
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黄野螟糖原磷酸化酶基因的时空表达动态及其对温度胁迫的响应 预览
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作者 吕子豪 王春燕 林同 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期276-283,共8页
[目的]本文旨在鉴定重要林业害虫黄野螟(Heortia vitessoides Moore)的糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase,GP)基因,并分析其序列、时空表达特征及对温度胁迫的响应,为进一步研究黄野螟的抗寒机制奠定基础。[方法]基于黄野螟转录组文... [目的]本文旨在鉴定重要林业害虫黄野螟(Heortia vitessoides Moore)的糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase,GP)基因,并分析其序列、时空表达特征及对温度胁迫的响应,为进一步研究黄野螟的抗寒机制奠定基础。[方法]基于黄野螟转录组文库获得GP基因的全长cDNA序列,通过同源比对和系统发育树对其进行鉴定,利用RT-qPCR分析其时空表达谱及对温度胁迫的响应。[结果]将筛选出的基因命名为HvGP(GenBank登录号:MG517442),其开放阅读框(ORF)长2526bp,共编码841个氨基酸。蛋白序列相似性比对和系统进化关系分析表明:HvGP与亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)对应蛋白的相似性最高(95%),亲缘关系最近;与烟粉虱(Bemisia tabaci)对应蛋白相似性最低(78%),亲缘关系较远。RT-qPCR分析显示:HvGP在5龄幼虫虫态时表达量最高,为对照的1.77倍;HvGP在黄野螟不同组织均有表达,且在组织间存在表达差异,幼虫脂肪体的表达量是其体壁的72.85倍;在成虫阶段,翅中表达量最高,足中最低。在5、10、15、20℃低温胁迫下,HvGP的表达量均高于对照处理(25℃),在30、35、40℃高温胁迫下,HvGP的表达量呈逐渐下降趋势。[结论]根据黄野螟不同发育阶段与不同组织表达模式推测,HvGP可能与黄野螟的组织分化、摄食及运动等生命活动有关。HvGP基因在温度胁迫下的响应表明HvGP能响应低温信号,高温与HvGP的表达量存在负相关关系。 展开更多
关键词 黄野螟 糖原磷酸化酶 温度胁迫 RT-QPCR
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PhoR/PhoP双组分系统对枯草芽胞杆菌NCD-2菌落形态和芽胞形成的影响
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作者 郭庆港 王培培 +7 位作者 董丽红 苏振贺 张晓云 宋健 赵卫松 鹿秀云 李社增 马平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期552-559,共8页
双组分PhoR/PhoP是枯草芽胞杆菌中普遍存在的以低磷为信号的调控系统。前期研究发现,PhoR/PhoP双组分系统正调控枯草芽胞杆菌NCD-2菌株脂肽类抗生素fengycin的合成,本研究分析了PhoR/PhoP双组分系统对NCD-2菌株菌落形态和芽胞形成的影... 双组分PhoR/PhoP是枯草芽胞杆菌中普遍存在的以低磷为信号的调控系统。前期研究发现,PhoR/PhoP双组分系统正调控枯草芽胞杆菌NCD-2菌株脂肽类抗生素fengycin的合成,本研究分析了PhoR/PhoP双组分系统对NCD-2菌株菌落形态和芽胞形成的影响。在有机磷培养基上,NCD-2野生型菌株可以降解有机磷并且形成表面褶皱、立体结构较强的菌落形态,而phoR或phoP基因突变子丧失了降解有机磷的能力,菌落表面光滑、平坦。phoR和phoP基因突变子的互补菌株恢复到了与野生型相似的解磷能力和菌落形态。在低磷和高磷培养基中比较了NCD-2野生型及其衍生菌株的生长及芽胞形成情况,结果表明,在高磷培养基中,NCD-2野生型及其衍生菌株的生长速率没有差异,但在低磷培养基中,phoR和phoP基因突变子的菌体生长速率显著降低。芽胞形成能力测定结果表明,在低磷培养基中,NCD-2野生型菌株的芽胞形成率较高,而phoR和phoP基因突变子的芽胞形成率显著降低;在高磷培养基中,NCD-2野生型及其衍生菌株芽胞形成率普遍较低并且无显著差异。RT-PCR分析显示,phoR和phoP的突变均显著降低了芽胞形成相关基因spo Ⅱ GA的表达,相比感应激酶PhoR,调控因子PhoP对spo Ⅱ GA基因的影响更显著。 展开更多
关键词 枯草芽胞杆菌 PhoR/PhoP双组分系统 芽胞 RT-qPCR
啤酒腐败菌耐乙酸乳杆菌种特异性检测体系的建立与应用 预览
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作者 曹伟华 罗娜 +6 位作者 孙义玄 涂京霞 刘静 王德良 郝建秦 栾春光 包怡红 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第21期53-59,共7页
以耐乙酸乳杆菌的3个特异性基因为靶标,设计并优化了3对耐乙酸乳杆菌的特异性引物,建立了基于SYBR GREEN实时荧光定量PCR的耐乙酸乳杆菌定性定量检测的标准检测(standard operation procedure,SOP)方法。利用耐乙酸乳杆菌CN247的基因组... 以耐乙酸乳杆菌的3个特异性基因为靶标,设计并优化了3对耐乙酸乳杆菌的特异性引物,建立了基于SYBR GREEN实时荧光定量PCR的耐乙酸乳杆菌定性定量检测的标准检测(standard operation procedure,SOP)方法。利用耐乙酸乳杆菌CN247的基因组DNA作为标准品绘制了标准曲线,实现了对耐乙酸乳杆菌的定量检测,耐乙酸乳杆菌的最低检测限可达100 CFU/mL,精度可达10 CFU/mL。大生产样品在培养基中富集培养48 h后即可满足检测的要求,检出率为100%,整个检测时间控制在3 d以内,满足了啤酒企业对出厂产品快速检测的质量控制要求。 展开更多
关键词 耐乙酸乳杆菌 RT-QPCR 特异性引物 定性定量检测 标准检测方法
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棉花根系分泌物对枯草芽胞杆菌NCD-2菌株趋化性的影响
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作者 董丽红 郭庆港 +6 位作者 张晓云 赵卫松 王培培 苏振贺 鹿秀云 李社增 马平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期399-407,共9页
枯草芽胞杆菌NCD-2菌株在不同棉花品种根际定殖能力表现不同,在感黄萎病品种冀棉11根际的定殖能力最强,而在耐病品种中棉所41根际的定殖能力最弱。本研究收集了5个不同棉花品种的根系分泌物,测定了NCD-2菌株对根系分泌物的趋化作用,结... 枯草芽胞杆菌NCD-2菌株在不同棉花品种根际定殖能力表现不同,在感黄萎病品种冀棉11根际的定殖能力最强,而在耐病品种中棉所41根际的定殖能力最弱。本研究收集了5个不同棉花品种的根系分泌物,测定了NCD-2菌株对根系分泌物的趋化作用,结果表明NCD-2菌株对冀棉11根系分泌物的趋化作用最强,而对中棉所41根系分泌物的趋化作用最差。通过柱前衍生高效液相色谱法(AccQ-Tag-HPLC)测定了根系分泌物中氨基酸的成分及含量,结果表明不同氨基酸在不同棉花品种中含量不同。冀棉11的根系分泌物中氨基酸种类最多,可达17种。在中棉所41的根系分泌物中氨基酸种类最少且大多数氨基酸含量均为最低。测定了NCD-2菌株对14种氨基酸标准品的趋化性,结果表明NCD-2菌株对精氨酸(Arg)、丙氨酸(Ala)和赖氨酸(Lys)趋化性最强,但对甘氨酸(Gly)呈现负趋化性。RT-qPCR试验表明冀棉11的根系分泌物可提高cheA和cheD基因在NCD-2菌株中的表达量。室内防治试验表明,NCD-2菌株对冀棉11黄萎病的防效最好,防治效果可达到66.68%。本研究明确了棉花根系分泌物中氨基酸对NCD-2菌株趋化性的影响,该菌株在棉花根际定殖能力与棉花根系分泌物中氨基酸对本菌株的趋化性相一致。 展开更多
关键词 枯草芽胞杆菌 根系分泌物 液相色谱 趋化性 RT-QPCR
巴哈雀稗PnDREB2基因克隆及时序表达图谱构建 预览
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作者 张宇君 王普昶 +4 位作者 赵丽丽 曾庆飞 张雄 陈超 董瑞 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期7-15,共9页
脱水反应元件结合蛋白(DREBs)在植物非生物逆境胁迫中可调节下游一系列抗逆基因的表达。为探究巴哈雀稗DREB2基因在逆境胁迫下的功能,本研究采用RNA-Seq结合RT-PCR技术从巴哈雀稗中获得一个DREB2基因CDS区全序列,命名为PnDREB2(GenBank... 脱水反应元件结合蛋白(DREBs)在植物非生物逆境胁迫中可调节下游一系列抗逆基因的表达。为探究巴哈雀稗DREB2基因在逆境胁迫下的功能,本研究采用RNA-Seq结合RT-PCR技术从巴哈雀稗中获得一个DREB2基因CDS区全序列,命名为PnDREB2(GenBank登录号:MH150946)。核苷酸序列分析表明,该基因开放阅读框全长774 bp,编码257个氨基酸,相对分子质量为28.09 kD,理论等电点为5.25;该植物蛋白中具有DREB类基因家族典型的保守域AP2结构域,属于DREB2类转录因子A类中A2亚类的亚型1。进化和聚类分析结果表明,巴哈雀稗PnDREB2基因与高粱、割手密、玉米、谷子及牛鞭草亲缘关系较近,氨基酸序列同源性分别为91.10%、89.50%、88.20%、87.60%和87.60%。RT-qPCR和生物信息学分析表明,PnDREB2基因在茎中表达量最高,幼穗次之,叶最低;表达产物定位于细胞质中,具有26个磷酸化位点,并具有结构和功能的特异性。PnDREB2表达量受干旱(PEG-6000,20%)和高温(40℃)的强烈诱导,同时也受到高盐(NaCl,300 mmol·L^-1)、低温(4℃)、脱落酸(ABA,100μmol·L^-1)和赤霉素(GA,100μmol·L^-1)等非生物胁迫和激素的不同程度诱导,随着处理时间的延长,整体上均呈先增加后降低的趋势。本试验为巴哈雀稗抗逆分子机理研究与抗性增强的转基因材料培育奠定了理论基础。 展开更多
关键词 巴哈雀稗 非生物胁迫 RNA-SEQ RT-QPCR 时序表达
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核桃(Juglans regia L.)MicroRNA实时荧光定量RT-PCR内参基因的筛选
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作者 周丽 全绍文 +2 位作者 马丽 徐航 牛建新 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期2270-2278,共9页
RT-qPCR是目前应用最广泛的基因表达分析方法,选择合适的内参基因对数据进行标准化至关重要。结合geNorm、Normfinder和RefFinder 3个软件分析了8个候选miRNA内参基因在核桃不同分化期花芽与叶芽、不同组织及不同品种中的表达稳定性。... RT-qPCR是目前应用最广泛的基因表达分析方法,选择合适的内参基因对数据进行标准化至关重要。结合geNorm、Normfinder和RefFinder 3个软件分析了8个候选miRNA内参基因在核桃不同分化期花芽与叶芽、不同组织及不同品种中的表达稳定性。结果显示,jre-miR394a,jre-miR159a和jre-miR159c可作为不同分化期花芽中基因表达分析的内参;5.8S rRNA和jre-miRn3可作为不同分化期叶芽中基因表达分析的内参;5.8S rRNA,jre-miRn3、jre-miR159b-3p和jre-miR159c可作为不同组织中基因表达分析的内参;jre-miR159b-3p,jre-miR159c和jre-miR159a可作为不同品种中基因表达分析的内参。5.8S rRNA不适合作为不同分化期花芽和不同品种中基因表达分析的内参。本研究为核桃miRNA表达分析中的数据标准化提供数据支持和理论参考。 展开更多
关键词 核桃(Juglans regia L.) MICRORNA RT-QPCR 内参基因
不同日龄和羽型太行鸡卵巢繁殖调控基因的表达分析
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作者 张乐超 王晗 +4 位作者 张秀玲 王麒 周荣艳 李兰会 李祥龙 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期171-177,共7页
旨在mRNA水平上研究催乳素受体(PRLR)、促卵泡激素受体(FSHR)、雌激素受体2 (ESR2)、多巴胺受体2(DRD2)和血管活性肠肽(VIP)5个繁殖调控基因在5个不同日龄的太行鸡卵巢中的表达变化,为太行慢羽鸡的高产蛋性能提供依据。应用RT-qPCR方法... 旨在mRNA水平上研究催乳素受体(PRLR)、促卵泡激素受体(FSHR)、雌激素受体2 (ESR2)、多巴胺受体2(DRD2)和血管活性肠肽(VIP)5个繁殖调控基因在5个不同日龄的太行鸡卵巢中的表达变化,为太行慢羽鸡的高产蛋性能提供依据。应用RT-qPCR方法检测快慢羽太行鸡卵巢组织中5个基因的mRNA相对表达量,2-ΔΔCt表示的相对表达量进行羽型和日龄的差异分析,2-ΔCt表示的相对表达量进行基因间相关性分析。结果显示,52(育雏末期)~300d(产蛋高峰期)太行鸡PRLR表达持续升高,慢羽鸡表达均高于快羽鸡,且在250d产蛋高峰期慢羽鸡表达显著高于快羽鸡((1.20±0.23)vs(0.58±0.16),P<0.05);但0d表达最高并显著高于其他日龄(P<0.05),且快羽鸡表达显著高于慢羽((2.76±0.00)vs(0.70±0.54),P<0.05);FSHR表达量随日龄逐渐降低,但慢羽鸡表达均高于快羽鸡,且在0,52d显著高于快羽鸡((23.97±1.28)和(12.93±4.37)vs (18.00±0.00)和(6.00±2.15),P<0.05);DRD2表达呈现波动降低,0d慢羽鸡表达显著高于快羽鸡((51.86±9.42)vs(15.88±0.00),P<0.05);5个日龄ESR2表达慢羽鸡均高于快羽鸡,且在250d产蛋高峰期慢羽鸡显著高于快羽鸡((2.71±0.75)vs(1.11±0.40),P<0.05);VIP表达在139(开产期)~300d(产蛋高峰期)逐渐升高,产蛋高峰慢羽鸡表达高于快羽鸡但差异不显著(P>0.05)。PRLR和FSHR对卵巢卵泡发育发挥关键作用,与慢羽太行鸡的高产蛋水平密切相关;DRD2、ESR2和VIP在太行鸡发育和产蛋过程中表达波动变化,对PRLR和FSHR的表达存在调控作用影响太行鸡的产蛋性能。 展开更多
关键词 太行鸡 羽型 日龄 卵巢 RT-QPCR
结直肠癌细胞多腺苷酸化元件结合蛋白1mRNA的临床价值研究 预览
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作者 邢慧 杨珍妮 +1 位作者 胡小翠 刘丹 《现代消化及介入诊疗》 2019年第11期1256-1259,共4页
目的本研究旨在评估细胞质多腺苷酸化元件结合蛋白1(CPEB1)mRNA与结直肠癌患者术后转移相关临床结局之间的关系。方法采用荧光实时定量PCR检测221例结直肠癌标本和30例配对正常结肠上皮CPEB1 mRNA表达,并计算肿瘤与正常上皮细胞的表达... 目的本研究旨在评估细胞质多腺苷酸化元件结合蛋白1(CPEB1)mRNA与结直肠癌患者术后转移相关临床结局之间的关系。方法采用荧光实时定量PCR检测221例结直肠癌标本和30例配对正常结肠上皮CPEB1 mRNA表达,并计算肿瘤与正常上皮细胞的表达比值。通过免疫组织化学检测30例结直肠癌患者的CPEB1蛋白表达,并对CPEB1 mRNA比值与临床病理特征与预后的关系进行了评估。结果CPEB1 mRNA水平升高的结直肠癌标本CPEB1 mRNA比值的中位数为1.57(范围为1.01~3.45),而CPEB1 mRNA水平降低者比值为0.53(范围0.23~1.00)。CPEB1蛋白水平表达组织化学评分与CPEB1 mRNA水平显著相关(P=1.43×10-4)。较低的CPEB1 mRNA比值与淋巴结受累显著相关,而肿瘤组织中CPEB1 mRNA比值降低患者的总中位生存时间显著低于升高患者(P=2×10-5)的。CPEB1 mRNA比值降低与无进展生存时间短显着相关(P=0.001)。多变量分析证实,CPEB1 mRNA的下调是总生存期和无进展生存期短的独立危险因素(P=2.31×10-4;P=0.002)。结论较低的CPEB1 mRNA比值是结直肠癌患者预后差的独立预测因子。 展开更多
关键词 RNA结合蛋白 癌症 预后 RT-QPCR 免疫组织化学
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银鲫crh基因的克隆、组织表达谱及其对摄食的影响 预览
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作者 周朝伟 雷骆 +11 位作者 邓星星 袁登越 杨旻珉 曹高祥 朱海星 李岩 朱成科 李代金 唐仁军 张桂众 李路宽 郑宗林 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2019年第3期69-79,共11页
为研究crh(Corticotropin-releasing hormone)基因对鱼类摄食的调控作用,首次克隆了银鲫(Carassius auratus gibelio)crh基因cDNA全长序列。运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测crh基因mRNA在不同组织的表达及餐前、餐后和禁食对其表... 为研究crh(Corticotropin-releasing hormone)基因对鱼类摄食的调控作用,首次克隆了银鲫(Carassius auratus gibelio)crh基因cDNA全长序列。运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测crh基因mRNA在不同组织的表达及餐前、餐后和禁食对其表达的影响。结果显示,银鲫crh基因的cDNA序列全长为920 bp,其中,5-UTR为53 bp,3-UTR为378 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为489 bp。推导银鲫crh基因的ORF区编码蛋白由162个氨基酸组成,其中,含有11个氨基酸的保守区,24个氨基酸的信号肽,41个氨基酸的成熟肽。氨基酸序列的多重比较分析显示,银鲫crh基因与金鱼(Carassius auratus)的同源性为99%,与鲤(Cyprinus carpio)的同源性为96%。荧光定量PCR表达分析显示,银鲫crh基因在下丘脑中的表达量最高,其次是端脑和心脏。crh基因的表达量在餐前与餐后没有显著变化(P>0.05),在禁食第5天、第7天出现极显著降低(P<0.01),而在复投喂后第9天、第11天出现极显著升高(P<0.01)。以上结果显示,crh基因在银鲫摄食调控方面可能扮演着重要角色。 展开更多
关键词 银鲫 crh基因 RT-QPCR 基因表达 摄食调控
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Differential IL10 mRNA Profiles Associated to <i>Babesia bovis</i>and <i>B. bigemina</i>Infection Levels in Persistently Infected Animals 预览
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作者 Talita Barban Bilhassi Rodrigo Giglioti +4 位作者 Cintia Hiromi Okino Wilson Malagó Júnior Henrique Nunes de Oliveira Cíntia Righetti Marcondes Márcia Cristina de Sena Oliveira 《兽医学(英文)》 2019年第11期161-169,共9页
This work aimed to find quantitative phenotypic traits that can be used to discriminate the levels of resistance/susceptibility to B. bovis and B. bigemina in two groups of cattle presenting the highest (H) or lowest ... This work aimed to find quantitative phenotypic traits that can be used to discriminate the levels of resistance/susceptibility to B. bovis and B. bigemina in two groups of cattle presenting the highest (H) or lowest (L) infection levels and Rhipicephalus microplus ticks count. The animals were selected from a previous study of 50 Canchim (5/8 Charolais/zebu) heifers raised in an endemic area for these parasites. These animals were evaluated regarding their TNFα, IL10, IFN-γ, IL12 and iNOS mRNA levels. No differences were found between these groups regarding TNFα, IFN-γ, IL12β or iNOS transcripts. However, the IL10 transcripts were significantly higher in the H group compared to the L group. Moreover, significant correlation coefficients were observed between B. bovis loads and both IL10 and IFN-γ transcripts, while no correlations were found for B. bigemina loads and all tested immune-related transcripts, suggesting that differential IL10 mRNA profiles were closely associated to B. bovis loads. Our results have contributed to a better understanding of the immune responses against Babesia infection, as we demonstrated that the IL10 cytokine levels might also influence or be influenced by parasitemia levels in persistently infected animals. 展开更多
关键词 BABESIA BOVIS Cytokines Gene Expression IL10 RT-qPCR
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