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一起猪非典型瘟病毒感染的诊断 预览
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作者 周可磊 陈新诺 +1 位作者 岳华 张斌 《动物医学进展》 北大核心 2019年第6期135-139,共5页
2017年8月四川省某规模化猪场出现临产母猪产弱子、发抖、死胎,且死胎率达30%,哺乳仔猪成活率明显降低,其中以全身性或局部性阵发痉挛为典型症状。用RT-PCR扩增及序列分析确诊该猪场感染了一种新型的猪非典型瘟病毒(APPV)。这是四川省... 2017年8月四川省某规模化猪场出现临产母猪产弱子、发抖、死胎,且死胎率达30%,哺乳仔猪成活率明显降低,其中以全身性或局部性阵发痉挛为典型症状。用RT-PCR扩增及序列分析确诊该猪场感染了一种新型的猪非典型瘟病毒(APPV)。这是四川省首次检测到并报道APPV,可为该病的研究和防控提供了一定的参考。 展开更多
关键词 阵发痉挛 猪非典型瘟病毒 诊断
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基于猪非典型瘟病毒E2蛋白的间接ELISA检测方法的建立
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作者 黎振标 许古明 +5 位作者 刘健新 任旭皎 鲁荣 李慧子 张彭涛 宁章勇 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期1-6,共6页
猪非典型瘟病(APPV)是新近发现能引起仔猪先天震颤的病原体,血清学检测方法亟待构建。本研究制备了APPV原核表达的E2重组蛋白,以其作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法。结果表明,最佳抗原包被浓度为10μg/mL,最佳血清稀释度为1:40,... 猪非典型瘟病(APPV)是新近发现能引起仔猪先天震颤的病原体,血清学检测方法亟待构建。本研究制备了APPV原核表达的E2重组蛋白,以其作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法。结果表明,最佳抗原包被浓度为10μg/mL,最佳血清稀释度为1:40,阴阳性临界值D450=0.243,灵敏度达到1:64;与猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征、猪流感及圆环病毒病的阳性血清均不发生交叉反应,特异性好;批内变异系数最大值为3.797%,批间变异系数最大值为5.425%,重复性好。利用建立的间接ELISA方法对50份猪临床血清样本进行检测,阳性率为12%。本研究基于E2蛋白建立的间接ELISA方法为猪非典型瘟病毒感染的检测提供了可靠的工具,也为开展APPV相关的研究工作提供了基础材料。 展开更多
关键词 猪非典型瘟病毒 E2蛋白 原核表达 间接ELISA
非典型猪瘟病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 曹亮 田明尧 +7 位作者 孙文超 郭丹丹 汪伟 鲁会军 刘云霞 郑敏 钱爱东 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期622-626,共5页
参照GenBank上登录的非典型猪瘟病毒(atypical porcine pestivirus virus,APPV)全基因组序列设计特异性引物成功从感染APPV阳性样品中扩增出270 bp的APPV基因片段,并将其克隆到pEASY-Bluent Zero Cloning Kit载体,以纯化的重组质粒为模... 参照GenBank上登录的非典型猪瘟病毒(atypical porcine pestivirus virus,APPV)全基因组序列设计特异性引物成功从感染APPV阳性样品中扩增出270 bp的APPV基因片段,并将其克隆到pEASY-Bluent Zero Cloning Kit载体,以纯化的重组质粒为模板优化反应条件,建立了检测APPV的特异性荧光定量PCR方法。结果显示,建立的荧光定量PCR方法C_t值与标准品在1.49×10~1~1.49×10~(10) copies/μL呈现良好的线性关系,相关系数为R~20.999,斜率为-3.442,扩增效率为95.207%。该方法与PCV2、PRV、PRRSV、PPV及CSFV基因组均无交叉反应,敏感性比常规PCR高出1 000倍,组内和组间重复试验变异系数均小于2%。对临床采集的20份疑似感染APPV的样品进行检测,结果显示应用所建立的荧光定量PCR成功检测到3份APPV阳性样品,而常规PCR仅检测到1份,表明所建立的荧光定量PCR比常规PCR灵敏度更高。本试验所建立的APPV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,可实现对APPV早期诊断及感染进行定量分析检测。 展开更多
关键词 非典型猪瘟 仔猪先天震颤 荧光定量PCR
猪非典型瘟病毒GX01-2018株全基因组分子特征的分析
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作者 尹彦文 施开创 +3 位作者 孙文超 莫胜兰 陆文俊 屈素洁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期484-492,共9页
猪非典型瘟病毒(APPV)被证实是新生仔猪先天性震颤的致病因子。为了解广西APPV流行毒株的分子遗传特征,采用RT-PCR分段扩增APPV阳性病料,经克隆、测序、拼接,获得1株APPV的全基因序列,遂被命名为GX01-2018株。结果显示,GX01-2018株基因... 猪非典型瘟病毒(APPV)被证实是新生仔猪先天性震颤的致病因子。为了解广西APPV流行毒株的分子遗传特征,采用RT-PCR分段扩增APPV阳性病料,经克隆、测序、拼接,获得1株APPV的全基因序列,遂被命名为GX01-2018株。结果显示,GX01-2018株基因组全长11 565 bp,包括一个编码3 635个氨基酸的阅读框(ORF)。同源性分析显示,GX01-2018株与国内代表毒株广西GX-CH_2016株、江西JX-JM01-2018A01株、广东China/GD-SD/2016株、广东GD株核苷酸序列的同源性分别为98.2%、92.9%、83.4%、90.8%。GX01-2018株与国外代表毒株美国000515株、德国Bavaria_S5/9株、奥地利AUT-2016_C株、荷兰NL1株核苷酸序列的同源性分别为87.8%、90.7%、90.5%、90.7%。上述国内外代表毒株间Npro、Erns、E2基因核苷酸序列的同源性分别为79.1%~97.2%、83.0%~98.4%、83.1%~96.8%。基于APPV全基因组以及E2、Npro、Erns基因核苷酸序列绘制遗传进化树,获得相似的进化树图。来自广西的GX01-2018株与欧洲型毒株位于一个分支,而同样来自广西的GX04/2017株与美洲型毒株位于另一个分支。表明APPV流行毒株具有遗传多样性,来自同一地区的流行毒株出现较大的遗传变异。 展开更多
关键词 猪非典型瘟病毒 基因组序列 遗传变异 遗传多样性 分子特征
仔猪先天性震颤瘟病毒RT-PCR检测方法的建立 预览
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作者 吴松松 周荷田 +3 位作者 张文波 邓舜洲 张志庆 杨丹凤 《动物医学进展》 北大核心 2019年第4期28-31,共4页
旨在建立检测仔猪先天性震颤瘟病毒(APPV)的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法。根据GenBank上登录的APPV基因组序列,设计1对引物,以临床上表现典型震颤仔猪的淋巴结为材料,提取RNA,建立了RT-PCR方法,并进行敏感性、重复性和特异性试验,... 旨在建立检测仔猪先天性震颤瘟病毒(APPV)的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法。根据GenBank上登录的APPV基因组序列,设计1对引物,以临床上表现典型震颤仔猪的淋巴结为材料,提取RNA,建立了RT-PCR方法,并进行敏感性、重复性和特异性试验,对其扩增产物测序比对分析;利用该方法,对临床病料进行检测。结果显示,从典型震颤仔猪的淋巴结中均扩增到与预期大小有一致的片段,经测序比对,扩增片段序列与APPV相应片段的核苷酸同源性在89%以上;该方法只能扩增出APPV片段,而其他几种常见猪病毒均为阴性,3次重复检测结果基本一致,可检测最低cDNA浓度为184.11ng/μL;对临床病料检测,典型病例的检出率达100%。试验结果表明,建立的RT-PCR方法具有良好的特异性、重复性、敏感性等优点,可用于临床APPV引起的仔猪先天性震颤早期检测、病毒鉴定和分子流行病学调查。 展开更多
关键词 仔猪先天性震颤 瘟病毒 逆转录-聚合酶链反应
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猪非典型性瘟病毒与猪流行性腹泻病毒双重PCR方法的建立与应用 预览 被引量:1
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作者 杨晓宇 徐雷 +3 位作者 殷鑫欢 张继宗 徐志文 朱玲 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期1081-1086,共6页
为了快速准确地检测出猪非典型性瘟病毒(APPV)与猪流行性腹泻病毒(PEDV),根据GenBank中发布的PEDVS2基因和APPVNS3基因的序列,分别选取PEDVS2基因和APPVNS3基因的保守序列,设计、合成了1对特异性引物。通过对体系进行优化,分别扩增出19... 为了快速准确地检测出猪非典型性瘟病毒(APPV)与猪流行性腹泻病毒(PEDV),根据GenBank中发布的PEDVS2基因和APPVNS3基因的序列,分别选取PEDVS2基因和APPVNS3基因的保守序列,设计、合成了1对特异性引物。通过对体系进行优化,分别扩增出190bp和500bp的特异性片段。建立的双重RT-PCR方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪轮状病毒(RV)的检测均为阴性。对PEDV和APPV的最低检出量分别为1μl2.65×105和1μl3.56×104,对四川遂宁、眉山等地采集到的腹泻、肌肉震颤的病料进行检测,PEDV、APPV阳性病料检出率分别为41.18%和11.76%,经分别与特异性检测APPV和PEDV的单一RT-PCR法检测结果进行比较分析,符合率均为100%。与单一RT-PCR检测方法具有相同特异性和重复性,可用于临床检测。 展开更多
关键词 猪非典型性瘟病毒 猪流行性腹泻病毒 双重RT-PCR
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猪非典型瘟病毒的基因组特征分析及荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:7
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作者 许古明 葛士坤 +5 位作者 张凯照 刘健新 任旭皎 崔灝 罗畅 宁章勇 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2017年第11期1357-1362,共6页
最近的研究表明,猪非典型瘟病毒(APPV)在我国猪群流行,并造成了严重的危害。本研究应用RT-PCR方法对APPV GD3株进行了全基因组扩增、测序,并进行了全基因组及其部分编码基因的遗传演化分析;根据APPV基因组编码的结构蛋白E2的基因序列... 最近的研究表明,猪非典型瘟病毒(APPV)在我国猪群流行,并造成了严重的危害。本研究应用RT-PCR方法对APPV GD3株进行了全基因组扩增、测序,并进行了全基因组及其部分编码基因的遗传演化分析;根据APPV基因组编码的结构蛋白E2的基因序列,构建了APPV的荧光定量RT-PCR检测方法。APPV GD3株的全基因组序列与德国、美国、荷兰和西班牙毒株在不同的进化分支上,同源性为83.1%-83.4%;与中国毒株GD1、GD2和GD的同源性分别为99.5%、99.6%和83.4%。GD3株编码的E2、Npro和Erns基因与国内外现有毒株的同源性分别为83.1%-99.7%、80.2%-99.8%和81.9%-99.5%。本研究建立的荧光定量RTPCR检测方法特异性强、最低检测浓度为10 copes/L、操作简单、耗时短,具有良好的兽医临床应用前景。 展开更多
关键词 猪非典型瘟病毒 序列分析 荧光定量RT-PCR
猪非典型性瘟病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用 预览
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作者 郭佳琪 杨晓宇 +3 位作者 冯宇 杨钒 徐志文 朱玲 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期357-362,共6页
为建立一种快速、准确检测猪非典型性瘟病毒(APPV)的方法,根据GenBank发布的APPVNS2基因序列,设计合成1对扩增后目的基因片段大小为500bp的特异性引物。建立的RT-PCR方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪瘟病毒(CS... 为建立一种快速、准确检测猪非典型性瘟病毒(APPV)的方法,根据GenBank发布的APPVNS2基因序列,设计合成1对扩增后目的基因片段大小为500bp的特异性引物。建立的RT-PCR方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪瘟病毒(CSFV)的检测结果均为阴性,该方法对APPV的最低检出量为1μl4.95×104拷贝,重复性试验中组间、组内试验结果均与预期相符。应用该方法对68份疑似患病的仔猪样品进行检测,阳性病料检出率为7.35%。利用Mega7.0绘制APPV系统进化树,对APPV进行遗传进化分析,结果显示本试验检出的APPV(SC株)与中国报道的APPV的亲缘关系较近。建立的APPVRT-PCR检测方法可用于APPV的临床诊断及流行病学检测。 展开更多
关键词 猪非典型性瘟病毒 RT-PCR 检测
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非典型性猪的瘟病毒研究进展
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作者 李雨濛 杨晓宇 朱玲 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期542-548,共7页
非典型性猪的瘟病毒(Atypical porcine pestivirus,APPV)是导致仔猪发生先天性震颤(Congenital tremor,CT)A-Ⅱ型的主要病原,主要感染猪,仔猪感染后主要出现全身肌肉震颤。目前,该病主要流行于美国、巴西和德国等国家,我国广东某猪场于2... 非典型性猪的瘟病毒(Atypical porcine pestivirus,APPV)是导致仔猪发生先天性震颤(Congenital tremor,CT)A-Ⅱ型的主要病原,主要感染猪,仔猪感染后主要出现全身肌肉震颤。目前,该病主要流行于美国、巴西和德国等国家,我国广东某猪场于2016年在猪只中首次检测出APPV。为提高人们对APPV的认识和重视,及早做好相关防控和检测技术储备,本文从APPV的病原学、流行病学、临床症状与病理变化、检疫与诊断等方面对取得的最新研究进展进行了概述。 展开更多
关键词 非典型性猪的瘟病毒(APPV) 病原学 流行 诊断
一种新型仔猪先天性震颤及其病原的初步研究 预览 被引量:7
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作者 张文波 吴松松 +4 位作者 邓舜洲 周荷田 张志庆 杨丹凤 曹亮亮 《中国畜牧兽医》 北大核心 2017年第7期2147-2154,共8页
为了解国内猪群是否存在新型仔猪先天性震颤及其病原,本试验对临床疑似仔猪先天性震颤病例进行剖检,观察组织脏器的病理变化;根据GenBank上登录的瘟病毒基因组序列设计2对引物,以典型震颤仔猪的病料RNA为模板,进行RT-PCR,并对阳性产物... 为了解国内猪群是否存在新型仔猪先天性震颤及其病原,本试验对临床疑似仔猪先天性震颤病例进行剖检,观察组织脏器的病理变化;根据GenBank上登录的瘟病毒基因组序列设计2对引物,以典型震颤仔猪的病料RNA为模板,进行RT-PCR,并对阳性产物进行测序;用DNAStar和Mega 7.0软件对所测序列进行分析,绘制系统进化树。结果表明,疑似仔猪先天性震颤病猪的组织脏器病理变化与猪瘟的病理变化相似,但无明显的脾脏梗死和淋巴结周边出血;从采集的病料中均扩增到与预期大小基本一致的条带;所测序列经BLAST比对,均为仔猪先天性震颤瘟病毒(APPV)的相应基因序列片段;系统进化树结果显示,哺乳动物瘟病毒可分为两大进化分支,APPV为单独一分支,其他瘟病毒为另一分支,两分支的同源性低于70%;所测的NS2-3和NS5B基因序列与GenBank上登录的APPV相应序列同源性在76.9%-98.8%之间,表明本研究所测定的序列是APPV的基因组序列;测定的7条NS2-3基因序列之间的同源性在89.7%-94.8%之间,12条NS5B基因序列的同源性在82.2%-100.0%之间。本试验首次证实国内猪群中存在新型仔猪先天性震颤病及其病原(APPV)。 展开更多
关键词 仔猪先天性震颤 瘟病毒 仔猪先天性震颤瘟病毒(APPV) 序列分析
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