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UBE2C regulates proliferation and invasion of neuroblastoma: An experimental study
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作者 Li Feng 《海南医科大学学报(英文版)》 2018年第11期5-8,共4页
Objective:To study the regulatory effect of ubiquitin-conjugating enzyme 2C (UBE2C) on the proliferation and invasion of neuroblastoma.Methods: SH-SY5Y neuroblastoma cell lines were cultured and randomly divided into ... Objective:To study the regulatory effect of ubiquitin-conjugating enzyme 2C (UBE2C) on the proliferation and invasion of neuroblastoma.Methods: SH-SY5Y neuroblastoma cell lines were cultured and randomly divided into UBE2C-siRNA group and NC-siRNA group that were transfected with UBE2C siRNA and NC siRNA respectively. 24 h after siRNA transfection, the RNA in the cells was extracted, and fluorescence quantitative PCR reaction was used to detect the mRNA expression of pro-proliferation genes YB-1, CyclinD1, CDK4, Aurora-A and Ki-67, anti-proliferation genes LC3, Beclin1, GRP78, IRE1α, PERK and ATF6 as well as invasion genes KLF4, RIPK3, HIF-1α, Integrinβ1 and MMP9.Results: YB-1, CyclinD1, CDK4, Aurora-A, Ki-67, KLF4, RIPK3, HIF-1α, Integrinβ1 and MMP9 mRNA expression in UBE2C-siRNA group of cells were significantly lower than those in NC-siRNA group whereas LC3, Beclin1, GRP78, IRE1α, PERK and ATF6 mRNA expression were significantly higher than those in NC-siRNA group.Conclusions: Inhibition of the UBE2C gene can regulate the expression of proliferation and invasion genes in neuroblastoma to hinder cell proliferation and invasion. 展开更多
关键词 NEUROBLASTOMA Ubiquitin-conjugating ENZYME 2C PROLIFERATION INVASION
松材线虫Bx-ubc-3基因克隆及泛素通路鉴定 预览
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作者 许佳瑶 陈俏丽 +1 位作者 张瑞芝 李丹蕾 《森林工程》 2019年第5期9-15,共7页
泛素途径可以调节许多关键的细胞功能。为探究松材线虫中是否存在泛素途径以及泛素途径中的关键酶基因—泛素结合酶基因ubc3,构建松材线虫cDNA文库,并进行测序、ORF分析、同源性分析、系统发育树构建、蛋白相互作用预测和分子动力学模... 泛素途径可以调节许多关键的细胞功能。为探究松材线虫中是否存在泛素途径以及泛素途径中的关键酶基因—泛素结合酶基因ubc3,构建松材线虫cDNA文库,并进行测序、ORF分析、同源性分析、系统发育树构建、蛋白相互作用预测和分子动力学模拟等工作。克隆到长度为957bp的Bx-ubc-3基因片段。随后的序列分析表明,其开放阅读框长度为738bp,编码245个氨基酸;氨基6酸同源性分析结果表明,Bx-UBC-3与已知的泛素结合酶高度同源;蛋白互作和分子对接分析及分子动力学模拟结果表明,Bx-UBC-3的结合位点位于一个α螺旋、一个Loop1(L1)环与一个Loop2(L2)环;形成硫酯的Cys103位于L2上,构成催化裂隙;Bx-UBC-3和Bx-Rbx1之间以及Bx-UBC-3和Bx-泛素之间形成氢键。这些结果表明松材线虫中存在一条理论泛素通路,其中的关键酶Bx-UBC-3是开发高效抗线虫生物药剂的潜在靶标。 展开更多
关键词 松材线虫 泛素结合酶3 E2 泛素途径
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百脉根泛素结合酶LjE2的表达及活性鉴定 预览
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作者 刘超 冯勇 +2 位作者 董笑笑 张忠明 朱辉 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期22-27,共6页
为了研究泛素化作用在豆科植物共生固氮过程中的调控功能和作用机制,利用拟南芥泛素结合酶E2的序列,在百脉根基因组上鉴定得到14个编码E2(LjE2)的基因,从LjE2中克隆到11个基因并构建了融合表达载体pET-LjE2s:His。通过大肠杆菌表达系统... 为了研究泛素化作用在豆科植物共生固氮过程中的调控功能和作用机制,利用拟南芥泛素结合酶E2的序列,在百脉根基因组上鉴定得到14个编码E2(LjE2)的基因,从LjE2中克隆到11个基因并构建了融合表达载体pET-LjE2s:His。通过大肠杆菌表达系统,表达并纯化到10个LjE2:His融合蛋白。经体外泛素化及Western blot分析,在10个LjE2中有9个具有泛素结合酶活性,1个(LjE2-5)未检测到泛素结合酶活性。 展开更多
关键词 百脉根 泛素结合酶 体外泛素化 原核表达系统
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基于Oncomine数据库及生物信息学方法挖掘UBE2C基因在卵巢癌中的表达及作用机制 预览
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作者 殷雪琴 倪娜 +2 位作者 张琴 冷天艳 杨丽华 《天津医药》 CAS 北大核心 2019年第6期609-612,共4页
目的通过深度挖掘Oncomine数据库中的基因信息,分析泛素结合酶E2C(UBE2C)在卵巢癌中的表达及作用机制。方法收集Oncomine数据库中关于UBE2C研究的信息,对其在卵巢癌的表达水平变化进行分析。采用Kaplan-Meier法分析UBE2C表达水平与卵巢... 目的通过深度挖掘Oncomine数据库中的基因信息,分析泛素结合酶E2C(UBE2C)在卵巢癌中的表达及作用机制。方法收集Oncomine数据库中关于UBE2C研究的信息,对其在卵巢癌的表达水平变化进行分析。采用Kaplan-Meier法分析UBE2C表达水平与卵巢癌患者生存之间的关系,探讨其临床意义。应用Genecards数据库收集与UBE2C基因相关的蛋白,并通过STRING绘制UBE2C相关蛋白网络图,分析蛋白富集的生理过程。结果在Oncomine数据库中共收集14项关于卵巢癌和卵巢正常组织UBE2C基因有差异表达的研究,对其数据进行分析,发现卵巢癌组织中UBE2C基因的表达显著高于卵巢正常组织(P<0 .05)。通过Kaplan-Meier生存分析发现高表达UBE2C基因的卵巢癌患者无病生存期、总生存期明显短于低表达者,低表达患者的预后更好(P<0 .05)。通过Genecards数据库收集到与UBE2C相关的蛋白有RLIM、CBX4、 SIAH2等25个,其相关蛋白富集分析结果显示主要富集在泛素依赖蛋白的分解代谢过程、蛋白质分解代谢过程、蛋白质泛素化、有丝分裂细胞周期中泛素-蛋白连接酶活性的调控、有丝分裂细胞周期的调节、细胞周期等生理过程。结论 UBE2C基因可能通过调节蛋白泛素化过程在卵巢癌发生、发展中发挥作用,高表达时提示卵巢癌患者预后不良,靶向UBE2C可能是一个潜在的肿瘤诊断和治疗工具。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 泛素缀合酶类 计算生物学 UBE2C基因 Oncomine数据库
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抑制泛素结合酶改变猪卵母细胞透明带泛素化状态及精-卵结合能力 预览
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作者 徐妲 王洋 +4 位作者 玄彪 汪秋月 徐曼 陈璇 金一 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期544-550,共7页
本研究旨在探究猪卵母细胞体外成熟过程中添加泛素结合酶(E2)抑制剂对卵母细胞透明带蛋白泛素化水平及精-卵结合能力的影响。试验分为6组:对照组、DMSO组、5、10、15和20μmol·L-1NSC697923处理组。采用Westernblot方法分析体外成... 本研究旨在探究猪卵母细胞体外成熟过程中添加泛素结合酶(E2)抑制剂对卵母细胞透明带蛋白泛素化水平及精-卵结合能力的影响。试验分为6组:对照组、DMSO组、5、10、15和20μmol·L-1NSC697923处理组。采用Westernblot方法分析体外成熟培养液中添加不同浓度泛素结合酶抑制剂NSC697923对猪卵母细胞透明带泛素化水平表达的影响。通过Hoechst染色检测不同组别的精卵结合能力。结果表明:1)猪卵母细胞体外成熟培养液中,添加10、15和20μmol·L-1NSC697923显著降低卵母细胞成熟率(P<0.05),透明带硬化时间(P<0.05)以及精卵结合率(P<0.05)。2)对照组和各处理组的透明带蛋白在61、81、106ku处发生不同程度的泛素化标记,而添加15和20μmol·L-1NSC697923显著地降低透明带蛋白泛素化水平(P<0.05)。综上表明,猪卵母细胞体外成熟过程中泛素结合酶(E2)改变成熟卵母细胞透明带泛素化水平以及精卵结合能力。 展开更多
关键词 卵母细胞 泛素结合酶 透明带泛素化 精子-卵子结合
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RNA干扰USE1基因慢病毒载体的构建及鉴定 预览
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作者 王佳悦 刘香男 +1 位作者 彭康莉 赵博 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期117-122,共6页
旨在构建泛素结合酶USE1基因的RNA干扰慢病毒载体,并在细胞中检测该基因的抑制表达水平,以期寻找Uba6-USE1特异性泛素化通路对应的下游底物并研究其功能。选取并合成靶向USE1基因的特异性shRNA序列,将其克隆至pLL3.7慢病毒抑制表达载体... 旨在构建泛素结合酶USE1基因的RNA干扰慢病毒载体,并在细胞中检测该基因的抑制表达水平,以期寻找Uba6-USE1特异性泛素化通路对应的下游底物并研究其功能。选取并合成靶向USE1基因的特异性shRNA序列,将其克隆至pLL3.7慢病毒抑制表达载体上,构建抑制USE1基因表达的重组慢病毒质粒并鉴定。将鉴定成功的重组质粒与psPAX2、VSVG慢病毒包装载体共转染至HEK-293细胞,收集病毒上清,测定病毒滴度并确定最佳感染稀释倍数,通过qPCR和Western Blot方法检测病毒感染HEK-293细胞后对USE1基因的抑制程度,获得能有效抑制USE1基因的慢病毒上清。结果显示,成功构建3种靶向USE1基因的RNA干扰慢病毒载体,获得滴度符合要求的3种慢病毒包装上清液,感染HEK-293细胞后发现,第2、3号shRNA序列均有明显抑制表达USE1基因效果,基因表达抑制率约50%(*P<0.05)。利用RNA干扰技术成功构建了特异性抑制泛素结合酶USE1基因表达的慢病毒载体,并经mRNA和蛋白水平检验得到2种能够显著抑制USE1表达的慢病毒上清及其shRNA序列。 展开更多
关键词 泛素结合酶USE1 RNA干扰 慢病毒载体 泛素化
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胶孢炭疽菌泛素结合酶基因CgUBC2的RNAi突变体获得与功能分析
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作者 苏初连 康浩 +3 位作者 杨石有 蒲金基 夏杨 张贺 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期125-131,共7页
为了研究胶孢炭疽菌泛素结合酶基因CgUBC2的功能以及与致病相关基因间的关联性。利用RNAi技术构建沉默载体pSilent-1:CgUBC2,通过PEG介导法获得突变体菌株,实时荧光定量PCR法分析其侵染寄主过程中的差异表达,以及与PG、ECH、LIP、PKS、... 为了研究胶孢炭疽菌泛素结合酶基因CgUBC2的功能以及与致病相关基因间的关联性。利用RNAi技术构建沉默载体pSilent-1:CgUBC2,通过PEG介导法获得突变体菌株,实时荧光定量PCR法分析其侵染寄主过程中的差异表达,以及与PG、ECH、LIP、PKS、HMT、Sin3P、NRPS 7个致病相关基因的关联性。通过特异性引物检测鉴定、表达量分析,获得CgUBC2的RNAi突变体为pSilent-1:CgUBC2-1和pSilent-1:CgUBC2-2,侵染过程中突变体菌株CgUBC2基因表达量、7个致病相关基因的表达量显著低于野生型菌株。成功获得胶孢炭疽菌泛素结合酶基因CgUBC2的RNAi沉默突变体,CgUBC2参与侵染寄主的过程、正向调控7个致病相关基因和致病力。 展开更多
关键词 胶孢炭疽菌 泛素结合酶基因CgUBC2 RNAi突变体
泛素/26S蛋白酶体途径在水稻中的生物学功能研究进展
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作者 徐丹丹 孙帆 +3 位作者 王银晓 石英尧 王文生 傅彬英 《中国农业科技导报》 CSCD 北大核心 2018年第1期25-33,共9页
生物体内的蛋白质降解方式有两种,一种不需要能量,一种需要能量。而泛素/26S蛋白酶体途径便是目前已知的依赖ATP、高效、有高度选择性的蛋白降解途径。它介导了真核生物中80%~85%的蛋白质降解,几乎参与到植物生长发育的各个环节,是植... 生物体内的蛋白质降解方式有两种,一种不需要能量,一种需要能量。而泛素/26S蛋白酶体途径便是目前已知的依赖ATP、高效、有高度选择性的蛋白降解途径。它介导了真核生物中80%~85%的蛋白质降解,几乎参与到植物生长发育的各个环节,是植物体内蛋白高效专一降解最重要、最精细的调控机制之一。概述了泛素蛋白酶体途径,重点阐述了泛素结合酶E2和泛素连接酶E3的蛋白结构及其在水稻生长发育、激素信号传导、生物和非生物胁迫响应中的生物学功能及机制,并对进一步研究进行了展望,将有助于揭示泛素/26S蛋白酶体途径在水稻生长发育中的精细调控过程,并为水稻抗逆育种提供了指导和借鉴。 展开更多
关键词 泛素蛋白酶体途径 水稻 泛素结合酶E2 泛素连接酶E3 生物学功能
过表达Ubc9酶对乳大鼠心肌细胞低氧损伤的保护作用
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作者 陈秀会 宜全 肖青 《中国药理学与毒理学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期772-781,共10页
目的探讨类泛素样修饰蛋白(SUMO)修饰中的泛素缀合酶类E2I(Ubc9)对体外乳大鼠心肌细胞(NRCM)急性低氧损伤的作用及其可能的机制。方法采用分离纯化细胞法培养NRCM,对NRCM分别转染5,10,20,50和100感染指数(moi)的纯化的大鼠Ubc9基因腺病... 目的探讨类泛素样修饰蛋白(SUMO)修饰中的泛素缀合酶类E2I(Ubc9)对体外乳大鼠心肌细胞(NRCM)急性低氧损伤的作用及其可能的机制。方法采用分离纯化细胞法培养NRCM,对NRCM分别转染5,10,20,50和100感染指数(moi)的纯化的大鼠Ubc9基因腺病毒(Adv-Ubc9),转染48 h后在荧光显微镜下分别观察其绿色荧光蛋白(GFP)的荧光强度,并用Western印迹法检测转染效率。NRCM行氧葡萄糖剥夺(OGD)分别处理0,2,4,6,12和24 h后,Western印迹法检测Ubc9、活化的胱天蛋白酶3、自噬相关蛋白P62/SQSTM1(P62)和微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达。NRCM转染Adv-Ubc9 50 moi 48 h,使得Ubc9过表达,随后OGD处理6 h,建立心肌细胞急性低氧模型,利用原位末端转移酶标记(TUNEL)技术检测细胞凋亡,Western印迹法检测Ubc9、活化的胱天蛋白酶3、P62、LC3和类泛素化修饰蛋白1(SUMO-1)的表达水平,蛋白免疫共沉淀法检测Vps34和Beclin1的SUMO化修饰水平。NRCM转染Ubc9的小干扰RNA(Ubc9-siRNA)48 h,使Ubc9沉默,随后行OGD处理6 h,Western印迹法检测活化的胱天蛋白酶3的表达水平。NRCM给予巴伐洛霉素A1(BFA1)50 nmol·L^-1作用2 h,Western印迹法检测LC3表达水平。结果Adv-Ubc9在50与100 moi时转染成功且效率一致,与单纯OGD组相比,过表达Ubc9能明显降低OGD引起的心肌细胞凋亡(P<0.01)、降低活化的胱天蛋白酶3的表达(P<0.01),而沉默Ubc9使心肌细胞OGD处理后的活化的胱天蛋白酶3表达上调(P<0.05),说明过表达Ubc9能抵抗OGD引起的心肌细胞凋亡。与正常对照组相比,OGD处理后,自噬底物P62发生堆积(P<0.01),自噬蛋白LC3Ⅱ明显下调(P<0.05),自噬流出现障碍;当过表达Ubc9后能明显逆转OGD引起的自噬底物P62堆积(P<0.05),改善自噬流障碍,但对自噬蛋白LC3Ⅱ影响不明显。在此基础上给予BFA1阻断自噬体与溶酶体融合过程后,与OGD+BFA1组相比,Adv-Ubc9+OGD+BFA1组的LC3Ⅱ表达明显上调(P<0.01),提示Ubc9改善自噬流障碍的 展开更多
关键词 氧葡萄糖剥夺 泛素缀合酶类 UBC9 自噬 细胞凋亡
甘蔗泛素结合酶基因的克隆与表达
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作者 黄宁 李聪娜 +4 位作者 汤翰臣 郑清雷 凌辉 陈如凯 阙友雄 《应用与环境生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期845-852,共8页
为克隆鉴定甘蔗泛素结合酶基因(Sugarcane ubiquitin-conjugating enzyme,ScUBc E2)并探索其在激素信号通路和甘蔗与黑穗病互作过程中的作用,选择黑穗病菌胁迫下甘蔗抑制消减杂交文库(Suppression subtractive hybridization,SSH)... 为克隆鉴定甘蔗泛素结合酶基因(Sugarcane ubiquitin-conjugating enzyme,ScUBc E2)并探索其在激素信号通路和甘蔗与黑穗病互作过程中的作用,选择黑穗病菌胁迫下甘蔗抑制消减杂交文库(Suppression subtractive hybridization,SSH)中注释为泛素结合酶的差异表达EST序列为探针,结合电子克隆技术和RT-PCR技术,以甘蔗cDNA为模板进行泛素结合酶基因克隆.对克隆获得的序列进行生物信息学分析,并利用qRT-PCR技术分析该基因在甘蔗根、蔗髓、叶、芽中的组织特异性表达以及在黑穗病菌、茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,Me JA)、脱落酸(Abscisic acid,ABA)和水杨酸(Salicylic acid,SA)胁迫下的表达情况.最终克隆得到一条长度为699 bp的甘蔗泛素结合酶基因(ScUBc E2;Gen Bank accession number:KJ577594.1),该基因包含长度为447 bp的完整开放读码框,编码148个氨基酸.生物信息学分析结果显示,ScUBc E2编码的蛋白分子量(Mr)为16.507×10^3;无信号肽,为碱性不稳定的亲水蛋白;包含4个α螺旋、4个β折叠和一些无规则卷曲;第15位氨基酸为泛素化位点,74-89位氨基酸为活性位点;在进化过程中与高粱泛素结合酶基因的亲缘关系最近.qRT-PCR分析结果表明,ScUBc E2基因组成型表达,但在芽中的表达量最高;其表达在甘蔗感黑穗病基因型ROC22中受到黑穗病菌胁迫的抑制,在黑穗病抗病基因型YC05-179中则先被抑制,后被诱导;ScUBc E2基因受MeJA及SA诱导表达,对ABA胁迫的响应不明显.本研究表明,甘蔗ScUBc E2基因在抗病基因型和感病基因型甘蔗中存在不同表达模式,可能参与甘蔗与黑穗病菌的互作过程,有望为抗病育种分子标记提供潜在基因资源;同时,该基因受MeJA和SA外源激素胁迫后的表达模式,可为泛素-蛋白酶体途径及激素调控的信号转导在甘蔗与黑穗病菌互作过程中的作用提供一定的理论依据. 展开更多
关键词 泛素结合酶 甘蔗 生物信息学 实时荧光定量PCR 甘蔗黑穗病菌 水杨酸 茉莉酸甲酯 脱落酸
Akt1通过磷酸化泛素结合酶E2S增强胶质瘤放化疗抵抗的实验研究
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作者 胡力 沈红 +5 位作者 刘利 谢春成 王海洋 刘琴芳 翁长江 林志国 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期194-199,共6页
目的 探讨Akt1增强胶质瘤放、化疗抵抗的机制.方法 通过免疫荧光实验检测正常星形细胞和4种恶性胶质瘤细胞(U87、U251、SF767以及U373)中泛素结合酶E2S(UBE2S)的表达情况;通过Western blot实验检测PTEN基因突变型和野生型胶质瘤细胞... 目的 探讨Akt1增强胶质瘤放、化疗抵抗的机制.方法 通过免疫荧光实验检测正常星形细胞和4种恶性胶质瘤细胞(U87、U251、SF767以及U373)中泛素结合酶E2S(UBE2S)的表达情况;通过Western blot实验检测PTEN基因突变型和野生型胶质瘤细胞中UBE2S的表达差异;构建激活型Akt1载体,分别与UBE2S野生型或T152位点突变型载体共表达,观察PTEN/Akt信号通路对UBE2S的作用,以及UBE2S过表达后对非同源末端连接复合物的影响;采用流式细胞仪检测稳定敲低UBE2S的U87胶质瘤细胞对放、化疗的敏感性.结果 与正常星形细胞相比,胶质瘤细胞高表达UBE2S蛋白;PTEN突变型的胶质瘤细胞UBE2S的表达较野生型更稳定.构建激活型Akt1磷酸化UBE2S的T152位点,可促进UBE2S的稳定表达.UBE2S与Ku70、Ku80相互作用能促进Ku70的表达(P =0.009).免疫印迹结果显示,敲低UBE2S的表达后,Ku70、Ku80和DNA-PKcs的表达量显著降低(P〈0.001).流式细胞检测结果显示,UBE2S敲低可增强胶质瘤对放、化疗的敏感性(P〈0.001).结论 UBE2S在恶性胶质瘤中高表达;Akt1可磷酸化UBE2S的T152位点,从而增强UBE2S的稳定性;敲低UBE2S能降低非同源末端连接复合物介导的DNA修复效率,从而增强胶质瘤细胞对放、化疗的敏感性. 展开更多
关键词 神经胶质瘤 化放疗 泛素结合酶E2S PTEN/Akt信号通路
UBE2C基因调节神经母细胞瘤增殖、侵袭的实验研究 预览
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作者 冯力 《海南医学院学报》 CAS 2018年第11期1062-1064,1068共4页
目的:研究泛素偶联酶2C(UBE2C)对神经母细胞瘤增殖、侵袭的调节作用。方法:培养SHSY5Y神经母细胞瘤细胞株并随机分为UBE2C-siRNA组和NC-siRNA组,分别转染UBE2C的siRNA和NC的siRNA。转染siRNA后24小时,抽提细胞内的RNA并通过荧光定量... 目的:研究泛素偶联酶2C(UBE2C)对神经母细胞瘤增殖、侵袭的调节作用。方法:培养SHSY5Y神经母细胞瘤细胞株并随机分为UBE2C-siRNA组和NC-siRNA组,分别转染UBE2C的siRNA和NC的siRNA。转染siRNA后24小时,抽提细胞内的RNA并通过荧光定量PCR反应测定促增殖基因YB-1、CyclinD1、CDK4、Aurora-A、Ki-67及增殖抑制基因LC3、Beclin1、GRP78、IRE1α、PERK、ATF6及侵袭基因KLF4、RIPK3、HIF-1α、Integrinβ1、MMP9的mRNA表达量。结果:UBE2C-siRNA组细胞中YB-1、CyclinD1、CDK4、Aurora-A、Ki-67、KLF4、RIPK3、HIF-1α、Integrinβ1、MMP9的mRNA表达量显著低于NC-siRNA组,LC3、Beclin1、GRP78、IRE1α、PERK、ATF6的mRNA表达量显著高于NC-siRNA组。结论:抑制UBE2C基因能够调节神经母细胞瘤内增殖及侵袭基因的表达,进而阻碍细胞的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 泛素偶联酶2C 增殖 侵袭
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WSSV感染对中国明对虾bantam及其候选靶基因的影响 预览
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作者 李旭鹏 孔杰 +2 位作者 孟宪红 栾生 罗坤 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第6期106-113,共8页
Bantam能够调控细胞增殖、细胞凋亡等过程,影响生物的免疫过程。本研究利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术对感染WSSV的中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)肝胰腺和鳃组织内bantam表达水平进行检测,发现感染WSSV后6、12、24和48 h,... Bantam能够调控细胞增殖、细胞凋亡等过程,影响生物的免疫过程。本研究利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术对感染WSSV的中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)肝胰腺和鳃组织内bantam表达水平进行检测,发现感染WSSV后6、12、24和48 h,中国明对虾肝胰腺中的bantam表达水平分别是对照组的(0.16±0.03)(P<0.05)、(0.63±0.26)、(0.32±0.06)(P<0.05)和(0.41±0.13)倍;中国明对虾鳃中的bantam表达水平分别是对照组的(0.30±0.17)(P<0.05)、(1.88±0.26)(P<0.01)、(0.84±0.36)和(0.51±0.25)倍。利用mi Randa软件进一步对中国明对虾bantam靶基因进行预测分析,评分最高的靶基因是泛素缀合酶E2。中国明对虾泛素缀合酶E2包含UBCc功能域。多序列比对显示,UBCc功能域氨基酸残基序列在不同物种间保守性较高。进化树分析显示,分类学地位相近的物种的泛素缀合酶E2聚为一类。q RT-PCR检测感染WSSV的中国明对虾肝胰腺和鳃中的泛素缀合酶E2表达水平,结果显示,在感染WSSV后6、12、24和48 h,中国明对虾肝胰腺中泛素缀合酶E2的表达水平分别是对照组的(0.54±0.10)、(1.19±0.62)、(3.69±0.51)(P<0.01)和(1.94±0.07)(P<0.05)倍;中国明对虾鳃中泛素缀合酶E2的表达水平分别是对照组的(0.22±0.05)、(1.34±0.38)、(4.29±0.52)(P<0.01)和(1.28±0.79)倍。研究表明,bantam和泛素缀合酶E2的表达都受WSSV侵染的影响,可能与中国明对虾和WSSV之间的互作相关。但bantam和泛素缀合酶E2表达水平的变化是对虾抵抗WSSV侵染过程的免疫反应,还是宿主基因被病毒胁迫后的结果,需要进一步验证。 展开更多
关键词 中国明对虾 WSSV bantam 泛素缀合酶E2 表达
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泛素结合酶E2s在胆囊癌患者中的高表达及意义
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作者 曹进 张景涛 +4 位作者 刘中砚 李新平 徐国利 王芳涛 范跃祖 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期1321-1324,共4页
目的探讨泛素结酶E2s(UBE2S)在胆囊癌中表达及临床意义。方法应用免疫组织化学检测UBE2S在85例胆囊癌、28例胆囊癌前病变及15例胆囊良性病变蜡块组织表达,以Western blot检测胆囊良恶性病变新鲜组织加以验证,并分析其临床意义。结果... 目的探讨泛素结酶E2s(UBE2S)在胆囊癌中表达及临床意义。方法应用免疫组织化学检测UBE2S在85例胆囊癌、28例胆囊癌前病变及15例胆囊良性病变蜡块组织表达,以Western blot检测胆囊良恶性病变新鲜组织加以验证,并分析其临床意义。结果UBE2S在胆囊癌组织中表达显著高于胆囊癌前病变[染色指数(SI):4.082±3.413比2.607±2.025,P=0.021]和良性病变(SI:4.082±3.413比2.067±1.335,P=0.001),在新鲜胆囊癌组织中表达亦高于良性病变(Western blot灰度值:0.734±0.181比0.197±0.099,P=0.002)。UBE2S表达与肿瘤分化程度(x^2=6.978,P=0.031)、肝转移(x^2=8.155,P=0.004)显著相关。UBE2S表达(P=0.024)和肿瘤分化程度(P=0.000)、Nevin分期(P=0.040)、R0切除(P=0.011)是影响胆囊癌患者预后的独立因素;UBE2S高表达胆囊癌患者生存期较短(P=0.011)。结论UBE2S高表达是胆囊癌患者不良预后的独立因素。 展开更多
关键词 泛素结合酶E2s 胆囊癌 生存期
鸡球虫共同抗原UCE免疫原性分析及其对多种球虫感染的免疫保护效果评估 预览
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作者 刘剑华 刘连瑞 +4 位作者 李灵娟 徐立新 严若峰 李祥瑞 宋小凯 《南京农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期496-503,共8页
[目的]在前期研究中,筛选到了存在于多种鸡球虫间的共同抗原泛素缀合酶结构域蛋白(UCE),本研究进一步分析其免疫原性,评估其对多种球虫感染的免疫保护效果。[方法]提取纯化的堆型艾美耳球虫孢子化卵囊总RNA,用反转录PCR(RT-PCR)技术扩... [目的]在前期研究中,筛选到了存在于多种鸡球虫间的共同抗原泛素缀合酶结构域蛋白(UCE),本研究进一步分析其免疫原性,评估其对多种球虫感染的免疫保护效果。[方法]提取纯化的堆型艾美耳球虫孢子化卵囊总RNA,用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增堆型艾美耳球虫UCE基因(EaUCE),插入pVAX1质粒,构建真核表达质粒pVAX-EaUCE,通过RT-PCR和Western blot检测pVAX-EaUCE在鸡体内的转录和表达情况。经流式细胞术和间接ELISA法检测pVAX-EaUCE免疫后鸡体细胞免疫和体液免疫水平变化,分析其免疫原性。分别采用柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫及三者的混合卵囊人工感染雏鸡,观察感染前、后雏鸡体质量变化和排出卵囊减少量,评估其对多种球虫感染的免疫保护效果。[结果]EaUCE基因开放阅读框为444 bp,编码148个氨基酸,BLAST分析显示,柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫UCE氨基酸序列同源性均大于95%。pVAX-EaUCE能够在鸡体内成功转录和表达。pVAX-EaUCE免疫后,鸡体的CD+4/CD+3和CD+8/CD+3细胞比例显著升高,IFN-γ、IL-2、IL-4、TNFSF15、IL-17D、TGF-β4 mRNA和IgY抗体水平显著升高,表明免疫该质粒能诱导细胞和体液产生免疫反应(P<0.05)。pVAX-EaUCE免疫后,与对照组相比,免疫组鸡体质量显著增加,卵囊产量明显下降,肠道损伤也相应减轻。[结论]鸡球虫共同抗原UCE具有良好的免疫原性,可对多种球虫感染提供部分免疫保护力,有望成为抵抗多种球虫感染的候选抗原。 展开更多
关键词 鸡球虫 共同抗原 泛素缀合酶结构域蛋白(UCE) 免疫原性 混合感染
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泛素偶联酶2C促进肺癌细胞增殖和迁移与抑制细胞衰老
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作者 郭纪伟 武艳 +4 位作者 金丹 杜静 宫凯凯 苗双 杨丽娟 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期649-658,共10页
泛素偶联酶2C与多种肿瘤细胞的增殖密切相关,但其与肺癌发生和发展的关系尚不明确。本研究以肺癌A549细胞为材料,通过RT-PCR、Western印迹、免疫荧光、SA-β-Gal细胞衰老染色、细胞划痕和Trans-well实验,阐明UBE2C与肺癌细胞的增殖、衰... 泛素偶联酶2C与多种肿瘤细胞的增殖密切相关,但其与肺癌发生和发展的关系尚不明确。本研究以肺癌A549细胞为材料,通过RT-PCR、Western印迹、免疫荧光、SA-β-Gal细胞衰老染色、细胞划痕和Trans-well实验,阐明UBE2C与肺癌细胞的增殖、衰老和迁移能力的关系。结果显示,UBE2C在肺癌细胞中的表达明显高于正常细胞。利用基因修饰技术瞬时过表达或靶向沉默UBE2C后,在肺癌A549细胞中,UBE2C的mRNA和蛋白质水平显著增加3.5倍或减少0.5倍,显著促进或抑制细胞增殖,进而减少或增加细胞的凋亡率。过表达UBE2C后,显著抑制细胞衰老;但沉默UBE2C后,则增加细胞衰老。此外,过表达UBE2C后,下调转移相关基因E-钙黏着蛋白的mRNA和蛋白质表达水平,且上调波形蛋白基因的表达水平,进而促进肺癌细胞的迁移。但靶向敲除UBE2C后,上调E-钙黏着蛋白,同时下调波形蛋白表达水平,进而抑制肺癌细胞的迁移。本研究的开展将明确UBE2C在肺癌中的作用及其机制,为以UBE2C为靶点,提高病人生存期提供了理论基础。 展开更多
关键词 泛素偶联酶2C 细胞增殖 细胞衰老 细胞迁移 肺癌
Structural analysis of recombinant human ubiquitin-conjugating enzyme UbcH5c
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作者 Fangshu Wu Junsheng Zhu +1 位作者 Honglin Li Lili Zhu 《药学学报:英文版》 CSCD 2017年第3期390-394,共5页
UbcH5c belongs to the ubiquitin-conjugating enzyme family and plays an important role in catalyzing ubiquitination during TNF-α–triggered NF-κB activation. Therefore, UbcH5c is a potent therapeutic target for the t... UbcH5c belongs to the ubiquitin-conjugating enzyme family and plays an important role in catalyzing ubiquitination during TNF-α–triggered NF-κB activation. Therefore, UbcH5c is a potent therapeutic target for the treatment of inflammatory and autoimmune diseases induced by aberrant activation of NF-κB. In this study, we established a stable expression system for recombinant UbcH5c and solved the crystal structure of UbcH5c belonging to space group P22121 with one molecule in the asymmetric unit. This study provides the basis for further study of UbcH5c including the design of UbcH5c inhibitors. 展开更多
MTAP和UbcH10在骨肉瘤中的表达及临床意义 预览 被引量:1
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作者 冷华平 段永壮 +1 位作者 钱华兵 李宽宽 《癌症进展》 2017年第7期837-839,845共4页
目的 探讨骨肉瘤组织中甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)和泛素结合酶10(UbcH10)的表达与患者临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学法检测40例骨肉瘤组织和20例正常骨组织中MTAP和UbcH10的表达情况,并分析其与骨肉瘤患者临床病理特征及... 目的 探讨骨肉瘤组织中甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)和泛素结合酶10(UbcH10)的表达与患者临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学法检测40例骨肉瘤组织和20例正常骨组织中MTAP和UbcH10的表达情况,并分析其与骨肉瘤患者临床病理特征及预后的关系.结果 骨肉瘤组织中的MTAP阳性表达率明显低于正常骨组织,而UbcH10阳性表达率明显高于正常骨组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01),且两者在骨肉瘤组织中的表达呈负相关(r=-0.551,P=0.013).MTAP和UbcH10的表达与患者年龄、性别、肿瘤部位及组织分型无关(P﹥0.05),而与软组织浸润、远处转移及Enneking分期有关(P﹤0.05).随访6~72个月,生存组患者骨肉瘤组织中的MTAP和UbcH10阳性表达率均低于死亡组患者,差异有统计学意义(P﹤0.05).结论 MTAP和UbcH10与骨肉瘤的浸润、转移及预后密切相关,可作为临床诊治及预后判断的参考指标. 展开更多
关键词 骨肉瘤 甲硫腺苷磷酸化酶 泛素结合酶 免疫组化
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EGCG对A549细胞炎性反应模型UBC9表达的影响 预览
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作者 曹留霞 武涧松 +1 位作者 徐晓丹 贺丹 《武警医学》 CAS 2017年第3期235-239,共5页
目的观察泛素连接酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9,UBC9)在表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)作用的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导A549细胞中的表达,探讨UBC9与EGCG抗炎性反应机制的相关性。... 目的观察泛素连接酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9,UBC9)在表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)作用的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导A549细胞中的表达,探讨UBC9与EGCG抗炎性反应机制的相关性。方法根据筛选结果随机分为对照组、EGCG组、LPS组、EGCG+LPS组4个组,MTT检测不同浓度的EGCG(50-400μg/ml)和LPS(10-50μg/ml)对A549细胞增殖活性的影响,筛选最佳作用浓度,进一步通过免疫组化染色法、蛋白质印迹法和Realtime-PCR检测分析各处理组UBC9蛋白及其mRNA的相对表达量。结果 MTT显示,200μg/ml的EGCG细胞增殖抑制作用最强(F=1618.18,P〈0.001),LPS 25μg/ml细胞增殖活性最明显(F=237.38,P〈0.001)。免疫组化与蛋白质印迹检测均显示,与对照组比较,EGCG下调A549细胞UBC9蛋白表达(P〈0.001),LPS则上调UBC9表达量(P〈0.001),与LPS组比较,EGCG+LPS组UBC9蛋白表达明显降低(P〈0.001)。同样,Realtime-PCR显示,与对照组比较,EGCG组UBC9 mRNA表达下调(F=89.34,P〈0.001),LPS组UBC9 mRNA表达上调(F=225.00,P〈0.001),与LPS组比较,EGCG+LPS组UBC9mRNA的表达受到抑制,显著降低(F=625.00,P〈0.001)。结论 EGCG下调LPS刺激的炎性反应模型的UBC9的表达,其抗炎机制可能与抑制UBC9蛋白与mRNA表达有关。 展开更多
关键词 表没食子儿茶素没食子酸酯 脂多糖 泛素连接酶9 炎性反应
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Ubc9在结直肠癌中的表达及其与化疗药物敏感性之间的关系 预览
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作者 张建伟 郑绘霞 +1 位作者 梁建芳 肖虹 《中国医学创新》 CAS 2017年第23期38-41,共4页
目的:研究小泛素相关修饰物泛素结合酶9(Ubc9)在结直肠癌中的表达及其与化疗药物敏感性之间的关系。方法:收集手术切除的结直肠癌及癌旁新鲜标本50例,腺瘤30例,免疫组化法检测Ubc9蛋白的表达,分析其表达与患者临床病理资料的关系。... 目的:研究小泛素相关修饰物泛素结合酶9(Ubc9)在结直肠癌中的表达及其与化疗药物敏感性之间的关系。方法:收集手术切除的结直肠癌及癌旁新鲜标本50例,腺瘤30例,免疫组化法检测Ubc9蛋白的表达,分析其表达与患者临床病理资料的关系。原代培养结直肠癌细胞,MTT法检测不同结直肠癌组织对顺铂及5-氟尿嘧啶的药物敏感性,分析Ubc9蛋白的表达与药物敏感性之间的关系。结果:Ubc9在结直肠癌中的表达均显著高于癌旁和腺瘤组织,差异均有统计学意义(P〈0.05);Ubc9蛋白的表达与患者的性别、年龄及分化程度均无关(P〉0.05),与肿瘤的TNM分期及淋巴结转移均有关(P〈0.05);Ubc9蛋白的高表达与顺铂的耐药呈正相关(r=0.323,P〈0.05),Ubc9蛋白的表达与5-氟尿嘧啶药物敏感性无显著相关性(r=0.283,P〉0.05)。结论:Ubc9蛋白在结直肠癌中高表达,与患者的临床分期、淋巴结转移有关,与顺铂的耐药性呈正相关。 展开更多
关键词 结直肠癌 泛素结合酶9 免疫组织化学
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