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副溶血性弧菌分泌系统在致病力中作用的研究进展
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作者 穆丽丽 牛犇 赵勇 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期621-631,共11页
致病菌借助分泌系统将特异蛋白直接注入宿主细胞内,破坏宿主细胞内的多种信号通路,是导致细菌定殖和感染的有效途径。作为一种重要的食源性致病菌,副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,T3SS... 致病菌借助分泌系统将特异蛋白直接注入宿主细胞内,破坏宿主细胞内的多种信号通路,是导致细菌定殖和感染的有效途径。作为一种重要的食源性致病菌,副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,T3SS)和Ⅵ型分泌系统(Type Ⅵ secretion system,T6SS)是其对宿主细胞产生致病性的重要因素。本文综述了副溶血性弧菌T3SS和T6SS效应物在致病力中的具体作用,以及相关调控机理,为进一步了解由副溶血性弧菌导致的病症,研究其致病机理以及寻找致病性靶标提供参考。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 T3SS T6SS 致病力 效应物
铜绿假单胞菌中T3SS毒力基因分布、表达及与抗菌药物耐药相关性研究 预览 被引量:1
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作者 张秀彩 张肖肖 +3 位作者 王忠永 陈栎江 董郭枫 周铁丽 《临床检验杂志》 CAS 2019年第1期14-18,共5页
目的探究临床分离铜绿假单胞菌中T3SS毒力基因分布、表达及与耐药的相关性。方法收集2015年温州医科大学附属第一医院分离的铜绿假单胞菌共68株。琼脂稀释法检测抗菌药物的敏感性;PCR法检测不同来源菌株exo U、exo S、exo T、exo Y 4种... 目的探究临床分离铜绿假单胞菌中T3SS毒力基因分布、表达及与耐药的相关性。方法收集2015年温州医科大学附属第一医院分离的铜绿假单胞菌共68株。琼脂稀释法检测抗菌药物的敏感性;PCR法检测不同来源菌株exo U、exo S、exo T、exo Y 4种毒力基因的分布,并对结果进行统计学分析;实时荧光定量PCR检测部分菌株中转录调控相关基因ptrA、exs A以及效应蛋白基因exo T、exo S的表达情况,并对4种基因的相对表达量进行Pearson相关性分析。结果 68株铜绿假单胞菌中,exo T和exo Y检出率较高,分别为79.4%和75.0%,其中exo T在创面来源菌株中的检出率高于痰液(97.0%vs 61.8%,P<0.01),且以exo U-/exo S+基因型最常见,占51.5%(35/68)。痰液来源的菌株对亚胺培南、美罗培南的耐药率显著高于创面来源菌株(47.1%vs 8.8%,47.1%vs 14.7%,P<0.01);携带exo U基因的菌株对碳青霉烯类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类药物耐药率均高于其他3种基因型菌株。Pearson相关性分析显示ptrA基因表达量与exo T、exo S、exs A基因表达水平均呈负相关(P<0.05)。结论本院临床分离的铜绿假单胞菌T3SS毒力基因exo T和exo Y的携带率较高,毒力基因与铜绿假单胞菌耐药性相关,ptrA可能是T3SS毒力基因表达的潜在负调控基因。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 T3SS 细菌耐药 PTRA
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An improved protein expression system for T3SS genes regulation analysis in Xanthomonas oryzae pv.oryzae 预览
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作者 XU Jin-bo ZHANG Cui-ping +5 位作者 WUNIERBIEKE Mei-li YANG Xiao-fei LI Yi-lang CHEN Xiao-bin CHEN Gong-you ZOU Li-fang 《农业科学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第6期1189-1198,共10页
Xanthomonas oryzea pv.oryzae(Xoo)is the causal agent of bacterial blight of rice,which is a significant threat to many of rice-growing regions.The type Ⅲ secretion system(T3SS)is an essential virulence factor in Xoo.... Xanthomonas oryzea pv.oryzae(Xoo)is the causal agent of bacterial blight of rice,which is a significant threat to many of rice-growing regions.The type Ⅲ secretion system(T3SS)is an essential virulence factor in Xoo.Expression of the T3SS is often induced in the host environment or in hrp-inducing medium but is repressed in nutrient-rich medium.The elucidation of molecular mechanism underlying induction of T3SS genes expression is a very important step to lift the veil on global virulence regulation network in Xoo.Thus,an efficient and reliable genetic tool system is required for detection of the T3SS proteins.In this study,we constructed a protein expression vector pH3-flag based on the backbone of pHM1,a most widely used vector in Xoo strains,especially a model strain PXO99A.This vector contains a synthesized MCS-FLAG cassette that consists of a multiple cloning site(MCS),containing a modified pUC18 polylinker,and Flag as a C-terminal tag.The cassette is flanked by transcriptional terminators to eliminate interference of external transcription enabling detection of accurate protein expression.We evaluated the potential of this expression vector as T3SS proteins detection system and demonstrated it is applicable in the study of T3SS genes expression regulation in Xoo.This improved expression system could be very effectively used as a molecular tool in understanding some virulence genes expression and regulation in Xoo and other Xanthomonas spp. 展开更多
关键词 XANTHOMONAS ORYZAE pv.oryzae broad-host range VECTOR expression VECTOR T3SS GENES
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迟缓爱德华菌T3SS转位因子EseC促炎反应 预览
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作者 赵凯英 刘孝琪 +5 位作者 敬吉波 曹育嘉 张聂珂 张仪迪 高大庆 陆承平 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期865-872,共8页
目的 Ⅲ型分泌系统(T3SS)是迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda,简称Et)一种重要的毒力因子,EseC是T3SS一个转位因子。通过缺失eseC基因,探索Et菌T3SS与该菌感染细胞和组织后,诱导宿主产生炎症反应的关系。方法 构建Et.CD菌eseC基因缺失... 目的 Ⅲ型分泌系统(T3SS)是迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda,简称Et)一种重要的毒力因子,EseC是T3SS一个转位因子。通过缺失eseC基因,探索Et菌T3SS与该菌感染细胞和组织后,诱导宿主产生炎症反应的关系。方法 构建Et.CD菌eseC基因缺失株及其互补株;用菌落计数法比较两菌株在RAW264.7巨噬细胞胞内存活数目;用CCK-8法比较两菌株感染巨噬细胞后的细胞存活率;利用流式比较野生株和缺失株诱发巨噬细胞的细胞坏死。分别将野生株和缺失株注射小鼠腹腔,用菌落计数法比较两菌株在肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中细菌CFU/mL,以及通过观察这些器官的大小和HE染色切片组织,比较两菌株对这些小鼠组织的炎症反应;用ELISA比较这些小鼠血清促炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的浓度;用RT-PCR,比较野生株和缺失株效应蛋白基因转录水平。结果 eseC基因缺失后,Et感染巨噬细胞后,胞内细菌数目和细胞存活率均明显降低,说明野生株感染细胞后,可通过其T3SS引起更多细胞的死亡,释放出更多细菌成份;野生株可通过其T3SS诱导更多巨噬细胞发生坏死,伴有大量促炎症因子的释放;T3SS有助于野生株在肝、肺、脾和肾中组织中的大量增殖;野生株感染小鼠后,和eseC基因缺失株相比,它们的肝脏,脾脏和肺脏外观明显肿大,肝、肺、脾和肾组织中有明显的急性炎症反应,野生株诱发产生的促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β浓度明显高于缺失株;RT-PCR结果显示,eseC基因的缺失使得Et菌的T3SS效应蛋白的eseJ和eseE基因转录水平明显下降。结论 eseC基因可以通过T3SS影响Et在组织和细胞的致炎作用。 展开更多
关键词 eseC基因 迟缓爱德华菌 Ⅲ型分泌系统 炎症
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致病性大肠杆菌致结肠癌细胞微绒毛损伤的毒力分子研究 预览
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作者 周诗璞 林华 杨健 《川北医学院学报》 CAS 2018年第4期520-523,共4页
目的:PEC感染结肠癌TC-7细胞致微绒毛损伤的毒力分子。方法:分别用EPEC野毒株、III型分泌系统删除株(Δcfm-14)、束状菌毛删除株(Δbfp A)、外膜蛋白删除株(Δeae)、效应分子Map删除株(Δmap)、效应分子Map和Esp F联合删除株... 目的:PEC感染结肠癌TC-7细胞致微绒毛损伤的毒力分子。方法:分别用EPEC野毒株、III型分泌系统删除株(Δcfm-14)、束状菌毛删除株(Δbfp A)、外膜蛋白删除株(Δeae)、效应分子Map删除株(Δmap)、效应分子Map和Esp F联合删除株(Δmap esp F)、外膜蛋白受体删除株(Δtir)及相应质粒互补株感染TC-7细胞,通过扫描电镜(SEM)检测细菌黏附及TC-7细胞微绒毛脱落损伤情况。结果:野生型EPEC感染时,大量细菌先局限性黏附,接着紧密黏附在TC-7细胞表面,细胞微绒毛大量脱落;Δbfp A感染时,极少细菌黏附细胞,微绒毛完好,但补充表达Bfp A后可以恢复到野生型表型;而Δcfm-14感染时,大量细菌局限性黏附,但微绒毛损伤轻微;Δeae或Δtir删除株感染TC-7细胞后,可见细菌呈局限性黏附,但细胞微绒毛大量脱落,相应质粒表达互补后可以恢复到野生型表型;而Δesp F或Δmap esp F感染TC-7细胞后,有大量细菌紧密黏附,细菌下陷入微绒毛丛,但微绒毛损伤轻微,质粒表达互补可恢复删除株表型。结论:多个效应分子参与EPEC黏附,但Esp F是造成微绒毛脱落损伤的重要分子。 展开更多
关键词 致病性大肠杆菌 Ⅲ型分泌系统 微绒毛
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2013-2015年杭州地区急性腹泻患者来源副溶血弧菌毒力基因及耐药性调查 被引量:6
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作者 谭焕腾 陈晓 +3 位作者 蒋俊丽 王若南 孙长贵 陈瑜 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2017年第2期151-154,158共5页
目的对2013-2015年杭州地区腹泻患者副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)毒力基因的携带和耐药进行调查研究。方法可疑菌株用全自动细菌鉴定仪(VITEK2Compact,生物梅里埃,法国)进行鉴定,用PCR方法检测其8种毒力基因,用纸片扩散法检... 目的对2013-2015年杭州地区腹泻患者副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)毒力基因的携带和耐药进行调查研究。方法可疑菌株用全自动细菌鉴定仪(VITEK2Compact,生物梅里埃,法国)进行鉴定,用PCR方法检测其8种毒力基因,用纸片扩散法检测13种抗生素的敏感性。结果 120株副溶血弧菌中,tdh+或trh+的致病菌株占95.0%(114株),tdh-且trh-的非致病株占5.0%(6株)。所有120株副溶血弧菌均含有T3SS1基因,T3SS2α基因主要存在于tdh+/trh-的菌株中,T3SS2β存在于trh+的菌株中,2株tdh-的菌株首次检出T3SS2α基因。本研究中大流行菌株占64.2%(77株),非大流行菌株占35.8%(43株)。多达65.8%的副溶血弧菌对氨苄西林耐药,而90.0%以上的副溶血弧菌对其他抗生素包括喹诺酮类、第三代头孢菌素类、氨基糖苷类、四环素类和磺胺类抗菌药物较敏感。结论杭州地区腹泻来源的副溶血弧菌多为大流行菌株,对常见抗菌药物敏感性高,但耐药率有所上升,要加强监测并引起临床重视。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 TDH TRH T3SS 耐药性
不同温度下福氏志贺茵与其膜囊泡的比较蛋白质组学研究 预览
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作者 韩冬梅 卫灿东 《云南农业大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2017年第6期967-974,共8页
【目的】对不同温度下福氏志贺菌( Shigella flexneri )及其分泌的膜囊泡进行比较蛋白质组学分析,为进一步理解福氏志贺菌膜囊泡的生物学活性奠定基础。【方法】采用差速离心和密度梯度离心方法,分别富集纯化37℃和30℃培养条件下... 【目的】对不同温度下福氏志贺菌( Shigella flexneri )及其分泌的膜囊泡进行比较蛋白质组学分析,为进一步理解福氏志贺菌膜囊泡的生物学活性奠定基础。【方法】采用差速离心和密度梯度离心方法,分别富集纯化37℃和30℃培养条件下的野生型福氏志贺菌2a301株和相应的膜囊泡;借助二维纳升液相色谱一线性离子阱质谱联用系统:对制备得到的4种组分蛋白进行鸟枪蛋白质组学鉴定分析。【结果】37℃和30℃培养条件下,福氏志贺菌茵体蛋白和膜囊泡蛋白的鉴定总数分别为1510、231、1412、281,4种组分的共有蛋白数为156。生物信息学分析结果发现:膜囊泡中特异性富集了核糖体结构蛋白和膜起源蛋白,且37℃培养条件下的膜囊泡特异包被了大量三型分泌系统相关蛋白。【结论】运用比较蛋白质组学技术首次分析了不同温度下福氏志贺菌及其膜囊泡的蛋白质组变化,发现一些温度相关的膜囊泡特异包被蛋白,为深入研究膜囊泡的选择性包被奠定基础。 展开更多
关键词 福氏志贺菌 膜囊泡 蛋白质组 三型分泌系统
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鲁氏耶尔森菌invF基因无痕缺失突变株的构建及生物学特性 预览
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作者 闵洁 汪开毓 +3 位作者 刘韬 贺扬 胡伟 罗梦笛 《水产学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期1858-1866,共9页
鲁氏耶尔森菌是一种具有广泛致病性的条件致病肠杆菌。三型分泌系统(T3SS)是该菌的重要毒力系统,其中invF基因是T3SS功能表达的重要调控因子。为探讨invF和T3SS对Y.ruckeri致病作用的影响,本研究构建了Y.ruckeri SC09株invF基因的无... 鲁氏耶尔森菌是一种具有广泛致病性的条件致病肠杆菌。三型分泌系统(T3SS)是该菌的重要毒力系统,其中invF基因是T3SS功能表达的重要调控因子。为探讨invF和T3SS对Y.ruckeri致病作用的影响,本研究构建了Y.ruckeri SC09株invF基因的无痕缺失株,并对其生物学特性进行研究。通过融合PCR方法,将invF基因的上、下游片段A、C融合,构建同源臂AC;将获得的同源臂AC连接入自杀质粒pLP12,构建pLP12-invF同源重组载体;pLP12-invF电转化进入供体菌株大肠杆菌β2163,并利用接合转移方法转入受体菌株Y.ruckeri SC09,利用抗生素正向筛选和vmt反向筛选分别对插入突变株和缺失突变株进行筛选,并利用PCR技术和序列测定对Y.ruckeri invF缺失株进行鉴定;对突变株和野生株进行菌体菌落形态观察、生化特性鉴定和生长曲线测定。结果显示,融合PCR、AC片段经氯霉素抗性正向筛选和vmt反向筛选,PCR鉴定和测序鉴定后,成功获得了Y.ruckeri SC09 invF基因的无痕缺失突变株,突变株和野生株菌体菌落形态和生化特性基本一致,突变株菌落较野生株小,各个时期突变株的生长浓度较野生株低。研究表明,采用自杀质粒pLP12和大肠杆菌β2163接合转移系统,利用抗生素正向筛选和vmt反向筛选技术,在对其基本生物学特性无显著影响的情况下,可简捷高效地获得invF基因的无痕缺失突变株。 展开更多
关键词 鲁氏耶尔森菌 三型分泌系统 invF基因 无痕突变 生物学特性
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十字花科黑腐病菌群体密度和DSF信号因子负调控Ⅲ型分泌系统
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作者 王凛 李光华 +4 位作者 梁雪莲 杨丽超 阳丽艳 甘永亮 姜伯乐 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2017年第9期3814-3818,共5页
十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)是能在全世界引起十字花科植物黑腐病的革兰氏阴性细菌。群体感应(quorum sensing,QS)是细菌通过感应菌群生长密度调控自身生理活动和致病因子的作用。Xcc QS信号分子为... 十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)是能在全世界引起十字花科植物黑腐病的革兰氏阴性细菌。群体感应(quorum sensing,QS)是细菌通过感应菌群生长密度调控自身生理活动和致病因子的作用。Xcc QS信号分子为DSF(diffusible signal factor)因子,感受系统由rpf(regulation of pathogenicity factors)基因簇编码。Ⅲ型分泌系统(T3SS)是Xcc与寄主植物相互作用并致病的关键系统,Xcc的Ⅲ型分泌系统是由hrp(hypersensitive response and pathogenicity)基因簇所编码的。研究rpf/DSF系统对Ⅲ型分泌系统的调控作用,对于揭示该病原菌致病分子机制,以及植物病害防治具有重要的意义。针对Xcc 8004菌株,利用连有hrp B基因启动子区的p LGUS报告质导入Xcc 8004中,在XCM诱导培养基中添加DSF因子后通过测定GUS酶活对比DSF对hrp基因的调控作用。结果发现,随着菌体浓度的增长,hrp B基因的表达呈下降趋势;额外加入DSF因子后hrp B基因的表达量呈现下降趋势。十字花科黑腐病菌中菌体密度和信号扩散因子对Ⅲ型分泌系统有负调控作用。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 群体感应 rpf/DSF系统 Ⅲ型分泌系统
十字花科黑腐病菌一个编码FhrR蛋白的基因功能分析
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作者 王凛 李光华 +1 位作者 杨丽超 姜伯乐 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2017年第8期3258-3265,共8页
十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)的Rpf C/Rpf G双组分系统感应DSF(diffusible signal factor)因子,并通过二级信使环二鸟苷酸(c-di-GMP)调控下游Clp、Zur和Fhr R等全局性转录因子。为进一步研究Fhr R... 十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)的Rpf C/Rpf G双组分系统感应DSF(diffusible signal factor)因子,并通过二级信使环二鸟苷酸(c-di-GMP)调控下游Clp、Zur和Fhr R等全局性转录因子。为进一步研究Fhr R在Xcc中的调控作用,本研究构建了编码Fhr R蛋白的XC3027基因的整合突变体PK3027。植株试验表明PK3027突变对致病力和过敏(HR)反应没有影响。将连有hrp G、hrp X、hrp B、hrc U和hrp F启动子的p L6GUS报告质粒导入PK3027中,在XCM培养基中检测gus报告基因表达,结果表明XC3027对这些hrp基因的表达没有影响。表达纯化Fhr R蛋白后进行了凝胶阻滞实验,发现该转录调控蛋白不能直接与hrp X启动子结合。在Xcc 8004中Fhr R不参与Ⅲ型分泌系统相关基因的调控,并与病原菌致病无关。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 rpf/DSF系统 Ⅲ型分泌系统 Fhr R
温度对副溶血弧菌T3SS中相关基因表达的影响 预览 被引量:1
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作者 丁晓燕 曲凌云 +3 位作者 王琛 田欣欣 孙承君 王敏强 《海洋科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期250-259,共10页
III型分泌系统(type III secretion system,T3SS)是副溶血弧菌主要的毒力因子之一,能传递与致病有关的毒性因子来发挥病原菌的毒性,而温度是影响细菌基因表达等生命活动的关键生态因子。本文以ATCC17802和JA21作为实验菌株,分别提取其... III型分泌系统(type III secretion system,T3SS)是副溶血弧菌主要的毒力因子之一,能传递与致病有关的毒性因子来发挥病原菌的毒性,而温度是影响细菌基因表达等生命活动的关键生态因子。本文以ATCC17802和JA21作为实验菌株,分别提取其RNA,在不同温度和温度应激条件下,以pvuA为内参基因,以副溶血弧菌T3SS1的vcrD1、vopS、vopD1和T3SS2的vscC2β、vcrD2β、vopP2β作为目的基因,运用荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测T3SS相关基因的表达下,用ΔΔCt法计算基因表达差异。结果表明:副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)ATCC17802菌株的T3SS1基因在16℃表达量最高,T3SS2基因在25℃表达量最高。副溶血弧菌JA21菌株的T3SS1基因和T3SS2基因均在25℃表达量最高。2株副溶血弧菌从不同的培养温度转入到应激温度37℃后,T3SS1和T3SS2基因的表达量均被显著诱导,并表现出时间依赖性,呈现先升高后降低的趋势。这为进一步探究环境因素与副溶血弧菌致病力的关系提供了科学依据。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 T3SS RT-PCR 基因表达
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十字花科黑腐病菌应急反应相关基因spokc对TXcc基因调控作用的分析
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作者 刘国芳 苏辉昭 +4 位作者 刘伟 牛祥娜 玉延华 姜伟 何勇强 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期27-36,共10页
通过反向遗传学方法和半定量RT-PCR方法,研究了十字花科黑腐病菌中被注释的应急反应相关基因spoTXcc与Ⅲ型分泌系统(T3SS)基因的调控关系。基于自杀质粒pKl8mob同源整合方法构建了十字花科黑腐病菌spoTXcc基因(XC_0956)的非极性整... 通过反向遗传学方法和半定量RT-PCR方法,研究了十字花科黑腐病菌中被注释的应急反应相关基因spoTXcc与Ⅲ型分泌系统(T3SS)基因的调控关系。基于自杀质粒pKl8mob同源整合方法构建了十字花科黑腐病菌spoTXcc基因(XC_0956)的非极性整合突变体,检测了突变体的多种表型,发现spozk突变体延迟了在非寄主植物辣椒ECW-10R上引发的过敏反应(HR)。利用GUS(β-葡糖苷酸酶)活性检测、原位组织染色和半定量RT-PCR的方法,发现T3SS相关基因在spoTXcc基因的非极性整合突变体中表达量降低,表明十字花科黑腐病菌中被注释的应急反应相关基因妒spoTXcc显著正调控T3SS相关基因的表达。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 spoTXcc基因 过敏反应(HR) T3SS 调控
沙门氏菌毒力岛及Ⅲ型分泌系统研究进展 预览 被引量:6
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作者 陈俊 蒋文灿 +2 位作者 谭天 许凯迪 杨丽红 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期371-376,共6页
沙门氏菌(Salmonella)是寄生于人和动物肠道内的革兰氏阴性杆菌,能引起人和动物多种不同临床症状表现,为人类食物中毒主要病原菌之一。沙门氏菌的侵袭力与毒力岛(pathogenicity island,PI)及其编码的Ⅲ型分泌系统(TypeⅢsecretion ... 沙门氏菌(Salmonella)是寄生于人和动物肠道内的革兰氏阴性杆菌,能引起人和动物多种不同临床症状表现,为人类食物中毒主要病原菌之一。沙门氏菌的侵袭力与毒力岛(pathogenicity island,PI)及其编码的Ⅲ型分泌系统(TypeⅢsecretion system,T3SS)直接相关。本文对沙门氏菌毒力岛、T3SS组成、T3SS分泌及调控机制、T3SS与沙门氏菌致病性、应用研究等进行综述,以期为深入研究提供参考。 展开更多
关键词 沙门氏菌 毒力岛 Ⅲ型分泌系统 T3SS
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肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Ⅲ型分泌系统效应蛋白NleF基因敲除菌株的构建及其生物学功能初探
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作者 徐婷婷 宋婷 +3 位作者 周围 戴红梅 岳俊杰 梁龙 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期747-750,共4页
目的构建肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7 T3SS效应蛋白Nle F敲除菌株和回复菌株,研究其对细菌生长和细胞死亡的影响。方法利用λ-Red同源重组的方法构建nle F基因敲除菌株Δnle F;将p ET-24a(+... 目的构建肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7 T3SS效应蛋白Nle F敲除菌株和回复菌株,研究其对细菌生长和细胞死亡的影响。方法利用λ-Red同源重组的方法构建nle F基因敲除菌株Δnle F;将p ET-24a(+)-Nle F重组质粒导入敲除菌感受态细胞中构建回复菌株Δnle F/Nle F。将野生株、敲除株和回复株分别用LB和DMEM(10%FBS)培养,每隔1 h测定D600,绘制生长曲线;分别用3种菌株感染He La细胞,用细胞毒性试剂盒检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,计算细胞毒性。结果成功构建Nle F敲除菌株Δnle F和回复菌株Δnle F/Nle F;野生株、敲除株和回复株三者的生长速率无明显差异;与野生株相比,Δnle F感染He La细胞后,细胞毒性增加,Δnle F/Nle F感染后He La细胞毒性与野生株相当。结论 EHEC O157∶H7 T3SS效应蛋白Nle F对细菌的生长无明显影响,但可能抑制由细菌感染引起的宿主细胞死亡。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌 O157∶H7 NleF 基因敲除 T3SS λ-Red同源重组
副溶血性弧菌食物中毒及腹泻菌株Ⅲ型分泌系统的检测及分析 被引量:3
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作者 邵占涛 李颖 +2 位作者 王园园 朱美娟 王彦波 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2015年第2期159-162,共4页
目的了解副溶血性弧菌食物中毒和临床腹泻株Ⅲ型分泌系统的分布以及耐药特征。方法对食物中毒和临床腹泻分离到的共21株副溶血性弧菌进行毒力基因tdh、trh、T3SS1、T3SS2α、T3SS2β和toxR检测,并用VITEK 2 compact全自动微生物鉴定系... 目的了解副溶血性弧菌食物中毒和临床腹泻株Ⅲ型分泌系统的分布以及耐药特征。方法对食物中毒和临床腹泻分离到的共21株副溶血性弧菌进行毒力基因tdh、trh、T3SS1、T3SS2α、T3SS2β和toxR检测,并用VITEK 2 compact全自动微生物鉴定系统进行了耐药性分析。结果 21株菌株中tdh+/trh-占90.48%(19/21),tdh-/trh+和tdh-/trh-分别占4.76%、4.76%,未检测到tdh+/trh+菌株。T3SS1广泛存在于所有菌株中。T3SS2α存在于tdh+/trh-菌株,T3SS2β存在于tdh-/trh+菌株。1株食物中毒菌株毒力基因携带情况为tdh-/trh-/T3SS2α-/T3SS2β-。21株副溶血性弧菌对阿莫西林、头孢吡肟、抗菌素B、庆大霉素、环丙沙星和复方新诺明敏感,对氨苄西林完全耐药。结论食物中毒和临床腹泻分离到的菌株大多携带tdh基因,T3SS2α与tdh相关,而T3SS2β则存在于trh+菌株。未携带tdh和trh基因的食物中毒分离株表明副溶血性弧菌不仅仅依赖TDH和TRH发挥毒力作用,其致病机制具有多样性和复杂性。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 TDH TRH T3SS
沙门菌毒力效应蛋白对宿主NF-κB信号通路的调控
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作者 郑学明 《生命的化学》 CAS CSCD 2015年第1期61-65,共5页
沙门菌(Salmonella)通过向宿主细胞分泌毒力效应蛋白(effector protein)来调控细胞内一系列的信号传导通路,从而有利于沙门菌的侵染和繁殖。NF-κB信号通路在宿主对病原菌的炎症反应及免疫应答中发挥着重要的作用,也是很多毒力效应... 沙门菌(Salmonella)通过向宿主细胞分泌毒力效应蛋白(effector protein)来调控细胞内一系列的信号传导通路,从而有利于沙门菌的侵染和繁殖。NF-κB信号通路在宿主对病原菌的炎症反应及免疫应答中发挥着重要的作用,也是很多毒力效应蛋白调控的靶点。沙门菌致病岛(Salmonella pathogenicity island,SPI)-1上的毒力效应蛋白Sip A、Sop E、Sop E2和Sop B都能激活宿主细胞的NF-κB信号通路,而毒力效应蛋白Spt P、Avr A、Ssp H1以及SPI-2上的Sse L能有效地抑制NF-κB信号通路。研究这些毒力效应蛋白对NF-κB信号通路的时相调控和协同作用,将进一步揭示沙门菌的致病机制。 展开更多
关键词 沙门菌 毒力效应蛋白 NF-ΚB 致病岛 Ⅲ型分泌系统
西瓜嗜酸菌分泌系统的研究进展 被引量:1
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作者 安心 王铁霖 +3 位作者 杨玉文 唐爽爽 刘志恒 赵廷昌 《北方园艺》 CAS 北大核心 2014年第14期196-199,共4页
植物病原细菌多为革兰氏阴性菌。细菌的分泌系统与其致病性有密切的联系,其研究对揭示植物病原细菌的致病机理具有重要意义。现从细菌分泌系统、西瓜嗜酸菌致病机理及Ⅱ型和Ⅲ型分泌系统与西瓜嗜酸菌致病性之间的关系等角度出发,重点阐... 植物病原细菌多为革兰氏阴性菌。细菌的分泌系统与其致病性有密切的联系,其研究对揭示植物病原细菌的致病机理具有重要意义。现从细菌分泌系统、西瓜嗜酸菌致病机理及Ⅱ型和Ⅲ型分泌系统与西瓜嗜酸菌致病性之间的关系等角度出发,重点阐述了与西瓜嗜酸菌分泌系统有关的功能基因,为进一步研究西瓜嗜酸菌的作用机理及寻找其致病性靶标提供理论依据。 展开更多
关键词 西瓜嗜酸菌 T2SS T3SS 功能基因 致病性
溶藻弧菌vscO基因在不同环境下的表达差异 预览 被引量:1
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作者 庞欢瑛 周泽军 +3 位作者 丁燏 黄郁葱 吴灶和 简纪常 《吉首大学学报:自然科学版》 CAS 2014年第4期59-63,共5页
为阐明溶藻弧菌vscO的在不同环境下的表达情况,用半定量RT-PCR方法检测vscO mRNA在不同生长时期、不同环境因子(温度、盐度和pH值)培养下的相对表达量.结果表明,溶藻弧菌vscO在对数期,温度为28℃,盐度为2%以及培养基起始pH值为7.0时... 为阐明溶藻弧菌vscO的在不同环境下的表达情况,用半定量RT-PCR方法检测vscO mRNA在不同生长时期、不同环境因子(温度、盐度和pH值)培养下的相对表达量.结果表明,溶藻弧菌vscO在对数期,温度为28℃,盐度为2%以及培养基起始pH值为7.0时的表达量最高. 展开更多
关键词 溶藻弧菌 Ⅲ型分泌系统(T3SS) vscO基因 环境因子 基因表达
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溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统分子伴侣护航蛋白VscO的基因克隆及其生物信息学分析 预览 被引量:3
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作者 庞欢瑛 周泽军 +3 位作者 丁燏 黄郁葱 吴灶和 简纪常 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期155-161,共7页
克隆了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)ZJ03株Ⅲ型分泌系统(T3SS)分子伴侣护航蛋白(Chaperone escort protein) vscO基因,并对其进行生物信息学分析。结果表明,vscO基因全长462 bp,编码153个氨基酸,理论分子量约为18.43 kD,p... 克隆了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)ZJ03株Ⅲ型分泌系统(T3SS)分子伴侣护航蛋白(Chaperone escort protein) vscO基因,并对其进行生物信息学分析。结果表明,vscO基因全长462 bp,编码153个氨基酸,理论分子量约为18.43 kD,pI值为9.22。细胞定位分析显示vscO基因位于外周质,不存在信号肽,无跨膜区。vscO基因具有转录起始区-35区和-10区,以及翻译识别信号SD序列(Shine-Dalgarno sequence)。该氨基酸序列含有多种活性位点,如蛋白激酶C磷酸化位点等。系统进化树发现溶藻弧菌的VscO蛋白与副溶血弧菌聚为同一亚族。VscO亚基三维结构模型显示其与副溶血弧菌T3SS的YscO蛋白有相似构型。信号通路分析推测VscO位于T3SS的针状样结构上。蛋白网络互作图谱发现VscO与10种T3SS蛋白具有相邻关系。本研究结果将为溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统护航机制的研究奠定基础。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 Ⅲ型分泌系统(T3SS) 分子伴侣护航vscO基因
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大肠杆菌O157∶H7Ⅲ型分泌系统的缺陷突变株对HeLa细胞黏附能力的影响
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作者 王玉瑞 廖翔 +3 位作者 周围 戴红梅 宋婷 梁龙 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期795-798,共4页
目的:构建O157∶H7 EDL933菌株Ⅲ型分泌系统( T3SS)缺陷突变株ΔescR,感染HeLa细胞后检测其黏附能力。方法通过重叠延伸PCR扩增出中间为卡那霉素抗性基因,两侧为escR基因上下游同源序列的重组线性DNA片段,电击转入含pKD46的EDL93... 目的:构建O157∶H7 EDL933菌株Ⅲ型分泌系统( T3SS)缺陷突变株ΔescR,感染HeLa细胞后检测其黏附能力。方法通过重叠延伸PCR扩增出中间为卡那霉素抗性基因,两侧为escR基因上下游同源序列的重组线性DNA片段,电击转入含pKD46的EDL933感受态细胞中,escR基因被kan基因替换而缺失。绘制野生株与ΔescR生长曲线,并利用免疫荧光观察两株细菌对HeLa细胞的黏附能力。结果获得缺陷突变株ΔescR,相较于野生株,该突变株在DMEM(10%FBS)培养基中生长速度以及对HeLa细胞的黏附能力明显下降。结论 T3SS结构蛋白escR基因的缺失破坏了EDL933 T3SS的形成,影响了该菌株黏附能力,其构建为后续研究T3SS奠定了基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌 0157:H7 Ⅲ型分泌系统 escR基因 HELA细胞 λRed同源重组
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