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基于绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白间接ELISA方法的建立 预览
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作者 张洁 曹军军 +4 位作者 祝明松 杨亚军 王小凤 王璐 石峰 《动物医学进展》 北大核心 2019年第11期6-13,共8页
为解决绵羊肺炎支原体感染的预防问题,建立一种简单、快速、成本低的诊断方法,构建绵羊肺炎支原体EF-Tu基因原核表达载体,诱导纯化重组蛋白并用Western blot分析其反应原性,以重组蛋白为诊断抗原,建立绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法,... 为解决绵羊肺炎支原体感染的预防问题,建立一种简单、快速、成本低的诊断方法,构建绵羊肺炎支原体EF-Tu基因原核表达载体,诱导纯化重组蛋白并用Western blot分析其反应原性,以重组蛋白为诊断抗原,建立绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法,评估其特异性和灵敏性。结果表明,构建的重组蛋白纯度后,经Western blot证实具有良好的反应原性;间接ELISA反应条件优化显示,抗原稀释度为0.25μg/mL,一抗最佳稀释浓度为1∶50,最佳孵育时间为90 min,封闭液为50 g/L脱脂奶粉,二抗最佳稀释倍数为1∶8 000,最佳孵育时间为60 min,特异性与灵敏性良好;该方法与间接血凝法对100份血清进行检测,两者符合率为88.7%。说明试验建立的绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法可以推广使用。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 原核表达 EF-Tu蛋白 Western blot 间接ELISA
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FGF8b在卵巢癌组织中的表达及其临床意义
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作者 孙涛 韩鹏黎 李凤梅 《中华内分泌外科杂志》 CAS 2019年第3期229-232,共4页
目的探讨卵巢癌组织中人类成纤维细胞生长因子8(fibroblast growth factor 8,FGF8)的表达及其与患者临床特征的关系。方法采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测28例卵巢癌组织及其对应的癌旁正常组织中FGF8b mRNA的表达水平,蛋白免疫... 目的探讨卵巢癌组织中人类成纤维细胞生长因子8(fibroblast growth factor 8,FGF8)的表达及其与患者临床特征的关系。方法采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测28例卵巢癌组织及其对应的癌旁正常组织中FGF8b mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)方法检测FGF8b蛋白的表达水平,并分析其与患者临床特征的关系。结果卵巢癌组织中FGF8b mRNA(0.23±0.08)表达高于癌旁组织(0.71±0.11),差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中FGF8b蛋白(0.27±0.03)表达高于癌旁组织(0.44±0.03),差异有统计学意义(P<0.05)。在卵巢癌组织中,Ⅲ~Ⅳ期患者FGF8b阳性率(76.9%)表达高于Ⅰ~Ⅱ期患者(33.3%),差异有统计学意义(P<0.05);淋巴结转移组阳性率(60.0%)表达高于无淋巴转移组(27.8%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FGF8b在卵巢癌组织中高表达,并与患者临床分期相关。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子8 卵巢癌 RT-PCR WESTERN BLOT
巨噬细胞移动抑制因子在慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中的表达及意义
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作者 李冰 杨元立 +3 位作者 王美霞 曹枫 刘先福 张红璇 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1123-1127,共5页
目的检测巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者肺组织中的表达水平及临床意义。方法选取深圳市龙岗中心医院2015年1月至2018年9月因... 目的检测巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者肺组织中的表达水平及临床意义。方法选取深圳市龙岗中心医院2015年1月至2018年9月因肺大疱行肺大疱楔形切除术患者的肺组织标本为研究对象(n=180),依据病史资料分为COPD病例组(COPD合并肺大疱行肺大疱楔形切除术患者,n=90)和对照组(未合并COPD单纯肺大疱行肺大疱楔形切除术患者,n=90);病例组再根据术前肺功能指标分为:COPD轻度组(FEV1/FVC<70%、FEV1/Pred%≥80%,n=30)、COPD中度组(FEV1/FVC<70%、50%≤FEV1/Pred%<80%,n=30)和COPD重度组(FEV1/FVC<70%、30%≤FEV1/Pred%<50%,n=30)。利用RT-PCR、ELISA和Western blot检测各组人群肺组织中MIF mRNA及蛋白的表达水平,并分析各指标与肺功能的相关性。采用SPSS 18.0进行单因素方差分析、SNK-q检验和Pearson相关分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果与对照组相比,病例组MIF的表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);依据COPD严重程度分组,疾病严重程度越高,MIF mRNA及蛋白表达越强,差异有统计学意义(P<0.05)。病例组MIF表达水平与肺功能指标(FEV1/ FVC%、FEV1/Pred%)呈负相关(P<0.05)。结论COPD肺组织中MIF的表达水平显著升高,和疾病严重程度及肺功能指标明显相关。 展开更多
关键词 巨噬细胞移动抑制因子 慢性阻塞性肺疾病 RT-PCR ELISA WESTERN BLOT
不同参数对蛋白免疫印迹法结果的影响
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作者 卢进 周东东 +1 位作者 杨永清 尹磊淼 《生物技术》 CAS 2019年第4期371-375,366共6页
[目的]探讨曝光时间、洗脱时间等参数对蛋白免疫印迹法结果的影响。[方法]通过测量灰度值,比较不同曝光时间(6 s和21 s)、洗脱时间(30 min和8 h)以及图像处理软件(Image J和Imagequant TL)对蛋白免疫印迹法结果的影响。[结果]上样量比值... [目的]探讨曝光时间、洗脱时间等参数对蛋白免疫印迹法结果的影响。[方法]通过测量灰度值,比较不同曝光时间(6 s和21 s)、洗脱时间(30 min和8 h)以及图像处理软件(Image J和Imagequant TL)对蛋白免疫印迹法结果的影响。[结果]上样量比值为2∶1的蛋白曝光6 s的灰度值读数分别为14766±724和7171±577(n=3),均数比值为2. 1∶1。延长曝光至21 s后相同样品灰度值分别为14932±1198和11994±616(n=3),均数比值减小为1. 2∶1;洗脱30 min和8 h后的曝光结果相比,上样量为1. 64μg蛋白灰度值分别为23713±1895和22892±571(n=3),差异无统计学意义;Image J和Imagequant TL两种软件对倍比梯度上样的蛋白样品读值,比值分别为1∶0. 56∶0. 41∶0. 22和1∶0. 59∶0. 40∶0. 15;对两组读值进行直线回归分析,可得斜率分别为0. 13和0. 14,提示两组读值趋势一致。[结论]曝光时间对蛋白免疫印迹法结果有明显影响,高丰度蛋白需要低曝光时间,才能保持确切的倍比关系;洗脱时间超过30 min对蛋白免疫印迹法灰度值结果没有直接影响;不同图像处理软件对灰度值结果分析趋势一致。 展开更多
关键词 蛋白免疫印迹法 WESTERN BLOT 灰度值 曝光时间 洗脱时间
大鼠外伤性癫痫模型皮层SPP1蛋白的表达
5
作者 代滨滨 向思阳 +5 位作者 王宇聪 李珊 郝红霞 赵东 王旭 杨天潼 《中国法医学杂志》 CSCD 2019年第1期36-39,43共5页
目的检测分泌型焦磷酸蛋白1 (Secreted phosphoprotein 1,SPP1)在外伤性癫痫(post-traumaticepilepsy,PTE)大鼠皮层脑组织中的表达变化,探讨其与外伤性癫痫的关联。方法随机将18只大鼠分为正常对照组、生理盐水组和实验组。建立外伤性... 目的检测分泌型焦磷酸蛋白1 (Secreted phosphoprotein 1,SPP1)在外伤性癫痫(post-traumaticepilepsy,PTE)大鼠皮层脑组织中的表达变化,探讨其与外伤性癫痫的关联。方法随机将18只大鼠分为正常对照组、生理盐水组和实验组。建立外伤性癫痫模型。采用免疫组化法检测GFAP蛋白,采用Western blot法检测SPP1蛋白。结果大鼠行为学平均评分为4分;EEG显示明显痫性放电;免疫组化结果显示,实验组大鼠脑组织GFAP阳性细胞与正常对照组和生理盐水组比较,显著增高(P <0.05);生理盐水组GFAP阳性细胞与正常对照组比较,差异不具有统计学意义(P> 0.05),以上结果综合表明成功建立了大鼠外伤性癫痫模型。Western blot结果显示,实验组SPP1蛋白表达量较正常对照组和生理盐水组显著增高(P <0.01);生理盐水组SPP1蛋白表达量较正常对照组不显著,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 SPP1在外伤性癫痫大鼠皮层脑组织中表达显著上调,外伤性癫痫的发生机制可能与SPP1的表达异常增高有关。 展开更多
关键词 法医临床学 外伤性癫痫 Western BLOT SPP1 GFAP
原发性肝细胞癌中NOP14的表达及其临床意义 预览
6
作者 邢云龙 许戈良 +3 位作者 余继海 潘婷婷 黄玫 周杭城 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期402-406,共5页
目的探讨NOP14在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及临床意义。方法检测97例HCC石蜡包埋组织及其癌旁组织中NOP14的表达,分析NOP14表达与HCC临床病理特征的关系。利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qR... 目的探讨NOP14在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及临床意义。方法检测97例HCC石蜡包埋组织及其癌旁组织中NOP14的表达,分析NOP14表达与HCC临床病理特征的关系。利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)及Western blot法分别检测20对配对新鲜冻存HCC及癌旁组织中NOP14的表达。结果 NOP14在HCC组织中的高表达率为64.9%(63/97),癌旁组织中的高表达率为12.4%(12/97),差异有统计学意义( P <0.001),NOP14在HCC组织中的高表达与肿瘤血管侵犯( P =0.004)、TNM分期( P =0.013)及 Edmondson分级( P =0.009)差异有统计学意义。qRT-PCR及Western blot法检测均显示HCC组织中NOP14的表达量显著高于配对癌旁组织,差异有统计学意义( P <0.001, P <0.001)。Kaplan-Meier生存分析和Log-rank检验显示:NOP14高表达与低表达患者的中位生存期分别为17、35个月,差异有统计学意义( P <0.05)。结论 NOP14的表达与HCC是否存在血管侵犯、TNM分期以及Edmondson分级均有显著相关性,检测NOP14有助于HCC患者病情评估。 展开更多
关键词 肝肿瘤 NOP14 免疫组织化学 WESTERN BLOT QRT-PCR
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RBM5蛋白的RNA识别区在肿瘤细胞周期调控中作用的研究 预览
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作者 王迪 吴传芳 《四川大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期531-536,共6页
为分析RNA识别区(RNA recognition motif,RRM)在RBM5蛋白调控肿瘤细胞周期中的作用,本研究利用低表达RBM5的A549细胞系构建了A549/Vector、A549/RBM5-WT、A549/RBM5-△RRM三种稳定细胞株,通过流式细胞术检测,发现仅有A549/RBM5-WT能显... 为分析RNA识别区(RNA recognition motif,RRM)在RBM5蛋白调控肿瘤细胞周期中的作用,本研究利用低表达RBM5的A549细胞系构建了A549/Vector、A549/RBM5-WT、A549/RBM5-△RRM三种稳定细胞株,通过流式细胞术检测,发现仅有A549/RBM5-WT能显著阻滞细胞于G1期,说明RRM区是RBM5抑制细胞周期进程必不可少的区域.利用Western Blot检测细胞中cyclin A与Phospho-Rb(ser 795)的蛋白水平差异,证明了RBM5蛋白的RRM能够参与其介导的pRb去磷酸化以及抑制cyclin A表达,从而抑制细胞周期进程. 展开更多
关键词 RBM5 RNA识别区 流式细胞术 WESTERN BLOT 细胞周期
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miRNA-148b-3p调节胎盘滋养细胞GLUT1表达与ICP子代糖代谢紊乱关系的研究
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作者 景晓琳 邢爱耘 +1 位作者 白怀 吴琳 《四川大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期328-333,共6页
目的研究miRNA-148b-3p在妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)孕妇胎盘组织中的表达及对滋养细胞葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter 1,GLUT1)的调控,探索ICP孕妇子代糖代谢异常的可能机制.方法收集201... 目的研究miRNA-148b-3p在妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)孕妇胎盘组织中的表达及对滋养细胞葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter 1,GLUT1)的调控,探索ICP孕妇子代糖代谢异常的可能机制.方法收集2017年3月至2018年1月于四川大学华西第二医院产科行剖宫分娩的ICP孕妇30例,正常妊娠孕妇30例,分别收集胎盘组织、母血及脐血,提取胎盘组织miRNA,母血及脐血送检生化指标.采用实时荧光定量PCR验证miR-148b-3p在两组胎盘中的表达差异.通过lipofectaine3000脂质体包裹miR-148b-3p inhibitor/mimics转染人滋养细胞HTR-8,实时荧光定量PCR验证转染后细胞中miR-148b-3p的表达水平;Western blot检测转染后细胞中GLUT1的表达水平.结果ICP孕妇母血空腹血糖(fasting blood glucose,FPG)及其胎儿脐血胰岛素水平较对照组增高(P<0.05).ICP组胎盘组织中miR-148b-3p表达量较对照组下降(P<0.05).转染miR-148b-3p inhibitor后,与转染inhibitor control比较,HTR-8细胞中miR-148b-3p的表达水平下降(P<0.05),GLUT1蛋白的表达量升高(P<0.05);转染miR-148b-3p mimics后,与转染mimics control比较,HTR-8细胞中miR-148b-3p的表达水平上升(P<0.05),GLUT1蛋白的表达量降低(P<0.05).结论miR-148b-3p可能通过对胎盘滋养细胞GLUT1表达的负向调控参与了ICP子代糖代谢异常的发生. 展开更多
关键词 ICP MIRNA miRNA-148b-3p GLUT1 实时荧光定量PCR Western blot
基于蛋白免疫印迹的水蛭抗凝活性成分研究 预览
9
作者 程珊 汪波 +2 位作者 肖凌 聂晶 郑健 《世界科学技术:中医药现代化》 CSCD 北大核心 2019年第4期657-661,共5页
目的:建立Native-PAGE结合Western blot检测水蛭活性多肽与凝血酶相互作用产物的方法,探究水蛭有效抗凝成分。方法:本研究分别提取宽体金线蛭、日本医蛭两种水蛭虫体总蛋白及日本医蛭唾液蛋白,用凝血酶滴定法测定其抗凝血酶活性,Western... 目的:建立Native-PAGE结合Western blot检测水蛭活性多肽与凝血酶相互作用产物的方法,探究水蛭有效抗凝成分。方法:本研究分别提取宽体金线蛭、日本医蛭两种水蛭虫体总蛋白及日本医蛭唾液蛋白,用凝血酶滴定法测定其抗凝血酶活性,Western blot检测凝血酶-活性多肽复合体。结果:研究发现两种水蛭Native-PAGE-WB均检测到凝血酶-活性多肽复合体,且SDS-PAGE-WB检测到复合体变性后产生凝血酶条带。结论:建立的Native-PAGE-WB法可有效检出水蛭活性多肽和凝血酶相互作用产物,且发现同水蛭素类似,宽体金线蛭活性抗凝多肽与凝血酶在体外也能形成稳定的蛋白复合体。 展开更多
关键词 宽体金线蛭 日本医蛭 凝血酶 NATIVE-PAGE 抗凝成分 Western BLOT
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原发性肝细胞癌中游离脂肪酸受体4的表达及其临床意义 预览
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作者 缪冉 吴立胜 +2 位作者 周杭城 邢云龙 姚寒晖 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期147-150,共4页
目的探讨游离脂肪酸受体4(FFAR4)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测102例HCC及其对应癌旁组织中FFAR4表达,并分析FFAR4的表达与HCC临床病理特征之间的相关性。利用qRT-PCR及West... 目的探讨游离脂肪酸受体4(FFAR4)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测102例HCC及其对应癌旁组织中FFAR4表达,并分析FFAR4的表达与HCC临床病理特征之间的相关性。利用qRT-PCR及Western blot法检测20对新鲜冷冻HCC组织及对应癌旁组织中FFAR4的表达,并复习相关文献。结果FFAR4在HCC及癌旁组织中的高表达率分别为64. 7%(66/102)、15. 7%(16/102),两组差异有统计学意义(P <0. 05),FFAR4高表达与HCC肿瘤血管侵犯(P <0. 05)、TNM分期(P <0. 01)及Edmondson分级(P <0. 05)有关。qRT-PCR及Western blot法检测结果均显示HCC组织中FFAR4的表达量显著高于癌旁组织,组间差异有统计学意义(P均<0. 05)。结论FFAR4表达与HCC是否存在血管侵犯、TNM分期以及Edmondson分级均有显著相关性。FFAR4高表达可能与HCC患者病情严重程度密切相关。 展开更多
关键词 肝肿瘤 肝细胞癌 FFAR4 免疫组织化学 QRT-PCR WESTERN BLOT
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枸杞木糖异构酶基因LbxylA的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备 预览
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作者 赵建华 李浩霞 +5 位作者 尹跃 王亚军 李彦龙 樊云芳 安巍 曹有龙 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第10期77-83,共7页
以‘宁杞1号’枸杞果实为材料,利用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术,克隆出枸杞木糖异构酶基因(Lycium barbarum Linn. xylose isomerase,LbxylA)的全长,开放阅读框为1 446 bp,编码48... 以‘宁杞1号’枸杞果实为材料,利用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术,克隆出枸杞木糖异构酶基因(Lycium barbarum Linn. xylose isomerase,LbxylA)的全长,开放阅读框为1 446 bp,编码481个氨基酸,蛋白质分子质量为53.54 kDa,理论等电点5.37;对其进行生物信息学分析,发现LbxylA与烟草和马铃薯的木糖异构酶基因序列相似性较高,达到95%;构建重组质粒pGEX4T-1-LbxylA,转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行原核表达,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-Dthiogalactoside,IPTG)诱导培养,筛选出重组蛋白的适宜表达条件为:在18℃条件下100 μmol/L IPTG诱导10 h蛋白量最大,该蛋白为融合表达的且部分可溶;进一步纯化该蛋白并将获到的LbxylA融合蛋白为抗原,以日本大耳兔免疫制备Lbxyl A多克隆抗体,采用间接酶联免疫吸附测定法,测定抗体血清的效价高于1∶81 000;随着果实的发育,果实中LbxylA的相对表达量呈现逐渐下降的趋势,且在开花后9 d果实中LbxylA表达丰度最高;利用Western blot检测到LbxylA蛋白的变化与LbxylA相对表达量基本一致,但在开花后9 d果实中蛋白表达量低于开花后15 d,随后逐渐降低,果实成熟时两者的表达量到达最低。这表明枸杞果实发育前期LbxylA蛋白由于翻译后加工可能导致蛋白质表达滞后于基因,其结果有助于进一步研究LbxylA功能及其对果实糖积累的作用。 展开更多
关键词 枸杞 木糖异构酶 原核表达 多克隆抗体 Western BLOT检测
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HIV抗体初筛阳性标本的复检与确证结果分析 预览
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作者 周昀 杨新智 +3 位作者 周秋颖 王建华 孙玉萍 杨政权 《沈阳医学院学报》 2019年第1期56-58,61共4页
目的:探讨HIV抗体初筛阳性标本的复检与确证试验结果之间的关系。方法:对2011年1月至2017年10月HIV抗体初筛阳性标本按照《全国艾滋病检测技术规范(2009年、2015年修订版)》要求分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和胶体硒法进行复检,复... 目的:探讨HIV抗体初筛阳性标本的复检与确证试验结果之间的关系。方法:对2011年1月至2017年10月HIV抗体初筛阳性标本按照《全国艾滋病检测技术规范(2009年、2015年修订版)》要求分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和胶体硒法进行复检,复检任一方法阳性采用Western blot法进行确证,收集数据进行分析。结果:656份HIV抗体初筛阳性标本,622份复检阳性,初筛假阳性率为5.2%(34/656)。其中受检者信息齐全的490份标本进行确证试验,确证阳性标本450份(91.8%),阴性11份(2.3%),不确定29份(5.9%)。ELISA法复检阳性标本确证阳性率为92.9%(450/488),胶体硒法复检阳性标本确证阳性率为99.1%(450/454),差异有统计学意义(χ^2=31.22,P<0.01);ELISA法中S/CO值>6组与3≤S/CO值≤6组和1≤S/CO值<3组的确证阳性率比较差异均有统计学意义(χ^2=96.33、301.15,P<0.01);ELISA法S/CO值与确证阳性标本出现条带数量呈正相关,Gamma系数为0.788。结论:采用优先选择胶体硒法+ELISA法补充的模式进行复检可以大大提高检测效率,保证及时有效地发现HIV感染者。较高S/CO值的标本感染HIV的可能性较大,且病毒处于复制活跃期具有较强感染性的可能性也较大。 展开更多
关键词 HIV抗体 筛查阳性 确证试验 Western BLOT
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胰腺导管腺癌中BCLAF1蛋白的表达 预览
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作者 何俊飞 陈炯 +2 位作者 胡丕波 邬高华 周海波 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第7期1076-1082,共7页
目的探究Bcl-2相关转录因子-1(BCLAF1)蛋白在胰腺导管腺癌(PDAC)中的表达水平及临床意义。方法通过免疫组织化学法分别检测67例配对的PDAC以及癌旁组织石蜡切片中BCLAF1蛋白的表达。用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测8例配... 目的探究Bcl-2相关转录因子-1(BCLAF1)蛋白在胰腺导管腺癌(PDAC)中的表达水平及临床意义。方法通过免疫组织化学法分别检测67例配对的PDAC以及癌旁组织石蜡切片中BCLAF1蛋白的表达。用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测8例配对的PDAC以及癌旁组织中BCLAF1蛋白的表达水平。PDAC Panc-1细胞中过表达BCLAF1后,通过Transwell侵袭实验观察PDAC细胞侵袭迁移能力的变化,采用CCK-8法检测各组PDAC细胞增殖情况。结果免疫组化结果显示:BCLAF1主要表达于PDAC导管细胞的细胞核中,PDAC组BCLAF1阳性表达的有54例(80.59%),高于癌旁组织(35.82%),差异有统计学意义(χ^2=27.610,P<0.001)。Western blot结果表明:PDAC中BCLAF1蛋白含量高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.001)。PDAC细胞中过表达BCLAF1后明显增加胰腺细胞的侵袭迁移能力,同时能促进癌细胞的增殖能力。BCLAF1在PDAC癌组织中的表达水平与患者肿瘤的大小、TNM分期、有无淋巴结转移以及临床分期和预后情况等临床生物学特征显著相关。Kaplan-Meier生存分析显示BCLAF1高表达生存时间比BCLAF1低表达生存时间显著缩短,差异有统计学意义(χ^2=17.419,P<0.01)。COX回归多因素分析显示BCLAF1和TNM分期是影响PDAC预后的独立因素。结论 BCLAF1蛋白表达水平在PDAC中显著升高,转染pcDNA3.1-BCLAF-1质粒Panc-1细胞增殖速度,侵袭能力得到提高,其检测有助于对PDAC的早期诊断以及预后评估。 展开更多
关键词 胰腺导管腺癌 BCLAF1 免疫组化 WESTERN BLOT CCK-8
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Annexin A7在高癌家系鼻咽癌人群中的表达水平 预览
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作者 唐浩斌 邓太海 +1 位作者 谷婷婷 陈舒华 《广东医学》 CAS 2019年第8期1078-1081,共4页
目的检测膜联蛋白A7(Annexin A7)在高癌家系鼻咽癌组织中的表达情况,以期探讨高癌家系鼻咽癌患者与Annexin A7之间的关系。方法采集门诊患者鼻咽组织标本(高癌家系鼻咽癌组织标本、散发性鼻咽癌组织标本及鼻咽黏膜慢性炎症患者组织标本... 目的检测膜联蛋白A7(Annexin A7)在高癌家系鼻咽癌组织中的表达情况,以期探讨高癌家系鼻咽癌患者与Annexin A7之间的关系。方法采集门诊患者鼻咽组织标本(高癌家系鼻咽癌组织标本、散发性鼻咽癌组织标本及鼻咽黏膜慢性炎症患者组织标本各15例),应用RT-PCR及Western blot检测Annexin A7在各组标本的mRNA及蛋白质水平的表达情况。结果在高癌家系鼻咽癌患者、散发性鼻咽癌患者及鼻咽黏膜慢性炎症患者鼻咽组织中,Annexin A7 mRNA的相对表达量依次为0.828±0.046、0.459±0.048、0.312±0.072,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。在高癌家系鼻咽癌患者、散发性鼻咽癌患者及鼻咽黏膜慢性炎症患者鼻咽组织中,Annexin A7蛋白相对表达量依次为0.867±0.068、0.624±0.065、0.392±0.087,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。Annexin A7蛋白在鼻咽癌组织中的表达与TNM分期及淋巴结转移有关,与患者的年龄﹑性别无关。结论 Annexin A7在高癌家系鼻咽癌患者鼻咽组织中表达明显上调。Annexin A7的表达和肿瘤的分期和淋巴结转移有关。 展开更多
关键词 鼻咽癌 高癌家系 RT-PCR WESTERN BLOT 膜联蛋白A7
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抗人PD-L1单克隆抗体制备及其在肿瘤病理诊断中的意义 预览
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作者 廖伟聪 黄建芳 +3 位作者 向军俭 冯沛然 何亚运 张宇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期707-710,共4页
目的:研制用于肿瘤临床诊断的高亲和力、高特异性的抗人PD-L1单克隆抗体。方法:用重组人PD-L1胞外段蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术和间接ELISA筛选,鉴定获得可稳定分泌抗人PD-L1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;通过SDS-PAGE、间... 目的:研制用于肿瘤临床诊断的高亲和力、高特异性的抗人PD-L1单克隆抗体。方法:用重组人PD-L1胞外段蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术和间接ELISA筛选,鉴定获得可稳定分泌抗人PD-L1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;通过SDS-PAGE、间接ELISA等方法鉴定其亲和力、效价、纯度及亚型;用Western blot检测肿瘤细胞(OV2008、C13等);用免疫组化(ICH)检测膀胱癌、黑色素瘤肿瘤组织芯片病理组织的PD-L1表达水平。结果:共获得4株单克隆抗体,其中Ab3亲和力高、特异性强,其效价和亲和常数分别为4. 1 ng/ml、7. 85×109M-1,与PD-L2无交叉反应,可识别肿瘤细胞中的天然PD-L1;ICH结果表明,Ab3抗体能特异性检测出膀胱癌和黑色素瘤组织中PD-L1表达水平的高、中、低。结论:获得一株可分泌高亲和力、高特异性的抗人PD-L1单抗的杂交瘤细胞株,可用于膀胱癌和黑色素瘤组织的PD-L1表达水平的检测。 展开更多
关键词 单克隆抗体 PD-L1 WESTERN BLOT 免疫组化 肿瘤分子诊断
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囊性包虫原头蚴外泌体的提取及其特性的初步研究
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作者 李宗吉 丁淑琴 李元 《当代畜牧》 2019年第3期27-29,共3页
笔者采用高速离心法,成功分离提取原头蚴分泌的外泌体(Protoscoleces Exosome,PE),电镜下观察到原头蚴外泌体为形状大小较为均一的球形颗粒,直径30 nm~200 nm,平均直径82 nm。SDS-PAGE分析,原头蚴外泌体蛋白主要集中分布在20 KD~43 KD... 笔者采用高速离心法,成功分离提取原头蚴分泌的外泌体(Protoscoleces Exosome,PE),电镜下观察到原头蚴外泌体为形状大小较为均一的球形颗粒,直径30 nm~200 nm,平均直径82 nm。SDS-PAGE分析,原头蚴外泌体蛋白主要集中分布在20 KD~43 KD之间。Western blot分析显示,包虫病患者血清在28.8 KD~35.5 KD之间可识别出3条明显外泌体蛋白条带。研究表明,高速离心法可有效分离原头蚴分泌的外泌体。外泌体蛋白成分具有较强的抗原性和免疫原性,具有作为包虫病诊断标志物或疫苗候选分子的价值。 展开更多
关键词 原头蚴 外泌体 SDS-PAGE WESTERN BLOT
GPR120对奶牛脂肪细胞脂代谢的调节作用
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作者 李莹 陈喜莹 +4 位作者 范明赫 许秋实 李心慰 刘国文 李小兵 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期221-225,共5页
为研究GPR120对奶牛脂肪细胞脂合成和脂分解的影响,缓解围产期奶牛出现的脂代谢紊乱问题,在体外培养的奶牛脂肪细胞中分别沉默GPR120和激活GPR120,采用Western Blot、qRT-PCR等技术检测脂代谢基因变化。结果表明:沉默GPR120组奶牛脂肪... 为研究GPR120对奶牛脂肪细胞脂合成和脂分解的影响,缓解围产期奶牛出现的脂代谢紊乱问题,在体外培养的奶牛脂肪细胞中分别沉默GPR120和激活GPR120,采用Western Blot、qRT-PCR等技术检测脂代谢基因变化。结果表明:沉默GPR120组奶牛脂肪细胞脂合成关键酶、脂滴包被蛋白(PLIN1)和甘油三酯(TG)含量显著降低;添加GPR120激动剂组奶牛脂肪细胞脂合成关键酶和TG含量升高,激素敏感酯酶(HSL)基因表达量降低。这说明,GPR120在体外培养的奶牛脂肪细胞中能促进脂肪细胞的脂合成,抑制脂肪细胞的脂分解。 展开更多
关键词 GPR120 奶牛脂肪细胞 脂代谢紊乱 Western BLOT QRT-PCR
ARTN在食管鳞状细胞癌中的表达及临床病理联系 预览
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作者 陈雅琪 吴燕 +1 位作者 黄一凡 文彬 《川北医学院学报》 CAS 2019年第2期178-181,共4页
目的:研究ARTN在食管鳞状细胞癌组织中的表达及与食管鳞癌患者临床病理特征及预后的联系。方法:采用免疫组化SP两步法检测ARTN蛋白在114例食管鳞状细胞癌组织、17例高级别上皮内瘤变组织、25例正常食管组织中的表达;Western blot法检测A... 目的:研究ARTN在食管鳞状细胞癌组织中的表达及与食管鳞癌患者临床病理特征及预后的联系。方法:采用免疫组化SP两步法检测ARTN蛋白在114例食管鳞状细胞癌组织、17例高级别上皮内瘤变组织、25例正常食管组织中的表达;Western blot法检测ARTN在12例新鲜食管鳞癌组织及配对的癌旁组织中的表达,分析ARTN表达与患者临床病理及预后的关系。结果:免疫组化:ARTN在食管正常组织、高级别上皮内瘤变组织、食管鳞癌组织中的阳性表达率分别为0%(0/25)、23.5%(6/17)、80.7%(92/114);Western blot:食管鳞癌组织中ARTN的表达高于癌旁正常组织。结论:ARTN表达与癌浸润深度、TNM分期及预后相关(P<0.01),可能成为判断患者浸润深度、临床分期及预后的指标。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 浸润深度 临床分期 预后 ARTN 免疫组化 WESTERN BLOT
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牛妊娠相关糖蛋白BoPAG1的制备及生物信息学分析
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作者 杨亚军 王震 +2 位作者 张洁 徐明国 陈创夫 《生物技术》 CAS 2019年第1期29-34,89共7页
[目的]获得高效表达并且抗原性较好的BoPAG1(bovin Pregnancy associated glycoproteins 1)蛋白,并分析其生物信息学功能。[方法]扩增荷斯坦奶牛BoPAG1基因,并将其连接在表达载体pET-30a,并转化至大肠杆菌(DE3)中表达,用SDS-PAGE和Weste... [目的]获得高效表达并且抗原性较好的BoPAG1(bovin Pregnancy associated glycoproteins 1)蛋白,并分析其生物信息学功能。[方法]扩增荷斯坦奶牛BoPAG1基因,并将其连接在表达载体pET-30a,并转化至大肠杆菌(DE3)中表达,用SDS-PAGE和Western Blot检测其免疫学特性,采用生物信息学方法对BoPAG1基因编码蛋白的蛋白修饰、结构、线性B细胞抗原表位进行预测分析。并对不同物种间的PAG1以及荷斯坦奶牛BoPAG的氨基酸做同源性分析。[结果]成功克隆BoPAG1基因并表达相应蛋白,大小与预期结果相符,预测BoPAG1蛋白具有18个B细胞抗原表位,其N端具有15个氨基酸组成的信号肽,并且有4处N连接糖基化,不同物种间PAG1氨基酸的同源性为95.1%~97.9%,BoPAG蛋白家族氨基酸的同源性为86.4%~97.2%。[结论]成功表达并纯化获得了BoPAG1蛋白。BoPAG1蛋白N连接糖基化有4处并且预测出18个B细胞抗原表位以及15个氨基酸组成的信号肽。不同物种间PAG1及BoPAG蛋白家族同源性较高。为BoPAG1蛋白抗体的制备和功能的研究提供了基础。 展开更多
关键词 妊娠相关糖蛋白 原核表达 WESTERN BLOT 生物信息学分析
IL1RAP在健康奶牛与患子宫内膜炎奶牛子宫内膜组织间表达差异的研究 预览
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作者 陈秀竹 常迪 +9 位作者 黄启震 王瑞 王天坤 盛熙晖 齐晓龙 王相国 郭勇 刑凯 倪和民 谷传慧 《北京农学院学报》 2019年第2期77-81,共5页
【目的】为了探明IL1RAP与奶牛子宫内膜炎的关系。【方法】分别采集3头健康奶牛和患子宫内膜炎奶牛的子宫组织,利用荧光定量PCR和western blot检测IL1RAP在两者间的表达差异。【结果】健康奶牛子宫组织中IL1RAP mRNA的相对表达量显著高... 【目的】为了探明IL1RAP与奶牛子宫内膜炎的关系。【方法】分别采集3头健康奶牛和患子宫内膜炎奶牛的子宫组织,利用荧光定量PCR和western blot检测IL1RAP在两者间的表达差异。【结果】健康奶牛子宫组织中IL1RAP mRNA的相对表达量显著高于患子宫内膜炎奶牛子宫组织中IL1RAP的相对表达量(P<0.05)。健康奶牛子宫组织中IL1RAP蛋白的相对表达量极显著高于患子宫内膜炎奶牛子宫组织中IL1RAP蛋白的相对表达量。【结论】IL1RAP基因在患子宫内膜炎子宫组织中的相对表达量显著低于健康奶牛,结果为初步证实IL1RAP为奶牛子宫内膜炎的抗性基因提供试验数据。 展开更多
关键词 奶牛子宫内膜炎 IL1RAP 荧光定量PCR western BLOT
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