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鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及比较 预览
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作者 祁芳菲 楼滨 杨青 《复旦学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期445-453,共9页
目的建立鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型并比较其生物学特征。方法体外培养鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞,经氧化型低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL)刺激后,油红O染色,于荧光倒置显微镜下观察泡沫细胞形态... 目的建立鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型并比较其生物学特征。方法体外培养鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞,经氧化型低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL)刺激后,油红O染色,于荧光倒置显微镜下观察泡沫细胞形态及脂质富集情况。采用qRT-PCR技术检测ox-LDL对细胞内炎性因子表达的影响;流式细胞术检测ox-LDL对细胞凋亡的影响;酶标仪分别检测ox-LDL对细胞内脂质过氧化标志物活性氧(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平的影响;HPLC检测ox-LDL对鼠、人源巨噬细胞内催化色氨酸沿犬尿氨酸途径(kynurenine pathway,KP)分解代谢的限速酶吲哚胺2,3-双加氧化酶1(indoleamine 2,3 dioxygenase 1,IDO1)活性的影响。结果鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞经ox-LDL处理后,大量脂质在细胞内富集沉积,形成泡沫细胞。ox-LDL既可诱发巨噬细胞内炎性因子高表达,也会引起ROS和MDA水平显著升高,表明ox-LDL可以诱导鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞内炎症反应和脂质过氧化产生。ox-LDL更容易引发人源THP-1巨噬细胞的凋亡,而对鼠源RAW264.7巨噬细胞凋亡却无明显影响。ox-LDL在鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞中均可激活KP。结论鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞均可通过ox-LDL处理来建立稳定的鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型。 展开更多
关键词 泡沫细胞 RAW264.7 THP-1 炎症因子 活性氧(ROS) 丙二醛(MDA) 吲哚胺2 3-双加氧化酶1(IDO1)
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Salusin-α通过调控PPARγ抑制THP-1源性泡沫细胞形成 预览
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作者 刘枝婷 赵唯 +3 位作者 陈菲 王顺 潘燕 杨文琼 《华中科技大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期268-275,共8页
目的 探究Salusin-α是否通过调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome pro-liferator-activated receptor gamma,PPARγ)下调酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(acyl-coA:cholesterol acyltransferase 1,ACAT1)抑制THP-1源性泡沫细胞... 目的 探究Salusin-α是否通过调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome pro-liferator-activated receptor gamma,PPARγ)下调酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(acyl-coA:cholesterol acyltransferase 1,ACAT1)抑制THP-1源性泡沫细胞形成。方法 THP-1细胞以160 nmol/L佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(Phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)孵育48 h诱导分化为巨噬细胞,再用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,Ox-LDL)孵育48 h诱导分化为泡沫细胞,Ox-LDL孵育的同时加入不同浓度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 nmol/L)Salusin-α处理。采用酶偶联比色法检测细胞游离胆固醇(free cholesterol,FC)和总胆固醇(total cholesterol,TC)含量,两者之差即为胆固醇酯(cholesterol ester,CE),比较各组CE/TC的比值;油红O染色法观察胞质脂滴的变化;RT-PCR和Western blot分别检测各组ACAT1、PPARγ mRNA和蛋白相对表达量。用特异性PPARγ抑制剂T0070907进一步验证Salusin-α抑制THP-1源性泡沫细胞形成的分子机制。结果胆固醇检测及油红O染色提示泡沫细胞模型构建成功。随着Salusin-α浓度的增加,CE/TC先降低后稍增加,0.6 nmol/L时最低,差异有统计学意义。Salusin-α可明显减少胞质内脂滴的形成,抑制泡沫细胞形成;同时浓度依赖性降低ACAT1 mRNA和蛋白相对表达量,增加PPARγ mRNA和蛋白相对表达量,差异有统计学意义。T0070907可降低PPARγ mRNA和蛋白相对表达量,增加ACAT1 mRNA和蛋白相对表达量,部分阻断Salusin-α抑制泡沫细胞形成的作用。结论 Salusin-α通过激活PPARγ通路下调ACAT1抑制THP-1源性泡沫细胞形成,发挥抗动脉粥样硬化作用。 展开更多
关键词 Salusin-α THP-1 泡沫细胞 PPARΓ ACAT1 动脉粥样硬化
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LNK基因沉默对THP-1细胞EPO、EPOR表达影响的研究
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作者 田润梅 罗茜 +4 位作者 谭梅 史良 黄成双 苏琼 陈艳 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1013-1019,共7页
目的:探讨LNK基因沉默对人单核细胞白血病细胞(THP-1)EPO、EPOR表达的影响。方法:培养THP-1细胞,以慢病毒为载体介导SiRNA稳定沉默LNK基因,感染72h后在荧光倒置显微镜下观察GFP表达水平;应用流式细胞术检测慢病毒感染效率,RT-PCR验证LN... 目的:探讨LNK基因沉默对人单核细胞白血病细胞(THP-1)EPO、EPOR表达的影响。方法:培养THP-1细胞,以慢病毒为载体介导SiRNA稳定沉默LNK基因,感染72h后在荧光倒置显微镜下观察GFP表达水平;应用流式细胞术检测慢病毒感染效率,RT-PCR验证LNK沉默效应,并检测EPO及EPOR mRNA表达水平;应用Western blot检测LNK、EPO及EPOR蛋白水平。结果:慢病毒感染72h在荧光倒置显微镜下观察GFP表达水平达85%以上,流式细胞术检测感染效率均在99%以上;LNK沉默组LNK、EPO及EPORmRNA表述水平明显低于对照组(P<0.05)。LNK沉默组LNK、EPO及EPOR蛋白水平明显低于对照组(P<0.05)。结论:成功建立了LNK基因沉默的THP-1细胞株。沉默LNK基因,则EPO及EPOR表达下调,提示LNK可能参与了EPO及EPOR的调控。 展开更多
关键词 THP-1 淋巴细胞特异性连接蛋白 促红细胞生成素 促红细胞生成素受体
人细胞系活化试验用于皮肤致敏性测试的实验验证
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作者 袁园 阳晓燕 +3 位作者 石莹 阮鸿洁 宋瑞霞 张宏伟 《环境卫生学杂志》 2019年第1期56-64,共9页
目的在实验室建立皮肤致敏的体外检测方法人细胞系活化试验(human Cell Line Activation Test,h-CLAT),并对染料前体、染发剂成品的皮肤致敏性进行检测。方法参考OECD 442(E)标准方法,用OECD 442(E)附表2推荐的10种验证物质建立方法,确... 目的在实验室建立皮肤致敏的体外检测方法人细胞系活化试验(human Cell Line Activation Test,h-CLAT),并对染料前体、染发剂成品的皮肤致敏性进行检测。方法参考OECD 442(E)标准方法,用OECD 442(E)附表2推荐的10种验证物质建立方法,确定实验可靠性,对4种样品进行皮肤致敏性检测。分别使用CCK-8法和流式细胞术检测10种验证物质的细胞毒性并进行比较。结果 10种验证物质检测结果符合OECD 442(E)要求,4种样品的h-CLAT检测结果和LLNA方法结果一致。CCK-8法和流式细胞术检测细胞毒性结果均符合OECD参考范围,两种方法的组内相关系数(Intra-group Correlation Coefficient,ICC)为0. 993。结论在实验室内建立了可靠的h-CLAT检测方法,并且可以应用于部分染发类产品的致敏性检测。 展开更多
关键词 h-CLAT 皮肤致敏 体外替代方法 THP-1 CCK-8
葡萄糖调节蛋白78对单核巨噬细胞分化的影响
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作者 胡继军 王梅 +4 位作者 方静 马春梅 沈加裙 凃星 陈文莹 《临床血液学杂志:输血与检验》 2019年第2期252-257,共6页
目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对单核巨噬细胞分化的影响。方法:利用佛波酯(PMA)诱导形成THP-1单核细胞来源巨噬细胞模型。实验分为4组,分别为对照组(PMA浓度为50 ng/ml)、GRP78 10 ng/ml组(GRP78浓度10 ng/ml+PMA 50 ng/ml)、GRP78... 目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对单核巨噬细胞分化的影响。方法:利用佛波酯(PMA)诱导形成THP-1单核细胞来源巨噬细胞模型。实验分为4组,分别为对照组(PMA浓度为50 ng/ml)、GRP78 10 ng/ml组(GRP78浓度10 ng/ml+PMA 50 ng/ml)、GRP78 20 ng/ml组(GRP78浓度20 ng/ml+PMA 50 ng/ml)、GRP78 40 ng/ml组(GRP78浓度40 ng/ml+PMA 50 ng/ml),培养72 h。应用流式细胞术检测巨噬细胞M1型特异表面标志物CD86、M2型特异表面标志物CD163的表达;实时荧光定量PCR检测巨噬细胞M1型相关因子iNOS、M2型相关因子FIZZ-1、TGF-β、ARG-1及IL-10的mRNA表达。结果:与对照组比较,其他3组的CD163阳性巨噬细胞百分比显著增加(P<0.01);而各实验组CD86阳性巨噬细胞百分比没有明显改变。与对照组相比,GRP78实验组中各组FIZZ-1、TGF-β的mRNA水平均有增加,其中GRP78 40 ng/ml组FIZZ-1、TGF-β的mRNA水平明显增高(P<0.01);各组其他因子iNOS、IL-10和ARG-1的mRNA水平则没有明显变化。结论:GRP78可诱导THP-1单核巨噬细胞极化成M2型巨噬细胞。 展开更多
关键词 葡萄糖调节蛋白78 THP-1 巨噬细胞 极化
白细胞黏附分子CD44在肺结核患者体内的表达水平、作用及机制研究 预览
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作者 张宪波 刘月皎 +1 位作者 钱世宁 董杰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期213-219,共7页
目的:研究CD44在肺结核患者体内的表达,并初步探讨其可能的作用机制。方法:选取本院拟诊为肺结核患者236例,分为肺结核组(n=152)和非肺结核组(n=84),随机选取健康体检者100名作为健康对照组,qRT-PCR检测不同组别人群外周血单个核细胞PBM... 目的:研究CD44在肺结核患者体内的表达,并初步探讨其可能的作用机制。方法:选取本院拟诊为肺结核患者236例,分为肺结核组(n=152)和非肺结核组(n=84),随机选取健康体检者100名作为健康对照组,qRT-PCR检测不同组别人群外周血单个核细胞PBMC和结核性胸膜炎患者胸水中CD44的表达,ELISA检测治疗前后结核性胸膜炎患者血浆和胸水中CD44的水平;进一步分析CD44在结核感染中的产生机制和发挥作用的方式;同时分析CD44与T-spot.TB联合检测对肺结核的诊断价值。结果:在肺结核患者外周血PBMC和结核性胸膜炎患者胸水中CD44mRNA的表达水平显著高于非肺结核组和健康对照组,肺结核患者血浆和结核性胸膜炎患者胸水中CD44蛋白浓度显著高于非肺结核组和健康对照组;治疗后3、6、9月肺结核患者的外周血中CD44的mRNA水平,以及血浆中CD44浓度,显著降低,相比治疗前差异具有统计学意义;CD44和结核杆菌共作用的THP-1细胞可以显著提高细胞中CCL-2的表达,表明CD44通过促进结核杆菌感染的巨噬细胞中CCL2的表达来调节细胞的迁移;利用TNF-α中和抗体或者功能性TNF-α作用THP-1细胞,结果发现TNF-α可以显著提高细胞中CD44的表达。结论:CD44在结核患者体内高表达,可能是由于结核患者中高表达的TNF-α,从而刺激巨噬细胞产生CD44,为肺结核的临床诊断提供一定的研究基础。 展开更多
关键词 肺结核 CD44 TNF-Α THP-1
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人β防御素2抗氧化型低密度脂蛋白诱导的单核细胞泡沫化的作用机制研究
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作者 沈桢巍 雷撼 李鹏 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 2019年第5期287-291,共5页
目的明确人β防御素2(human β-defensin-2,hBD2)基因氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,OX-LDL)诱导的人单核巨噬细胞(human leukemic monocyte ,THP-1)泡沫化的作用和机制.方法用OX-LDL诱导THP-1细胞建立单核细胞... 目的明确人β防御素2(human β-defensin-2,hBD2)基因氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,OX-LDL)诱导的人单核巨噬细胞(human leukemic monocyte ,THP-1)泡沫化的作用和机制.方法用OX-LDL诱导THP-1细胞建立单核细胞泡沫化模型并通过油红O染色进行模型鉴定.通过慢病毒系统在THP-1细胞中过表达hBD2基因,并检测hBD2过表达对OX-LDL诱导的THP-1细胞泡沫化的影响.酶联免疫吸附试验测定各组细胞上清液炎症因子肿瘤坏死因子( tumor necrosis factor, TNF)-α、白细胞介素(interleukin, IL)-1β和IL-6含量.组间差异比较采用t检验.结果重组病毒感染后72 h,细胞的基因转染效率接近100%.细胞对照组hBD2蛋白水平为0.122 ±0.024,对照病毒感染组为0.123 ±0.022,hBD-2感染组为0.981 ±0.183,细胞对照与hBD-2感染组比较差异有统计学意义(t=-3.175,P=0.007);病毒感染后72 h,细胞对照组hBD2基因mRNA相对表达量为0.131 ± 0.021,对照病毒感染组为0.128 ±0.022, hBD-2感染组为1.001 ±0.105,细胞对照组与hBD-2感染组比较差异有统计学意义(t=-7.213,P=0.003).油红O染色结果表明,OX-LDL诱导THP-1细胞72 h,能够明显引起细胞内脂质堆积,hBD2过表达则可以有效抑制OX-LDL诱导引起的THP-1细胞内脂质堆积. THP-1组和THP-1+Lv-hBD2+OX-LDL诱导组hBD2 mRNA相对表达量均显著高于THP-1+OX-LDL诱导组,差异有统计学意义(t值分别为3.237和-6.021,P值分别为0.004和0.003),THP-1组和THP-1+Lv-hBD2+OX-LDL诱导组hBD2蛋白水平均显著高于THP-1+OX-LDL诱导组,差异均有统计学意义(t值分别为0.314和-4.061,P值分别为0.006和0.007),THP-1细胞经OX-LDL诱导72 h,细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6 含量明显上升,与THP-1 组比较差异均有统计学意义( t 值分别为-3.825、-2.017和-3.551, P值分别为0.007、 0.004和0.005);THP-1+Lv-hBD2+OX-LDL组细胞中TNF-α、 IL-1β和IL-6含量明显降低,与THP-1+OX-LDL组比较差异均有统计学意义(t值分别为4.132、 3. 展开更多
关键词 人Β防御素2 THP-1细胞 单核细胞泡沫化 低密度脂蛋白
嗜吞噬无形体Msp2蛋白与宿主互作靶蛋白筛选及生物信息分析
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作者 郑炜 马忠臣 +3 位作者 张辉 张丽娟 陈创夫 王勇 《现代生物医学进展》 CAS 2019年第14期2657-2661,共5页
目的:筛选与嗜吞噬无形体Msp2蛋白互作的THP-1细胞靶蛋白,有助于理解病原体侵袭宿主的分子机理。方法:PCR获得无形体msp2基因克隆到pGBKT7载体上构建诱饵质粒并转化酵母菌株Y2HGold,营养缺陷培养基及蓝白斑实验验证诱饵质粒是否有自激... 目的:筛选与嗜吞噬无形体Msp2蛋白互作的THP-1细胞靶蛋白,有助于理解病原体侵袭宿主的分子机理。方法:PCR获得无形体msp2基因克隆到pGBKT7载体上构建诱饵质粒并转化酵母菌株Y2HGold,营养缺陷培养基及蓝白斑实验验证诱饵质粒是否有自激活、毒性;抽提THP-1总RNA,经反转录、Long-distance PCR、同源重组等构建到pGADT7-Rec载体上并转化酵母菌株Y187,鉴定cDNA文库质量;酵母双杂交筛选与无形体Msp2互作的宿主细胞靶蛋白,生物信息学分析蛋白互作可能导致的信号通路变化。结果:成功构建诱饵质粒;cDNA文库容量达4×106克隆,插入片段大小100-3000 bp,且无污染;酵母双杂交获得宿主靶蛋白7个,分别是NADH脱氢酶(泛醌)1α亚体13(NDUFA13)、锌指蛋白36, C3H样2(ZFP36L2)、核糖体蛋白11(RPL11)、前胸腺素α(PTMA)、C19orf10、组织蛋白酶G(CTSG)、核糖体蛋白S25(RPS25);生物信息学分析,互作的宿主靶蛋白主要参与细胞增殖、细胞凋亡、溶酶体成熟及其它一些信号通路等生物学过程。结论:应用酵母双杂交系统初步筛选出与嗜吞噬细胞无形体表面蛋白Msp2互作的宿主细胞靶蛋白,并利用生物信息学初步分析了其参与的生物学过程,为进一步研究病原菌胞内生存分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 嗜吞噬无形体 Msp2 酵母双杂交 THP-1 生物信息分析
Apelin-13对巨噬细胞极化的影响
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作者 孙梦娜 徐予 +4 位作者 陈昌 郝家亮 岳凤阳 张春丽 孙志阔 《中华实用诊断与治疗杂志》 2019年第5期435-438,共4页
目的探讨合成型Apelin-13对人脐带源间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cell, HUCMSC)与单核巨噬细胞THP-1共培养体系中巨噬细胞极化的影响。方法单核巨噬系细胞THP-1,复苏培养后用佛波酯(phorbol ester, PM... 目的探讨合成型Apelin-13对人脐带源间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cell, HUCMSC)与单核巨噬细胞THP-1共培养体系中巨噬细胞极化的影响。方法单核巨噬系细胞THP-1,复苏培养后用佛波酯(phorbol ester, PMA)+脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)+重组人干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)诱导为M1型巨噬细胞,分为空白对照组和低、中、高浓度组,与HUCMSC共培养后分别用质量浓度为0、100、500、1 000μg/L的Apelin-13进行干预。干预48 h,应用倒置显微镜观察细胞形态;收集M1型巨噬细胞及共培养体系中上层小室内的贴壁巨噬细胞,应用流式细胞术检测细胞膜蛋白CD86及CD206表达;采用ELISA法检测上清液中白细胞介素(interleukin, IL)-4、IL-6、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)表达。结果 Apelin-13干预48 h,THP-1细胞形态由棒状、放射状、树枝状转变为圆形、类圆形,黏附性增强,细胞内颗粒增多,且随Apelin-13浓度增高细胞形态变化明显;低、中、高浓度组细胞表面膜蛋白CD86阳性表达率[(5.633±0.153)%、(3.040±0.529)%、(2.860±0.531)%]低于空白对照组[(16.710±0.103)%],CD206阳性表达率[(93.633±0.351)%、(94.100±0.266)%、(97.402±0.265)%]高于空白对照组[(73.220±1.307)%](P<0.05);中、高浓度组CD86阳性表达率低于低浓度组(P<0.05),中浓度组与高浓度组比较差异无统计学意义(P>0.05);高浓度组CD206阳性表达率高于低、中浓度组(P<0.05),低浓度组与中浓度组比较差异无统计学意义(P>0.05)。低、中、高浓度组IL-6(1.006±0.007、0.682±0.004、0.346±0.004)、IL-1β(1.468±0.033、0.919±0.014、0.908±0.018)、TNF-α(0.880±0.004、0.285±0.005、0.278±0.005)吸光度(optical density, OD)值低于空白对照组(1.417±0.005、1.907±0.004、1.301±0.006)(P<0.05),IL-4(0.101±0.004、0.155±0.003、0.248±0.005)、IL-10(0.117±0.004、0.15 展开更多
关键词 巨噬细胞极化 人脐带源间充质干细胞 APELIN-13 THP-1细胞
Salidroside Inhibits Lipopolysaccharide-ethanol-induced Activation of Proinflammatory Macrophages via Notch Signaling Pathway 预览
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作者 Jian-sha LI Lu-yao FAN +1 位作者 Meng-dan YUAN Ming-you XING 《当代医学科学(英文)》 SCIE CAS 2019年第4期526-533,共8页
Activation of macrophages is a key event for the pathogenesis of various inflammatory diseases.Notch signaling pathway recently has been found to be a critical pathway in the activation of proinflammatory macrophages.... Activation of macrophages is a key event for the pathogenesis of various inflammatory diseases.Notch signaling pathway recently has been found to be a critical pathway in the activation of proinflammatory macrophages.Salidroside (Sal),one of main bioactive components in Rhodiola crenulata (Hook.F.et Thoms) H.ohba,reportedly possesses anti-inflammatory activity and ameliorates inflammation in alcohol-induced hepatic injury.However,whether Sal regulates the activation of proinflammatory macrophages through Notch signaling pathway remains unknown.The present study investigated the effects of Sal on macrophage activation and its possible mechanisms by using both alcohol and lipopolysaccharide (LPS) to mimic the microenvironment of alcoholic liver.Detection of THP-1-derived macrophages exhibited that Sal could significantly decrease the expression of tumor necrosis factor-α(TNF-α),interleukinbeta (IL-1β)and IL-6 in the macrophages at both mRNA and protein levels.Furthermore,Sal significantly suppressed NF-kB activation via Notch-Hes signaling pathway in a dose-dependent manner.Moreover,in the microenvironment of alcoholic liver,the expression of Notch-dependent pyruvate dehydrogenase phosphatase 1 (PDP1) was elevated,and that of Ml gene expression [inducible NO synthase (NOS2)] was up-regulated.These changes could all be effectively ameliorated by Sal.The aforementioned findings demonstrated that Sal could inhibit LPS-ethanol-induced activation of proinflammatory macrophages via Notch signaling pathway. 展开更多
关键词 THP-1 MACROPHAGES SALIDROSIDE Notch tumor NECROSIS factor-α MONOCYTE CHEMOATTRACTANT protei-1
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Bioactive A-ring rearranged limonoids from the root barks of Walsura robusta
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作者 Faliang An Xiaobing Wang +2 位作者 Minghua Yang Jun Luo Lingyi Kong 《药学学报:英文版》 CSCD 2019年第3期545-556,共12页
Screening active natural products, rapid identification, and accurate isolation are of great important for modern natural lead compounds discovery1. We hereby reported the isolation of seven new neotecleanin-type limo... Screening active natural products, rapid identification, and accurate isolation are of great important for modern natural lead compounds discovery1. We hereby reported the isolation of seven new neotecleanin-type limonoids(1–7), seven new limonoids with 5-oxatricyclo[5.4.0.11,4]hendecane ring system(8–14), and two new precursors(15–16) together with four known limonoids(17–20) from the root barks of Walsura robusta. Their structures, including their absolute configurations, were elucidated based on analyses of HR-ESI-MS, 1D/2D NMR, ECD spectrum calculations and singlecrystal X-ray diffraction techniques. Compounds 2, 8, 9, 11, 13, 14, 18 showed significant anti-inflammatory activities in LPS-induced RAW 264.7 cell line, BV2 microglial cells, and Propionibacterium acnes-stimulated THP-1 human monocytic cells. Walrobsin M(11) exhibited anti-inflammatory activity with IC50 value of 7.9670.36 μmol/L, and down-regulated phosphorylation levels of ERK and p38 in a dose-dependent manner. 展开更多
关键词 Walsura ROBUSTA LIMONOID Neotecleanin-type ECD spectrum calculation SINGLE-CRYSTAL X-ray diffraction ANTI-INFLAMMATORY activity PROPIONIBACTERIUM acnes THP-1 human monocytic cell
Pre-incubated with BSA-complexed free fatty acids alters ER stress/autophagic gene expression by carboxylated multi-walled carbon nanotube exposure in THP-1 macrophages
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作者 Qianyu Yang Maolin Wang +3 位作者 Yongbing Sun Shengming Peng Yanhuai Ding Yi Cao 《中国化学快报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第6期1224-1228,共5页
Recently we found that multi-walled carbon nanotube (MWCNT) exposure alters the mRNA levels of endoplasmic reticulum (ER) stress/autophagic genes, but the impact of biological molecules on this response is unclear. He... Recently we found that multi-walled carbon nanotube (MWCNT) exposure alters the mRNA levels of endoplasmic reticulum (ER) stress/autophagic genes, but the impact of biological molecules on this response is unclear. Herein, we compared the different actions of carboxylated MWCNTs (c-MWCNTs) pre-incubated with bovine serum albumin (BSA) or BSA-complexed free fatty acid (denoted as FFA) on macrophages derived from THP-1 monocytes (denoted as THP-1 macrophages). C-MWCNTs exhibited increased diameter and hydrodynamic size as well as decreased absolute zeta potential value after pre-incubation with BSA or FFA, which suggested a coating effect. Cytotoxicity or oxidative stress were not significantly induced after exposure to BSA-or FFA-coated c-MWCNTs. BSA-pre-incubated c-MWCNTs significantly enhanced the expression of the ER stress gene, DDIT3 and the autophagic genes, ATG5, BECN1, and PLIN2, but the mRNA levels of these genes was significantly decreased by FFA-pre-incubated c-MWCNTs. FFA-pre-incubated c-MWCNTs induced significantly higher lipid accumulation and interleukin-6 (IL-6) protein level compared with BSA-pre-incubated c-MWCNTs, which suggested that FFA-pre-incubated c-MWCNTs may more effectively induce the formation of macrophage foam cells. Collectively, our data indicated that pre-incubation with FFA may influence c-MWCNT-induced ER stress/autophagic gene expression and foam cell formation in THP-1 macrophages. 展开更多
关键词 Multi-walled carbon nanotubes (MWCNTs) THP-1 MACROPHAGES Endoplasmic reticulum (ER) stress Autophagy Foam cells
DEPTOR-mTOR信号通路介导的自噬在多发性骨髓瘤中对破骨细胞分化的调控作用 预览 被引量:1
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作者 张浩然 乔旭旭 +4 位作者 毕明宏 翟云芝 钱立宇 潘成武 赵论 《中国医药导报》 CAS 2018年第4期18-22,共5页
目的 探讨沉默RPMI-8226 DEPTOR基因表达在非接触式共培养体系下,对破骨细胞分化因子(RANKL)蛋白表达及THP-1细胞向破骨样分化的作用,并研究其可能机制。方法 构建DEPTOR sh RNA重组慢病毒载体转染RPMI-8226细胞。通过Western blot技... 目的 探讨沉默RPMI-8226 DEPTOR基因表达在非接触式共培养体系下,对破骨细胞分化因子(RANKL)蛋白表达及THP-1细胞向破骨样分化的作用,并研究其可能机制。方法 构建DEPTOR sh RNA重组慢病毒载体转染RPMI-8226细胞。通过Western blot技术从蛋白水平检测RPMI-8226细胞中DEPTOR及RANKL的表达,Western blot检测自噬相关蛋白LC-3和Atg5表达。构建共培养体系,分三组:THP-1细胞单培养组、THP-1+RPMI-8226细胞组和THP-1+DEPTOR sh RNA组。应用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法检测THP-1向破骨样细胞分化过程中抗酒石酸酸性磷酸酶活性改变,应用RT-PCR法检测THP-1细胞降钙素受体(CTR)和组织蛋白酶(Cathepsin)-K m RNA表达水平。结果 DEPTOR sh RNA可明显抑制RPMI-8226细胞中DEPTOR及RANKL蛋白表达(P〈0.05),DEPTOR sh RNA组自噬相关蛋白LC-3和Atg5的蛋白的表达水平较阴性对照转染组及未转染组下降(P〈0.05)。THP-1细胞与RPMI-8226细胞共培养条件下可诱导THP-1细胞破骨样分化,CTR和Cathepsin-K基因表达上调(P〈0.05);DEPTOR sh RNA共培养条件下可抑制THP-1细胞向破骨样细胞分化,CTR和Cathepsin-K基因表达减弱,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论 DEPTOR sh RNA能明显抑制共培养体系中THP-1细胞的破骨样分化,该作用可能与DEPTOR下调RPMI-8226细胞RANKL有关,抑制自噬可阻碍破骨细胞的分化成熟。 展开更多
关键词 骨髓瘤骨病 DEPTOR RNA干扰 自噬 THP-1
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清热解毒方药含药血清对脂多糖刺激下人单核细胞MAPK通路的干预作用 预览
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作者 梅雪 王豪勋 +1 位作者 刘晓蕙 裴兰英 《中国老年学杂志》 北大核心 2018年第21期5275-5277,共3页
目的探讨清热解毒方药毒素清含药血清对单核细胞THP-1内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,从炎症细胞通路层面揭示该药治疗肺炎的机制。方法制备毒素清低、中、高浓度含药血清,以脂多糖(LPS)刺激的单核巨噬细胞为研究对象,... 目的探讨清热解毒方药毒素清含药血清对单核细胞THP-1内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,从炎症细胞通路层面揭示该药治疗肺炎的机制。方法制备毒素清低、中、高浓度含药血清,以脂多糖(LPS)刺激的单核巨噬细胞为研究对象,将培养好的细胞分为:空白组(10%空白药物血清)、模型组(10%空白药物血清+1μg/ml LPS)、毒素清低、中、高浓度组(含10%相应药物血清+1μg/ml LPS)。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞因子白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-8,Western印迹检测P38MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)46/54、细胞外调节蛋白激酶(ERK) 42/44蛋白磷酸化水平。结果与空白组比,模型组细胞IL-1、IL-6、IL-8的表达及P38MAPK、JNK46/54、ERK42/44蛋白的磷酸化水平均显著升高,毒素清不同浓度含药血清组上述指标较模型组降低,以中高浓度组尤为显著(P〈0. 05)。结论 LPS作为感染刺激物作用于单核巨噬细胞,激活了该细胞内MAPK信号通路,促进了炎症因子的分泌。清热解毒方药毒素清减轻肺部炎症损伤的机制与其抑制单核巨噬细胞内MAPK通路的活化,降低炎症细胞因子的表达有关。 展开更多
关键词 脂多糖 单核细胞THP-1 毒素清 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)
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LPS炎性刺激对SAF基因编码区外显子e4B保留和剪切的影响
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作者 曹锡梅 罗旭光 +1 位作者 张潮 郭大玮 《解剖科学进展》 2018年第3期241-246,共6页
目的探讨LPS刺激对血清淀粉样蛋白A转录激活因子(SAF)外显子e4B保留和剪切的影响。方法 LPS刺激不同时间THP-1细胞和去除刺激后放线菌素D处理THP-1细胞的cDNA作模板进行半定量和定量聚合酶链式反应。结果 LPS刺激2h SAF基因外显子e4B... 目的探讨LPS刺激对血清淀粉样蛋白A转录激活因子(SAF)外显子e4B保留和剪切的影响。方法 LPS刺激不同时间THP-1细胞和去除刺激后放线菌素D处理THP-1细胞的cDNA作模板进行半定量和定量聚合酶链式反应。结果 LPS刺激2h SAF基因外显子e4B保留的转录子表达下降、e4B剪切的转录子表达增高,延长刺激至24h,二者的表达呈下降趋势。LPS刺激12h和24h后去除刺激给予放线菌素D初始,上述转录子表达增高;延长放线菌素D作用至2h,二者表达下降。结论延长LPS刺激SAF基因外显子e4B保留和剪切的转录子表达下降可能和RNA降解有关。 展开更多
关键词 血清淀粉样蛋白A转录激活因子 外显子e4B RNA降解 LPS THP-1细胞
PMA活化THP-1的巨噬细胞分化标记特征分析
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作者 杨颖 李勤 +4 位作者 张嘉敏 赵俸涌 杨启修 叶璐夷 朱自严 《中国输血杂志》 2018年第9期930-934,共5页
目的了解佛波酯-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PMA)分化的THP-1(人单核细胞白血病肿瘤细胞)上巨噬细胞标记特征,评估其作为人源巨噬细胞的替代品的可行性。方法用PMA诱导分化THP-1细胞72 h(活化组),并同步分离随机健康O型献血者的新... 目的了解佛波酯-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PMA)分化的THP-1(人单核细胞白血病肿瘤细胞)上巨噬细胞标记特征,评估其作为人源巨噬细胞的替代品的可行性。方法用PMA诱导分化THP-1细胞72 h(活化组),并同步分离随机健康O型献血者的新鲜外周血单个核细胞(PBMC),其中一部分PBMC用人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)培养7 d(7 d PBMC),而未处理的THP-1作为未活化组,分别用流式细胞仪分析这4组细胞的CD14、CD16、HLA-Ⅰ、HLA-DR等细胞表型,并分析Fc受体CD32、CD32b的组成;并用已知含人源HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗体、抗-E、健康献血者血浆各1份以及6种未确定抗体特异性但免疫血液学试验检出疑有不规则抗体的血浆与活化THP-1和新鲜PBMC细胞共培养,观察CD14、CD16、HLA-I、HLA-DR等变化;制备O型IgG致敏红细胞和非致敏红细胞,分别用活化THP-1和PBMC细胞与致敏、非致敏红细胞共培养,进行单核细胞单层试验(MMA)。结果观察到THP-1细胞未活化组为CD14~+CD16~-,活化组为CD14~+CD16~(+d),缺乏PBMC中CD14~-CD16~+以及非经典CD14~(+h) CD16~+,后者在7 d PBMC中明显增加;未活化THP-1表达HLA-Ⅰ类、CD32分子,但HLA-Ⅱ类和CD32b较弱,在PMA刺激后这些抗原或标记分子均升高。发现活化THP-1细胞CD14、CD16分子可被人源性血浆吸附而致下降,而6例未确定抗体特异性的血浆有4例明显降低HLA-Ⅰ类表达。活化THP-1和PBMC均可成功作为单核细胞单层试验的反应细胞,诱导红细胞调理性吞噬。结论 THP-1可替代人单核巨噬细胞作为人源PBMC来源单核巨噬细胞的替代,细胞群落比较少;但是需要注意其与PBMC来源单核巨噬细胞的不同,并具有HLA抗原特异性,因此其应用范围可能比较局限。 展开更多
关键词 THP-1 佛波酯-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯 外周血单个核细胞 单核细胞来源巨噬细胞 吞噬作用 FC受体 MMA
三阴性乳腺癌TCL诱导THP-1细胞活化及分化的研究 预览
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作者 董博翰 丁园园 +2 位作者 戴广丽 王贝茹 张思远 《皖南医学院学报》 CAS 2018年第3期205-209,共5页
目的:研究三阴性乳腺癌细胞裂解物(TCL)对单核细胞活化和分化所产生的影响,以及裂解物诱导单核细胞分化的机制。方法:选取三阴性乳腺癌细胞系HCC1937制备细胞裂解物,以人单核细胞系THP-1作为研究对象。将HCC1937细胞裂解物作用于TH... 目的:研究三阴性乳腺癌细胞裂解物(TCL)对单核细胞活化和分化所产生的影响,以及裂解物诱导单核细胞分化的机制。方法:选取三阴性乳腺癌细胞系HCC1937制备细胞裂解物,以人单核细胞系THP-1作为研究对象。将HCC1937细胞裂解物作用于THP-1细胞,检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-12的分泌情况,并确定促进细胞因子分泌的最佳裂解物剂量和时间点。流式检测HCC1937细胞裂解物作用的THP-1细胞形态及细胞表面CD68表达的改变,并利用Q-PCR的方法检测裂解物作用后THP-1细胞中促分化关键因子转录因子CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)和PU.1蛋白的表达情况。结果:HCC1937细胞裂解物活化的THP-1细胞,大量合成分泌TNF-α、IL-12(P〈0.05)。THP-1细胞在裂解物作用后细胞体积、颗粒度等会发生增大,细胞表面CD68表达上调(P〈0.05),上述表现符合巨噬细胞的特征。与此同时,作用后THP-1细胞中C/EBPα表达出现上调(P〈0.05),而PU.1表达出现下调(P〈0.05)。结论:三阴性乳腺癌HCC1937细胞裂解物活化人单核细胞THP-1,并通过促进分化因子C/EBPα的表达和抑制PU.1的表达诱导THP-1向巨噬细胞分化。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 肿瘤细胞裂解物 THP-1 C/EBPΑ PU.1
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N-cadherin表达下调对THP-1细胞增殖、凋亡和药物敏感性的影响及机制研究
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作者 马杰 刘亚杰 +7 位作者 刘晓艳 汤平 马平 余庆峰 张占芳 李宁 甘思林 孙慧 《中华血液学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期514-517,共4页
神经钙黏蛋白(N-cadherin)是经典的钙黏蛋白超家族成员之一,表达于神经细胞、内皮细胞、肌肉细胞和造血干细胞在内的多种正常组织中。它不仅是胚胎发育过程中原肠胚形成和神经嵴发育的重要分子,而且在结直肠癌、前列腺癌、胃癌、乳... 神经钙黏蛋白(N-cadherin)是经典的钙黏蛋白超家族成员之一,表达于神经细胞、内皮细胞、肌肉细胞和造血干细胞在内的多种正常组织中。它不仅是胚胎发育过程中原肠胚形成和神经嵴发育的重要分子,而且在结直肠癌、前列腺癌、胃癌、乳腺癌等实体肿瘤中参与调控肿瘤的浸润和转移、细胞周期和凋亡等病理过程,并与肿瘤的恶性程度和侵袭性呈正相关。 展开更多
关键词 N-CADHERIN THP-1 药物敏感性 细胞增殖 表达下调 凋亡 胚胎发育过程 实体肿瘤
弓形虫感染对THP-1巨噬细胞极化影响的研究 预览
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作者 刘学雷 王云杰 +5 位作者 杨宁爱 安童童 康宇婷 贾伟 苏雅静 赵志军 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期902-907,共6页
目的 探讨弓形虫感染对体外诱导的人外周血单核细胞(Humanacutemonocyticleukemiacellline,THP-1)极化特点的影响。方法 用佛波酯(PMA)诱导THP-148h使之由悬浮的单核细胞诱导为贴壁的巨噬细胞,体外选择不同时间点感染弓形虫,用Diff染色... 目的 探讨弓形虫感染对体外诱导的人外周血单核细胞(Humanacutemonocyticleukemiacellline,THP-1)极化特点的影响。方法 用佛波酯(PMA)诱导THP-148h使之由悬浮的单核细胞诱导为贴壁的巨噬细胞,体外选择不同时间点感染弓形虫,用Diff染色分析弓形虫在细胞内的增殖情况。Westernblot检测极化相关蛋白,Q-PCR检测mRNA的表达情况。结果 成功诱导得到贴壁的巨噬细胞模型,感染弓形虫后,M1型巨噬细胞标志性蛋白iNOS及M2型巨噬细胞标志型蛋白Arg-136h表达量与对照组差异明显(t=10.23,P<0.05)。Q-PCR的结果显示不同的处理组IL-1、IL-12、iNOS和TNF-α逐渐减少,而IL-10、Arg-1呈逐渐增加,到36h达到顶峰(t=9.587,P<0.05)。结论 弓形虫RH株感染THP-1巨噬细胞后可以在胞内生长增殖,THP-1细胞感染后向M2型巨噬细胞方向极化。 展开更多
关键词 THP-1 弓形虫感染 巨噬细胞极化
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淫羊藿苷对CX3CL1诱导的单核细胞向人脐静脉内皮细胞迁移和黏附的影响及机制研究 预览 被引量:3
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作者 付晓霞 罗云梅 +2 位作者 刘娟 刘杰 李利生 《遵义医学院学报》 2017年第1期59-63,共5页
目的研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对CX3CL1诱导的单核细胞(THP-1)向人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移和黏附的影响及其机制。方法采用Transwells联合培养THP-1和HUVECs,CX3CL1诱导THP-1向HUVECs迁移和黏附模型,并观察ICA(10-8、10-7、... 目的研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对CX3CL1诱导的单核细胞(THP-1)向人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移和黏附的影响及其机制。方法采用Transwells联合培养THP-1和HUVECs,CX3CL1诱导THP-1向HUVECs迁移和黏附模型,并观察ICA(10-8、10-7、10-6mol/L)对该模型的影响。ICA预给药4 h后加入CX3CL1(50 ng/m L)继续培养24 h,移除Transwells及上室中的THP-1细胞,收集培养液并对迁移至下室的THP-1计数;免疫荧光双标法检测THP-1向HUVECs黏附的情况;Western blot检测CX3CR1、p-NF-κB p65和TNF-α蛋白水平。结果与对照组比较,CX3CL1诱导THP-1向HUVECs迁移和黏附的数量明显增多(P〈0.01),伴有CX3CR1、p-NF-κB p65、TNF-α蛋白水平升高(P〈0.05);ICA预处理(10-810-6mol/L)能减少THP-1向HUVECs迁移和黏附的数量(P〈0.05或P〈0.01),抑制CX3CR1、p-NF-κB p65、TNF-α蛋白水平的上调。结论 ICA(10-810-6mol/L)可抑制CX3CL1诱导的THP-1向HUVECs的迁移和黏附,作用机制可能与抑制CX3CL1/CX3CR1/NF-κB/TNF-α信号通路有关。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 CX3CL1 CX3CR1 核转录因子-κB 单核细胞(THP-1) 人脐静脉内皮细胞
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