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过表达慢病毒载体介导miR-1转染L6细胞增殖分化及组蛋白去乙酰化酶的表达 预览
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作者 弓贺炜 刘承伟 +1 位作者 梁炳生 李刚 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第13期2075-2080,共6页
背景:有研究认为组蛋白去乙酰化酶能够影响肌肉的分化和增殖,且其与miR-1关联紧密,但其具体调控机制尚不明确。目的:分析mi R-1过表达对L6成肌细胞增殖分化及组蛋白去乙酰化酶表达水平的影响。方法:构建表达含miR-1的重组慢病毒载体,进... 背景:有研究认为组蛋白去乙酰化酶能够影响肌肉的分化和增殖,且其与miR-1关联紧密,但其具体调控机制尚不明确。目的:分析mi R-1过表达对L6成肌细胞增殖分化及组蛋白去乙酰化酶表达水平的影响。方法:构建表达含miR-1的重组慢病毒载体,进行测序和酶切鉴定,稳定转染L6成肌细胞,采用RT-PCR检测miR-1的表达水平。取稳定转染miR-1重组慢病毒载体的L6成肌细胞(miR-1组)、转染空质粒重组慢病毒载体的L6成肌细胞(空载组)及未转染的L6成肌细胞(空白组),培养24,48,72,96 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖,荧光显微镜下观察细胞形态变化,Western blot检测培养72 h后的α肌动蛋白表达;培养24,72,120 h后,Western blot与RT-PCR检测mi R-1组、空载组组蛋白去乙酰化酶蛋白及基因的表达。结果与结论:①miR-1慢病毒载体经酶切和测序鉴定正确,转染48 h后,mi R-1组L6成肌细胞miR-1基因表达显著高于空载组、空白组(P <0.01),实现了miR-1在L6成肌细胞中过表达;②培养24,48,72,96 h后,3组细胞增殖能力比较差异无显著性意义(P > 0.05);③培养24,48 h时,miR-1组与空白组、空载组细胞形态无明显差异;72 h以后,miR-1组呈梭形的成熟肌细胞显著增多,且细胞α肌动蛋白表达明显高于空载组、空白组,证实miR-1过表达促进了L6成肌细胞的分化;④随着时间推移,miR-1组的组蛋白去乙酰化酶蛋白条带较空载组明显变淡、变细;miR-1组培养不同时间点的组蛋白去乙酰化酶基因表达均低于空载组(P <0.01);⑤结果表明,miR-1过表达可促进L6成肌细胞的分化能力,其机制与抑制组蛋白去乙酰化酶4的表达相关。 展开更多
关键词 慢病毒载体 L6细胞 MIR-1 细胞分化 细胞增殖 Α肌动蛋白 组蛋白去乙酰化酶4 成肌细胞分化 转染 成肌细胞 微RNAs 肌动蛋白类 组织工程
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肝肺综合征大鼠血清诱导肺动脉平滑肌细胞增殖时Talin1和F-actin表达的变化
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作者 陈杨 陈林 +3 位作者 杨勇 张铭 鲁开智 吴艳 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期471-474,共4页
目的评价肝肺综合征(HPS)大鼠血清诱导肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖时踝蛋白1(Talin1)和F-肌动蛋白(F-actin)表达的变化。方法雄性SD大鼠20只,体重220~250 g,采用慢性胆总管结扎法制备HPS模型,取腹主动脉血样制备血清。将原代培养的大... 目的评价肝肺综合征(HPS)大鼠血清诱导肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖时踝蛋白1(Talin1)和F-肌动蛋白(F-actin)表达的变化。方法雄性SD大鼠20只,体重220~250 g,采用慢性胆总管结扎法制备HPS模型,取腹主动脉血样制备血清。将原代培养的大鼠PASMCs接种于6或96孔板,采用随机数字表法分为2组:对照组(C组)和HPS组,每组24孔(6孔板)或30孔(96孔板)。C组加入正常大鼠血清,HPS组加入HPS大鼠血清,终浓度为5%。分别于细胞孵育24、48和72 h时,采用Western blot法测定Talin1、F-actin和G-actin的表达水平,计算F-actin/G-actin比值;采用3H-TdR掺入法和CCK-8法测定PASMCs增殖水平。结果与C组比较,HPS组PASMCs增殖增强,Talin1表达上调,F-actin/G-actin比值升高(P<0.05)。HPS组随孵育时间延长,PASMCs增殖逐渐增强,Talin1表达逐渐上调,F-actin/G-actin比值逐渐升高(P<0.05)。结论HPS大鼠血清诱导PASMCs增殖的机制可能与上调Talin1和F-actin的表达有关。 展开更多
关键词 肝肺综合征 肌细胞 平滑肌 肺动脉 踝蛋白 肌动蛋白类
纤维化因子及NADPH氧化酶在心理应激诱导小鼠的食管纤维化中的表达及意义
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作者 买买提·依斯热依力 吾布力卡斯木·吾拉木 +2 位作者 艾克拜尔·艾力 李义亮 克力木·阿不都热依木 《中国医师杂志》 CAS 2019年第5期672-676,共5页
目的研究胶原蛋白1(colla-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX-4)在慢性束缚应激(CRS)模型小鼠食管中的表达水平,探讨心理应激诱导食管纤维化的发生及氧化应激所产... 目的研究胶原蛋白1(colla-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX-4)在慢性束缚应激(CRS)模型小鼠食管中的表达水平,探讨心理应激诱导食管纤维化的发生及氧化应激所产生的影响。方法 20只雄性SPF级昆明小鼠随机分2组,即CRS组和对照组。CRS组小鼠每天在自制式束缚器中限制活动2 h,其余时间两组小鼠在相同环境中自由饮水摄食,实验持续14 d。通过Masson染色在电子显微镜下观察食管组织纤维化改变。采用免疫组化、实时定量RT-PCR、ELISA法检测NOX-4在小鼠食管中的表达,并通过实时定量RT-PCR法检测食管组织中纤维化因子colla-1、TGF-β1及α-SMA mRNA的表达量。结果与对照组小鼠相比,CRS组小鼠体重增加量低于对照组[(8.75±1.69)g vs (12.69±3.16)g],差异有统计学意义(t=3.11,P<0.05)。Masson染色镜下观察可见:CRS组小鼠食管黏膜上皮细胞间明显的纤维化表现,而对照组未见明显异常;免疫组化结果显示:NOX-4阳性着色细胞在大部分标本中均可见到,CRS组小鼠食管组织中阳性着色较对照组染色深且丰富;ELISA法检测结果表明,CRS组小鼠血清中NOX-4表达量明显高于对照组(1.42±0.05 vs 0.49±0.08),差异有统计学意义(t=-27.32,P<0.01)。实时定量RT-PCR实验结果表明,CRS组纤维化标志物(colla-1,TGF-β1,α-SMA)及NOX-4 mRNA表达水平是对照组的(2.43±0.36、2.78±0.13、2.24±0.18、2.48±0.40)倍,差异有统计学意义(t=-11.19、-38.86、-19.90、-10.37,P<0.01)。结论 colla-1、TGF-β1、α-SMA参与心理应激诱导食管纤维化的形成,而氧化应激在食管纤维化产生中具有重要的作用。 展开更多
关键词 应激 心理学 约束 身体的 胶原Ⅰ型 转化生长因子β1 肌动蛋白类 NADPH氧化酶4 纤维化 食管疾病 小鼠
比较细胞松弛素A与B在胞质分裂阻断法微核试验中的应用 预览
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作者 文海若 任璐 +1 位作者 罗飞亚 汪祺 《中国医药生物技术》 2019年第2期115-120,共6页
目的比较细胞松弛素 A(Cyto A)及细胞松弛素 B(Cyto B)对微核试验常用细胞系——中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)毒性及对体外微核试验结果的影响。方法在荧光显微镜下观察由微丝组成的应力纤维结构,并使用 CHL 开展胞质分裂阻断法微核试验,... 目的比较细胞松弛素 A(Cyto A)及细胞松弛素 B(Cyto B)对微核试验常用细胞系——中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)毒性及对体外微核试验结果的影响。方法在荧光显微镜下观察由微丝组成的应力纤维结构,并使用 CHL 开展胞质分裂阻断法微核试验,比较两者对多核细胞率及含微核双核细胞率的影响。结果不同浓度的 Cyto A 和 Cyto B 与细胞作用 24 h后,与对照组(26%± 7%)比较均可诱导多核细胞形成率的显著升高(Cyto A 及 Cyto B 3.0 μg/ml 浓度组分别为58%± 12%和 72%± 9%,P < 0.001),且 Cyto A 在 3.0 μg/ml浓度条件下诱导的平均多核细胞率与 1.5 μg/ml 浓度组比较有所降低。Cyto A 处理组在 MMC 浓度分别为 0、0.1 和0.3 μg/ml 时的微核率分别为 0.25%± 0.16%、1.98%±0.59%和 3.80%± 0.90%;而 Cyto B 处理组在相同 MMC浓度时的微核率分别为 0.32%± 0.16%、2.50%± 0.61%和5.05%± 1.09%。结论虽然 Cyto B 的多核细胞造模效果略优于 Cyto A,两者均可有效用于胞质分裂阻断法微核研究。研究结果将为相关领域研究者提供可借鉴的实际经验。 展开更多
关键词 细胞松弛素类 微核试验 肌动蛋白类 胞质分裂阻断法
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系统性红斑狼疮患者血清中F-肌动蛋白抗体检测的临床应用
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作者 吴兆立 刘湘 +8 位作者 杨惠琴 宁勇 赵岚 黄伟 程贵莲 熊银 李妹 全紫瑶 崔天盆 《中华风湿病学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第8期543-547,共5页
目的探讨SLE患者血清中F-肌动蛋白抗体检测的临床价值及其与其他临床指标的相关性。方法ELISA法检测2017年3月至2018年1月武汉市第一医院收治的93例SLE患者(病例组),72例RA患者(疾病对照组)和同期83名体检健康者(健康对照组)血清... 目的探讨SLE患者血清中F-肌动蛋白抗体检测的临床价值及其与其他临床指标的相关性。方法ELISA法检测2017年3月至2018年1月武汉市第一医院收治的93例SLE患者(病例组),72例RA患者(疾病对照组)和同期83名体检健康者(健康对照组)血清中F-肌动蛋白抗体水平,并分析3组结果的阳性率;回顾性分析病例组93例患者的SLEDAI、血清免疫球蛋白G(IgG)、ESR、抗dsDNA抗体及ANA临床指标数据,将F-肌动蛋白抗体单位数值与上述各指标逐一进行相关性分析;利用受试者工作特征曲线(ROC)分析F-肌动蛋白抗体单位数值对SLE的诊断价值。采用t检验,χ2检验和Spearman/Pearson相关分析进行统计分析。结果SLE病例组、疾病对照组和健康对照组血清中F-肌动蛋白抗体平均水平分别为(18±13)U、(12±6)U和(11±5)U,SLE病例组与疾病对照组、健康对照组差异均有统计学意义(t=3.163,P=0.0019;t=4.436,P〈0.01);SLE病例组血清中F-肌动蛋白抗体阳性率为33%(31/93),与疾病对照组(10%,7/72)和健康对照组(4%,3/83)相比,差异均有统计学意义坼=12.76,P〈0.01;2z=24.84,P〈0.01);SIN病例组F.肌动蛋白抗体单位数值与患者SLEDAI、IgG、ESR、抗dsDNA抗体及ANA均呈正相关(r=0.2737,P=0.0083;r=0.5587,P〈0.01;r=0.4199,P=0.0001;r=0.3514,P=0.0011;r=0.4609,P〈0.01),其中,F-肌动蛋白抗体单位数值与IgG及ANA相关性最明显;ROC曲线中,曲线下面积(AUC)为0.62[95%CI(0.54,0.70)],差异有统计学意义(P=0.0013)。F-肌动蛋白抗体单位数值的临界值(cut-off值)为14.04U时,约登指数最大(YI=0.30),对SLE的诊断敏感度为0.77,特异度为0.53。结论F-肌动蛋白抗体在SLE患者血清中的平均水平和阳性率较RA患者和健康人群高,对SLE有一定的诊断价值;F-� 展开更多
关键词 肌动蛋白类 红斑狼疮 系统性 生物学标记
葫芦素B对压力负荷诱导的心肌纤维化的作用机制 预览
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作者 段明霞 吴青青 唐其柱 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2018年第2期184-187,共4页
目的 探讨葫芦素B对压力负荷诱导的心肌纤维化的作用机制。方法 选择C57小鼠60只,随机分为假手术组、葫芦素B组、结扎术组(主动脉结扎术)、联合组(葫芦素B+主动脉结扎术),每组15只。术后1周给予葫芦素B灌胃处理[0.2mg/(kg·2d... 目的 探讨葫芦素B对压力负荷诱导的心肌纤维化的作用机制。方法 选择C57小鼠60只,随机分为假手术组、葫芦素B组、结扎术组(主动脉结扎术)、联合组(葫芦素B+主动脉结扎术),每组15只。术后1周给予葫芦素B灌胃处理[0.2mg/(kg·2d),持续到术后4周],主动脉结扎术诱导心肌纤维化模型。用免疫组织化学方法检测心脏微血管密度;免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;运用免疫荧光染色和蛋白免疫印迹法检测CD31、CD34、α-SMA和波形蛋白表达和内皮间质转化程度。结果 假手术组和葫芦素B组术后4周心脏微血管密度、α-SMA,波形蛋白、CD31、CD34表达无明显变化(P〉0.05)。与假手术组比较,结扎术组术后4周心脏微血管密度、CD31、CD34表达明显下调,α-SMA、波形蛋白表达明显增加(P〈0.05)。联合组术后4周心脏微血管密度、CD31、CD34表达明显高于结扎术组(4.31±1.06 vs 2.24±0.78,0.22±0.04 vs 0.05±0.02,0.12±0.02 vs0.04±0.01,P〈0.05),α-SMA、波形蛋白表达明显低于结扎术组(0.31±0.03 vs 0.98±0.04,0.05±0.02 vs 0.53±0.07,P〈0.05)。结论 葫芦素B可以通过抑制内皮向间质转化改善压力负荷诱导的心肌纤维化。 展开更多
关键词 葫芦素类 心内膜心肌纤维化症 肌动蛋白类 转化生长因子β 结扎术
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星孢菌素干预组织工程化颞下颌关节盘自组装基体收缩的机制 预览
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作者 罗银月 李鸿燕 +1 位作者 包广洁 康宏 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第30期4888-4893,共6页
背景:颞下颌关节盘细胞自组装基体在生长过程中出现的体积收缩现象机制不明,有研究认为可能与细胞骨架蛋白肌动蛋白的收缩效应有关。目的:探索星孢菌素对颞下颌关节盘细胞、肌动蛋白和细胞外基质代谢的影响,阐明可能导致自组装基体收缩... 背景:颞下颌关节盘细胞自组装基体在生长过程中出现的体积收缩现象机制不明,有研究认为可能与细胞骨架蛋白肌动蛋白的收缩效应有关。目的:探索星孢菌素对颞下颌关节盘细胞、肌动蛋白和细胞外基质代谢的影响,阐明可能导致自组装基体收缩的机制。方法:由第一作者检索2000至2018年PubMed、Web of Science核心合集数据库相关文献,检索关键词为“staurosporine,temporomandibular joint disc tissue engineering,chondrocyte tissue engineering,self-assembly”;检索2000至2018年CNKI中文数据库相关文献,中文检索词为“星孢菌素,颞下颌关节盘组织工程,软骨细胞组织工程,自组装”。结果与结论:颞下颌关节盘细胞自组装基体收缩的可能原因:体外关节盘细胞的收缩;细胞类型的不同;基体营养通路障碍;肌动蛋白过表达;细胞外基质减少。星孢菌素减少肌动蛋白细胞骨架的表达,抑制细胞收缩,上调细胞外基质中重要基质蛋白胶原、聚集蛋白聚糖及软骨寡聚基质蛋白的量,抑制基体收缩。 展开更多
关键词 星孢菌素 颞下颌关节盘组织工程 软骨细胞组织工程 自组装 生物材料 细胞外基质 颞下颌关节盘 肌动蛋白类 组织工程
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软基底介导细胞骨架蛋白与力学特性的改变 预览
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作者 侯添 安美文 王立 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第22期3461-3466,共6页
背景:前期研究发现在不同硬度基底上生长的细胞,细胞调控受基底硬度的影响,但抑制肌球蛋白的活性会阻碍基底硬度对细胞的调控作用,然而关于基底硬度对于肌球蛋白的影响及在这个过程中对于肌球蛋白的量化描述较少。目的:量化肌球蛋白... 背景:前期研究发现在不同硬度基底上生长的细胞,细胞调控受基底硬度的影响,但抑制肌球蛋白的活性会阻碍基底硬度对细胞的调控作用,然而关于基底硬度对于肌球蛋白的影响及在这个过程中对于肌球蛋白的量化描述较少。目的:量化肌球蛋白Ⅱ分布及运动速率、肌动蛋白纤维分布与基底硬度的关系。方法:采用聚丙烯酰胺凝胶制备硬度分别为1,10,150 kPa的基底,将稳定表达转染荧光肌球蛋白Ⅱ的宫颈癌Hela细胞分别接种于不同硬度的基底上12 h,检测不同硬度基底上生长的宫颈癌细胞荧光肌球蛋白Ⅱ沿细胞长轴的荧光分布,利用荧光漂白恢复技术测定荧光肌球蛋白Ⅱ的运动速率,荧光染色观察肌动蛋白纤维的分布,利用微管吸吮技术测定单个宫颈癌细胞在铺展状态下的细胞膜弹性模量。结果与结论:(1)硬度为150 kPa基底上细胞的边缘荧光肌球蛋白Ⅱ强度显著高于其他部分;在1 kPa和10 kPa基底上生长的细胞,荧光肌球蛋白Ⅱ在边缘的分布呈现出一定回落现象;(2)硬度为150 kPa基底上细胞末端荧光肌球蛋白Ⅱ的恢复速率最大,显著快于1 kPa和10 kPa基底上细胞的恢复速率;(3)3种硬度基底上生长的细胞肌动蛋白纤维整体荧光强度近似;(4)硬度为150 kPa基底上Hela细胞细胞膜的弹性模量显著高于1 kPa和10 kPa基底上的细胞;(5)结果表明,基底硬度会明显改变肌球蛋白、肌动蛋白等重要细胞骨架蛋白区域性作用的效果,影响癌细胞在不同微环境下的细胞状态。 展开更多
关键词 肌球蛋白类 肌动蛋白类:弹性模量 组织工程 细胞骨架 肌球蛋白 肌动蛋白纤维 细胞外基质 聚丙烯酰胺凝胶 基底硬度 弹性模量 人宫颈癌细胞 生物材料
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α-SMA和Ki-67的表达及其与原发性腹膜后平滑肌肉瘤患者预后的关系 被引量:1
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作者 马超 李沛雨 +3 位作者 张楠 孙成博 侯雷 刘娜 《中华肿瘤杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期258-263,共6页
目的探讨α-SMA和Ki-67的表达及其与原发性腹膜后平滑肌肉瘤患者预后的关系。方法回顾性分析2002年5月至2015年12月解放军总医院收治的50例腹膜后平滑肌肉瘤患者的临床病理资料。男14例,女36例:年龄21-79岁,平均年龄48岁。单因素生... 目的探讨α-SMA和Ki-67的表达及其与原发性腹膜后平滑肌肉瘤患者预后的关系。方法回顾性分析2002年5月至2015年12月解放军总医院收治的50例腹膜后平滑肌肉瘤患者的临床病理资料。男14例,女36例:年龄21-79岁,平均年龄48岁。单因素生存分析采用Kaplan.Meier法和Logrank检验,多因素生存分析采用Cox风险比例模型。结果50例患者中,完整切除45例,未完整切除5例。患者的生存时间为2-131个月,中位生存时间为35个月。患者的1、3、5年生存率分别为86.0%、46.0%和28.0%。单因素分析显示,肿瘤最大直径、手术切除程度、病理分级、α-SMA和Ki-67表达为患者预后的影响因素(均P〈0.05)。多因素分析显示,病理分级和手术切除程度为患者预后的独立影响因素(均P〈0.05)。结论腹膜后平滑肌肉瘤患者的预后较差,为达到肿瘤完整切除的目的,可根据术中情况联合周围器官切除。肿瘤过大、非完整切除、病理分级高、高表达Ki-67和α-SMA患者的预后差。 展开更多
关键词 平滑肌肉瘤 腹膜后肿瘤 预后 肌动蛋白类 KI-67 Α-SMA
康复新液对博来霉素诱导大鼠肺纤维化模型的治疗作用 预览
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作者 徐秋颖 刘伟伟 +2 位作者 王宝家 马秀英 高永翔 《福建医科大学学报》 2018年第2期75-79,共5页
目的探讨康复新液对博来霉素(BLM)诱导的肺纤维化(PF)模型大鼠的治疗作用以及可能的机制。方法 Wistar大鼠48只,雌雄各半,随机分为对照组、模型组及模型鼠康复新液治疗组(康复新液组)和地塞米松阳性对照组(DXM组);用BLM 5mg/kg... 目的探讨康复新液对博来霉素(BLM)诱导的肺纤维化(PF)模型大鼠的治疗作用以及可能的机制。方法 Wistar大鼠48只,雌雄各半,随机分为对照组、模型组及模型鼠康复新液治疗组(康复新液组)和地塞米松阳性对照组(DXM组);用BLM 5mg/kg气管内一次性滴注复制模型。鉴定模型成功后,使用康复新液和DXM进行灌胃治疗。康复新液组康复新液治疗剂量为5mL·kg-1·d-1,DXM组的DXM治疗剂量为0.25mL·kg-1·d-1,灌注周期为21d。治疗后取大鼠肺组织,行H-E和马松染色,显微镜下观察;采用PCR方法检测肺组织中层连结蛋白(LN)、纤维连结蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达情况,采用WB方法检测肺组织中LN,FN及α-SMA的表达情况。结果显微镜下可见模型组肺组织纤维化较对照组明显,LN,FN及α-SMA蛋白的mRNA水平及蛋白表达均有上升;使用康复新液和DXM治疗后,镜下可见康复新液组和DXM组的肺组织纤维化较模型组明显改善,LN,FN及α-SMA蛋白的mRNA水平及蛋白表达均有下降。结论康复新液可减轻BLM诱导的大鼠PF,其作用与其下调肺组织LN,FN及α-SMA蛋白表达有关。 展开更多
关键词 肺纤维化 层黏连蛋白 纤连蛋白类 肌动蛋白类 博来霉素
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Wnt5A基因过表达对黑素细胞骨架蛋白的影响
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作者 粟倩雅 林彤 +1 位作者 周启艳 彭霖 《中华皮肤科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第8期584-588,共5页
目的 探讨携带Wnt5A全基因序列的质粒转染原代黑素细胞后,Wnt5A表达升高对黑素细胞骨架蛋白的影响。方法 培养原代人表皮黑素细胞,并分为3组:①空白对照组:除细胞外不加任何试剂;②阴性对照组:加入空白的去内毒素pcDNA3.1(+)... 目的 探讨携带Wnt5A全基因序列的质粒转染原代黑素细胞后,Wnt5A表达升高对黑素细胞骨架蛋白的影响。方法 培养原代人表皮黑素细胞,并分为3组:①空白对照组:除细胞外不加任何试剂;②阴性对照组:加入空白的去内毒素pcDNA3.1(+)质粒、Opti-MEM培养基及Lipo3000;③Wnt5A质粒组:加入Wnt5A去内毒素pcDNA3.1(+)质粒、Opti-MEM培养基及Lipo3000。Wnt5A质粒转染黑素细胞,采用qPCR法检测各组Wnt5A、Ras相关C3肉毒素底物1(Rac1)、丝状肌动蛋白(F肌动蛋白)和β微管蛋白基因表达,Western印迹法测定Wnt5A、酪氨酸激酶受体2(ROR2)、Rac1、F肌动蛋白和β微管蛋白表达,并通过细胞免疫荧光试验观察细胞骨架蛋白表达情况。结果 qPCR法显示,Wnt5A质粒组、阴性对照组和空白对照组Wnt5A mRNA及其下游基因Rac1和F肌动蛋白mRNA表达量3组间差异均有统计学意义(F = 1 374.179、112.576、66.458,均P 〈 0.01),但β微管蛋白mRNA表达差异无统计学意义(P 〉 0.05)。Wnt5A质粒组Wnt5A、Rac1和F肌动蛋白mRNA表达量均显著高于空白对照组及阴性对照组(P 〈 0.05)。Western印迹法显示,Wnt5A质粒组Wnt5A蛋白表达较空白对照及阴性对照明显升高,差异均有统计学意义(P 〈 0.05)。Wnt5A质粒组Rac1、ROR2、F肌动蛋白表达均明显低于空白对照组和阴性对照组(P 〈 0.05),但β微管蛋白表达在3组间差异无统计学意义(P 〉 0.05)。细胞免疫荧光实验显示,Wnt5A质粒组绿色(β微管蛋白)、红色(F肌动蛋白)荧光强度与两个对照组相比均无明显差别,但黑素细胞体积明显增大,树突数目明显增多,细胞骨架显著改变,表现为F肌动蛋白强弱不一,纹理模糊,张力丝断裂,局部呈团块状。结论 黑素细胞Wnt5A基因表达升高可调控细胞骨架相关基因及蛋白表达,使黑素细胞体积增大、树突增多、骨架� 展开更多
关键词 黑素细胞 Wnt信号通路 细胞骨架 肌动蛋白类 微管蛋白 RAC1 GTP结合蛋白质 Wnt5A蛋白质
不同程度间歇低氧对小鼠肺成纤维细胞活化和胞外基质分泌的影响 预览 被引量:1
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作者 李菲 李莲 +4 位作者 任方元 姜芳馨 冯靖 陈宝元 曹洁 《天津医药》 CAS 2017年第1期9-12,共4页
目的探讨不同程度间歇低氧(IH)对MLg小鼠肺成纤维细胞活化和胞外基质分泌的影响。方法取对数生长期的MLg成纤维细胞,IH分别处理1 h、4 h、8 h(IH1组、IH4组、IH8组),IH频率为5%O2100 s,21%O2120 s,并设置常氧对照组(21%O2处理8 h,... 目的探讨不同程度间歇低氧(IH)对MLg小鼠肺成纤维细胞活化和胞外基质分泌的影响。方法取对数生长期的MLg成纤维细胞,IH分别处理1 h、4 h、8 h(IH1组、IH4组、IH8组),IH频率为5%O2100 s,21%O2120 s,并设置常氧对照组(21%O2处理8 h,N组)。实验结束后收集细胞,采用q RT-PCR和Western blot检测各组α肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶质蛋白(COL1)m RNA和蛋白表达水平。结果 IH1组、IH4组、IH8组α-SMA、COL1 m RNA及蛋白的表达水平明显高于N组(P〈0.05),且随着IH时间的延长,α-SMA、COL1表达水平逐渐升高。结论 IH可以促进小鼠肺成纤维细胞活化和胞外基质分泌,其作用机制可能与氧化应激有关。 展开更多
关键词 缺氧 成纤维细胞 细胞外基质 胶原Ⅰ型 肌动蛋白类 睡眠呼吸暂停 阻塞性 肺纤维化
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中药骨康方对体外培养大鼠成骨细胞骨架保护作用的初步实验研究 预览 被引量:1
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作者 张姝江 李颖 +1 位作者 白波 陈艺 《世界中医药》 CAS 2016年第5期880-883,共4页
目的:探讨在离心力作用下中药骨康方对大鼠成骨细胞微丝结构的保护与修复作用。方法:选用成年新西兰白兔,分2组分别灌服中药骨康方及戊酸雌二醇,制备中药骨康方和雌激素的含药血清。原代培养大鼠成骨细胞,制备细胞爬片,分为中药骨康... 目的:探讨在离心力作用下中药骨康方对大鼠成骨细胞微丝结构的保护与修复作用。方法:选用成年新西兰白兔,分2组分别灌服中药骨康方及戊酸雌二醇,制备中药骨康方和雌激素的含药血清。原代培养大鼠成骨细胞,制备细胞爬片,分为中药骨康方血清培养组(中药组),雌激素血清培养组(西药组)、不含药血清组(对照组)以及空白组。中药组、西药组及对照组3组细胞分别在240 g、200 g离心力下离心4 min,空白组不离心,离心后培养24 h以多聚甲醛固定各组细胞,鬼笔环肽荧光染色后,于共聚焦显微镜下观察。每张细胞爬片随机取5个视野,每个视野5-7个细胞,计算平均荧光值,并作统计学计算,P〈0.05为有统计学意义。结果:不同离心力作用下,中药组、西药组细胞与对照组细胞比较荧光强度明显较强,且差异有统计学意义(P〈0.001)。中药组与西药组中,240 g离心力与200 g离心力相比,前者细胞微丝荧光强度显著减弱(P〈0.001);中药组与西药组相比,200 g时,中药组细胞微丝荧光强度强于西药组细胞,有统计学意义(P〈0.001);240 g时,西药组细胞微丝荧光强度强于中药组细胞,且有统计学意义(P〈0.001)。结论:离心力作用下,中药骨康方含药血清对大鼠成骨细胞的微丝结构由保护和修复作用,但随着离心力的加大,该作用有限。 展开更多
关键词 中药 成骨细胞 肌动蛋白 机械应力
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甘草酸二铵干预兔基底动脉瘤形成的实验研究 预览
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作者 桂铮 汪子文 +2 位作者 张鹏飞 赵文可 于耀宇 《天津医药》 CAS 2016年第11期1356-1358,1410共4页
目的:探讨甘草酸二铵(DG)干预兔基底动脉瘤发生的作用机制。方法新西兰白兔40只,按照随机数字表法分为对照组、动脉瘤(IA)组、生理盐水(NS)组、DG组,每组10只。其中对照组不做任何处理,其余各组结扎双侧颈总动脉建立基底动脉... 目的:探讨甘草酸二铵(DG)干预兔基底动脉瘤发生的作用机制。方法新西兰白兔40只,按照随机数字表法分为对照组、动脉瘤(IA)组、生理盐水(NS)组、DG组,每组10只。其中对照组不做任何处理,其余各组结扎双侧颈总动脉建立基底动脉瘤形成模型。在造模后的第1-7天,IA组不做处理,DG组给予DG[20 mg/(kg·d)]静脉注射,NS组注入等剂量生理盐水。使用免疫组化染色方法检测基底动脉尖核转录因子核因子kappa B(NF-κB)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达情况,使用免疫荧光染色方法检测基底动脉尖α-平滑肌细胞肌动蛋白(α-SMA)表达情况。结果 IA组和NS组NF-κB和MMP-9表达均高于对照组,α-SMA表达量低于对照组(P<0.05);IA组和NS组差异无统计学意义(P>0.05)。DG组NF-κB和MMP-9表达低于IA组和NS组(P<0.05),而α-SMA表达量高于IA组和NS组(P<0.05)。结论 DG可抑制NF-κB和MMP-9的表达,减轻血管壁内炎症反应,抑制颅内动脉瘤的形成。 展开更多
关键词 颅内动脉瘤 炎症 NF-κB 基质金属蛋白酶9 肌动蛋白类 血管壁破坏性重构
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α-异硫氰酸萘酯致胆汁淤积性肝炎的发生机制初探 预览 被引量:3
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作者 李华 黎一鸣 卢乐 《临床肝胆病杂志》 CAS 2016年第5期933-937,共5页
目的探讨α-异硫氰酸萘酯(ANIT)致胆汁淤积性肝炎的机制。方法 60只成年健康雄性SD大鼠,随机分为正常对照组(N组,30只)和模型组(ANIT组,30只),按灌胃后不同时相再分为24、48、72 h 3个亚组,每个亚组各10只。检测血清中ALT、AST、... 目的探讨α-异硫氰酸萘酯(ANIT)致胆汁淤积性肝炎的机制。方法 60只成年健康雄性SD大鼠,随机分为正常对照组(N组,30只)和模型组(ANIT组,30只),按灌胃后不同时相再分为24、48、72 h 3个亚组,每个亚组各10只。检测血清中ALT、AST、GGT和TBil的水平;检测肝组织中丙二醛(MDA)的水平;光镜观察肝组织病理学改变;透射电镜观察胆小管超微结构的改变;共聚焦激光扫描显微镜分析异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽的平均荧光强度,间接确定纤维形肌动蛋白(F-actin)水平的变化。计量资料组间比较采用t检验。结果大鼠在灌服ANIT后,血清ALT、AST、GGT和TBil的水平和肝组织中MDA的水平较对照组显著增加;肝小叶结构破坏,肝细胞有透明变性,可见点状、片状、灶状坏死区及中性粒细胞浸润,多局限于胆管周围的肝细胞,胆管上皮和纤维组织增生,窦周间隙增宽,胆小管扩张,微绒毛大量脱落,管腔内有微胆栓形成;F-actin的荧光染色明显紊乱、强度减弱。上述变化48 h最明显,72 h开始恢复,但与N组相比,差异均有统计学意义(P值均〈0.05)。结论 ANIT可引起肝组织发生脂质过氧化损伤,导致肝细胞变性坏死,胆小管微绒毛破坏,微胆栓形成以及胆小管F-actin的表达下降,从而影响肝脏对胆汁的排泄功能,引起胆汁淤积性肝炎。 展开更多
关键词 胆汁淤积 肝炎 异硫氰酸1-萘酯 肌动蛋白类
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梅毒螺旋体膜蛋白Tpp47通过RhoA/ROCK信号通路调控血管内皮细胞通透性
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作者 张瑞丽 王千秋 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期21-25,共5页
目的 探讨梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp47对血管内皮细胞通透性影响的调控机制。 方法 用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)构建细胞单层模型,重组蛋白Tpp47(rTpp47)直接与HUVEC单层模型混合培养,或RhoA/ROCK信号通路特异性抑制剂Y-27632预处... 目的 探讨梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp47对血管内皮细胞通透性影响的调控机制。 方法 用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)构建细胞单层模型,重组蛋白Tpp47(rTpp47)直接与HUVEC单层模型混合培养,或RhoA/ROCK信号通路特异性抑制剂Y-27632预处理后再用rTpp47刺激HUVEC单层模型,以煮沸灭活的rTpp47处理HUVEC单层模型为阴性对照组,采用ELISA检测各组培养1、4 h时辣根过氧化物酶(HRP)流量,培养12 h用荧光染料罗丹明-鬼笔环肽染色细胞骨架系统,共聚焦显微镜下观察细胞骨架蛋白F肌动蛋白排列变化。用Western 印迹检测rTpp47与煮沸灭活的rTpp47分别处理HUVEC单层模型后细胞RhoA的表达水平。 结果 rTpp47刺激HUVEC单层模型1 h时HRP流量(0.81 ± 0.10)高于阴性对照组(0.39 ± 0.09),差异有统计学意义(P 〈 0.05),而此时Y-27632预处理组HRP流量(0.51 ± 0.10)与单用rTpp47刺激组及阴性对照组相比,差异无统计学意义(均P 〉 0.05)。培养4 h时,单用rTpp47刺激组HRP流量显著增加(2.31 ± 0.14),且高于Y-27632预处理组(1.21 ± 0.12)及阴性对照组(0.73 ± 0.12),差异有统计学意义(均P 〈 0.05),而Y-27632预处理组与阴性对照组之间差异无统计学意义。rTpp47刺激HUVEC后,与煮沸灭活的rTpp47作用HUVEC相比,细胞中RhoA表达增加。同时,rTpp47刺激细胞中骨架蛋白F肌动蛋白重排,在胞质中形成应力纤维,抑制剂Y-27632可部分抑制F肌动蛋白重排。 结论 梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp47可通过RhoA/ROCK信号转导通路调控血管内皮细胞通透性。 展开更多
关键词 苍白密螺旋体 内皮 血管 通透性 脐静脉 肌动蛋白 Tpp47 RhoA/ROCK信号通路
缺氧人肠上皮细胞Slingshot蛋白表达变化及其与屏障功能的关系 被引量:1
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作者 张健 王裴 +1 位作者 何雯 王凤君 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期249-253,共5页
目的研究缺氧对人肠上皮细胞Slingshot蛋白表达的影响及其与屏障功能变化的关系。方法建立人肠上皮细胞株Caco-2单层细胞培养模型。取细胞按照随机数字表法分为6部分,分别行缺氧处理0h(即刻)及1、2、6、12、24h,采用生物电阻测定仪... 目的研究缺氧对人肠上皮细胞Slingshot蛋白表达的影响及其与屏障功能变化的关系。方法建立人肠上皮细胞株Caco-2单层细胞培养模型。取细胞按照随机数字表法分为6部分,分别行缺氧处理0h(即刻)及1、2、6、12、24h,采用生物电阻测定仪测定细胞的跨上皮电阻(TER)。另取细胞同前行缺氧处理,采用蛋白质印迹法检测带状闭合蛋白1(ZO-1)、咬合蛋白、闭合蛋白1及Slingshot-1、Slingshot-2、Slingshot-3的蛋白表达。另取细胞同前行缺氧处理,采用荧光法检测纤维状肌动蛋白及球状肌动蛋白含量。3项检测中,各时相点样本数分别为10、10、18。对数据行单因素方差分析、Dunnett检验。结果(1)与缺氧0h比较,缺氧1—24h细胞的TER值均明显降低(P值均小于0.01)。(2)与缺氧0h(均为1.00)比较,缺氧1~24h细胞的ZO-1、咬合蛋白及闭合蛋白1表达量普遍降低,于缺氧12h或24h达到最低值(分别为0.69±0.20、0.47±0.15、0.474-0.22,P〈0.05或P〈0.01)。与缺氧0h比较,缺氧1~24h细胞的Slingshot-1、Slingshot-3蛋白表达量无明显变化(P值均大于0.05);缺氧1~24h,细胞的Slingshot-2蛋白表达量呈先降低后上升的趋势,其中缺氧24h(1.544-0.57)明显高于缺氧0h(1.00,P〈0.05)。(3)与缺氧0h比较,缺氧1、6、12、24h细胞的纤维状肌动蛋白含量明显减少,缺氧6~24h细胞的球状肌动蛋白含量明显增加,P〈0.05或P〈0.01;其余时相点2项指标无明显变化(P值均大于0.05)。结论缺氧通过诱导人肠上皮细胞Slingshot-2表达,引起丝切蛋白去磷酸化而活化以及纤维状肌动蛋白解聚,从而影响细胞间紧密连接,导致细胞屏障功能受损。 展开更多
关键词 缺氧 肌动蛋白类 肠上皮细胞 Slingshot 带状闭合蛋白1 咬合蛋白 闭合蛋白1
间歇低氧对大鼠肺组织RhoA/ROCK通路及肺血管新生肌化的影响 预览
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作者 杨晓琨 高梦丽 +3 位作者 刘亚萌 李彩丽 曹洁 冯靖 《天津医药》 CAS 2015年第2期113-116,共4页
目的探讨间歇低氧(IH)对大鼠肺组织RhoA/ROCK通路及肺血管新生肌化的影响。方法将40只Wistar雄性大鼠随机分为对照组和IH组各20只,对照组:间歇正常氧暴露(21%O2);IH组:IH暴露(5%-21%O2),持续4周。暴露结束后,2组均采用Real-time... 目的探讨间歇低氧(IH)对大鼠肺组织RhoA/ROCK通路及肺血管新生肌化的影响。方法将40只Wistar雄性大鼠随机分为对照组和IH组各20只,对照组:间歇正常氧暴露(21%O2);IH组:IH暴露(5%-21%O2),持续4周。暴露结束后,2组均采用Real-time PCR和Western blot检测肺组织RhoA、ROCK mRNA和蛋白表达情况,免疫组化法测定肺组织和肺动脉的增殖细胞核抗原(PCNA)及α-平滑肌肌动蛋白(SM-α-actin)的表达情况。结果IH组肺组织RhoA mRNA(0.463±0.067 vs 0.182±0.040)、ROCK mRNA(0.384±0.062 vs 0.192±0.052)、RhoA蛋白(0.827±0.065 vs 0.424±0.075)及ROCK蛋白(0.488±0.088 vs 0.336±0.102)表达水平均高于对照组(均P〈0.05);IH组肺组织PCNA[(54.67±1.80)%vs(9.14±0.91)%]、肺动脉PCNA[(49.40±1.21)%vs(8.38±1.13)%]、肺组织SM-α-actin[(42.66±1.63)%vs(35.44±1.41)%]与肺动脉SM-α-actin[(62.62±2.53)%vs(45.54±2.58)%]表达水平均明显高于对照组(均P〈0.05)。结论 RhoA/ROCK传导通路在IH所致肺动脉高压发病机制中可能起着重要作用;IH可通过促进肺动脉的新生肌化进一步促进肺动脉压力升高。 展开更多
关键词 缺氧 高血压 肺性 增殖细胞核抗原 肌动蛋白类 间歇低氧 肺动脉高压 RhoA/ROCK
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Gremlin对人晶状体上皮细胞转分化和细胞外基质合成的影响 被引量:3
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作者 裴澄 马波 +2 位作者 康前雁 秦莉 崔丽珺 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期597-603,共7页
目的 探讨细胞因子Gremlin对体外培养的人晶状体上皮细胞(HLEC)转分化和细胞外基质合成的影响.方法 实验研究.采用不同浓度Gremlin(0、100、200、400 μg/L)对体外培养的HLEC诱导24 h,倒置显微镜下观察细胞形态的变化;用200 μg/L G... 目的 探讨细胞因子Gremlin对体外培养的人晶状体上皮细胞(HLEC)转分化和细胞外基质合成的影响.方法 实验研究.采用不同浓度Gremlin(0、100、200、400 μg/L)对体外培养的HLEC诱导24 h,倒置显微镜下观察细胞形态的变化;用200 μg/L Gremlin诱导HLEC不同时间(0、12、24、48、72 h),实时PCR和Western-blot方法检测转分化标志性蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞外基质主要成分纤维连接蛋白(Fn)和Ⅰ型胶原纤维(COL-1)的表达.特异性地抑制Gremlin的表达(Gremlin.siRNA)对1.0 μg/L转化生长因子-β2 (TGF-β2)诱导HLEC不同时间(0、12、24、48、72 h)α-SMA 、Fn和COL-1蛋白和基因表达的影响.α-SMA 、Fn和COL-1蛋白和基因的表达与对照组的总体比较采用单因素及双因素方差分析,组间两两比较采用Turkey HSD检验及LSD-t检验.结果 正常HLEC为多角形贴壁细胞,用不同浓度Gremlin诱导24 h后,细胞变为长梭形,细胞间隙变大,呈纤维细胞样改变.细胞纤维样改变程度与Gremlin浓度相关.Gremlin可以诱导HLEC表达α-SMA、Fn和COL-1,并且随着时间的延长(0、12、24、48、72 h),α-SMA、Fn、COL-1 mRNA (α-SMA mRNA的表达:1.00±0.00,1.62±0.57,3.40±0.83,5.90±0.49,7.97±0.91;F=61.64,P<0.05,q=6.43,13.13,18.66,P<0.05;Fn mRNA的表达:1.00±0.00,3.26±0.23,5.86±0.90,10.17±2.16,12.89± 1.63;F=42.03,P<0.05,q=6.45,12.18,15.79,P<0.05;COL-1 mRNA的表达:1.00±0.00,1.78±0.88,6.80±0.44,12.7±2.46,21.2±3.66;F=51.79,P<0.05,q=4.97,10.08,17.26,P<0.05)和蛋白(α-SMA蛋白的表达:0.13±0.02,0.26±0.02,0.29±0.09,0.47±0.06,0.68±0.05;F=45.14,q=5.11,10.67,17.40,P<0.05;Fn蛋白的表达:0.16±0.04,0.26±0.07,0.65±0.03,0.82±0.04,0.73±0.02;F=144.4,q=20.09,26.78,23.12,P<0.05;COL-1蛋白的表达:0.11±0.02,0.23±0.09,0.41±0.05,0.61±0.03,0.74±0.03;F=75.47,q=9.99,16.60,21.07,P<0.05)表达均增强,差异有统计学意义.特异性的阻断Gremlin的表达后,1 展开更多
关键词 胞间信号肽类和蛋白质类 晶体 上皮细胞 细胞外基质 肌动蛋白类 纤连 蛋白类 胶原I型
RNA干扰人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达对内皮细胞骨架损伤的影响 预览
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作者 刘洪光 屈宝泽 +1 位作者 陶贵周 黄建华 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 2015年第1期79-82,共4页
目的 构建针对人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体,并转染人脐静脉内皮细胞后,采取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导观察对内皮细胞骨架损伤的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞分为对照组、ox-LDL... 目的 构建针对人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体,并转染人脐静脉内皮细胞后,采取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导观察对内皮细胞骨架损伤的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞分为对照组、ox-LDL组(ox-LDL处理)、阴性转染组(ox-LDL处理+阴性慢病毒转染)和慢病毒转染组(ox-LDL处理+最佳干扰序列慢病毒转染).荧光显微镜观察转染效率,Western blot检测磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)、Rho激酶(ROCK)、LOX-1蛋白的表达;免疫荧光法观察细胞骨架肌动蛋白(F-actin)的变化.结果 与对照组比较,ox LDL组和阴性转染组p MLC、ROCK、LOX-1蛋白表达增高;细胞F-actin发生损伤并伴含量减少(P<0.05).与阴性转染组比较,慢病毒转染组抑制p-MLC、ROCK、LOX-1蛋白表达,减轻F-actin损伤及伴含量增加(P<0.05).结论 干扰LOX-1表达对ox-LDL诱导引起的内皮细胞ROCK、p-MLC表达增加及细胞骨架损伤均有抑制作用. 展开更多
关键词 RNA干扰 脂蛋白类 LDL 内皮细胞 细胞骨架 肌动蛋白类 RHO相关激酶类
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