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石油烃厌氧降解基因masD和bamA实时荧光定量PCR方法的建立及应用 预览
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作者 宋本如 甄梅楠 +1 位作者 刘小妹 唐景春 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2019年第2期207-213,共7页
masD和bamA基因分别是烷烃和芳烃厌氧降解的关键基因。本研究建立了这两种基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法。通过参考相关石油烃厌氧降解菌株的Gen Bank序列,利用Primer express软件设计烷烃和芳烃厌氧降解基因的扩增引物ma... masD和bamA基因分别是烷烃和芳烃厌氧降解的关键基因。本研究建立了这两种基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法。通过参考相关石油烃厌氧降解菌株的Gen Bank序列,利用Primer express软件设计烷烃和芳烃厌氧降解基因的扩增引物masD-f、masD-r和bamA-f、bamA-r。经过常规PCR扩增分别得到片段大小为389和354 bp扩增产物,经测序并在NCBI数据库查询,确定为masD和bamA片段。通过实时荧光定量PCR构建测定这两种基因的标准曲线。优化后的扩增体系(25μL)为:12.5μL 2×Trans Start Top Green qPCR Super Mix,引物浓度为0. 2μmol/L,masD和bamA基因最适退火温度分别为52℃和56℃。建立的两种基因的实时荧光定量PCR检测方法具有非常好的重复性,其灵敏度比传统PCR技术高100倍。对于氧化石墨烯促进石油烃的厌氧降解体系中厌氧基因的定量检测显示,添加不同浓度的石墨烯均促进了bamA拷贝数的增加,但对masD的拷贝数无显著影响。 展开更多
关键词 石油烃 厌氧降解基因 masD基因 bamA基因 实时荧光定量聚合酶链式反应
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夏桑菊颗粒体外抗Ⅰ型登革热病毒的作用 预览
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作者 张磊 姚江雄 +7 位作者 纪洵敏 余婷婷 蒲俏虹 唐芮 许瑛 赖文辉 彭拓华 张吉凯 《广东医学》 CAS 2019年第9期1250-1254,共5页
目的研究夏桑菊颗粒体外抗Ⅰ型登革热病毒(DENV-1)的作用效果。方法 MTT法测定夏桑菊颗粒和利巴韦林对C6/36细胞的最大无毒剂量以及DENV-1感染细胞病变效应;细胞免疫荧光法,以NS1蛋白为目标蛋白,测定DENV-1经不同稀释度的夏桑菊颗粒预... 目的研究夏桑菊颗粒体外抗Ⅰ型登革热病毒(DENV-1)的作用效果。方法 MTT法测定夏桑菊颗粒和利巴韦林对C6/36细胞的最大无毒剂量以及DENV-1感染细胞病变效应;细胞免疫荧光法,以NS1蛋白为目标蛋白,测定DENV-1经不同稀释度的夏桑菊颗粒预处理后感染能力;荧光定量PCR法检测夏桑菊颗粒和利巴韦林对DENV-1拷贝数的影响,采用方差分析比较不同稀释度药物对病毒的影响。结果MTT结果显示夏桑菊颗粒和利巴韦林的最大无毒剂量分别为7. 81 mg/m L和3. 13 mg/m L;经过夏桑菊颗粒溶液处理后,感染病毒的细胞存活率增加(21. 9±4. 3)%和(15. 7±4. 1)%,同时,经过利巴韦林处理后,细胞存活率分别增加(39. 2±1. 9)%和(24. 2±3. 1)%,两者均能明显减弱病毒引起细胞病变的效应(P <0. 05);荧光实验结果显示夏桑菊颗粒可使病毒相对感染率下降(42. 1±7. 4)%和(24. 2±2. 5)%,利巴韦林可使病毒相对感染率下降(51. 1±2. 3)%和(49. 3±2. 9)%,两者对病毒的感染具有明显的抑制作用(P <0. 05);q PCR实验结果表明夏桑菊颗粒对病毒拷贝数的抑制率达到(42. 1±7. 4)%和(24. 2±2. 5)%,利巴韦林对病毒拷贝数抑制率达到(51. 1±2. 3)%和(39. 3±2. 9)%,两者对病毒的RNA复制产生了明显的抑制作用(P <0. 05)。结论夏桑菊颗粒通过体外预给药的方式会产生明显的抗DENV-1的作用,其作用效果与利巴韦林相近。 展开更多
关键词 夏桑菊颗粒 登革热病毒 细胞免疫荧光 实时荧光定量PCR 最大无毒剂量
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生物钟基因bmal1与per1在小鼠胸腺、脾脏及外周血中表达的近日节律性研究
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作者 王庆敏 李科华 +3 位作者 唐瑛 戴圣龙 刘秋红 时粉周 《华南国防医学杂志》 CAS 2019年第4期228-231,共4页
目的观察小鼠脾脏、胸腺及外周血相关bmal1,per1基因的表达特点。方法将24只C57BL/6小鼠在光照-黑暗交替(12L/12D)的光制条件下饲养4周后,分别在一昼夜的4个时相点(9∶00,15∶00,21∶00,3∶00)取脾脏、胸腺及外周血,然后分别分离免疫细... 目的观察小鼠脾脏、胸腺及外周血相关bmal1,per1基因的表达特点。方法将24只C57BL/6小鼠在光照-黑暗交替(12L/12D)的光制条件下饲养4周后,分别在一昼夜的4个时相点(9∶00,15∶00,21∶00,3∶00)取脾脏、胸腺及外周血,然后分别分离免疫细胞,并利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测小鼠脾脏、胸腺及外周血中的bmal1,per1两种节律基因的mRNA水平。最后,通过余弦函数获取节律相关参数,并经振幅F检验分析这两种节律基因的表达是否具有近日节律。结果 bmal1,per1两种基因在脾脏、胸腺和外周血中存在明显的近日节律,各基因的峰值明显高于谷值(P均<0.01)。bmal1在脾脏、胸腺中及外周血的峰值相位时间分别为20∶21,22∶06和16∶53左右,per1基因在脾脏、胸腺