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miR-148a促进人诱导性多能干细胞向心肌样细胞的分化 认领
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作者 毛庆 庞毅恒 +1 位作者 卢永祥 梁秀琳 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第19期2978-2984,共7页
背景:研究发现,miR-148a可以促进人骨髓间充质干细胞定向分化为成熟心肌样细胞,但关于miR-148a对人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化的影响则未见报道。目的:探讨miR-148a对人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化的影响。方法:将人诱导... 背景:研究发现,miR-148a可以促进人骨髓间充质干细胞定向分化为成熟心肌样细胞,但关于miR-148a对人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化的影响则未见报道。目的:探讨miR-148a对人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化的影响。方法:将人诱导性多能干细胞分为3组向心肌样细胞诱导分化,对照组细胞不做处理,低表达组细胞用miR-148a抑制物处理28 d,高表达组细胞用miR-148a模拟物处理28 d;另取常规培养28 d的人诱导性多能干细胞为空白对照组。CCK-8检测细胞增殖活力,qRT-PCR检测miR-148a mRNA的表达,免疫荧光染色和Western blot检测MHC和cTnT蛋白的表达。结果与结论:①低表达组细胞内miR-148a mRNA表达、细胞增殖活力低于空白对照组和对照组,高表达组高于其他3组(P<0.01);②空白对照组无MHC和cTnT的阳性表达,对照组、低表达组和高表达组均有MHC和cTnT的阳性表达;③低表达组细胞MHC和cTnT蛋白表达低于对照组,高表达组高于其他3组(P<0.01);④以上结果提示,miR-148a可促进人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化。 展开更多
关键词 干细胞 人诱导性多能干细胞 心肌样细胞 定向分化 miR-148a 微小RNA 人肌球蛋白重链 心脏肌钙蛋白T
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不同部位心肌组织裂解液诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞 认领
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作者 韦雅淑 刘红静 +3 位作者 王慧丰 王珺铎 赵文婧 陈维平 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2021年第1期32-37,共6页
背景:骨髓间充质干细胞可定向诱导分化形成心肌组织样结构,但利用不同部位的心肌组织制备心肌组织裂解液构建有差异的微环境,探讨骨髓间充质干细胞定向诱导效率以及相关基因表达的研究甚少。目的:探究不同部位心肌组织裂解液对骨髓间充... 背景:骨髓间充质干细胞可定向诱导分化形成心肌组织样结构,但利用不同部位的心肌组织制备心肌组织裂解液构建有差异的微环境,探讨骨髓间充质干细胞定向诱导效率以及相关基因表达的研究甚少。目的:探究不同部位心肌组织裂解液对骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞的影响,评价诱导过程中相关基因的表达与心肌组织工程构建的关联。方法:选择第3代SD大鼠乳鼠骨髓间充质干细胞,采用全心组织裂解液、心房肌组织裂解液、心室肌组织裂解液构建不同的微环境诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞。倒置显微镜、透射电镜观察细胞的形态变化及其超微结构;免疫荧光染色检测α-actin、cTnI的表达;qRT-PCR检测诱导后ANP、HCN4及MLC-2v基因的表达。结果与结论:①各诱导组的细胞均遵循相似的形态学变化规律,心肌样细胞都能够发生自律性搏动、节律性的收缩和舒张,透射电镜可见大量整齐排列的肌丝,免疫荧光染色α-actin、cTnI均有阳性表达;②全心组织裂解液诱导组能够形成米粒大小、含胶原纤维的心肌组织样结构;③心房肌组织裂解液诱导骨髓间充质干细胞定向分化形成的心房肌样细胞,自律性搏动出现较早、但搏动频率和时间较短,培养液中出现大量分泌颗粒,ANP和HCN4在心房肌样细胞中高表达;④心室肌组织裂解液诱导形成的心室肌样细胞无分泌颗粒,MLC-2v在心室肌样细胞高表达;⑤结果表明,全心组织裂解液可诱导骨髓间充质干细胞形成心肌组织样结构,心房肌组织裂解液可诱导骨髓间充质干细胞向心房肌样细胞分化,心室肌组织裂解液可诱导骨髓间充质干细胞向心室肌样细胞分化。通过构建特定的微环境,骨髓间充质干细胞可以定向分化形成不同部位的心肌样细胞,为心肌组织工程的构建积累实验室数据。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 全心组织裂解液 心房肌组织裂解液 心室肌组织裂解液 心房肌 心室肌 心肌样细胞
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Elabela促进脐带华通胶间充质干细胞向心肌样细胞分化 认领
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作者 秦欣宇 张燕 +5 位作者 张宁坤 高连如 程涛 王泽 童珊珊 陈宇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第7期1046-1051,共6页
背景:Elabela是近几年发现的新型APJ内源性受体,在成人心血管系统中广泛分布,对心血管疾病也有一定的影响,但是Elabela在干细胞向心肌样细胞诱导分化过程中的作用以及分化过程中对APJ表达量的影响尚未发现相关研究。目的:探讨Elabela对... 背景:Elabela是近几年发现的新型APJ内源性受体,在成人心血管系统中广泛分布,对心血管疾病也有一定的影响,但是Elabela在干细胞向心肌样细胞诱导分化过程中的作用以及分化过程中对APJ表达量的影响尚未发现相关研究。目的:探讨Elabela对脐带华通胶间充质干细胞向心肌样细胞诱导分化的影响。方法:复苏冻存的脐带华通胶间充质干细胞,当细胞汇合度达到80%-90%时,使用5-氮胞苷使其向心肌样细胞分化,24 h后实验组更换为含Elabela、体积分数为10%胎牛血清的低糖DMEM培养基,对照组更换为含体积分数为10%胎牛血清的低糖DMEM培养基。诱导第7,14,21,28天,观察细胞形态变化,同时收集各组细胞的总RNA和总蛋白,采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测心肌特异性标记物Nkx2.5、cTnT、Connexin 43 mRNA及蛋白表达;采用实时荧光定量PCR和流式细胞技术检测诱导后的心肌样细胞中APJ的表达。结果与结论:①在诱导分化各阶段,实验组心肌特异性标记物Nkx2.5、cTnT、Connexin43 mRNA和蛋白表达量均高于对照组,APJ表达量也高于对照组;②结果表明,Elabela在脐带华通胶间充质干细胞向心肌样细胞分化过程中起一定的促进作用;Elabela作为APJ的另一个激动剂在诱导分化过程中可促进APJ的表达。 展开更多
关键词 Elabela Apelin13 脐带华通胶 间充质干细胞 5-氮胞苷 APJ 细胞分化 心肌样细胞
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直接心脏重编程的研究进展 认领
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作者 章晶晶 黄鹤 《心血管病学进展》 CAS 2020年第4期354-358,共5页
直接心脏重编程是指将成纤维细胞转变为功能性心肌细胞的技术,转录因子最先应用到直接重编程中,此后的研究表明,microRNAs和一些小分子等对优化这一技术表现出极大的潜能。近年来,直接心脏重编程技术不断发展,在心肌梗死、心力衰竭等疾... 直接心脏重编程是指将成纤维细胞转变为功能性心肌细胞的技术,转录因子最先应用到直接重编程中,此后的研究表明,microRNAs和一些小分子等对优化这一技术表现出极大的潜能。近年来,直接心脏重编程技术不断发展,在心肌梗死、心力衰竭等疾病研究中取得突破。现将近年来对直接心脏重编程的研究进行综述,展望直接重编程对心脏疾病的治疗前景,探索心血管疾病治疗的一个新思路。 展开更多
关键词 直接重编程 成纤维细胞 心肌样细胞
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心肌样细胞和聚乳酸-聚乙醇酸共聚物在体内构建工程化心肌组织 认领
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作者 邢玉洁 祝领 +3 位作者 朱火兰 赵娜 徐晶 刘富强 《心脏杂志》 CAS 2018年第6期647-652,共6页
目的 探索以骨髓间充质干细胞(BMMSCs)诱导分化的心肌样细胞为种子细胞、以聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)作为支架材料,在大鼠体内构建工程化心肌组织的可实施性。方法 分离培养大鼠BMMSCs,取第3代细胞用5-氮胞苷和血管紧张素Ⅱ联... 目的 探索以骨髓间充质干细胞(BMMSCs)诱导分化的心肌样细胞为种子细胞、以聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)作为支架材料,在大鼠体内构建工程化心肌组织的可实施性。方法 分离培养大鼠BMMSCs,取第3代细胞用5-氮胞苷和血管紧张素Ⅱ联合诱导24 h继续培养3周,将诱导分化的心肌样细胞种植到PLGA支架上形成移植物,在孵箱里孵育3 d,然后将其移植到预先制备好的大鼠腹膜腔囊袋之中。4周以后,取出移植物并采用HE染色观察心肌样细胞的形态特征、用免疫组织化学染色法检测工程化心肌细胞肌钙蛋白(cTn)I的表达、透射电镜下观察心肌样细胞的形态和结构。结果 HE染色结果显示,在PLGA支架上可见到梭形的细胞核,且心肌样细胞分布均一;免疫组织化学染色结果显示PLGA-心肌样细胞组绝大多数移植细胞表达心肌特异性蛋白cTnI;透射电镜观察显示,在体内构建的工程化心肌组织中,可以看到肌丝沿细胞的长轴平行排列,胞浆中富含大量的线粒体和内质网,以及桥粒结构、缝隙连接和Z线样物质。结论 成功的建立了在大鼠体内构建工程化心肌组织的方法。这种体内微环境有助于移植组织或细胞的存活,在大鼠体内构建的工程化心肌组织具有与天然心肌组织相似的结构。 展开更多
关键词 聚乳酸-聚乙醇酸共聚物 骨髓间充质干细胞 工程化心肌组织 心肌样细胞
β联蛋白参与骨形成蛋白9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化 认领 被引量:1
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作者 房松华 刘书霞 陈沅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期750-754,759共6页
目的探讨骨形成蛋白9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化过程β联蛋白(β-catenin)的作用。方法利用重组腺病毒BMP9(Ad-BMP9)诱导C3H10T1/2细胞分化,通过Western blot法检测Ad-BMP9及不同剂量XAV-939处理后β-catenin... 目的探讨骨形成蛋白9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化过程β联蛋白(β-catenin)的作用。方法利用重组腺病毒BMP9(Ad-BMP9)诱导C3H10T1/2细胞分化,通过Western blot法检测Ad-BMP9及不同剂量XAV-939处理后β-catenin的激活情况;在完全抑制β-catenin的情况下,Ad-BMP9诱导1周,通过实时定量PCR法检测心肌细胞增强因子2C(MEF2C)、心肌组织特异性转录因子GATA结合蛋白4(GATA4);Ad-BMP9处理3周后,通过Western blot法及免疫荧光技术检测心肌连接子蛋白43(Cx43)、心肌肌钙蛋白T(c Tn T)的表达。结果在感染效率约50%的情况下,BMP9可过度激活β-catenin,使其磷酸化水平增高;在XAV-939抑制β-catenin后,Ad-BMP9诱导的C3H10T1/2细胞表达的c Tn T、GATA4、Cx43和MEF2C均受到抑制。结论β-catenin能被BMP9激活并参与BMP9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化。 展开更多
关键词 骨形成蛋白9 心肌细胞样细胞 C3H10T1/2细胞 Β-CATENIN
Tbx18能使兔脂肪干细胞向心肌样细胞分化 认领 被引量:1
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作者 张格格 杨媚 +2 位作者 李艳君 唐艳红 黄从新 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第10期1812-1815,1994共5页
目的:研究Tbx18是否能成功转染脂肪干细胞并使脂肪干细胞向心肌细胞分化。方法:分离培养来源于日本大耳兔腹股沟部脂肪的兔脂肪干细胞,用搭载有Tbx18的腺病毒载体转染脂肪干细胞,诱导分化后检测向心肌细胞的分化情况,同时将转染了含GF... 目的:研究Tbx18是否能成功转染脂肪干细胞并使脂肪干细胞向心肌细胞分化。方法:分离培养来源于日本大耳兔腹股沟部脂肪的兔脂肪干细胞,用搭载有Tbx18的腺病毒载体转染脂肪干细胞,诱导分化后检测向心肌细胞的分化情况,同时将转染了含GFP的腺病毒组与未转染组作为对照。采用用流式细胞仪检测转染效率,采用免疫荧光法检测平滑肌肌动蛋白α-SMA,采用实时定量PCR法检测兔肌钙蛋白TNNT2的表达。结果:转染后荧光显微镜下可观察到荧光表达,且持续时间较长。流式细胞仪检测转染效率为70%左右;诱导分化后,脂肪干细胞内出现了α-SMA和TNNT2的表达。结论:Tbx18可成功转染入脂肪干细胞,且能在细胞内稳定表达;Tbx18可诱导脂肪干细胞向心肌样细胞分化。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 Tbx18 诱导 分化 心肌样细胞
直接与间接接触共培养对诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响 认领 被引量:1
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作者 谢盈彧 曹杨 +3 位作者 方子寒 张梦迪 薛亮 范英昌 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第15期4124-4127,共4页
目的研究不同接触方法共培养对骨髓间充质干细胞(BMSCs)呈心肌样细胞分化的影响。方法通过体外扩增BMSCs,在细胞水平上研究心肌细胞直接接触共培养、transwell小室建立的间接接触共培养模拟的心肌微环境,对BMSCs向心肌细胞分化的影响。... 目的研究不同接触方法共培养对骨髓间充质干细胞(BMSCs)呈心肌样细胞分化的影响。方法通过体外扩增BMSCs,在细胞水平上研究心肌细胞直接接触共培养、transwell小室建立的间接接触共培养模拟的心肌微环境,对BMSCs向心肌细胞分化的影响。通过倒置显微镜观察形态,2 w后运用免疫荧光、RT-PCR等技术,检测两试验组细胞心肌特异性蛋白:心肌肌钙蛋白T(c Tn T)表达情况。结果免疫荧光及RT-PCR结果均显示直接接触共培养组c Tn T的表达均高于间接接触组共培养组(P<0.05)。结论直接和间接接触共培养模拟的心肌微环境均可诱导BMSCs向心肌样细胞分化,直接接触的分化率优于间接接触。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 心肌细胞 共培养 心肌肌钙蛋白T
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双相脉冲电刺激可促进脂肪干细胞分化为心肌细胞样细胞 认领 被引量:4
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作者 李志园 杨刚 +2 位作者 黄华 肖正华 任小梅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1200-1204,1210共6页
目的设计一套用于心肌组织工程的双相脉冲电刺激(BPES)系统,并研究BPES对体外培养的脂肪干细胞(ADSC)向心肌细胞样细胞分化的影响。方法分离和培养SD大鼠ADSC,通过流式细胞术对细胞表型进行鉴定,通过成脂、成骨分化证明其多向分化... 目的设计一套用于心肌组织工程的双相脉冲电刺激(BPES)系统,并研究BPES对体外培养的脂肪干细胞(ADSC)向心肌细胞样细胞分化的影响。方法分离和培养SD大鼠ADSC,通过流式细胞术对细胞表型进行鉴定,通过成脂、成骨分化证明其多向分化潜能。选择第3代细胞随机分为2组:BPES组接种24 h后,给予BPES(脉宽2 ms、幅度2 V、频率2 Hz、刺激时间2 h/d,连续刺激3、7、14 d),每3 d换1次液;对照组培养条件与BPES组相同,但不给予BPES。通过倒置相差显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖,免疫荧光技术检测细胞同源盒蛋白Nkx-2.5和连接子蛋白43(CX43)的水平。结果流式细胞术证明分离的细胞是ADSC,成脂诱导后并用油红O染色,可见细胞内脂滴被染成红色,成骨诱导后碱性磷酸酶(ALP)和Von Kossa染色,可见钙结节特征;细胞增殖无明显变化,BPES组Nkx-2.5和CX43蛋白表达量明显高于对照组。结论成功设计了可用于组织工程的BPES系统,并证明BPES可在体外促进ADSC向心肌细胞样细胞分化。 展开更多
关键词 双相脉冲 双相脉冲电刺激 脂肪干细胞 分化 心肌细胞样细胞
大鼠 BMSCs 向心肌样细胞分化过程中miR-128对 Nkx2-5基因的调控作用 认领
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作者 朱国伟 鞠延玲 高振宇 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第34期1-3,共3页
目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞( BMSCs)向心肌样细胞分化过程中miR-128对Nkx2-5基因的调控作用。方法分离培养大鼠BMSCs,应用5-氮杂胞苷将其诱导为心肌样细胞,采用Real-time PCR法检测诱导6、10、14、18、22 d时miR-128、Nkx2... 目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞( BMSCs)向心肌样细胞分化过程中miR-128对Nkx2-5基因的调控作用。方法分离培养大鼠BMSCs,应用5-氮杂胞苷将其诱导为心肌样细胞,采用Real-time PCR法检测诱导6、10、14、18、22 d时miR-128、Nkx2-5基因的表达。用生物信息学方法对miR-128和Nkx2-5基因的靶向匹配关系进行预测,显示miR-128与Nkx2-5 mRNA的3′UTR结合情况良好。提取心肌细胞总RNA,扩增Nkx2-5 mRNA 3′UTR片段,构建Nkx2-53′UTR-pmirGLO荧光素酶报告载体,双荧光素酶检测转染Nkx2-53′UTR-pmirGLO以及miR-128模拟物或对照miRNA的荧光强度,鉴定miR-128与Nkx2-5的靶向关系。结果将诱导6 d的Nkx2-5和miR-128的表达量分别设为1,诱导10 d的Nkx2-5表达量为4.33±1.32、22 d为14.78±6.05,诱导10 d的miR-128表达量为0.7762±0.0543、22 d为0.1976±0.0836。 miR-128与Nkx2-5的表达呈负相关(r=-0.546,P=0.021)。相对于转染对照miRNA(设定其荧光素酶活性为1),转染miR-128能使Nkx2-53′UTR-pmirGLO的荧光素酶表达下降为0.4354±0.0726。结论 miR-128通过结合Nkx2-5 mRNA 3′UTR抑制其表达,具有负性调控BMSCs向心肌样细胞分化过程中Nkx2-5表达的作用。 展开更多
关键词 微小核糖核酸 Nkx2-5基因 骨髓间充质干细胞 心肌样细胞 大鼠
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Wnt3a联合BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化 认领
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作者 刘书霞 耿雪静 +1 位作者 房松华 陈沅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期448-451,共4页
目的探讨Wnt3a单独以及联合骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化的作用。方法利用HEK293细胞扩增重组腺病毒AdGFP、AdBMP9、AdWnt3a;分别转染C3H10T1/2细胞3周后,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态及绿色... 目的探讨Wnt3a单独以及联合骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化的作用。方法利用HEK293细胞扩增重组腺病毒AdGFP、AdBMP9、AdWnt3a;分别转染C3H10T1/2细胞3周后,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态及绿色荧光蛋白表达;流式细胞术检测细胞转染效率;Western blot法、免疫荧光技术及实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测缝隙连接蛋白43(Cx43)、肌钙蛋白T(cTnT)、GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌细胞增强因子2C(MEF2C)的表达。结果经HEK293细胞扩增可得到高滴度的重组腺病毒;转染C3H10T1/2细胞3周后,Wnt3a组Cx43、cTnT、GATA4、MEF2C的表达量与空白组比较无明显差异;Wnt3a联合BMP9组的Cx43、cTnT、GATA4、MEF2C基因的表达量显著高于空白组、GFP组和Wnt3a组,与单独BMP9组相比无显著性差异。结论Wnt3a不能单独诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化;Wnt3a联合BMP9可诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白9 WNT3A C3H10T1/2细胞 心肌细胞样细胞
P19细胞向心肌样细胞分化前后gp91-phox的变化 认领
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作者 吴继军 韩卫星 +3 位作者 刘超 陈晓蓉 王成 卢挪挪 《国际心血管病杂志》 2014年第5期331-333,共3页
目的:探讨诱导P19细胞向心肌样细胞分化前后gp91-phox水平的变化。方法:P19细胞经0.9%二甲基亚砜(DMSO)于细菌培养皿中悬浮诱导培养4 d,待细胞聚集体形成,吸取聚集体接种于组织培养皿,贴壁培养至第13天。行Western blot检测肌钙蛋白... 目的:探讨诱导P19细胞向心肌样细胞分化前后gp91-phox水平的变化。方法:P19细胞经0.9%二甲基亚砜(DMSO)于细菌培养皿中悬浮诱导培养4 d,待细胞聚集体形成,吸取聚集体接种于组织培养皿,贴壁培养至第13天。行Western blot检测肌钙蛋白I(cTnI),以鉴定心肌样细胞的分化,并检测P19细胞向心肌样细胞分化前后细胞中gp91-phox蛋白水平。结果:(1)经0.9%DMSO诱导分化,P19细胞于第7天开始表达cTnI,随后cTnI表达明显增高并趋于稳定;(2)P19细胞分化为心肌样细胞后细胞内gp91-phox蛋白水平较分化前高(P〈0.05)。结论:P19细胞向心肌样细胞分化后gp91-phox表达上调,氧化应激水平增加。 展开更多
关键词 P19细胞 心肌样细胞 细胞分化 氧化应激 gp91-phox
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miR-122靶向调控心肌样细胞诱导分化过程中GATA4基因的表达 认领 被引量:2
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作者 郭励京 张志 +2 位作者 刘紫东 付伟 季州 《天津医药》 CAS 北大核心 2014年第4期333-336,I0006共5页
目的:实现大鼠骨髓间充质干细胞(bMSCs)向心肌样细胞的诱导分化,并验证分化过程中miR-122靶向调控GATA4基因的表达。方法首先,分离培养bMSCs,应用5-氮杂胞苷(5-azacytidine)将其诱导分化为心肌样细胞。然后,采用靶基因预测软件... 目的:实现大鼠骨髓间充质干细胞(bMSCs)向心肌样细胞的诱导分化,并验证分化过程中miR-122靶向调控GATA4基因的表达。方法首先,分离培养bMSCs,应用5-氮杂胞苷(5-azacytidine)将其诱导分化为心肌样细胞。然后,采用靶基因预测软件miRanda和TargetScan对miR-122和GATA4基因的靶向匹配关系进行预测并通过双荧光素酶报告基因系统鉴定。qRT-PCR检测诱导分化过程中miR-122和GATA4的表达。结果诱导分化后的细胞平行排列,紧密相连,形态规则均一,免疫荧光化学显示有心肌肌钙蛋白I(cTnI)表达。生物信息学方法预测发现miR-122和GATA4基因两者匹配良好,通过双荧光素酶报告基因系统检测发现miR-122能结合到GATA4 mRNA的3′UTR并有效抑制其表达。qRT-PCR检测结果表明,miR-122的表达水平与GATA4表达呈负相关。结论 miR-122能调控心肌样细胞诱导分化过程中GATA4的表达。 展开更多
关键词 间质干细胞 微RNAs GATA4转录因子 3’非翻译区 计算生物学 大鼠 Sprague-Dawley MIR-122 肌样细胞
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HGF联合5-aza诱导间充质干细胞心肌样分化实验探讨 认领 被引量:1
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作者 孙玉河 陶志虎 方五旺 《临床和实验医学杂志》 2014年第18期1483-1487,共5页
目的探讨肝细胞生长因子(HGF)联合5-氮胞苷(5-aza)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMMSCs)向心肌样细胞分化的机制。方法 ①采用全骨髓贴壁法培养BMMSCs,用流式细胞仪对阳性表面标记抗原CD44、CD29和阴性标记抗原CD34进行检测。②取第4... 目的探讨肝细胞生长因子(HGF)联合5-氮胞苷(5-aza)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMMSCs)向心肌样细胞分化的机制。方法 ①采用全骨髓贴壁法培养BMMSCs,用流式细胞仪对阳性表面标记抗原CD44、CD29和阴性标记抗原CD34进行检测。②取第4代BMMSCs进行分组诱导,空白对照组(普通培养基)、5-aza组(10μmol/L)、HGF组(10 ng/ml)、5-aza+HGF组(10μmol/l+10 ng/ml)。各组BMMSCs诱导4周后,实时荧光定量PCR法检测各组α-actin、GATA-4相对表达量,免疫组化法鉴定肌钙蛋白T(cTnT)表达。结果 ①大鼠BMMSCs体外培养形态特征及鉴定:细胞呈长梭形、同心圆状生长,形态逐渐趋向一致。CD44阳性表达率为(86.14)%,CD29阳性表达率为(98.97)%,CD34阳性表达率为(6.86%);②BMMSCs诱导4周后空白对照组细胞死亡,免疫组化显示3组均表达心肌特异性结构蛋白cTnT;实时荧光定量PCR显示3组均表达心肌分化早期基因,其中5-aza+HGF组明显高于其他两组。结论 ①骨髓间充质干细胞经5-aza、HGF诱导后可以分化为心肌样细胞。②在骨髓间充质干细胞诱导为心肌样细胞的过程中,5-aza+HGF组优于5-aza及HGF组。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 心肌样细胞 诱导 肝细胞生长因子 5-氮胞苷
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P53特异性抑制剂PFT-α诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化 认领
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作者 燕学波 胡朝晖 +2 位作者 杜运华 吕安林 邢玉洁 《中国组织工程研究》 CSCD 2013年第1期9-16,共8页
背景:最新研究表明,P53可通过阻断P53-P21蛋白通路,显著提高干细胞分化率。而5-氮杂胞苷主要通过激活P53-P21蛋白通路,抑制细胞增殖,导致细胞凋亡。目的:观察P53特异性抑制剂PFT-α对大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响。方... 背景:最新研究表明,P53可通过阻断P53-P21蛋白通路,显著提高干细胞分化率。而5-氮杂胞苷主要通过激活P53-P21蛋白通路,抑制细胞增殖,导致细胞凋亡。目的:观察P53特异性抑制剂PFT-α对大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响。方法:分离SD大鼠骨髓间充质干细胞进行培养、传代,取第4代细胞分为4组,正常对照组、PFT-α组、5-氮杂胞苷组及PFT-α+5-氮杂胞苷组。结果与结论:原代培养的骨髓间充质干细胞传代诱导后细胞体积变大,呈长梭形,排列趋一致。当PFT-α浓度≤20μmol/L时,能减少骨髓间充质干细胞凋亡。心肌样细胞鉴定结果显示,诱导后4周时,可见正常对照组少量表达肌钙蛋白Ⅰ和CX-43,其余3组均强表达。心肌细胞分化率结果显示,诱导4周时,PFT-α组和5-氮杂胞苷+PFT-α组显著高于5-氮杂胞苷组。Western Blotting检测结果示,诱导1周时,5-氮杂胞苷组P53、P21表达最强,PFT-α组几乎不表达;诱导4周时,5-氮杂胞苷组、PFT-α组、PFT-α+5-氮杂胞苷组P53、P21表达明显高于正常对照组。PFT-α组、PFT-α+5-氮杂胞苷组内诱导4周时P53、P21表达量均高于1周时表达。提示通过P53抑制剂PFT-α阻断P53-P21蛋白通路,能显著减少骨髓间充质干细胞凋亡,促进其增殖,且能诱导其向心肌样细胞分化。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 PFT-Α 骨髓间充质干细胞 P53-P21蛋白通路 5-氮杂胞苷 心肌样细胞 干细胞图片文章
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诱导小鼠胎肝干细胞向类心肌细胞的分化 认领
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作者 吴必刚 常静 张晓刚 《中国组织工程研究》 CSCD 2013年第32期5813-5818,共6页
背景:近年来胚胎肝干细胞备受关注,该类细胞是否具有向类心肌细胞方向分化的潜能及相关的诱导分化条件,目前报道极少。目的:探讨体外环境下化学试剂诱导小鼠胎肝干细胞向类心肌细胞方向分化的合适条件。方法:二甲基亚砜联合5-氮杂胞... 背景:近年来胚胎肝干细胞备受关注,该类细胞是否具有向类心肌细胞方向分化的潜能及相关的诱导分化条件,目前报道极少。目的:探讨体外环境下化学试剂诱导小鼠胎肝干细胞向类心肌细胞方向分化的合适条件。方法:二甲基亚砜联合5-氮杂胞苷以不同的浓度和时间,作用于13.5d胎龄的昆明小鼠胎肝干细胞,观察诱导分化效果。结果与结论:体外环境下,0.8%二甲基亚砜+5μmol/L5-氮杂胞苷能诱导小鼠胎肝干细胞表达心肌细胞特异性标志物,而增加诱导剂浓度及延长时间不能提高诱导效率。 展开更多
关键词 干细胞 胚胎干细胞 胎肝干细胞 二甲基亚砜 5-氮杂胞苷 诱导 分化 类心肌细胞 Α-ACTIN 肌钙蛋白T 干细胞图片文章
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胰岛素样生长因子1诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验研究 认领 被引量:2
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作者 王秀力 李春梅 +3 位作者 吕茜 王雷 王洁 宫海滨 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期150-155,共6页
目的研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)分化为心肌样细胞的能力及其机制。方法分离大鼠BMSC,并在体外培养纯化。实验分为两个部分:第一部分,IGF-1诱导BMSC分化为心肌样细胞的实验研究,分为培养基对照组... 目的研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)分化为心肌样细胞的能力及其机制。方法分离大鼠BMSC,并在体外培养纯化。实验分为两个部分:第一部分,IGF-1诱导BMSC分化为心肌样细胞的实验研究,分为培养基对照组(对照组)和15ng/ml的IGF-1诱导组(IGF.1组),连续培养21d,分别在第3、7、14和21天采用免疫细胞化学染色法和Westernblot法检测BMSC中磷酸化(P)IGF.1受体(R)、心肌特异性肌钙蛋白T(TNT)及肌钙蛋白I(TNI)的表达。第二部分为IGF-1R激酶阻断剂I-OMeAG538阻断IGF-1诱导BMSC向心肌样细胞分化的实验研究,分为培养基对照组(对照组)、15ng/mlIGF-1诱导组(IGF-l组)、300nmol/LI-OMeAG538阻断组(I-OMeAG538组)及300nmol/LI-OMeAG538阻断+15ng/mlIGF-l诱导组(I-OMeAG538+IGF-l组)。免疫细胞化学法和Westernblot法检测BMSC中TNT及TNI、MAPK和P13K信号通路的蛋白表达水平。结果IGF-1诱导BMSC分化的实验结果显示IGF-1组诱导后,TNT、TNI的表达均呈阳性,plGF-1R的表达量也明显高于对照组(上述因子均未检测到),以第14天为最高(P〈0.05)。I-OMeAG538作用BMSC3和6h后,I-OMeAG538组pERKl/2/ERKl/2比值分别为0.17±0.03和0.06±0.03,均显著低于对照组的1.00±0.05(P均〈0.05)。IGF-1组pAKT/AKT和pERKl/2ERKl/2的比值分别为1.00±0.07和1.00±0.09均显著高于对照组的0.724-0.05(P均〈0.05),而l-OMeAG538组pAKT/AKT和pERKl/2ERKl/2的比值分别为0.31±0.10和0.39±0.04均显著低于对照组的0.63±0.05(P均〈0.05)。I-ONeAG538+IGF-1组心肌样细胞的TNT和TNI蛋白表达的灰度值分别为195.064-5.98和198.32±3.46均显著高于IGF-1组的188.70±5.35和176.10±4.96(P均〈0.05)。IGF-1组IGF诱导BMSC3、7、14和21d后,其TNT、TNI和pIGF-1R的蛋白表达水平均高于对照组,且� 展开更多
关键词 间质干细胞 胰岛素样生长因子I 细胞分化 心肌样细胞
骨形态发生蛋白2与P53抑制剂PFT-α联合诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验研究 认领 被引量:3
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作者 侯兆蕾 吕安林 +4 位作者 达晶 侯红 艾世宜 侯婧 刘博武 《中华临床医师杂志(电子版)》 2013年第6期121-123,共3页
目的 观察骨形态发生蛋白2(BMP-2)与P53抑制剂PFT-α体外联合诱导骨髓间充质干细胞(BMMSCs)定向分化为心肌样细胞的作用.方法 采用密度梯度离心法分离大鼠BMMSCs,取第4代BMMSCs分四组诱导:(1)空白对照组,仅用完全培养基诱导;(... 目的 观察骨形态发生蛋白2(BMP-2)与P53抑制剂PFT-α体外联合诱导骨髓间充质干细胞(BMMSCs)定向分化为心肌样细胞的作用.方法 采用密度梯度离心法分离大鼠BMMSCs,取第4代BMMSCs分四组诱导:(1)空白对照组,仅用完全培养基诱导;(2)骨形态发生蛋白2组(BMP-2,终浓度10 μg/L);(3)P53抑制剂组(PFT-α,终浓度20 μmol/L);(4)BMP-2联合PFT-α组(BMP-2+ PFT-α,终浓度分别为10 μg/L与20 mol/L).24h后换为普通培养液继续培养4周.用倒置相差显微镜观察细胞的形态学改变,免疫细胞化学法鉴定诱导后心肌样细胞中心肌特异标志物性肌钙蛋白Ⅰ (cTnⅠ)的表达,流式计数法计算诱导后心肌样细胞诱导率.结果 原代BMMSCs 10 d形成集落,呈星形或梭形.传代后细胞体积变大,诱导4周后细胞呈长梭形,生长趋于一致性,出现肌岛样结构.免疫细胞化学结果显示诱导4周后BMMSCs表达心肌特异性蛋白cTnⅠ.流式计数法结果显示:空白对照组、BMP-2组、PFT-α、BMP-2联合PFT-α组心肌样细胞诱导率分别为(1.4±0.3)%、(17.1±1.2)%、(28.2±1.0)%、(39.9±1.7)%,BMP-2联合PFT-α组心肌样细胞诱导分化率高于BMP-2组与PFT-α组(P<0.01).结论 BMP-2联合PFT-α可在体外诱导大鼠BMMSCs定向分化为心肌样细胞,其诱导分化率明显高于单纯BMP-2或单纯PFT-α诱导. 展开更多
关键词 间质干细胞 骨形态发生蛋白质类 肿瘤抑制蛋白质P53 细胞分化 心肌样细胞
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骨髓间充质干细胞向心肌分化的实验研究 认领 被引量:10
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作者 牛红星 穆军升 +1 位作者 张健群 伯平 《心肺血管病杂志》 CAS 2013年第3期357-360,共4页
目的:研究骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)分化为心肌样细胞的能力,用于心肌补片治疗心肌梗死的研究。方法:分离C57/BSL小鼠BMSCs,全培养差速贴壁法,经过贴壁培养至第3代,流式细胞仪鉴定细胞表面标志(CD34、C... 目的:研究骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)分化为心肌样细胞的能力,用于心肌补片治疗心肌梗死的研究。方法:分离C57/BSL小鼠BMSCs,全培养差速贴壁法,经过贴壁培养至第3代,流式细胞仪鉴定细胞表面标志(CD34、CD45、CD73、CD90),经10μmol/L的5-氮杂胞苷诱导细胞,24 h后更换完全培养基培养,2 w后进行免疫荧光染色,荧光显微镜观察心肌钙蛋白T(cTnT)和连接素蛋白43(CX43)的表达。结果:流式鉴定结果显示CD34、CD45阴性,CD73强阳性,CD90弱阳性。免疫荧光染色显示,诱导后细胞高表达心肌细胞特异性蛋白cTnT,连接素蛋白CX43表达水平明显增加。结论:5-aza可以诱导BMSCs大量表达心肌特异性蛋白cTnT和细胞连接素蛋白(CX43),干细胞分化为心肌样细胞,为干细胞移植治疗小鼠心梗提供种子细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 心肌样细胞 5-氮杂胞苷 免疫荧光
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P38MAPK信号通路在骨形态发生蛋白2诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞中的作用 认领 被引量:4
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作者 田龙 高航 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期37-42,共6页
目的研究P38MAPK信号通路在骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)分化为心肌样细胞中的调控作用,探讨BMSC向心肌样细胞分化的可能信号机制。方法BMsc分离与体外培养;分3组:对照组、BMP-2组(诱导剂组)和BMP-2+SB2... 目的研究P38MAPK信号通路在骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)分化为心肌样细胞中的调控作用,探讨BMSC向心肌样细胞分化的可能信号机制。方法BMsc分离与体外培养;分3组:对照组、BMP-2组(诱导剂组)和BMP-2+SB203580组(阻断剂组)。倒置相差显微镜观察细胞的形态学变化;免疫细胞化学检测诱导后BMSC心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)和连接蛋白43(Cx43)的表达;Western blot检测诱导后细胞内p-P38MAPK/P38MAPK的变化。结果BMP-2诱导15min,p-P38MAPK蛋白呈弱表达,30min达到高峰,60rain逐渐降低;用P38MAPK阻断剂SB203580预处理细胞后,p-P38MAPK表达明显降低;与诱导剂组比较,阻断剂组的p-P38MAPK蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P〈0.05)。诱导4周后,对照组cTnT、Cx43呈阴性表达;诱导剂组和阻断剂组呈阳性表达,且阻断剂组Cx43阳性细胞数多于诱导剂组,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论BMP-2可诱导BMSC分化为心肌样细胞,P38MAPK信号通路在诱导过程中发挥负性调节作用。 展开更多
关键词 P38MAPK信号通路 骨髓间充质干细胞 骨形态发生蛋白2 心肌样细胞
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