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阿利吉伦对糖氧剥夺损伤SH-SY5Y细胞的保护机制
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作者 陆婉杏 蒙兰青 黄晓华 《医学分子生物学杂志》 CAS 2019年第3期258-262,268共6页
目的研究阿利吉仑(Aliskiren)对糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)损伤的神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的保护机制。方法将SH-SY5Y细胞随机分成正常组[不作糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)处理],OGD 组和阿利吉仑低、中... 目的研究阿利吉仑(Aliskiren)对糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)损伤的神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的保护机制。方法将SH-SY5Y细胞随机分成正常组[不作糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)处理],OGD 组和阿利吉仑低、中、高剂量组(5.0, 10.0, 20. 0μmol/L),除了正常组,其余4组均OGD处理4h,流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测MKT、ERK和MTOR相应mRNA表达水平;Western印迹检测p-AKT^Thr308、p-AKT^Ser473、p-ERK1/2和p-MTOR蛋白表达水平。结果与OGD组相比,阿利吉仑组的细胞凋亡率呈剂量依赖性降低。RT-PCR和Western印迹检测结果表明:与正常组相比,OGD组的AKT、ERK和MTOR相应mRNA及磷酸化蛋白表达水平更低(P<0.05)。与OGD组比较,阿利吉仑组的AKT、ERA和MTOR相应mRNA及磷酸化蛋白表达水平呈剂量依赖性升高(P<0.05)。结论ERK1/2和PI3K/AKT/MTOR信号通路的激活可能是阿利吉仑对OGD损伤的SH-SY5Y细胞发挥保护作用的重要分子机制。 展开更多
关键词 阿利吉仑 SH-SY5Y细胞 糖氧剥夺损伤 ERK1/2信号通路 PI3K/AKT/MTOR信号通路
MPST基因慢病毒载体的构建及在SH-SY5Y细胞中的表达
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作者 范海琼 孙达权 +3 位作者 柳香香 王念 徐国强 潘际刚 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1812-1816,共5页
为构建MPST基因慢病毒表达载体,获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株,本研究通过PCR扩增出MPST目的基因,将其克隆到慢病毒表达载体p EB-GFP (T2A) PURO上,将重组慢病毒表达载体和慢病毒包装质粒系统(pLP/VSVG, pLP1, p LP2)共转染2... 为构建MPST基因慢病毒表达载体,获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株,本研究通过PCR扩增出MPST目的基因,将其克隆到慢病毒表达载体p EB-GFP (T2A) PURO上,将重组慢病毒表达载体和慢病毒包装质粒系统(pLP/VSVG, pLP1, p LP2)共转染293T细胞,用获得重组的慢病毒液感染SH-SY5Y细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达MPST基因的(SH-MPST)细胞株。采用Real-time PCR和Western blotting以及ELISA等方法对筛出来的SH-MPST中的MPST的表达及功能进行鉴定。与空转染组(SH-PEB)相比,SH-MPST细胞中MPST mRNA及蛋白的表达水平显著增加,且细胞内MPST酶活性、酶含量及细胞释放硫化氢的水平均显著增加(p<0.05)。以上研究表明,MPST基因慢病毒表达载体成功构建,并获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株,这将为MPST功能的深入研究提供依据。 展开更多
关键词 慢病毒 MPST 过表达 SH-SY5Y细胞 硫化氢
三苯基吡唑甲酮类化合物的合成及对6-OHDA 损伤的SH-SY5Y 细胞的保护作用
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作者 张乐华 冯秀娥 李青山 《中国药物化学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期268-272,共5页
目的设计合成系列三苯基吡唑甲酮类化合物,测定其对6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用,并初步探讨其构效关系。方法以2,5-二甲氧基苯乙酮为起始原料,经过Claisen-Schmidt反应和亲核加成合成目标化合物。采用CCK-8法考察... 目的设计合成系列三苯基吡唑甲酮类化合物,测定其对6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用,并初步探讨其构效关系。方法以2,5-二甲氧基苯乙酮为起始原料,经过Claisen-Schmidt反应和亲核加成合成目标化合物。采用CCK-8法考察了目标化合物对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用。结果与结论合成了8个未见文献报道的新化合物,其结构均经MS、1H-NMR、13C-NMR谱确证。体外活性筛选结果表明,化合物4c、4d、5c、5d具有较好的细胞保护作用,其EC50值为1.1~9.6μmol·L-1,与阳性对照雷沙吉兰相当(EC50=1.6μmol·L-1)。 展开更多
关键词 三苯基吡唑甲酮 6-羟基多巴胺 SH-SY5Y细胞 保护作用
CB2受体激活对MPP+致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用 预览
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作者 万洪丽 马泽刚 《精准医学杂志》 2019年第3期240-244,共5页
目的研究大麻素Ⅱ型(CB2)受体激活对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP +)致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法 根据药物处理的不同将细胞分为正常对照组(C组)、MPP +组(M组)、JWH-133/MPP +组(J+M组)以及JWH-133/AM630/MPP +组(J+A+M组)。用免... 目的研究大麻素Ⅱ型(CB2)受体激活对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP +)致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法 根据药物处理的不同将细胞分为正常对照组(C组)、MPP +组(M组)、JWH-133/MPP +组(J+M组)以及JWH-133/AM630/MPP +组(J+A+M组)。用免疫印迹法检测各组细胞CB2受体和酪氨酸羟化酶(TH)蛋白的表达,用流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm)的变化。结果 与C组相比,M组的CB2受体蛋白表达下降( P <0.01);经JWH-133预处理后,CB2受体蛋白表达高于M组( P <0.01),此作用可被AM630所阻断;与C组相比,M组的TH表达降低( P <0.05),经JWH-133预处理后,TH表达高于M组( P <0.05),AM630预处理可抑制此作用;与C组相比,M组细胞的ΔΨm明显下降( P <0.01),经JWH-133预处理后,细胞ΔΨm下降幅度变小( P <0.01),此作用可被AM630所阻断。结论 CB2受体激活可以抑制MPP +对SH-SY5Y细胞的损伤作用。 展开更多
关键词 受体 大麻酚 CB2 大麻素受体激动剂 帕金森病 SH-SY5Y细胞
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O3氧化黑碳对SH-SY5Y细胞的毒性作用 预览
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作者 尚羽 王田田 +3 位作者 吴美英 王璐 何慧心 安静 《上海大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期550-557,共8页
以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为模型,在细胞体系探讨经O3氧化过的黑碳(O3-oxidized black carbon,OBC)颗粒对神经细胞的毒性作用.应用MTT方法评估SH-SY5Y细胞的存活率;通过测定培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LHD)浓度评估... 以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为模型,在细胞体系探讨经O3氧化过的黑碳(O3-oxidized black carbon,OBC)颗粒对神经细胞的毒性作用.应用MTT方法评估SH-SY5Y细胞的存活率;通过测定培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LHD)浓度评估细胞膜的损伤程度;利用流式细胞术评价细胞凋亡率;使用荧光探针(Fluo 3-AM)检测细胞内Ca^2+浓度.结果显示,OBC颗粒对SH-SY5Y细胞暴露24和48 h的半致死浓度(IC50)分别为202.2和133.3μg/mL;随着BC颗粒染毒浓度的增加(0,5,10,20,40μg/mL),胞外LDH浓度、细胞凋亡率和Ca^2+浓度均逐渐升高,呈显著的剂量-效应关系(p<0.05).研究表明,OBC颗粒可导致神经细胞内Ca^2+浓度升高、细胞膜损坏,并最终导致细胞凋亡的发生. 展开更多
关键词 黑碳颗粒 SH-SY5Y细胞 细胞毒性 细胞凋亡 CA^2+
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阿利吉仑对氧糖剥夺损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用及可能机制 预览
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作者 陆婉杏 蒙兰青 黄晓华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1630-1634,共5页
目的:探讨阿利吉仑对氧糖剥夺(OGD)损伤的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用及可能机制。方法:将SH-SY5Y细胞随机分为对照组、OGD组及阿利吉仑低、中和高剂量(5.0、10.0和20.0 μmol/L)组。CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测兴奋性氨基酸... 目的:探讨阿利吉仑对氧糖剥夺(OGD)损伤的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用及可能机制。方法:将SH-SY5Y细胞随机分为对照组、OGD组及阿利吉仑低、中和高剂量(5.0、10.0和20.0 μmol/L)组。CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测兴奋性氨基酸转运蛋白2(EAAT2/GLT-1)、兴奋性氨基酸转运蛋白3(EAAT3/EAAC1)、兴奋性氨基酸转运蛋白4(EAAT4)、内皮素1(ET-1)和S100钙结合蛋白β亚基(S-100β)的表达;Hoechst 33258染色观察SH-SY5Y细胞形态变化;乳酸(LD)测试盒和超微量Na +-K +-ATP酶测试盒检测LD含量和Na +-K +-ATPase活性。结果: OGD损伤4 h时,细胞相对活力不足60%,因此4 h可作为后续实验OGD造模时间。与对照组相比,OGD组的GLT-1、EAAC1和EAAT4表达显著下调( P <0.05),ET-1和S-100β的表达显著上调( P <0.05);与OGD组相比,阿利吉仑组的GLT-1、EAAC1和EAAT4表达呈剂量依赖性上调, ET-1和S-100β表达呈剂量依赖性下调( P <0.05)。Hochest 33258染色结果表明,阿利吉仑可明显减少OGD引起的SH-SY5Y细胞凋亡。与对照组相比,OGD组的LD含量显著升高( P <0.05),Na +-K +-ATPase活性显著降低( P <0.05);与OGD组相比,阿利吉仑组的LD含量呈剂量依赖性降低,Na +-K +-ATPase活性呈剂量依赖性升高( P <0.05)。结论:阿利吉仑对OGD损伤的SH-SY5Y细胞有一定的保护作用,其机制可能与阿利吉仑上调GLT-1、EAAC1和EAAT4的水平,提高Na +-K +-ATPase的活性,下调ET-1和S-100β的表达及LD含量有关。 展开更多
关键词 阿利吉仑 SH-SY5Y细胞 氧糖剥夺 内皮素1 兴奋性氨基酸转运蛋白
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甲基苯丙胺对体外培养SH-SY5Y细胞线粒体膜电位、超微结构及Mfn1、Fis1蛋白表达的影响 预览
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作者 牟登峰 郑丹 +4 位作者 王琪 黄仕美 官志忠 于燕妮 楼迪栋 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期935-939,共5页
目的 评估甲基苯丙胺(METH)对体外培养的SH-SY5Y细胞线粒体膜电位(MMP)、线粒体超微结构及Mfn1、Fis1蛋白表达的影响。方法 SH-SY5Y细胞中加入METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1 ),培养3、6、12、24 h;JC-1法检测SH-SY5Y细胞MMP;... 目的 评估甲基苯丙胺(METH)对体外培养的SH-SY5Y细胞线粒体膜电位(MMP)、线粒体超微结构及Mfn1、Fis1蛋白表达的影响。方法 SH-SY5Y细胞中加入METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1 ),培养3、6、12、24 h;JC-1法检测SH-SY5Y细胞MMP;透射电镜观察SH-SY5Y细胞线粒体超微结构;Western blot检测Mfn1、Fis1蛋白表达。结果 METH作用SH-SY5Y细胞3、6、12、24 h,与对照组比较,METH组细胞MMP红绿荧光比值明显降低( P <0.05),Mfn1蛋白表达降低( P <0.05),Fis1蛋白表达升高( P <0.05);METH作用SH-SY5Y细胞24 h时,透射电镜观察见未处理组细胞线粒体呈椭圆形棒状双层膜结构,线粒体嵴正常、清晰,METH组细胞线粒体椭圆形棒状结构被分裂成小球状结构,并发现线粒体自噬小体及自噬溶酶体。结论 METH可引起SH-SY5Y细胞MMP下降、线粒体超微结构改变及Mfn1、Fis1蛋白表达水平改变,其改变可能参与METH致神经细胞损伤的发病机制。 展开更多
关键词 甲基苯丙胺 SH-SY5Y细胞 线粒体膜电位 线粒体超微结构 线粒体融合蛋白1 线粒体分裂蛋白1
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锰中毒对SH-SY5Y细胞线粒体自噬作用的影响 预览
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作者 李慧颖 陆潭丽 王进 《广西中医药大学学报》 2019年第1期6-9,共4页
[目的]探讨锰中毒对SH-SY5Y细胞线粒体自噬作用的影响。[方法]取对数生长期的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,予MnCl2处理24 h,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中多巴胺(DA)的分泌量,蛋白免疫印迹法检测自噬标记蛋白LC3、线粒体分裂蛋... [目的]探讨锰中毒对SH-SY5Y细胞线粒体自噬作用的影响。[方法]取对数生长期的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,予MnCl2处理24 h,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中多巴胺(DA)的分泌量,蛋白免疫印迹法检测自噬标记蛋白LC3、线粒体分裂蛋白Drp1、线粒体融合蛋白Mfn1、Mfn2的表达。[结果]与正常对照组相比,MnCl2组多巴胺的分泌量显著减少(P<0.05),LC3-Ⅱ表达增加(P<0.05),Drp1表达降低(P<0.05),Mfn1及Mfn2表达增加(P<0.05)。[结论]锰中毒可显著降低SH-SY5Y细胞中多巴胺的分泌量,抑制线粒体的分裂并促进线粒体融合,导致线粒体自噬增多,这可能是锰中毒性帕金森综合征的病理机制之一。 展开更多
关键词 锰中毒 帕金森综合征 线粒体自噬 线粒体融合分裂 SH-SY5Y细胞 实验研究
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亚砷酸钠对SH-SY5Y细胞周期的影响及MPST过表达的干预 预览
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作者 柳香香 孙达权 +3 位作者 许键炜 范海琼 徐国强 潘际刚 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期634-639,共6页
目的探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对神经细胞周期的影响及MPST过表达在其中的作用。方法以空白组(正常SH-SY5Y细胞,BC)、空载对照组(NC)、过表达组(过表达MPST,OP)细胞分别经NaAsO2处理后,采用CCK-8法、结晶紫染色法、流式细胞术和Westernblot... 目的探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对神经细胞周期的影响及MPST过表达在其中的作用。方法以空白组(正常SH-SY5Y细胞,BC)、空载对照组(NC)、过表达组(过表达MPST,OP)细胞分别经NaAsO2处理后,采用CCK-8法、结晶紫染色法、流式细胞术和Westernblot法,分别检测细胞活力、细胞贴壁力、细胞周期及p53、CDC25A、CyclinA、CDK2等蛋白表达水平。结果经NaAsO2处理48h后,NC组细胞存活率、细胞贴壁率明显降低,而过表达MPST细胞上述变化明显得到改善(P<0.01)。同时,NaAsO2明显上调BC、NC组细胞S期比例和p53蛋白表达,而下调CDC25A、CyclinA及CDK2蛋白(P<0.01);然而,过表达MPST则明显拮抗上述效应(P<0.05,P<0.01)。结论NaAsO2通过诱导SH-SY5Y细胞S期阻滞,抑制细胞生长,而过表达MPST可拮抗NaAsO2诱导的毒性效应。 展开更多
关键词 亚砷酸钠 3-巯基丙酮酸硫转移酶 SH-SY5Y细胞 细胞周期 S期阻滞 硫化氢
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知母须根中1个新的二苯甲酮类化合物
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作者 廖振东 许凤清 +2 位作者 吴德玲 张伟 黄琪 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1392-1396,共5页
采用硅胶、Sephadex LH-20结合高压半制备高效液相色谱技术研究知母Anemarrhena asphodeloides的须根中的化学成分。通过理化性质和波谱数据鉴定了5个化合物:methyl 2-[2,4-dihydroxy-3-(4-hydroxybenzoyl)-6-methoxypheyl]acetate(1)、... 采用硅胶、Sephadex LH-20结合高压半制备高效液相色谱技术研究知母Anemarrhena asphodeloides的须根中的化学成分。通过理化性质和波谱数据鉴定了5个化合物:methyl 2-[2,4-dihydroxy-3-(4-hydroxybenzoyl)-6-methoxypheyl]acetate(1)、4-[formyl-5-(methoxymethyl)-1H-pyrrol-1-yl] butanoate(2)、川芎哚(3)、丁香脂酚-4′-β-D-葡萄糖苷(4)和4′,6-dihydroxy-4-methoxybenzophenone-2-O-(2″),3-C-(1″)-1″-desoxy-α-L-fructofuranoside(5)。其中化合物1为新化合物,化合物2~5均为首次从该植物中得到。并检测新化合物1对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的神经保护活性。 展开更多
关键词 知母须根 化学成分 SH-SY5Y细胞
玉米黄素对衣霉素诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用 预览
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作者 魏俊 赵范范 +3 位作者 刘馨君 劳凤学 黄汉昌 商迎辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第7期163-168,共6页
研究玉米黄素对衣霉素诱导损伤的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的保护作用。实验分为空白组、损伤组(模型组)、2、5、10 μmol/L玉米黄素保护组。用衣霉素(tunicamycin,TM)建立SH-SY5Y细胞损伤模型,噻唑蓝测定细胞存活率,试剂盒法测定培养... 研究玉米黄素对衣霉素诱导损伤的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的保护作用。实验分为空白组、损伤组(模型组)、2、5、10 μmol/L玉米黄素保护组。用衣霉素(tunicamycin,TM)建立SH-SY5Y细胞损伤模型,噻唑蓝测定细胞存活率,试剂盒法测定培养液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平。结果显示:TM质量浓度在2 μg/mL以上时,可显著降低SH-SY5Y细胞活性(P<0.01);与TM损伤组相比,2~10 μmol/L玉米黄素预处理可显著提高细胞存活率(P<0.05),降低LDH的释放率,先用TM处理30 min后再加2、5、10 μmol/L的玉米黄素处理24 h的玉米黄素后处理组结果相同。因此,TM通过诱导内质网应激可引起细胞损伤,玉米黄素能够减轻该损伤作用,并且在一定程度上可逆转TM引起的损伤。 展开更多
关键词 玉米黄素 衣霉素 内质网应激 SH-SY5Y细胞
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多巴胺通过促进RNF20降解抑制神经细胞中组蛋白H2B泛素化
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作者 董婷婷 刘艳萍 +5 位作者 李云芳 李胜 张国安 刘增甲 黄鑫 崔文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期421-427,共7页
表观遗传修饰参与了药物成瘾的形成过程,而在药物成瘾过程中组蛋白泛素化水平的变化仍未可知。药物成瘾过程中常表现为多巴胺(dopamine,DA)表达量的升高,因此本研究欲探讨多巴胺升高对神经细胞组蛋白泛素化的影响及其机制。Western印迹... 表观遗传修饰参与了药物成瘾的形成过程,而在药物成瘾过程中组蛋白泛素化水平的变化仍未可知。药物成瘾过程中常表现为多巴胺(dopamine,DA)表达量的升高,因此本研究欲探讨多巴胺升高对神经细胞组蛋白泛素化的影响及其机制。Western印迹结果显示,在终浓度0.8 mmol/L的多巴胺作用8 h后,人神经母细胞瘤细胞系SHSY5Y细胞中环指蛋白20(ring finger protein 20, RNF20)表达量降低(0.29 ± 0.032 vs. 1.0 ± 0.025,P< 0.0001),泛素化组蛋白H2B(H2Bub1)表达量下降(0.28 ± 0.032 vs. 1.0 ± 0.017,P< 0.0001)。但是RT-PCR结果显示,多巴胺处理SH-SY5Y细胞后,RNF20在mRNA水平的表达无明显变化。在SH-SY5Y细胞中沉默RNF20的表达,H2Bub1在蛋白质水平的表达明显降低(0.20 ± 0.069 vs. 1.0 ± 0.060,P=0.001)。在加入多巴胺的基础上,分别加入蛋白酶体抑制剂MG132、自噬体形成抑制剂3-MA以及空泡型H+-ATP酶特异性抑制剂Baf-A1等药物来检测RNF20的降解途径,结果发现,加入MG132、3-MA以及Baf-A1后,RNF20表达量均比DA处理组显著上升(1.51 ± 0.095, P=0.0003;0.89 ± 0.075,P=0.0021;2.74 ± 0.099, P<0.0001;vs. 0.27 ± 0.044)。上述结果表明,在SH-SY5Y细胞中,RNF20对H2Bub1具有调控作用,多巴胺可通过泛素化及自噬两种途径促进RNF20降解,从而抑制组蛋白H2B泛素化。 展开更多
关键词 多巴胺 SH-SY5Y细胞 环指蛋白20 泛素化 自噬
p38MAPK抑制剂对高糖诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的作用及机制 预览
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作者 刘瑞婷 朱文瑛 +3 位作者 张琳 唐跃 曹铭锋 蒋进皎 《山东医药》 CAS 2019年第1期38-41,共4页
目的探讨丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)抑制剂对高糖诱导神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡的保护作用及机制。方法将培养好的SH-SY5Y细胞随机分为6组,A、B、C组分别加入45、90、135mmol/L高糖进行处理;D、E组分别加入10、25μmol/L的p38M... 目的探讨丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)抑制剂对高糖诱导神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡的保护作用及机制。方法将培养好的SH-SY5Y细胞随机分为6组,A、B、C组分别加入45、90、135mmol/L高糖进行处理;D、E组分别加入10、25μmol/L的p38MAPK抑制剂PD169316预处理30min,之后加入135mmol/L高糖溶液进行培养;对照组常规培养不做干预;另随机选部分细胞用135mmol/L高糖处理3h作为高糖对照组。采用Westernblotting法检测细胞内磷酸化p38MAPK及凋亡相关蛋白,用AnnexinV-PI染色法检测细胞凋亡。结果高糖处理1.5、3h,与对照组比较,A、B、C组磷酸化p38MAPK蛋白相对表达量呈浓度依赖性升高、抗凋亡蛋白BCL-2相对表达量低、促凋亡蛋白BAX、BID、BAD相对表达量高(P均<0.05)。高糖处理6h,A组BCL-2蛋白相对表达量低,BAX、BID、BAD蛋白相对表达量高(P均<0.05),而B、C组促凋亡蛋白未见明显变化(P均>0.05)。与高糖对照组比较,D、E组磷酸化p38MAPK蛋白相对表达量低(P均<0.05),BCL-2蛋白蛋白相对表达量高(P均<0.05),BAD蛋白及BID蛋白相对表达量低(P均<0.05),E组以上指标变化最明显(P均<0.05)。与对照组比较,C组细胞凋亡重;与C组比较,E组细胞凋亡轻。结论p38MAPK抑制剂可抑制高糖诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与调控抗凋亡蛋白及促凋亡蛋白表达有关。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 丝裂原活化蛋白激酶P38 SH-SH5Y细胞 高糖 细胞凋亡 抗凋亡蛋白 凋亡蛋白
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姜黄素对毒胡萝卜素诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制
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作者 周碧兰 危永芳 +3 位作者 李晴晴 周意 朱艳妮 马宁 《中国药师》 CAS 2019年第9期1606-1610,共5页
目的:研究姜黄素对毒胡萝卜素(TG)诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用,并探讨其机制是否与改善内质网应激有关。方法:复苏并传代培养SH-SY5Y细胞,将其分为5组:正常对照组、模型组(TG,0.05μmol·L-1)、姜黄素低(1μmo... 目的:研究姜黄素对毒胡萝卜素(TG)诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用,并探讨其机制是否与改善内质网应激有关。方法:复苏并传代培养SH-SY5Y细胞,将其分为5组:正常对照组、模型组(TG,0.05μmol·L-1)、姜黄素低(1μmol·L-1)、中(10μmol·L-1)和高(50μmol·L-1)剂量组。采用MTT比色法检测SH-SY5Y细胞的存活率,Western blot法检测内质网应激反应中标志性分子伴侣蛋白GRP78和相关凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达水平,检测内质网应激反应中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和肌醇依赖酶(IRE1)通路相关蛋白的表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组SH-SY5Y细胞存活率显著降低(P<0.01),GRP78和CHOP蛋白均有增加的趋势,其中CHOP蛋白差异有统计学意义(P<0.05),p-PERK、磷酸化真核翻译起始因子2α(p-eIF2α)、IRE1α和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白均显著增加(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,姜黄素各剂量组的SH-SY5Y细胞存活率显著升高,GRP78、CHOP、p-eIF2α和IRE1α蛋白显著降低(P<0.05或P<0.01),姜黄素中剂量组的p-PERK和p-JNK蛋白显著降低(P<0.05)。结论:姜黄素通过调控内质网应激反应中蛋白表达进而改善TG诱导的SH-SY5Y细胞损伤,发挥神经保护作用。 展开更多
关键词 姜黄素 毒胡萝卜素 人神经母细胞瘤细胞 内质网应激
丙戊酸钠通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路抑制SH-SY5Y细胞自噬 预览
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作者 戴旭芳 闫小晶 +1 位作者 谢鹏 连继勤 《南方医科大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期1415-1420,共6页
目的探讨丙戊酸钠(VPA)对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24h,采用定量PCR分析VPA处理对ATG4... 目的探讨丙戊酸钠(VPA)对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24h,采用定量PCR分析VPA处理对ATG4B mRNA与miR-34c-5p表达的影响,免疫印迹法分析VPA处理对ATG4B蛋白表达的影响,将含ATG4B启动子片段的报告质粒转染SH-SY5Y细胞,然后通过荧光素酶报告基因系统分析VPA处理对ATG4B启动子活性的影响,用VPA单独或联合转录抑制剂放线菌素D分别处理SH-SY5Y细胞不同时间,定量PCR分析检测不同处理对ATG4BmRNA稳定性的影响,用VPA单独或联合miR-34c-5p抑制剂处理细胞24h,通过检测不同处理对ATG4B表达变化的影响,进而判断miR-34c-5p在VPA下调ATG4B表达中的作用,同时通过Western blot检测不同处理对LC3-II表达的影响,分析细胞自噬水平变化。结果VPA可剂量依赖性降低SH-SY5Y细胞中ATG4B的mRNA和蛋白水平(P<0.05)。VPA处理不影响SHSY5Y细胞中ATG4B的启动子活性(P>0.05),但显著下调其mRNA的稳定性(P<0.05)。同时,VPA处理明显增强SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p的表达水平(P<0.05)。使用miR-34c-5p抑制剂与VPA联合处理SH-SY5Y细胞,可逆转VPA对ATG4B表达的下调作用。VPA处理还下调了SH-SY5Y细胞中LC3-II的表达水平(P<0.05)。结论VPA可能通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路而抑制SH-SY5Y细胞自噬。 展开更多
关键词 丙戊酸钠 SH-SY5Y细胞 ATG4B miR-34c-5p 自噬
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灵孢多糖对Aβ25-35损伤SH-SY5Y细胞保护作用的研究
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作者 吴宜娟 莫明树 黄树宣 《热带医学杂志》 CAS 2018年第8期1006-1009,共4页
目的观察灵孢多糖(GLPS)对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用及其机制。方法将Aβ25-35、GLPS加入体外培养的SH-SY5Y细胞中,建立拟痴呆的细胞模型,用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活力的变化;Western blot技术检... 目的观察灵孢多糖(GLPS)对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用及其机制。方法将Aβ25-35、GLPS加入体外培养的SH-SY5Y细胞中,建立拟痴呆的细胞模型,用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活力的变化;Western blot技术检测Aβ25-35、金属蛋白酶-2(MMP-2)和金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果 Aβ25-35处理48 h后,细胞活力降至对照组的40.2%,差异有统计学意义(P〈0.001)。经GLPS低剂量(100μg/m L)预处理后,细胞活力提高17.5%(P〈0.05);GLPS高剂量(300μg/m L)预处理后,细胞活力提高30.4%(P〈0.05)。Western blot分析结果证明,GLPS预处理可降低SH-SY5Y细胞MMP-2和MMP-9蛋白表达及活性水平(P〈0.05)。结论 GLPS预处理对Aβ25-35诱导损伤的SH-SY5Y细胞有一定的保护作用,可能与减少细胞中MMP-2和MMP-9等炎症因子的异常生成相关。 展开更多
关键词 灵孢多糖 阿尔茨海默病 SH-SY5Y细胞 Β-淀粉样蛋白
甘松对6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及成分分析 预览
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作者 王胜男 王少男 +3 位作者 蔺明煊 马晓杰 郑志全 石晋丽 《环球中医药》 CAS 2018年第5期645-650,共6页
目的通过比较甘松不同提取物对6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护作用,筛选活性部位并进行成分分析。方法采用体外细胞培养法,建立6-OHDA损伤SH-SY5Y细胞帕金森模型。MTT法检测甘松不同提取部位对6-O... 目的通过比较甘松不同提取物对6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护作用,筛选活性部位并进行成分分析。方法采用体外细胞培养法,建立6-OHDA损伤SH-SY5Y细胞帕金森模型。MTT法检测甘松不同提取部位对6-OHDA诱导损伤的SH-SY5Y细胞活力的影响,计算抑制率;进一步观察细胞形态明确活性提取部位对细胞生长的影响。采用GC-MS技术对该部位进行化学成分分析。结果甘松石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及乙醇部位均能抑制6-OHDA所致的SH-SY5Y细胞损伤,提高细胞存活率,其中石油醚部位的保护作用最强,从该部位中分离鉴定出22个成分,主要为倍半萜类化合物。结论甘松不同提取部位对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞损伤均有一定保护作用,其中石油醚部位活性较强,主要成分为倍半萜类化合物。 展开更多
关键词 甘松 SH-SY5Y细胞 6-羟基多巴胺 GC-MS 帕金森
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BNIP3介导锰经线粒体凋亡途径诱导SH-SY5Y细胞凋亡的研究
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作者 黄燕宁 王进 +1 位作者 文巧林 黄锦凤 《毒理学杂志》 CSCD 2018年第2期112-117,共6页
目的探讨线粒体蛋白BNIP3在锰诱导线粒体依赖的SH-SY5Y细胞凋亡中的作用。方法取对数生长期的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,经MnCl2处理24 h后应用透射电子显微镜直接观察MnCl2作用下SH-SY5Y细胞的凋亡情况,使用流式细胞仪检测SH-SY5Y细... 目的探讨线粒体蛋白BNIP3在锰诱导线粒体依赖的SH-SY5Y细胞凋亡中的作用。方法取对数生长期的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,经MnCl2处理24 h后应用透射电子显微镜直接观察MnCl2作用下SH-SY5Y细胞的凋亡情况,使用流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞线粒体膜电位(Δψm),通过蛋白免疫印记法(Western blot)检测BNIP3及凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。并使用shRNA将SH-SY5Y细胞中的BNIP3沉默,观察BNIP3对MnCl2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡、线粒体膜电位丢失(Δψm)及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响。结果 MnCl2可使线粒体膜电位逐渐丢失(F=49.061,P〈0.01)、并使线粒体蛋白BNIP3及凋亡相关蛋白Caspase-3的表达随着MnCl2浓度的提高而上升(F=334.832,F=299.902,均P〈0.01)、明显增加SH-SY5Y细胞的凋亡小体个数,上述差异均有统计学意义。沉默BNIP3(F=1.301,P=0.318,t=32.647,P〈0.01)可以减少MnCl2诱导线粒体膜电位的丢失(F=1.786,P=0.252;t=20.290,P〈0.01),减少凋亡相关蛋白Caspase-3的表达(F=2.816,P=0.168;t=22.073,P〈0.01)并使SH-SY5Y凋亡小体的个数减少,上述差异均有统计学意义。结论在MnCl2通过线粒体凋亡途径诱导SH-SY5Y细胞凋亡的过程中BNIP3起到了重要作用,这种调控机制可能是锰产生神经毒性的作用机制之一。 展开更多
关键词 SH-SY5Y细胞 细胞凋亡 BNIP3 线粒体膜电位
丹皮酚对MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞线粒体自噬和死亡的保护作用 预览
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作者 王训翠 朱国旗 +1 位作者 赖桂华 李庆林 《中国药理学通报》 CSCD 北大核心 2018年第12期1655-1661,共7页
目的 研究线粒体自噬在MPP^+损伤SH-SY5Y细胞中的发生及丹皮酚的干预作用。方法 以1 mmol·L^-1) MPP^+诱导SH-SY5Y细胞损伤建立帕金森病模型。采用MTT和LDH法分别检测不同浓度的丹皮酚对MPP^+诱导的SHSY5Y细胞存活率和损伤度... 目的 研究线粒体自噬在MPP^+损伤SH-SY5Y细胞中的发生及丹皮酚的干预作用。方法 以1 mmol·L^-1) MPP^+诱导SH-SY5Y细胞损伤建立帕金森病模型。采用MTT和LDH法分别检测不同浓度的丹皮酚对MPP^+诱导的SHSY5Y细胞存活率和损伤度的影响;MDC染色荧光显微镜下检测自噬空泡聚集;流式细胞术定量分析细胞内酸性自噬泡的形成;透射电镜观察线粒体自噬现象;激光共聚焦检测溶酶体和线粒体共定位;Western blot检测线粒体自噬相关蛋白parkin、LC3和Beclin-1的表达变化。结果 在1-100μmol·L^(-1)浓度范围内,预先加入丹皮酚能拮抗MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞损伤,并呈一定的量效关系;SH-SY5Y细胞经MPP^+处理24 h,观察到自噬现象,出现自噬空泡增多,自噬水平增加,并存在较多的线粒体与溶酶体共定位的现象,LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达增加,parkin表达降低。预先加入丹皮酚后能逆转这些现象。结论 丹皮酚抑制MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞线粒体自噬的发生,阻止神经细胞的死亡。 展开更多
关键词 丹皮酚 线粒体自噬 MPP^+ SH-SY5Y细胞 细胞死亡 帕金森病
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丙戊酸钠下调SH-SY5Y细胞中Bcl-2表达的作用及机制分析
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作者 戴旭芳 秦利燕 连继勤 《第三军医大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期1060-1065,共6页
目的探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)在神经细胞中下调Bcl-2表达的作用及可能机制。方法用不同浓度的VPA处理SHSY5Y细胞,定量PCR检测Bcl-2 mRNA与miR-34a水平变化,Western blot检测Bcl-2蛋白水平变化,报告基因系统检测Bcl-... 目的探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)在神经细胞中下调Bcl-2表达的作用及可能机制。方法用不同浓度的VPA处理SHSY5Y细胞,定量PCR检测Bcl-2 mRNA与miR-34a水平变化,Western blot检测Bcl-2蛋白水平变化,报告基因系统检测Bcl-2启动子活性变化,联合转录抑制剂处理细胞,分析Bcl-2 mRNA稳定性变化,联合miR-34a模拟物及抑制剂处理细胞,进一步分析miR-34a在VPA下调Bcl-2表达中的作用。Annexin V/PI双染结合流式分析细胞凋亡情况。结果VPA可浓度依赖性下调SH-SY5Y细胞中Bcl-2的 mRNA与蛋白水平(P〈0.05)。VPA暴露不改变Bcl-2的启动子活性(P〉0.05),但显著降低了其mRNA的稳定性(P〈0.05)。同时,VPA可上调SH-SY5Y细胞中miR-34a的表达(P〈0.05),联合使用miR-34a的抑制剂可逆转VPA对Bcl-2表达的下调作用,且单独的miR-34a模拟物也可以下调细胞中Bcl-2的表达。VPA暴露还可引起SH-SY5Y细胞的凋亡增加(P〈0.05)。结论VPA可通过上调SH-SY5Y细胞中miR-34a水平而抑制Bcl-2的表达。 展开更多
关键词 丙戊酸钠 SH-SY5Y细胞 BCL-2 MIR-34A
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