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利用孤雌激活评估ICSI后未成熟卵母细胞的利用价值 预览
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作者 刘成军 涂艳琴 +4 位作者 王蔼明 商微 王伟周 李敏 沈玉良 《广州医药》 2019年第3期40-44,共5页
目的 本研究以ICSI后未成熟卵母细胞为研究对象,分析比较卵母细胞不同发育阶段冷冻对其后续效果的影响,评估ICSI后未成熟卵母细胞的利用价值。方法 未成熟卵母细胞直接成熟培养(新鲜组)与玻璃化冷冻后成熟培养(冷冻组)的成熟率,并利用... 目的 本研究以ICSI后未成熟卵母细胞为研究对象,分析比较卵母细胞不同发育阶段冷冻对其后续效果的影响,评估ICSI后未成熟卵母细胞的利用价值。方法 未成熟卵母细胞直接成熟培养(新鲜组)与玻璃化冷冻后成熟培养(冷冻组)的成熟率,并利用孤雌激活的方法比较卵母细胞的发育潜力。结果 发现新鲜组与冷冻组体外培养卵母细胞成熟率、受精率、卵裂率、优质胚胎率和囊胚率均无差异(P>0.05)。但两组的GV期卵母细胞成熟率低于MI期(P<0.05),且冷冻组的GV期卵母细胞受精率低于MI期(P<0.05)。不过裸卵体外成熟培养效果欠佳,特别是对GV期卵母细胞,体外成熟培养后的卵母细胞发育潜力低下,无囊胚形成。结论ICSI后未成熟卵母细胞的冷冻对卵母细胞的发育潜力没有明显影响,但体外成熟培养的卵母细胞发育潜力低下,有待进一步提高体外成熟培养技术。 展开更多
关键词 ICSI 未成熟卵母细胞 玻璃化冷冻 体外成熟培养 孤雌激活 发育潜力
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激光辅助孵化对玻璃化冷冻的卵裂期胚胎妊娠结局的影响
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作者 史鸿志 秦妍 +3 位作者 张楠 宋琪 李伟伟 殷秀荣 《中国优生与遗传杂志》 2019年第8期1000-1001,1006共3页
目的探讨激光辅助孵化(LAH)对玻璃化冷冻的卵裂期胚胎妊娠结局的影响。方法回顾性分析2017~2018年198个卵裂期胚胎解冻移植周期,其中行激光辅助孵化(LAH)64个周期,未进行激光辅助孵化(NLAH)134个周期。结果 LAH组的临床妊娠率和胚胎种... 目的探讨激光辅助孵化(LAH)对玻璃化冷冻的卵裂期胚胎妊娠结局的影响。方法回顾性分析2017~2018年198个卵裂期胚胎解冻移植周期,其中行激光辅助孵化(LAH)64个周期,未进行激光辅助孵化(NLAH)134个周期。结果 LAH组的临床妊娠率和胚胎种植率均低于NLAH组,而多胎率和流产率均高于NLAH组,但差异没有统计学意义(P>0.05)。结论激光辅助孵化对于玻璃化冷冻的卵裂期胚胎的妊娠结局没有明确的作用。 展开更多
关键词 激光辅助孵化 玻璃化冷冻 卵裂期胚胎 临床妊娠
水溶液中结合水的定义与量化 预览
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作者 王强 曹则贤 《物理学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2019年第1期45-55,共11页
水溶液中溶质的结合水具有不同于远离溶质的自由水的结构和性质.结合水的存在对水和溶质结构和动力学性质均具有显著甚至决定性的影响.然而,对结合水动力学和热力学性质的定量理解在诸多方面一直存在争议甚至严重分歧,其中重点包括如何... 水溶液中溶质的结合水具有不同于远离溶质的自由水的结构和性质.结合水的存在对水和溶质结构和动力学性质均具有显著甚至决定性的影响.然而,对结合水动力学和热力学性质的定量理解在诸多方面一直存在争议甚至严重分歧,其中重点包括如何定义和量化结合水,如何表征结合水和自由水的动力学差别,结合水如何参与生物大分子各种生物功能过程,以及溶质或界面影响结合水结构与性质的途径等.给出结合水定义的物理学依据和量化方法,是深入理解上述问题的第一步.本文简述了各种不同谱学方法定义结合水的基本原理及量化的困难,强调具有不同时间和空间响应尺度的测试方法所得结合水数不必完全可比.此外,系列水溶液物性随浓度升高会明显改变其浓度依赖关系,相应拐点浓度常被用于量化稀溶液中的溶质结合水数.我们近期研究的水溶液玻璃化转变温度-浓度关系,为结合水的定义、量化和水溶液的三区划分提供了物理依据,同时揭示了上述利用性质-浓度关系拐点浓度量化结合水方法的不足. 展开更多
关键词 水溶液 结合水 自由水 玻璃化
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三种冷冻方法对胎儿卵巢组织凋亡相关蛋白表达的Bcl-2、Bax、Caspase影响 预览
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作者 王国平 李倩倩 王燕蓉 《中国医药指南》 2019年第26期1-1,3,共2页
目的观察三种冷冻方法对胎儿卵巢组织卵泡凋亡蛋白的影响。方法分别采用程序冻存法(PFG)、快速冻存法(RFG)、玻璃化冻存法(VG)冻存胎儿卵巢组织,解冻后采用免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。结果各冷冻组卵... 目的观察三种冷冻方法对胎儿卵巢组织卵泡凋亡蛋白的影响。方法分别采用程序冻存法(PFG)、快速冻存法(RFG)、玻璃化冻存法(VG)冻存胎儿卵巢组织,解冻后采用免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。结果各冷冻组卵泡Bcl-2蛋白阳性表达率下降,与新鲜组相比差异显著(P<0.05);Bax蛋白阳性表达率上升,PFG、VG组Bax蛋白阳性表达与新鲜组(FCG)差别不显著(P>0.05);RFG显著高于FCG、PFG、VG(P<0.001)。冷冻后,Caspase-3蛋白阳性表达率上升,PFG、RFG显著高于FCG(P<0.05),VG与FCG差别不显著(P>0.05)。结论玻璃化冻存法可有效冻存胎儿卵巢组织。 展开更多
关键词 程序冷冻法 快速冷冻法 玻璃化冷冻法 卵泡 凋亡蛋白
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喷射参数对微滴喷射细胞效果的影响 预览
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作者 喻梓瑄 张宵敏 周新丽 《生物医学工程研究》 2019年第3期362-366,共5页
微滴喷射玻璃化是指将细胞悬液离散成微滴后直接喷入液氮中进行玻璃化保存。该方法可有效提升降温速率,提高细胞玻璃化保存效果。微滴喷射过程中,喷射参数对微滴喷射后的细胞活性有较大影响。本研究对HepG2细胞进行微滴喷射实验,研究氮... 微滴喷射玻璃化是指将细胞悬液离散成微滴后直接喷入液氮中进行玻璃化保存。该方法可有效提升降温速率,提高细胞玻璃化保存效果。微滴喷射过程中,喷射参数对微滴喷射后的细胞活性有较大影响。本研究对HepG2细胞进行微滴喷射实验,研究氮气流速、悬浮液注射速度、悬浮液浓度、微滴接收位置和针头型号等五个喷射参数对微滴大小及喷射后细胞存活率的影响。实验结果表明,当氮气流速为3.2 L/min、悬浮液注射速度为200μL/min、悬浮液浓度为10%Me2SO、接收位置为距离喷嘴6cm处且针头型号为30G时,微滴喷射后HepG2细胞活性最高。优化后的喷射参数可以作为其他小体积细胞微滴喷射玻璃化保存的参考。 展开更多
关键词 微滴喷射 喷射参数 氮气流速 注射速度 细胞浓度 接收位置 针头型号 玻璃化
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匍匐型地被菊再生及遗传转化体系的建立 预览
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作者 赵静雅 徐素娟 +1 位作者 陈发棣 滕年军 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1686-1697,共12页
为构建有效的地被菊再生和遗传转化体系,本研究以匍匐型地被菊雨花落英叶片为外植体,研究不同苗龄和激素配比对叶盘再生的影响;通过农杆菌介导法将外源基因导入野生型植株中,研究预培养、延迟培养、抗生素浓度等遗传转化条件对转化效率... 为构建有效的地被菊再生和遗传转化体系,本研究以匍匐型地被菊雨花落英叶片为外植体,研究不同苗龄和激素配比对叶盘再生的影响;通过农杆菌介导法将外源基因导入野生型植株中,研究预培养、延迟培养、抗生素浓度等遗传转化条件对转化效率的影响。结果表明,雨花落英叶盘转基因最适再生条件为,以苗龄为30 d的组培苗幼嫩叶片为外植体,设置再生培养基配方为MS+6-BA 1. 5 mg·L-1+NAA 0. 8 mg·L-1,此时再生率高达91. 11%,平均芽数为5. 90;最优遗传转化组合为预培养2 d,侵染5min,共培养2 d,延迟培养5 d,之后进行选择培养。羧苄青霉素在延迟培养阶段最适抑菌浓度为400mg·L-1;潮霉素叶盘筛选的最适选择压为8~10 mg·L-1,生根筛选最适浓度为11 mg·L-1;培养后期加入6-KT可以有效提高抗性芽的再生率;调节6-BA浓度为1. 0 mg·L-1,蔗糖浓度为40 g·L-1,可以将得到的玻璃化苗转化为正常苗。分子鉴定结果表明,15株抗性苗中有10株阳性苗,阳性苗概率为67%;与野生型植株相比,9个株系的CmERF12基因均受到了明显的抑制表达。本研究建立了地被菊雨花落英再生和遗传转化体系,为进一步进行基因功能研究和遗传改良奠定了一定的理论基础。 展开更多
关键词 匍匐型地被菊 高效再生 遗传转化体系 玻璃化
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人卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏后的体外培养时间对妊娠结局的影响 预览
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作者 郭雅彬 《国际医药卫生导报》 2019年第3期448-450,共3页
目的 分析人卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏后的体外培养时间对妊娠结局的影响。方法 对本中心2014年12月至2017年9月行FET(冻融胚胎移植)的患者984个周期进行回顾性分析,以移植时间为依据,分为两组,甲组解冻后次日移植(540个周期),乙组解冻... 目的 分析人卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏后的体外培养时间对妊娠结局的影响。方法 对本中心2014年12月至2017年9月行FET(冻融胚胎移植)的患者984个周期进行回顾性分析,以移植时间为依据,分为两组,甲组解冻后次日移植(540个周期),乙组解冻当天移植(444个周期),以甲组胚胎生长情况为依据,将甲组分为两个亚组,甲1组所有胚胎均生长(342个周期),甲2组部分胚胎生长(198个周期)。对各组胚胎着床率、临床妊娠率、胚胎复苏率、移植胚胎数、内膜厚度等进行对比分析。结果 甲、乙两组移植胚胎个数、内膜厚度、患者年龄比较,差异均无统计学意义(均P >0.05);与乙组对比,甲组种植率、妊娠率有升高趋势,但差异均无统计学意义(均P >0.05);甲1组胚胎着床率高于甲2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 人卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏后的适当延长体外培养时间观察其发育潜能不会对妊娠结局产生不利影响,且延长培养时间后继续生长的胚胎具有更高着床率。 展开更多
关键词 人卵裂期胚胎 玻璃化冷冻 胚胎复苏 体外培养时间 妊娠结局
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优质耐阴观叶植物熊掌木的离体快繁研究 预览
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作者 孙俊 《辽宁林业科技》 2019年第1期23-26,共4页
以熊掌木当年生嫩茎为外植体,以MS培养基为基础培养基,附加不同种类和浓度的植物生长调节物质诱导丛生芽及再生植株,建立熊掌木的高效再生繁殖体系。结果表明:先用75%酒精浸泡30s,再用0.1%HgCl2浸泡6min的灭菌效果最佳;最佳增殖培养基为... 以熊掌木当年生嫩茎为外植体,以MS培养基为基础培养基,附加不同种类和浓度的植物生长调节物质诱导丛生芽及再生植株,建立熊掌木的高效再生繁殖体系。结果表明:先用75%酒精浸泡30s,再用0.1%HgCl2浸泡6min的灭菌效果最佳;最佳增殖培养基为MS+6-BA4mg·L^-1+NAA0.2mg·L^-1;在培养基MS+6-BA4mg·L^-1+NAA0.2mg·L^-1+蔗糖3.0%+琼脂0.7%+AgNO30.1mg·L^-1上,试管苗玻璃化程度最低,且芽增殖倍数最高;最佳生根培养基为1/2MS+NAA0.1mg·L^-1+IBA0.01mg·L^-1,试管苗根系质量最好;将试管苗移栽在河沙︰珍珠岩︰草炭土(1︰1︰1)的基质上,成活率高达94%。 展开更多
关键词 熊掌木 离体培养 快速繁殖 玻璃化
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人工皱缩对玻璃化冻融囊胚复苏结局的影响 预览
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作者 周亭亭 薛林涛 +6 位作者 王世凯 谭卫红 成俊萍 毛献宝 李政达 张小慧 韦娉嫔 《中国临床新医学》 2019年第5期522-525,共4页
目的探讨不同人工皱缩方式对囊胚玻璃化冻融后复苏结局的影响。方法收集体外受精(IVF)/卵泡浆内单精子注射(ICSI)治疗周期病人冷冻或移植后的246枚囊胚,随机分为对照组(囊胚不进行皱缩,直接玻璃化冻融)、激光皱缩组(囊胚采用激光打孔法... 目的探讨不同人工皱缩方式对囊胚玻璃化冻融后复苏结局的影响。方法收集体外受精(IVF)/卵泡浆内单精子注射(ICSI)治疗周期病人冷冻或移植后的246枚囊胚,随机分为对照组(囊胚不进行皱缩,直接玻璃化冻融)、激光皱缩组(囊胚采用激光打孔法使其完全皱缩后行玻璃化冻融)、机械皱缩组(囊胚采用机械挤压法使其完全皱缩后行玻璃化冻融),每组82枚。比较三组间的复苏率和孵出率。结果激光皱缩组和机械皱缩组囊胚玻璃化冻融后的复苏率和孵出率均高于对照组(P<0.05)。机械皱缩组和激光皱缩组的优质囊胚孵出率均高于对照组且差异有统计学意义(P<0.05)。激光皱缩组优质囊胚复苏率及孵出率均高于机械皱缩组,但差异无统计学意义(P>0.05)。机械皱缩组和激光皱缩组的劣质囊胚复苏率、孵出率均高于对照组(P<0.05),激光皱缩组劣质囊胚孵出率高于机械皱缩组(P<0.05)。结论 人工皱缩去除囊胚腔液能够显著改善囊胚玻璃化冻融复苏结局,而激光法皱缩是最佳的人工皱缩方式。 展开更多
关键词 人工皱缩 囊胚 玻璃化冷冻 复苏率 孵出率
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人卵母细胞玻璃化冷冻的分子表达变化 预览
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作者 王赛赛 金海霞 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2019年第5期393-396,412共5页
卵母细胞冷冻技术是体外受精助孕的重要组成部分,是保存女性生育力的主要途径,卵母细胞冷冻保存易对卵母细胞造成不可逆损伤。卵丘细胞对卵母细胞体外成熟过程具有重要作用,在冷冻过程也可能受损伤。目前已知玻璃化冷冻/解冻对卵母细胞... 卵母细胞冷冻技术是体外受精助孕的重要组成部分,是保存女性生育力的主要途径,卵母细胞冷冻保存易对卵母细胞造成不可逆损伤。卵丘细胞对卵母细胞体外成熟过程具有重要作用,在冷冻过程也可能受损伤。目前已知玻璃化冷冻/解冻对卵母细胞(包括成熟与未成熟卵母细胞)的影响,可改变卵母细胞正常发育必需基因的表达,如卵母细胞成熟(GDF9、BMP15)、凋亡(Bax、Bcl-2)、细胞骨架(CK8、ACTB)、细胞周期(CCNA1、MCM10)、缝隙连接(GJA1)、发育能力(HDAC1、STAT3、SMARCAL1和DNMT3B)、脂质代谢(cGMP)等方面的改变。就卵母细胞玻璃化冷冻前后的分子及基因变化进行阐述,为卵母细胞玻璃化冷冻提供更好的理论基础和实验依据。 展开更多
关键词 卵母细胞 卵丘细胞 玻璃化作用 低温保存 基因
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甘氨酸对水貂GV期卵母细胞冷冻保存效率的影响 预览
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作者 曹俊国 李文 +9 位作者 韩玉萍 李晓霞 王士勇 刁云飞 杨镒峰 孟庆江 曹满园 常彤 魏海军 许保增 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期1994-2002,共9页
试验旨在探究玻璃化冷冻及培养过程中添加甘氨酸(glycine,Gly)对水貂GV期卵母细胞冷冻解冻后存活率、核发育、线粒体和皮质颗粒分布的影响。试验分为3组:对照组(没有进行冷冻处理)、冷冻组和Gly添加处理组(1 mmol/L Gly)。对玻璃化冷冻... 试验旨在探究玻璃化冷冻及培养过程中添加甘氨酸(glycine,Gly)对水貂GV期卵母细胞冷冻解冻后存活率、核发育、线粒体和皮质颗粒分布的影响。试验分为3组:对照组(没有进行冷冻处理)、冷冻组和Gly添加处理组(1 mmol/L Gly)。对玻璃化冷冻解冻后的水貂GV期卵母细胞分别进行平衡恢复3 h和体外成熟培养,采用免疫荧光标记法检测各组GV期卵母细胞线粒体分布的差异及MⅡ期皮质颗粒分布的变化。结果显示,Gly添加处理组卵母细胞在解冻后3 h的存活率与冷冻组相比差异不显著(P>0.05),但显著低于对照组(P<0.05);Gly添加处理组卵母细胞的减数分裂恢复率显著高于冷冻组(P<0.05),但与对照组相比差异不显著(P>0.05)。免疫荧光结果显示,Gly添加处理组的GV期卵母细胞线粒体正常分布率显著高于冷冻组(P<0.05),但Gly添加处理组和冷冻组的GV期卵母细胞线粒体正常分布率均显著低于对照组(P<0.05)。皮质颗粒分布结果显示,水貂GV期卵母细胞在冷冻后体外成熟培养至MⅡ期时,Gly添加处理组皮质颗粒的正常皮质区分布比例显著高于冷冻组(P<0.05),但Gly添加处理组与冷冻组的正常皮质区分布比例均显著低于对照组(P<0.05)。结果表明,添加Gly可以提高冻融后水貂卵母细胞的减数分裂恢复率,降低冷冻对其线粒体及皮质颗粒的损失。 展开更多
关键词 甘氨酸 水貂 卵母细胞 玻璃化冷冻
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胚胎玻璃化冷冻解冻技术对子代胚胎和胎盘中印记基因H19表达及甲基化水平的影响 预览
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作者 马媛 陈书强 +3 位作者 马夜肥 雷晖 文亮 王晓红 《生殖医学杂志》 CAS 2019年第9期1059-1065,共7页
目的建立玻璃化冷冻解冻移植小鼠模型,探究玻璃化冷冻解冻对子代胚胎及胎盘组织中印记基因H19表达及甲基化水平的影响。方法实验动物选择ICR清洁级小鼠,根据处理不同分为3组,自然妊娠(NC)组,胚胎体外培养(IVC)组和胚胎玻璃化冷冻解冻(V... 目的建立玻璃化冷冻解冻移植小鼠模型,探究玻璃化冷冻解冻对子代胚胎及胎盘组织中印记基因H19表达及甲基化水平的影响。方法实验动物选择ICR清洁级小鼠,根据处理不同分为3组,自然妊娠(NC)组,胚胎体外培养(IVC)组和胚胎玻璃化冷冻解冻(VET)组,每组收集7只孕鼠。观测3组孕鼠孕9.5d的胎鼠存活率。取3组孕鼠孕9.5d的胚胎及胎盘标本,采用实时定量PCR技术分析H19基因在胎鼠及胎盘中的表达情况,采用焦磷酸测序技术检测H19基因在胎鼠和胎盘中的甲基化水平。结果NC组的平均窝仔数(10.43±2.07)显著高于IVC组的(6.43±1.51)和VET组的(6.00±1.16)(P<0.05)。IVC组和VET组的存活率分别为40.2%和37.5%,与NC组(100.0%)相比,具有显著性差异(P均<0.05)。在胚胎组织中,与NC组相比,IVC组和VET组的H19表达水平显著增加(P<0.05);在胎盘组织中,3组间H19基因的表达水平比较无显著性差异(P>0.05);在胚胎和胎盘组织中,3组间H19基因甲基化水平比较均无显著性差异(P>0.05)。结论胚胎的玻璃化冷冻解冻和胚胎体外培养均可导致小鼠存活率下降,胚胎中H19基因表达水平明显增高。但并未发现胎盘组织中H19基因水平的变化,且无论在胚胎或胎盘组织中,H19基因甲基化水平均未发现变化,后期需要更多的研究加以探索。 展开更多
关键词 印记基因 H19 玻璃化冷冻 小鼠模型 胎盘
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未成熟大鼠睾丸组织玻璃化冻存效果的比较性研究 预览
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作者 童越 傅龙龙 +9 位作者 安琪 贾艳飞 张开舒 赵海豹 周芳 郭颖 卢文红 梁小薇 唐文豪 谷翊群 《生殖医学杂志》 CAS 2019年第9期1077-1083,共7页
目的采用三种浓度冷冻保护剂方案对两周龄未成熟大鼠睾丸组织进行玻璃化冻存,并对冻存效果做出评价。方法根据DMEM/F12培养基中所含二甲基亚砜(DMSO)和乙二醇(EG)的浓度差异,将冻存液分为A、B、C三组,其中DMSO和EG的浓度依次为7.5%、15%... 目的采用三种浓度冷冻保护剂方案对两周龄未成熟大鼠睾丸组织进行玻璃化冻存,并对冻存效果做出评价。方法根据DMEM/F12培养基中所含二甲基亚砜(DMSO)和乙二醇(EG)的浓度差异,将冻存液分为A、B、C三组,其中DMSO和EG的浓度依次为7.5%、15%、25%。将大鼠睾丸分割为8 mm^3~9 mm^3大小的组织块,分别纳入对照组、A组、B组和C组中。对照组的睾丸组织不作冷冻处理,直接进行后续实验;A、B、C三组使用不同浓度的冷冻保护剂进行玻璃化冷冻。冻存2周后,取出样本进行复苏。比较各组睾丸组织的形态学改变,采用免疫荧光染色观察精原细胞标志物UCHL1、支持细胞标志物SOX9、睾丸间质Leydig细胞标志物StAR和细胞增殖核抗原PCNA表达的改变,观察细胞的凋亡情况。结果玻璃化冻存后,未成熟大鼠睾丸组织形态发生一定程度改变,生精细胞及支持细胞标志物表达下降,凋亡增加,与对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。三个冻存组中,B组形态学改变最小,细胞标志物表达水平与对照组相差最少,凋亡最少;A组的结构损伤明显,生精上皮与基底膜分离;C组的细胞标志物表达显著下降,凋亡增加最显著。结论冷冻保护剂浓度变化对未成熟睾丸组织玻璃化冻存效果有显著影响,15%DMSO和15%EG组合是玻璃化冻存未成熟大鼠睾丸组织较适宜的冷冻保护剂浓度方案,可为进一步的临床应用提供参考。 展开更多
关键词 睾丸组织 玻璃化 冷冻保护剂 DMSO EG
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猪MII期卵母细胞冷冻前后全基因组表达谱分析 预览
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作者 戴建军 吴彩凤 +3 位作者 张树山 孙玲伟 陈亚宁 张德福 《上海农业学报》 2019年第2期67-74,共8页
为探究猪MII期卵母细胞冷冻前后基因表达的变化,采用猪全基因组表达谱芯片对其冷冻前后的基因进行表达谱分析,筛选出2倍以上差异表达基因,并利用生物信息学对这些基因进行GO和KEGGPathway分析。结果表明:(1)猪卵母细胞玻璃化冷冻前后共... 为探究猪MII期卵母细胞冷冻前后基因表达的变化,采用猪全基因组表达谱芯片对其冷冻前后的基因进行表达谱分析,筛选出2倍以上差异表达基因,并利用生物信息学对这些基因进行GO和KEGGPathway分析。结果表明:(1)猪卵母细胞玻璃化冷冻前后共获得2倍以上差异表达基因171个,其中冻后上调表达基因103个,下调表达基因68个;选取的6个差异表达基因的RT-PCR验证结果与芯片分析结果一致。(2)损伤应答、细胞凋亡、程序性细胞死亡、细胞坏死及蛋白激酶调节、RNA拼接、核mRNA拼接和mRNA代谢等参与了卵母细胞冻后基因差异表达的生物学过程;(3)胞外区、基底质膜、细胞外间隙、质膜、肌动蛋白细胞骨架、线粒体脊、线粒体、细胞器膜和线粒体包膜等参与了卵母细胞冻后基因差异表达的细胞组分调控;(4)类固醇结合、酶抑制剂的活性、激素结合、核苷酸结合、辅酶结合和ATP酶活等参与了卵母细胞冻后差异表达基因的分子功能调控。(5)KEGGPathway分析表明,Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路、黏着连接和MAPK信号通路等参与了冻后卵母细胞的基因表达调控。综上所述,冷冻能造成猪MII期卵母细胞多系统的损伤,如线粒体损伤、凋亡、坏死、质膜损伤和RNA拼接与代谢异常等。 展开更多
关键词 卵母细胞 玻璃化冷冻 表达谱 基因芯片
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玻璃化冷冻对猪GV期卵母细胞及其DNA的影响
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作者 王勇杰 周悦 +5 位作者 季珂萌 张润祥 白熙 唐小川 石德顺 王晓丽 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1048-1053,共6页
为了探索对猪GV期卵母细胞低毒性以及冷冻效果好的最佳冷冻保护液,并对玻璃化冷冻卵母细胞及其DNA损伤进行评价,本研究以猪GV期卵母细胞作为试验材料,应用玻璃化冷冻方法,就目前应用最多的六种冷冻保护液进行筛选,筛选出最合适的冷冻保... 为了探索对猪GV期卵母细胞低毒性以及冷冻效果好的最佳冷冻保护液,并对玻璃化冷冻卵母细胞及其DNA损伤进行评价,本研究以猪GV期卵母细胞作为试验材料,应用玻璃化冷冻方法,就目前应用最多的六种冷冻保护液进行筛选,筛选出最合适的冷冻保护液;透射电镜观察冷冻卵母细胞超微结构的变化;采用彗星电泳技术检测玻璃化冷冻对卵母细胞DNA的影响。结果发现,以二甲基亚砜DMSO和乙二醇EG为主要成分的(HM+7.5%DMSO+7.5%EG)、HM+17%DMSO+17%EG+0.4 mol/L Su)冷冻保护液对猪GV期卵母细胞的损伤最小;玻璃化冷冻后卵母细胞透明带、细胞膜损伤,微绒毛消失,线粒体肿胀、基质不均、嵴不明显,胞质内溶解为絮状,有大量空泡;冷冻保护液处理组(未进行玻璃化冷冻)卵母细胞DNA损伤与对照组差异不显著,玻璃化冷冻组卵母细胞DNA损伤与冷冻保护液处理组和对照组均差异显著。结果表明,以DMSO和EG为主要成分的冷冻保护液适合用于对猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻,同时也证实了DNA的损伤主要是由玻璃化冷冻过程的机械损伤所致。 展开更多
关键词 玻璃化冷冻 卵母细胞 DNA损伤
玻璃化冻融不同时段rFSH联合rLH干预对小鼠卵巢VEGF及Cx37表达的影响 预览
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作者 陈杰 王燕蓉 +2 位作者 常青 黑常春 孙苗 《宁夏医科大学学报》 2019年第2期114-120,共7页
目的通过在玻璃化冻存的不同时段给予小鼠卵巢组织重组人卵泡刺激素(recombinant follicle-stimulating hormone,rFSH)与重组人黄体生成素(recombinant luteinizing hormone,rLH)共同干预,观察对冻融小鼠卵巢组织的形态学、血管内皮生... 目的通过在玻璃化冻存的不同时段给予小鼠卵巢组织重组人卵泡刺激素(recombinant follicle-stimulating hormone,rFSH)与重组人黄体生成素(recombinant luteinizing hormone,rLH)共同干预,观察对冻融小鼠卵巢组织的形态学、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及缝隙连接蛋白(connexin-37,Cx37)表达的影响。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢组织随机分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、冻存全程添加rFSH+rLH组(OG-rFSH+rLH)、冻存前添加rFSH+rLH组(BG-rFSH+rLH)以及冻存后添加rFSH+rLH组(AG-rFSH+rLH),干预组浓度均为0.15IU·mL-1rFSH+0.15IU·mL^-1rLH。通过形态学、免疫组织化学技术观察并分析各组卵巢组织形态结构及VEGF、Cx37蛋白表达量的改变;通过Real-timePCR技术检测并分析各组VEGF及Cx37 mRNA的表达变化。结果正常卵泡百分比在VCG组最低,OG-rFSH+rLH组最高(P<0.05),在BG-rFSH+rLH组低于OG-rFSH+rLH组,高于FCG组、VCG组及AG-rFSH+rLH组(P<均0.05);干预组VEGF蛋白表达量由高到低依次为OG-rFSH+rLH组、BG-rFSH+rLH组、AG-rFSH+rLH组,且均高于VCG组(P<0.05);Cx37蛋白表达量及VEGFmRNA表达量均为OG-rFSH+rLH组最高,VCG组最低(P<0.05);Cx37 mRNA表达量在OG-rFSH+rLH组最高,VCG组最低,FCG组高于VCG组,低于BG-rFSH+rLH组和AG-rFSH+rLH组(P均<0.05)。结论玻璃化冻存过程添加rFSH+rLH的干预模式提升卵泡存活率、VEGF、Cx37蛋白及mRNA的表达,最佳干预效果依次为全程干预、冻存前时段干预及冻存后时段干预。 展开更多
关键词 小鼠 卵巢 重组人卵泡刺激素 重组人黄体生成素 血管内皮生长因子 缝隙连接蛋白 玻璃化冻存
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新鲜、玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚全基因组甲基化模式初探 预览
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作者 赵亚涵 郝海生 +6 位作者 杜卫华 庞云渭 闫长亮 刘岩 赵善江 赵学明 朱化彬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1179-1188,共10页
旨在初步分析新鲜及玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚全基因组甲基化模式。本研究采用单细胞全基因组甲基化测序技术(scWGMS)检测新鲜、玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚全基因组甲基化水平和差异甲基化区域(DMR),探讨两者之间DNA甲... 旨在初步分析新鲜及玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚全基因组甲基化模式。本研究采用单细胞全基因组甲基化测序技术(scWGMS)检测新鲜、玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚全基因组甲基化水平和差异甲基化区域(DMR),探讨两者之间DNA甲基化水平上的差异。结果表明,新鲜卵母细胞体外受精囊胚的整体甲基化水平显著高于玻璃化冷冻卵母细胞体外受精囊胚的整体甲基化水平(P<0.05)。采用基因本体分析(GO)和相关信号通路(KEGG)对143个DMRs分析,发现生物学过程主要显著富集在新陈代谢、生长发育、细胞定位、细胞刺激反应等,通路主要富集在生长发育、核酸结合及组蛋白乙酰化上,并筛选出几个与之相关的候选基因(FARP2、PI4KA、FAM3D、NCOR2、ZNF827等)。本研究初步发现,玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚的全基因组甲基化水平显著降低,且DMR区域主要集中在ATP结合、生长发育及组蛋白乙酰化,为提高玻璃化冷冻卵母细胞体外受精囊胚质量提供信息参考。 展开更多
关键词 玻璃化冷冻 囊胚 全基因组 甲基化 差异甲基化区域
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透射电镜生物样品冷冻保存方法的探讨 预览
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作者 杨慧 金良韵 +3 位作者 姬曼 孙竹林 陈大兴 赵君朋 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期175-181,共7页
利用透射电镜观察组织细胞的超微结构已成为生物医学领域重要的研究手段,并为临床诊断提供可靠的依据。固定良好、妥当保存的组织样品是电镜样品制备、电镜观察以及获得高质量图像的基础。目前,电镜技术工作者和研究者一般认为戊二醛固... 利用透射电镜观察组织细胞的超微结构已成为生物医学领域重要的研究手段,并为临床诊断提供可靠的依据。固定良好、妥当保存的组织样品是电镜样品制备、电镜观察以及获得高质量图像的基础。目前,电镜技术工作者和研究者一般认为戊二醛固定的样品进行清洗后可短期保存于磷酸盐或砷酸盐缓冲液中,尽快对样品进行脱水和树脂包埋。树脂块固然可以做到长期保存,但该方法限制了组织样品的多元化应用。因此建立一种简单易行的电镜样品冻存方法具有重要的意义。本研究采用含有蔗糖和乙二醇的冷冻保护剂对多种组织器官电镜样品进行-20℃和液氮环境冷冻保存,解冻后对样品进行常规制样、超薄切片以及电镜观察,结果显示各种组织样品超微结构完好。由此可得出结论:本研究采用的电镜样品冻存方法不改变超微结构,同时又可以有效延长样品保存时间,该方法为电镜样品的低温保存提供了一个解决方案。 展开更多
关键词 电镜样品 低温保存 玻璃化
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辛伐他汀改善小鼠卵巢组织自体移植的效果 预览
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作者 王大琳 甘冬英 +4 位作者 韩阁阁 耿蒙慧 邢阿英 胡艳秋 刘嘉茵 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2019年第2期93-98,107共7页
目的:探索辛伐他汀在小鼠卵巢组织自体移植中的效果和机制。方法:选择6~8周雌性ICR小鼠80只。10只小鼠制备新鲜卵巢组织(新鲜卵巢组),另取10只小鼠切除双侧卵巢组织,玻璃化冷冻(冷冻-解冻卵巢组)。余下的60只小鼠切除双侧卵巢玻璃化冷冻... 目的:探索辛伐他汀在小鼠卵巢组织自体移植中的效果和机制。方法:选择6~8周雌性ICR小鼠80只。10只小鼠制备新鲜卵巢组织(新鲜卵巢组),另取10只小鼠切除双侧卵巢组织,玻璃化冷冻(冷冻-解冻卵巢组)。余下的60只小鼠切除双侧卵巢玻璃化冷冻-解冻后自体移植至背部肌肉,随机分成2组(各30只),移植后第1天开始分别以生理盐水(生理盐水组)和辛伐他汀(5 mg/kg,辛伐他汀组)灌胃至移植后第7天。2组分别在移植后第3,7,21天,每组每时间点各处死5只鼠(共处死30只),回收卵巢组织和血清。光学显微镜下观察HE染色的卵巢组织,免疫组织化学检测细胞核增殖性抗原ki67和CD34,原位末端标记法(Tunel法)计数Tunel阳性细胞数,血清雌二醇(E2)和卵泡刺激素(FSH)浓度,2组分别在移植后第3,7天,每组每个时间点各处死5只鼠(共处死20只)测定卵巢组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。本实验中移植术后小鼠死亡4只,灌胃死亡2只,最终剩余4只脱颈处死按动物伦理处理尸体。结果:冷冻-解冻卵巢组比新鲜卵巢组的窦卵泡数减少,Tunel阳性细胞数增加(均P<0.05)。新鲜卵巢组织和冷冻-解冻卵巢组织均可见ki67表达。移植后第3,7天辛伐他汀处理组比生理盐水组原始卵泡数多、凋亡细胞数少(均P<0.05)。移植后第21天卵巢组织生长良好,2组都可见窦卵泡,辛伐他汀组原始卵泡数和窦卵泡数比生理盐水组多(均P<0.05)。移植后第3,7天,辛伐他汀组卵巢组织血管数比生理盐水组多(均P<0.05)。辛伐他汀组在移植后第21天血清E2高于生理盐水组(P<0.05);血清FSH水平在第21天比生理盐水组低(P<0.05)。移植后第3,7天,辛伐他汀组卵巢组织MDA低于生理盐水组,SOD高于生理盐水组(均P<0.05)。结论:辛伐他汀通过抗氧化、促血管再生改善小鼠卵巢组织自体移植的效果。 展开更多
关键词 低温保存 卵巢 组织移植 羟甲基戊二酰基COA还原酶抑制剂 缺血 玻璃化冷冻 辛伐他汀
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陶瓷电熔炉在动力堆高放废液玻璃固化中适用性分析 预览
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作者 张威 董海龙 阮苠秩 《辐射防护》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期322-330,共9页
随着我国核电事业发展和核燃料循环体系日益完善,玻璃固化动力堆高放废液的需求已提上日程。为探讨陶瓷电熔炉技术在我国后续动力堆高放废液玻璃固化项目中的适用性,本文从源项、熔炉技术特点和熔炉更换解体三个方面进行了分析,认为陶... 随着我国核电事业发展和核燃料循环体系日益完善,玻璃固化动力堆高放废液的需求已提上日程。为探讨陶瓷电熔炉技术在我国后续动力堆高放废液玻璃固化项目中的适用性,本文从源项、熔炉技术特点和熔炉更换解体三个方面进行了分析,认为陶瓷电熔炉技术可以用于玻璃固化动力堆产生的高放废液。 展开更多
关键词 陶瓷电熔炉 高放废液 玻璃固化 动力堆 生产堆
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