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OmpR对伤寒沙门菌侵袭上皮细胞能力的影响 预览
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作者 林立萍 张连璐 +5 位作者 易周易 赵雅闻 李雪 唐浩 黄新祥 张盈 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2019年第2期128-132,共5页
目的:研究OmpR对伤寒沙门菌侵袭力的影响及相关分子机制。方法:利用空载体对照株(WT-pBAD33)、ompR缺陷株(ΔompR-pBAD33)和ompR回补株(C-ΔompR)进行HeLa细胞侵袭实验,探究伤寒沙门菌OmpR对于He-La细胞侵袭力的影响。进一步用荧光实时... 目的:研究OmpR对伤寒沙门菌侵袭力的影响及相关分子机制。方法:利用空载体对照株(WT-pBAD33)、ompR缺陷株(ΔompR-pBAD33)和ompR回补株(C-ΔompR)进行HeLa细胞侵袭实验,探究伤寒沙门菌OmpR对于He-La细胞侵袭力的影响。进一步用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)、凝胶阻滞实验(EMSA)分析伤寒沙门菌OmpR对侵袭相关基因iagA、invF、prgH的调控作用。结果:成功制备伤寒沙门菌C-ΔompR。在HeLa细胞侵袭实验中,ΔompRpBAD33侵袭力显著低于WT-pBAD33(P<0.01),而C-ΔompR侵袭能力较ΔompR-pBAD33明显升高(P<0.01);qRTPCR结果显示,ΔompR-pBAD33中侵袭相关基因iagA、invF、prgH的转录水平较WT-pBAD33明显下降(P<0.01);EMSA结果表明,OmpR可直接与prgH基因启动子区域结合,与iagA和invF基因启动子区域未有结合。结论:OmpR通过直接调节prgH和间接调节iagA、invF增加侵袭相关基因的表达,从而增强伤寒沙门菌对上皮细胞的侵袭力。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 OMPR 侵袭力
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小RNASbfR增强伤寒沙门菌动力和侵袭力 预览
2
作者 孙嘉遥 陆仁飞 +1 位作者 赵昕 黄新祥 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2018年第1期47-50,共4页
目的:探究小RNA SbfR对伤寒沙门菌动力和侵袭力的影响及其潜在机制。方法:用前期构建的SbfR缺陷株(△SbfR+pBAD/Myc-HisA)、SbfR回补株(△SbfR+pBAD/Myc-HisA-SbfR)和空载体株(WT+pBAD/Myc-HisA)进行细菌动力实验和HeLa细胞侵袭实验,观... 目的:探究小RNA SbfR对伤寒沙门菌动力和侵袭力的影响及其潜在机制。方法:用前期构建的SbfR缺陷株(△SbfR+pBAD/Myc-HisA)、SbfR回补株(△SbfR+pBAD/Myc-HisA-SbfR)和空载体株(WT+pBAD/Myc-HisA)进行细菌动力实验和HeLa细胞侵袭实验,观察SbfR对伤寒沙门菌的动力和对HeLa细胞侵袭力的影响。通过基因芯片分析SbfR缺陷株与回补株全基因组表达的差异,并进一步用qRT-PCR分析SbfR对2个鞭毛和2个侵袭相关基因的调控作用。结果:与空载体株、SbfR回补株比较,SbfR缺陷株动力和侵袭力均明显下降(P<0.01或0.05);缺陷株鞭毛和侵袭相关基因的转录表达水平均比回补株明显下降(均P<0.05)。结论:SbfR通过促进鞭毛和侵袭相关基因的表达,增强伤寒沙门菌的动力和侵袭力。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 小RNA SbfR 侵袭力
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伤寒沙门菌sRNA S2959增强细菌动力和生物膜形成能力 预览
3
作者 陆仁飞 孙嘉瑶 黄新祥 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2018年第10期774-778,共5页
目的研究伤寒沙门菌小RNA(sRNA) S2959对细菌动力以及生物膜形成能力的影响。方法利用Red重组系统制备伤寒沙门菌sRNA S2959缺陷株(△S2959),同时制备sRNA S2959缺陷株的空载体株(△S2鞭毛相关基因在sRNA S2959相关菌株中的表达水... 目的研究伤寒沙门菌小RNA(sRNA) S2959对细菌动力以及生物膜形成能力的影响。方法利用Red重组系统制备伤寒沙门菌sRNA S2959缺陷株(△S2959),同时制备sRNA S2959缺陷株的空载体株(△S2鞭毛相关基因在sRNA S2959相关菌株中的表达水平。结果成功制备sRNA S2959缺陷株和回补株; sRNA 959-pBAD)和回补株(△S2959-p S2959)等相关菌株。通过sRNA S2959缺陷株和野生株的生长曲线实验观察sRNA S2959缺失后对细菌生长的影响;通过细菌sRNA S2959缺陷株、空载体株、回补株的泳动能力实验和生物膜实验观察sRNA S2959对细菌动力以及生物膜形成能力的影响;再用定量PCR(q PCR)方法检测细菌S2959缺陷株和野生株在LB和TSB液体培养基中的生长曲线无明显差异;与野生株相比,sRNA S2959缺陷株的泳动能力和生物膜形成能力下调(P〈0.05),而回补株的泳动能力和生物膜形成能力较缺陷株显著增加(P〈0.05); q PCR结果显示,高表达sRNA S2959后,细菌鞭毛相关基因(flh D、fli A和flj B)的mRNA水平分别上调大约4、3和6倍。结论伤寒沙门菌sRNA S2959促进鞭毛的表达,进一步上调伤寒沙门菌动力以及生物膜的形成能力。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 SRNA 动力 生物膜
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伤寒沙门菌非编码RNA AsrC表达特性及功能初步研究 预览
4
作者 张盈 张晓磊 +3 位作者 詹莉芳 张琪 生秀梅 黄新祥 《华中师范大学学报:自然科学版》 北大核心 2018年第6期832-840,共9页
非编码RNA在细菌的各种生命活动中都发挥着重要的功能.针对伤寒沙门菌非编码RNAAsrC,对其转录和降解特性及其所具有的功能进行初步研究.首先使用Northern blot和qRT-PCR的方法检测了σ因子rpoE和rpoS对AsrC转录的影响,分析了使用利福平... 非编码RNA在细菌的各种生命活动中都发挥着重要的功能.针对伤寒沙门菌非编码RNAAsrC,对其转录和降解特性及其所具有的功能进行初步研究.首先使用Northern blot和qRT-PCR的方法检测了σ因子rpoE和rpoS对AsrC转录的影响,分析了使用利福平抑制细菌RNA合成的情况下,RNaseE和RNase Ⅲ对AsrC降解的影响.其次使用AsrC缺陷株和高表达菌株分析细菌在酸、氧、高渗应激条件下的生长情况.再者通过全基因组芯片技术,研究AsrC高表达菌株基因表达的变化.进一步研究AsrC在细菌侵袭和巨噬细胞胞内生存力中的作用.结果显示,rpoE在酸应激下、rpoS在高渗应激下调节AsrC的转录.细菌中RNaseE主要参与了AsrC的降解.高表达AsrC后,有40个基因表达上调,23个基因表达下调.AsrC高表达可以增强伤寒沙门菌对于上皮细胞的侵袭力,并且可以减弱细菌的胞内生存和增殖力. 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 非编码RNA AsrC 侵袭力 胞内生存力
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细菌素免疫蛋白调控伤寒沙门菌耐药和生物膜的形成 预览
5
作者 陈珉池 刘锐 +2 位作者 颜冬梅 赵昕 黄新祥 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2017年第6期461-465,共5页
目的:研究伤寒沙门菌SPI-8编码的两种细菌素免疫蛋白的功能。方法:用自杀质粒p GMB151介导的同源重组法,制备细菌素免疫蛋白基因缺陷变异株(△t3036,△t3038,△t3036△t3038);采用药敏纸片法检测细菌对8种抗菌药物的抵抗能力;结晶... 目的:研究伤寒沙门菌SPI-8编码的两种细菌素免疫蛋白的功能。方法:用自杀质粒p GMB151介导的同源重组法,制备细菌素免疫蛋白基因缺陷变异株(△t3036,△t3038,△t3036△t3038);采用药敏纸片法检测细菌对8种抗菌药物的抵抗能力;结晶紫染色法观察细菌生物膜的形成。结果:通过PCR验证及序列比对,伤寒沙门菌细菌素免疫蛋白基因缺陷变异株制备成功;药敏实验结果显示,△t3038和△t3036△t3038变异株对氨苄西林、庆大霉素、多黏菌素B、环丙沙星、卡那霉素、亚胺培南等6种抗菌药物的抵抗能力明显变弱(P均〈0.01),△t3036对8种抗菌药物的抵抗能力均无明显变化;生物膜形成实验结果显示,与野生株相比,△t3036生物膜形成能力增强(P〈0.05),△t3038和△t3036△t3038生物膜形成能力明显减弱(P均〈0.01),而△t3036△t3038生物膜形成能力较△t3038减弱。结论:伤寒沙门菌细菌素免疫蛋白T3036和T3038均能够促进细菌生物膜形成,T3038能够增强细菌对抗菌药物的抵御。 展开更多
关键词 细菌素免疫蛋白 伤寒沙门菌 SPI-8 耐药 生物膜
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多黏菌素B刺激下伤寒沙门菌mig-14基因的表达特性 预览
6
作者 陈龙 杨璐璐 +4 位作者 李敏 殷灵莉 徐顺高 黄新祥 生秀梅 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2017年第3期243-247,共5页
目的:研究多黏菌素B(polymyxin,PB)刺激下,伤寒沙门菌mig-14基因的表达是否受调节因子Fis、OmpR、IHF、HilD激活。方法:用自杀质粒法分别制备hilD及IHF的α亚基编码基因(himA)和β亚基编码基因(himD)的缺陷株;然后通过实时定量... 目的:研究多黏菌素B(polymyxin,PB)刺激下,伤寒沙门菌mig-14基因的表达是否受调节因子Fis、OmpR、IHF、HilD激活。方法:用自杀质粒法分别制备hilD及IHF的α亚基编码基因(himA)和β亚基编码基因(himD)的缺陷株;然后通过实时定量PCR和lacZ融合实验比较PB刺激下mig-14在伤寒沙门菌各缺陷株(himA、himD、hilD、fis、ompR)与野生株中的转录水平差异,筛选出作用于mig-14的调控因子。结果:成功制备伤寒沙门菌himA、himD及hilD缺陷株;在多黏菌素B刺激下,实时定量PCR结果显示fis、ompR、himA、himD及hilD缺陷株中mig-14 mRNA水平明显低于野生株;lac Z融合实验中,fis、ompR、himA、himD及hilD缺陷株Miller Units值明显低于野生株。结论:在多黏菌素B刺激下,调节因子Fis、OmpR、IHF、HilD可激活伤寒沙门菌mig-14表达。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 多黏菌素B mig-14 基因调控
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伤寒沙门菌长链非编码RNA AS-RpoH分子鉴定 预览
7
作者 李雪娇 刘锐 +2 位作者 熊昌艳 赵昕 黄新祥 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2017年第4期287-290,共4页
目的:探讨伤寒沙门菌非编码RNA AS-RpoH的分子特性,为进一步研究其调控功能和机制奠定基础。方法:在AS-RpoH表达高峰区设计特异性探针,运用RNA印迹检测AS-RpoH的表达;通过PCR寻找AS-RpoH可能的转录起始位点和终止位点;在yhhk编码区设... 目的:探讨伤寒沙门菌非编码RNA AS-RpoH的分子特性,为进一步研究其调控功能和机制奠定基础。方法:在AS-RpoH表达高峰区设计特异性探针,运用RNA印迹检测AS-RpoH的表达;通过PCR寻找AS-RpoH可能的转录起始位点和终止位点;在yhhk编码区设计特异性探针,运用RNA印迹分析yhhk的转录产物。结果:RNA印迹结果显示,AS-RpoH在沙门菌中确实存在,长约3 000 nt;PCR结果表明,AS-RpoH的转录终止位点位于rpo H基因起始密码子上游191-238 nt之间;而其转录起始位点可能位于yhh K上游;RNA印迹分析结果表明yhh K基因的转录产物与AS-RpoH的长度一致。结论:长链非编码RNA AS-RpoH在伤寒沙门菌中存在表达,可能为yhh K的3'非翻译区。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 非编码RNA AS-RpoH 分子鉴定 yhhK
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Fis介导伤寒沙门菌滞留菌形成 预览
8
作者 颜冬梅 陆仁飞 +2 位作者 赵昕 张盈 黄新祥 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2017年第3期248-251,256共5页
目的:探讨伤寒沙门菌滞留现象的存在,研究Fis在伤寒沙门菌滞留菌形成中发挥的作用。方法:用药敏纸片和最小抑菌浓度检测进行药敏实验,挑选伤寒沙门菌敏感的抗生素。利用菌落计数法,绘制细菌存活曲线。qRT-PCR检测伤寒沙门菌fis的表达... 目的:探讨伤寒沙门菌滞留现象的存在,研究Fis在伤寒沙门菌滞留菌形成中发挥的作用。方法:用药敏纸片和最小抑菌浓度检测进行药敏实验,挑选伤寒沙门菌敏感的抗生素。利用菌落计数法,绘制细菌存活曲线。qRT-PCR检测伤寒沙门菌fis的表达。采用细菌滞留实验分析细菌滞留能力。结果:伤寒沙门菌在对数生长的早期和中晚期都存在滞留现象。与野生株相比,fis基因缺失株的滞留能力下降。结论:Fis可参与伤寒沙门菌滞留菌的形成。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 滞留菌 FIS 抗生素
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非编码RNA AsrH对伤寒沙门菌表型的影响 预览
9
作者 刘娟利 李雪娇 +3 位作者 熊昌艳 徐慧 赵昕 黄新祥 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2016年第1期40-44,共5页
目的:研究非编码RNA Asr H在伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)中的作用,观察其对应激条件下的生存能力、动力以及生物膜形成等表型的影响。方法:用自杀质粒p GMB151介导的同源重组法,制备asr H基因启动子缺... 目的:研究非编码RNA Asr H在伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)中的作用,观察其对应激条件下的生存能力、动力以及生物膜形成等表型的影响。方法:用自杀质粒p GMB151介导的同源重组法,制备asr H基因启动子缺失变异株;绘制生长曲线,观察S.Typhi在酸、氧和高渗应激条件下的生长;用半固体平板培养观察S.Typhi的动力;用结晶紫染色法观察S.Typhi生物膜形成情况。结果:序列分析表明,在变异株asr H基因启动子区域缺失了120 bp;生长曲线显示,与野生株相比,asr H缺陷株在酸性和高渗应激下的生存能力明显降低,而在氧应激下一定时间内升高;asr H缺陷株动力几乎完全消失,而生物膜形成能力强于野生株。结论:Asr H有助于S.Typhi在酸性和高渗应应激环境下生长,对S.Typhi的动力至关重要,且能抑制生物膜的形成。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 非编码RNA 环境应激 动力 生物膜
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伤寒沙门菌小RNAT64的功能 预览 被引量:1
10
作者 徐慧 袁一航 +5 位作者 陆仁飞 刘娟利 张盈 生秀梅 徐顺高 黄新祥 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2016年第4期320-323,327共5页
目的:探究小RNAT64对伤寒沙门菌(SWmoraeMaeniericaserovarTyphi,S.Typhi)表型的影响。方法:用入-Red重组系统构建小RNAT64的基因缺失变异株,并将携带T64基因序列的重组质粒导人T64缺陷株制备T64回补株,同时将该质粒导人/!/?基因缺... 目的:探究小RNAT64对伤寒沙门菌(SWmoraeMaeniericaserovarTyphi,S.Typhi)表型的影响。方法:用入-Red重组系统构建小RNAT64的基因缺失变异株,并将携带T64基因序列的重组质粒导人T64缺陷株制备T64回补株,同时将该质粒导人/!/?基因缺陷变异株。绘制T64高表达株的生长曲线,观察T64对细菌生长的影响;接种半固体平板观察细菌的动力;结晶紫染色法观察细菌生物膜形成情况。结果:序列分析表明,T64基因缺失变异株构建成功;生长曲线显示,T64高表达促进细菌的生长;与空载体对照株相比,T64高表达株的动力稍减弱;生物膜分析结果显示,T64高表达株生物膜形成能力强于空载体对照株;回补T64基因后,T64缺陷株生物膜形成能力基本恢复,而h/g缺陷株依旧难以形成生物膜。结论:T64能促进细菌生长,且在一定程度上抑制细菌的动力;其有助于S.TypM形成生物膜,但不足以消除/!/?基因缺失对生物膜形成的抑制作用。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 小RNA 生长 动力 生物膜形成
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QseBC双组分调控系统对伤寒沙门菌动力的调节作用
11
作者 吉滢 倪斌 +2 位作者 张义全 杨瑞馥 黄新祥 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期357-359,367共4页
目的:研究伤寒沙门菌QseBC双组分调控系统对伤寒菌动力的调节作用。方法比较伤寒沙门菌野生株(WT)、qseB缺陷株(ΔqseB)和qseC缺陷株(ΔqseC)动力差异,选取主要鞭毛基因flhD进行实时定量RT-PCR检测,同时检测qseB的表达水平;... 目的:研究伤寒沙门菌QseBC双组分调控系统对伤寒菌动力的调节作用。方法比较伤寒沙门菌野生株(WT)、qseB缺陷株(ΔqseB)和qseC缺陷株(ΔqseC)动力差异,选取主要鞭毛基因flhD进行实时定量RT-PCR检测,同时检测qseB的表达水平;构建qseB高表达株,比较其与空载体对照株动力和flhD表达差异。结果与WT相比,ΔqseB动力无变化,ΔqseC动力减弱;在ΔqseC中, flhD表达量下调至约1/4而qseB表达上调;qseB高表达株动力较WT减弱, flhD表达下调。结论 qseBC双组分调控系统能调节伤寒菌动力和主要鞭毛基因flhD的表达;qseB高表达时可抑制细菌动力。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 QseBC双组分系统 动力
非编码RNA AsrC对巨噬细胞中伤寒沙门菌生存能力的影响 预览
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作者 张琪 杨如月 +6 位作者 徐蓉 严蓉 于佳慧 印赟 翟培臖 张盈 黄新祥 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2015年第3期185-189,共5页
目的:研究伤寒沙门菌非编码RNA Asr C对其在巨噬细胞中生存能力的影响及机制。方法:用Asr C高表达菌株和空质粒对照株分别感染巨噬细胞12,24 h,检测伤寒沙门菌在感染细胞中的生存能力;qRT-PCR检测asr C、rse C、rpo E mRNA的表达水平;... 目的:研究伤寒沙门菌非编码RNA Asr C对其在巨噬细胞中生存能力的影响及机制。方法:用Asr C高表达菌株和空质粒对照株分别感染巨噬细胞12,24 h,检测伤寒沙门菌在感染细胞中的生存能力;qRT-PCR检测asr C、rse C、rpo E mRNA的表达水平;蛋白质印迹检测自噬标志蛋白LC3的表达。结果:与空质粒对照株相比,Asr C高表达菌株感染巨噬细胞12,24 h后在巨噬细胞中的生存能力明显下降(P均<0.01),asr C mRNA表达水平增加(P均<0.05),对侧靶基因rse C mRNA的表达水平增高(P均<0.05),而rpo E mRNA的表达水平无明显变化(P>0.05);Asr C高表达菌株自噬标志蛋白LC3的表达与空质粒对照株间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:伤寒沙门菌非编码RNA Asr C高表达可降低其在巨噬细胞中的生存能力,可能与自噬无直接关系。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 非编码RNA AsrC 胞内生存 自噬
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伤寒沙门菌外膜孔道蛋白ompC、ompF缺陷株的制备及其耐药性 预览 被引量:1
13
作者 汪伟伟 夏歆 +4 位作者 王静瑜 张桂红 陈龙 黄新祥 生秀梅 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2015年第6期532-535,542共5页
目的:制备伤寒沙门菌omp C缺陷株及omp C-omp F双缺陷株,研究外膜孔道蛋白Omp C、Omp F在伤寒沙门菌耐药中的作用。方法:经自杀质粒介导的同源重组方法制备omp C缺陷株及omp C-omp F双缺陷株,比较伤寒沙门菌omp C缺陷株、omp F缺陷株... 目的:制备伤寒沙门菌omp C缺陷株及omp C-omp F双缺陷株,研究外膜孔道蛋白Omp C、Omp F在伤寒沙门菌耐药中的作用。方法:经自杀质粒介导的同源重组方法制备omp C缺陷株及omp C-omp F双缺陷株,比较伤寒沙门菌omp C缺陷株、omp F缺陷株及omp C-omp F双缺陷株与野生株在多黏菌素B、卡那霉素以及氨苄青霉素处理下的生存能力。结果:成功制备伤寒沙门菌omp C单缺陷以及omp C-omp F双缺陷株。各菌株在普通培养条件下生长情况无差异;多黏菌素B及氨青苄霉素处理条件下omp C缺陷株、omp C-omp F双缺陷株生存能力明显强于野生株,而omp F缺陷株生存能力则低于野生株;卡那霉素处理条件下,各缺陷株生存能力均明显低于野生株。结论:外膜孔道蛋白Omp C、Omp F参与伤寒沙门菌耐药,但对不同药物的耐药机制不尽相同,具体机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 OMPC OMPF 抗生素 耐药性
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Induction of deletion mutation on ompR gene of Salmonella enterica serovar Typhi isolates from asymptomatic typhoid carriers to evolve attenuated strains for vaccine development
14
作者 Senthilkumar B Anbarasu K +1 位作者 Senbagam D Rajasekarapandian M 《亚太热带医药杂志:英文版》 SCIE 2014年第12期933-939,共7页
Objective:To develop allenualed slrains of Salmonella enterica serorar Typhi(S.typhi) for the candidate vaccine by osmolar stress.Mothods:S.typhi SS3 and SS5 strains were isolated from asymptomatic typhoid carriers... Objective:To develop allenualed slrains of Salmonella enterica serorar Typhi(S.typhi) for the candidate vaccine by osmolar stress.Mothods:S.typhi SS3 and SS5 strains were isolated from asymptomatic typhoid carriers in Mamakkal,Tamil Nadu.India.Both strains were grown in LB(Luria Bertani) medium supplemented with various concentration of NaCl(0.1- 0.7M) respectively.The effecl of osmolar stress was determined at molecular level by PCR using MCR 06 and MCR07 primers corresponding to ompR with chromosomal DNA of S.typhi SS3 and SS5 strains.Attenuation by osmolar stress results in deletion mutation of the.S.typhi slrains was determined by agglutination assays,precipitation method.SDS PAGE analysis and by animal models.Results:The 799 bp amplified ompR gene product from wild type S.typhi SS3 and SS5 illustrate the presence of virulent gene.Interestingly,there was only a 282 bp amplified product from S.typhi SS3 and SS5 grown in the presence of 0.5.0.6 and 0.7 M NaCl.This illustrates the occurrence of deletion mutation in ompR gene al high concentration of NaCl.Furthermore,both the wildtype and mutant S.typhi outer membrane SDS-PAGF.profile reveals the differences in the expression of ompF.ompC and ompA proteins.In mice,wild type and mutant strains lethal dose(LD<sub>50</sub>) were determined.The mice died within 72 h when both the wild type strains were injected intraperitoneally with 3 log CFU-mL<sup>-1</sup>.When the mice were injected with the mutants in same dosage,no clinical symptoms were observed;whereas the serum antibodv litre was elicited within two weeks indicated that the mutants have the ability to induce protective humoral immune response.These results suggest that S.typhi SS3 and SS5 may bo used as good candidate strains for the development of live attenuated vaccine against salmonellosis.Conclusions:This study demonstrates that the S.typhi strains were allenualed and could be good vaccine candidates in future. 展开更多
关键词 ATTENUATED live vaccine SALMONELLA ENTERICA SEROVAR Typhi Mutants
鼠伤寒沙门菌spvC基因缺陷变异株的制备 预览 被引量:2
15
作者 陈强 吴春雪 +3 位作者 余晓君 李红 朱春晖 刘晓艳 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2014年第3期235-239,共5页
目的:为进一步研究鼠伤寒沙门菌毒力基因spvC的功能,制备鼠伤寒沙门菌spvC基因缺陷变异株。方法:根据鼠伤寒沙门菌spvC基因序列,设计PCR特异性引物,制备spvC基因缺陷性同源性核苷酸片段,导入自杀质粒pCVD442后再导入鼠伤寒沙门菌野生株... 目的:为进一步研究鼠伤寒沙门菌毒力基因spvC的功能,制备鼠伤寒沙门菌spvC基因缺陷变异株。方法:根据鼠伤寒沙门菌spvC基因序列,设计PCR特异性引物,制备spvC基因缺陷性同源性核苷酸片段,导入自杀质粒pCVD442后再导入鼠伤寒沙门菌野生株,进行同源重组,用PCR观察重组现象,将完全重组的菌株作为spvC基因的缺陷变异株,并通过核苷酸序列分析加以确定。结果:PCR及序列分析证实,缺陷变异株的spvC基因缺失711个碱基。结论:成功构建鼠伤寒沙门菌spvC基因缺陷变异株,为进一步研究其在鼠伤寒沙门菌中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 SPVC 基因缺陷变异 同源重组
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鼠伤寒沙门菌spvB基因缺陷变异株的制备及其抗酸能力检测 预览 被引量:1
16
作者 吴春雪 陈强 +5 位作者 李红 余晓君 朱春晖 李岚 何美娟 刘晓艳 《华中科技大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期399-404,共6页
目的为深入研究鼠伤寒沙门菌毒力基因spvB的功能,制备鼠伤寒沙门菌spvB基因完全缺陷变异株,观察spvB基因缺陷株在体外酸性环境中的生存能力。方法根据鼠伤寒沙门菌spvB基因序列,设计PCR特异性引物,制备spvB基因缺陷性同源性核苷酸片段,... 目的为深入研究鼠伤寒沙门菌毒力基因spvB的功能,制备鼠伤寒沙门菌spvB基因完全缺陷变异株,观察spvB基因缺陷株在体外酸性环境中的生存能力。方法根据鼠伤寒沙门菌spvB基因序列,设计PCR特异性引物,制备spvB基因缺陷性同源性核苷酸片段,导入自杀质粒pCVD442后再导入鼠伤寒沙门菌野生株,进行同源重组,用PCR方法观察重组现象,将完全重组的菌株作为spvB基因的缺陷变异株,并通过核苷酸序列分析加以确定。绘制生长曲线,对比spvB基因缺陷变异株与野生株在酸性条件下的生存情况。结果 PCR及序列分析证实,缺陷变异株的spvB基因缺失1 749bp。酸性条件下培养1h及2h后,野生株的活菌数高于spvB基因缺陷株,差异有统计学意义(P〈0.05);且野生株在酸性环境中的生存率明显高于缺陷株,野生株在1h及2h后的生存率分别为85.6%、74.9%,缺失株分别为68.0%、42.3%。结论成功构建鼠伤寒沙门菌spvB基因缺陷变异株,并发现在酸性条件下其生存能力明显降低,为进一步研究其在鼠伤寒沙门菌中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 spvB 基因缺陷变异 同源重组 生长曲线
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伤寒沙门菌Mig-14蛋白部分密码子优化后的表达及多克隆抗体制备 预览
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作者 张红 生秀梅 +2 位作者 徐顺高 黄新祥 许化溪 《华中师范大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2014年第2期246-250,共5页
通过原核表达Mig-14蛋白,制备相应多克隆抗体,用于后续Mig-14分子功能研究,为探寻Mig-14拮抗PB分子机制奠定基础.经密码子偏爱性分析显示mig-14基因含有8%的稀有密码子,综合考虑密码子偏好性、GC含量、限制性酶切位点等影响因素对密码... 通过原核表达Mig-14蛋白,制备相应多克隆抗体,用于后续Mig-14分子功能研究,为探寻Mig-14拮抗PB分子机制奠定基础.经密码子偏爱性分析显示mig-14基因含有8%的稀有密码子,综合考虑密码子偏好性、GC含量、限制性酶切位点等影响因素对密码子进行优化,重新合成mig-14基因,PCR获得周质空间部分,克隆至表达载体pET22b(+),并转入大肠埃希菌JM109中表达,KCl染色后切胶纯化的蛋白作为抗原免疫家兔,制备多克隆抗体.Mig-14蛋白多克隆抗体的制备为后续免疫共沉淀研究Mig 14的作用蛋白奠定了基础. 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 mig-14 密码子优化 多克隆抗体
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多位点串联重复序列分析和脉冲场凝胶电泳对伤寒沙门菌基因分型
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作者 吴伟元 王辉 +6 位作者 陆坚 刘映霞 卢月梅 吴劲松 李文青 程锦娥 吴文苑 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期264-268,共5页
目的:比较多位点串联重复序列分析( MLVA)和脉冲场凝胶电泳( PFGE)对伤寒沙门菌基因分型的能力,构建适合伤寒沙门菌的MLVA分型方法。方法根据国外文献报道选出5个多变的伤寒沙门菌串联重复序列( VNTR)位点( SAL02、SAL11、SAL1... 目的:比较多位点串联重复序列分析( MLVA)和脉冲场凝胶电泳( PFGE)对伤寒沙门菌基因分型的能力,构建适合伤寒沙门菌的MLVA分型方法。方法根据国外文献报道选出5个多变的伤寒沙门菌串联重复序列( VNTR)位点( SAL02、SAL11、SAL16、SAL20、TR4699)设计MLVA分型方案,运用MLVA分型方案和国际PulseNet公布的沙门菌PFGE分型方案对2002至2007年21株流行病学不相关的深圳社区感染伤寒沙门菌基因分型,比较这两种分型方法对伤寒沙门菌基因分型的能力。结果5个单一VNTR位点对深圳地区伤寒沙门菌的分型能力( D值)为0.838~0.943;使用MLVA分型方法,获得19种MLVA型别;使用PFGE分型方法,获得19种PFGE型别;两种分型方法的D值均为0.99,且结果完全一致。结论5个VNTR位点的MLVA分型方法可作为一种简单快速准确的基因分型方法用于伤寒沙门菌感染流行的分析。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 基因分型 多位点串联重复序列分析 脉冲场凝胶电泳
非编码小RNA T64对伤寒沙门菌基因表达的影响 预览 被引量:2
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作者 王哲鑫 吉滢 +2 位作者 赵昕 徐顺高 黄新祥 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2014年第4期298-301,306共5页
目的:对由转录组测序获得的伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)非编码小RNA(small non-coding RNA,snRNA)T64的表达进行验证,并对其功能进行初步探讨。方法:选取特异性引物采用反转录PCR(RT-PCR)和普通PCR确认T64在... 目的:对由转录组测序获得的伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)非编码小RNA(small non-coding RNA,snRNA)T64的表达进行验证,并对其功能进行初步探讨。方法:选取特异性引物采用反转录PCR(RT-PCR)和普通PCR确认T64在S.Typhi中的表达;将含有T64 snRNA序列的重组质粒导入S.Typhi野生株构建T64高表达株;结合应用S.Typhi全基因组芯片分析技术,比较S.Typhi T64高表达株和空载体对照株在对数期基因表达谱差异,并对部分基因芯片结果进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证。结果:RT-PCR结果显示,snRNA T64在S.Typhi确有表达;基因芯片分析结果显示,与空载体对照株比,snRNA T64高表达株在对数期有20个基因表达上调,7个下调;4个被选基因表达的qRT-PCR结果与芯片分析结果相符。结论:snRNA T64在S.Typhi中表达,可能在基因的表达调节中发挥重要作用。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 非编码小RNA 基因芯片分析 实时荧光定量PCR 基因表达调节
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伤寒沙门菌质粒对巨噬细胞自噬过程的影响 预览 被引量:1
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作者 王贝贝 阙凤霞 +2 位作者 李嫄渊 吴淑燕 黄瑞 《微生物与感染》 2013年第1期26-32,共7页
为研究伤寒沙门菌质粒PRms对人巨噬细胞THP-1自噬过程的影响,以携带伤寒沙门菌质粒pR_ST98 的野生株ST6、消除pR_ST98的突变株ST6-△pR_ST98和将pR_ST98经接合转移的回补株ST6-C-PRm8为受试菌,与THP-1共培养建立感染模型,并加入自噬... 为研究伤寒沙门菌质粒PRms对人巨噬细胞THP-1自噬过程的影响,以携带伤寒沙门菌质粒pR_ST98 的野生株ST6、消除pR_ST98的突变株ST6-△pR_ST98和将pR_ST98经接合转移的回补株ST6-C-PRm8为受试菌,与THP-1共培养建立感染模型,并加入自噬作用阻断剂氯喹(cQ)进行干预。首先测定CQ单独作用对细胞及细菌的影响,确定CQ最适浓度;在细菌和细胞共作用后的不同时间点收集细胞,通过蛋白免疫印迹法(WB)和mRFP-GFP-LC3质粒转染法检测细胞LC3Ⅱ蛋白、p62蛋白、自噬体及自噬溶酶体的变化。结果显示,30μmol/LCQ对细胞自噬的阻断效果明显,且细胞存活率超过50%,对细菌也无明显影响。WB结果显示,用该浓度CQ干预后,ST6-ApR-s感染组细胞的LC3Ⅱ及p62表达量上升程度显著高于野生株ST6组及回补株ST6-C-pR_ST98 组;CQ干预组3株受试菌感染细胞LC3点状结构数量均高于未加CQ组,且ST6-△pR_ST98感染组细胞的点状结构数量明显增加。以上结果提示,伤寒沙门菌质粒pRsass在自噬前期发挥作用,早于溶酶体降解的过程。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 质粒 巨噬细胞 自噬
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