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人口腔鳞状细胞癌细胞系TSCC2016的建立及生物学特性分析
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作者 朱东旺 孙文文 +3 位作者 赵铜超 钟来平 张陈平 张志愿 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2019年第3期204-209,共6页
目的:建立一株口腔鳞状细胞癌细胞系TSCC2016,明确其生物学特性,为研究口腔鳞状细胞癌的发病机制和临床治疗提供工具。方法:选取新鲜的口腔鳞状细胞癌患者手术标本,采用组织块培养法,建立口腔鳞状细胞癌细胞系TSCC2016,观察其细胞形态... 目的:建立一株口腔鳞状细胞癌细胞系TSCC2016,明确其生物学特性,为研究口腔鳞状细胞癌的发病机制和临床治疗提供工具。方法:选取新鲜的口腔鳞状细胞癌患者手术标本,采用组织块培养法,建立口腔鳞状细胞癌细胞系TSCC2016,观察其细胞形态和生长特性,对其表面标记、细胞核型和裸鼠成瘤等进行检测。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:TSCC2016的传代已经超过100代。细胞生长稳定,形态为均一的多角形上皮细胞,具有典型的口腔鳞状细胞癌细胞特点。细胞STR分型结果表明,TSCC2016细胞为原代培养出的口腔鳞状细胞癌细胞,无其他肿瘤细胞系污染。TSCC2016细胞的成瘤性较好,成瘤率为100%,瘤体生长较快。结论:成功建立了一株口腔鳞状细胞癌细胞系TSCC2016,为口腔鳞状细胞癌的基础研究提供了一个稳定的细胞株。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 细胞系 原代培养 细胞培养
人卵巢颗粒细胞分离培养的优化及生物学特性 预览
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作者 许素铭 王耀琴 +3 位作者 朱鹏飞 李宵 王春芳 武学清 《解剖学杂志》 CAS 2019年第2期116-120,共5页
目的:建立原代人卵巢颗粒细胞(hGCs)的分离培养方法,观察其生物学特性。方法:取卵日,收集hGCs,分为对照组(DMEM培养基)和实验组(DMEM培养基∶卵泡液=1∶1)进行培养。比较2组hGCs的生长状态和雌激素分泌情况。利用RT-qPCR检测Nanog、Oct4... 目的:建立原代人卵巢颗粒细胞(hGCs)的分离培养方法,观察其生物学特性。方法:取卵日,收集hGCs,分为对照组(DMEM培养基)和实验组(DMEM培养基∶卵泡液=1∶1)进行培养。比较2组hGCs的生长状态和雌激素分泌情况。利用RT-qPCR检测Nanog、Oct4、Sox2的表达,应用流式细胞术检测CD44、CD73、CD45的表达。结果:hGCs培养24 h贴壁良好,细胞间伸出伪足。对照组和实验组分别在培养14d和21d后出现凋亡。实验组雌激素的分泌显著增加,第9天出现高峰,第21天显著下降。培养第7天实验组Oct4和Nanog mRNA表达显著增加。培养7d后,CD44、CD73表达阳性, CD45表达阴性。结论:该方法简单、有效,可获得大量hGCs。培养基中添加卵泡液有益于hGCs的生长,增加培养天数。同时hGCs可分泌雌激素并具有一定的干细胞特性。 展开更多
关键词 人卵巢颗粒细胞 细胞培养 细胞沉淀法 生物学特性 干细胞
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中华蜜蜂囊状幼虫病毒在Sf9和S2细胞系中的感染性研究
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作者 刘永梅 史红霞 +1 位作者 黄钰彬 党晓群 《重庆师范大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第3期118-123,F0002共7页
【目的】调查研究中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)在草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢细胞系Sf9和果蝇S2胚胎细胞(Schneider’s Drosophila Line 2)中的感染性。【方法】以Sf9和S2作为CSBV体外感染的细胞系,通... 【目的】调查研究中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)在草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢细胞系Sf9和果蝇S2胚胎细胞(Schneider’s Drosophila Line 2)中的感染性。【方法】以Sf9和S2作为CSBV体外感染的细胞系,通过RT-PCR检测CSBV的Vp1基因表达情况从而判断CSBV是否能在两种细胞中感染并增殖。【结果】在S2细胞中并未检测到CSBV,说明CSBV不能感染该细胞;接种了CSBV的Sf9细胞中并未表现出明显的致细胞病变效应(CPE),但在该细胞总RNA中可检测到Vp1基因的转录。通过克隆测序发现,从接种CSBV的Sf9细胞中克隆得到的Vp1基因序列与CSBV重庆分离株Vp1基因(NCBI登录号:KJ716806)同源性高达99%。系统进化分析显示,该序列与囊状幼虫病毒(Sacbrood virus,SBV)中国分离株聚为一簇。但是,当感染CSBV的细胞传至第3代时检测不到CSBV。【结论】CSBV不能感染S2细胞而能感染Sf9细胞,且不能在后者中进行增殖,暗示后者可能含有某类可清除CSBV的因子,从而为寻找CSBV寄生增殖所必需的细胞因子提供了线索。 展开更多
关键词 中华蜜蜂囊状幼虫病毒 SF9细胞 S2细胞 RT-PCR 细胞培养
miRNA-10b靶向调控Twist促进骨肉瘤细胞增殖与侵袭的研究 预览
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作者 梁秀伟 孙超 +3 位作者 文坤树 蔡勇平 高劲松 李晓江 《局解手术学杂志》 2019年第1期10-15,共6页
目的探讨microRNA-10b对骨肉瘤细胞MG-63增殖与侵袭能力的影响及潜在作用机制。方法应用实时荧光定量PCR检测人骨肉瘤组织和癌旁正常骨组织中miR-10b的表达差异。将miR-10b mimic和Twist特异性的siRNA(Twist siRNA)分别通过脂质体转染... 目的探讨microRNA-10b对骨肉瘤细胞MG-63增殖与侵袭能力的影响及潜在作用机制。方法应用实时荧光定量PCR检测人骨肉瘤组织和癌旁正常骨组织中miR-10b的表达差异。将miR-10b mimic和Twist特异性的siRNA(Twist siRNA)分别通过脂质体转染法转染入骨肉瘤细胞系MG-63,应用RT-PCR检测细胞中miR-10b和Twist mRNA的表达,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Twist及内参β-actin蛋白表达水平,采用MTT[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]法检测miR-10b mimic及Twist siRNA对人骨肉瘤细胞系MG-63增殖能力的影响;采用Transwell侵袭实验检测miR-10b mimic及Twist siRNA对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭能力的影响。结果与正常癌旁骨组织相比,miR-10b在骨肉瘤组织中呈现明显高表达,差异具有极显著性统计学意义(P<0.01);miR-10b mimic可使Twist mRNA和蛋白表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05),同时可显著增强MG-63细胞的增殖与侵袭能力(P<0.05),而转染miR-10b mimic和Twist siRNA的MG-63细胞的增殖与侵袭能力较仅转染miR-10b mimic的MG-63细胞显著减弱(P<0.05)。结论人骨肉瘤细胞系MG-63中miR-10b的表达上调,可能通过靶向激活Twist信号通路促进骨肉瘤细胞的异常增殖与远处侵袭。 展开更多
关键词 骨肉瘤 微小RNA-10b TWIST 细胞增殖 侵袭 细胞培养 细胞转染
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回阳固元方对人乳头瘤病毒感染细胞凋亡的影响研究 预览
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作者 曹萍 朱伟 杨同华 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第15期21-25,共5页
目的探讨回阳固元方对人乳头瘤病毒感染细胞凋亡的影响。方法用不同浓度回阳固元方,经Transwell(转换池)吸收后,与尖锐湿疣患者皮损中提取的角质形成细胞-单细胞悬液作用,通过流式细胞仪测定其细胞周期及细胞凋亡。结果固定中药浓度20μ... 目的探讨回阳固元方对人乳头瘤病毒感染细胞凋亡的影响。方法用不同浓度回阳固元方,经Transwell(转换池)吸收后,与尖锐湿疣患者皮损中提取的角质形成细胞-单细胞悬液作用,通过流式细胞仪测定其细胞周期及细胞凋亡。结果固定中药浓度20μg/ml,随着时间的变化,G1期细胞数量减少,G2期细胞数量逐渐增多,S期细胞数量较正常组减少,角质形成细胞的凋亡率也逐渐增加;固定时间48 h,随着中药浓度的增加,G1期细胞数量降低,G2期细胞数量极少,S期细胞较正常组减少,角质形成细胞的凋亡率呈逐渐增加的趋势(P<0.05)。结论回阳固元方可诱导人乳头瘤病毒感染细胞的凋亡。 展开更多
关键词 尖锐湿疣 角质形成细胞 细胞培养 细胞周期 细胞凋亡
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大鼠皮质神经元的体外培养及不同浓度尿激酶干预后的观察 预览
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作者 葛汝村 吕涌涛 +3 位作者 魏巍 陈平 冯肖亚 徐林 《神经损伤与功能重建》 2019年第6期271-274,共4页
目的:建立科学简易的大鼠皮质神经元的体外培养方法,观察尿激酶对其干预后的表现。方法:取24h内新生Wistar大鼠脑皮质,用浓度为2mg/mL的木瓜酶和适量DNaseI酶共同消化,并用配置好的无血清Neurobasal培养基接种培养,6d后免疫荧光法鉴定... 目的:建立科学简易的大鼠皮质神经元的体外培养方法,观察尿激酶对其干预后的表现。方法:取24h内新生Wistar大鼠脑皮质,用浓度为2mg/mL的木瓜酶和适量DNaseI酶共同消化,并用配置好的无血清Neurobasal培养基接种培养,6d后免疫荧光法鉴定神经元纯度;分别配置含尿激酶终浓度为5000U/mL、8000U/mL、10000U/mL、15000U/mL和20000U/mL的Neurobasal培养基并进行全量换液,镜下观察不同浓度尿激酶干预后神经元的变化。结果:培养6d,神经元分化成熟,胞质丰富,树突及轴突舒展延长,可见密集的神经纤维网络,免疫荧光鉴定神经元纯度为88.2%;尿激酶干预后,发现尿激酶浓度在5000~10000U/mL时,2h内镜下观察培养体系无明显变化,但随时间的延长,尿激酶浓度为10000U/mL作用4h时,可见少量神经元细胞破碎崩解,细胞间网状结构减少。尿激酶浓度在15000U/mL及20000U/mL时,干预2h发现神经元细胞崩解,网状结构消失。结论:本实验建立了一种简易、高效的体外培养新生大鼠皮质神经元的方法,尿激酶浓度在5000~10000U/mL时,2h内对体外神经元培养体系是安全的。 展开更多
关键词 神经元 细胞培养 培养基 免疫荧光 尿激酶
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黄芪甲苷对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达的影响 被引量:1
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作者 刘新辉 《广州中医药大学学报》 CAS 2019年第2期251-255,共5页
【目的】探讨黄芪甲苷对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达的影响。【方法】将大鼠近端肾小管上皮细胞NRK-52E分为3组:正常对照组、高糖刺激组(给予葡萄糖30 mmol/L,作用48 h)及黄芪甲苷干预组(给予葡萄糖30 mmol/L... 【目的】探讨黄芪甲苷对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达的影响。【方法】将大鼠近端肾小管上皮细胞NRK-52E分为3组:正常对照组、高糖刺激组(给予葡萄糖30 mmol/L,作用48 h)及黄芪甲苷干预组(给予葡萄糖30 mmol/L刺激的同时加用黄芪甲苷100μmol/L,48 h)。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖能力;采用Westernblot法检测促凋亡蛋白cleaved-caspase-3及同源性磷酸酶张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)/帕金蛋白(Parkin)介导的线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ的表达。【结果】黄芪甲苷可有效缓解高糖对细胞增殖的抑制作用(P <0.01)。高糖可上调NRK-52E细胞促凋亡蛋白cleaved-caspase-3,线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin的表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(均P <0.01);而黄芪甲苷干预可显著下调上述促凋亡蛋白及线粒体自噬相关蛋白的表达(P <0.05或P <0.01)。【结论】黄芪甲苷可抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞NRK-52E的凋亡,减轻其由PINK1/Parkin介导的线粒体自噬。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 高糖 凋亡 线粒体自噬 肾小管上皮细胞 细胞培养
SD乳鼠骨髓间充质干细胞体外改良筛选法培养及鉴定 预览
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作者 李楠 翁军权 +1 位作者 谢华德 孙海鹏 《标记免疫分析与临床》 CAS 2019年第5期851-857,共7页
目的评估应用SD乳鼠骨髓的改良筛选法分离培养骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSCs)的可行性及优势,探讨一种简单高效的BMSCs体外分离、纯化及扩增的方法。方法选择7d龄SD大鼠6只,无菌解剖大鼠双侧股骨,于完全培... 目的评估应用SD乳鼠骨髓的改良筛选法分离培养骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSCs)的可行性及优势,探讨一种简单高效的BMSCs体外分离、纯化及扩增的方法。方法选择7d龄SD大鼠6只,无菌解剖大鼠双侧股骨,于完全培养基浸泡、剪碎,反复吹打暴露骨髓腔,高速震荡3min后取上清液接种于培养瓶中,24h后半量换液,48h后全量换液,以后隔天换液。应用CCK-8法测定生长曲线;成骨分化诱导3周后进行茜素红染色,成脂分化诱导4周后进行油红“O”染色;应用流式细胞仪鉴定细胞表面抗原。结果原代培养的BMSCs细胞生长曲线呈“S”形,接种1d后有少量细胞贴壁,第3~6天为对数增殖期,第7天进入平台期。BMSCs经成骨诱导3周后茜素红染色细胞外基质中可见深红色团块状矿化结节;经成脂肪诱导4周后胞浆内充满“串珠状”红色脂滴。流式细胞仪检测BMSCs表面抗原CD29、CD44、CD90阳性,CD34和CD45阴性。结论应用7d龄SD乳鼠的改良全骨髓自然贴壁筛选法可以高效分离纯化出BMSCs。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞分离 细胞培养 SD乳鼠 诱导分化
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环形泰勒虫喀什株感染牛淋巴细胞系的建立及其生物学特征的鉴定
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作者 马全英 李有全 +8 位作者 刘军龙 刘爱红 王锦明 赵帅阳 陈银银 徐建林 殷宏 关贵全 罗建勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期144-151,共8页
建立1株环形泰勒虫(Theileria annulata)感染的牛淋巴细胞系,分析其生物学特征,为环形泰勒虫病疫苗研发提供新的细胞系。用环形泰勒虫喀什株感染的小亚璃眼蜱成蜱叮咬健康黄牛,当动物体温升高,体表淋巴结肿大时,用显微镜检查肩前和股前... 建立1株环形泰勒虫(Theileria annulata)感染的牛淋巴细胞系,分析其生物学特征,为环形泰勒虫病疫苗研发提供新的细胞系。用环形泰勒虫喀什株感染的小亚璃眼蜱成蜱叮咬健康黄牛,当动物体温升高,体表淋巴结肿大时,用显微镜检查肩前和股前淋巴结穿刺物涂片,出现裂殖体感染的淋巴细胞时,手术摘取淋巴结,无菌条件下进行淋巴细胞的分离培养;选择合适的培养条件对该细胞进行适应性传代培养,可稳定传代培养后,绘制细胞生长曲线,测定细胞倍增时间和细胞周期,测定细胞系环形泰勒虫18S rRNA基因序列,通过序列比对分析其亲缘关系。结果显示,建立了1株可传代培养的环形泰勒虫喀什株裂殖体感染的淋巴细胞系(TaKashi),接种5.0×10^5 mL^-1的细胞,经72 h培养周期,细胞浓度可达到(2.8~3.0)×10^6mL^-1,细胞存活率维持在90%以上;细胞群体倍增时间为33.4 h。细胞周期分析显示,G1期占46.2%,G2期占10.4%,S1期占43.4%,TaKashi传50代后仍然保持着淋巴细胞的形态学特征。18S rRNA基因序列比对及抗原基因Tams1同源性分析显示,该虫株与我国不同省份流行的环形泰勒虫虫株的相似性在91.9%以上,并处于同一个分支。 展开更多
关键词 环形泰勒虫 细胞培养 牛淋巴细胞 细胞系
临床用细胞培养实验室质量控制 预览
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作者 孙巍群 陈锦阳 刘军权 《中华临床实验室管理电子杂志》 2019年第3期173-179,共7页
随着生物治疗技术发展,细胞制品也成为某些重大难治性疾病治疗的新亮点。由于细胞在临床应用之前须经实验室培养和扩增,每个相关环节都需要明确质量标准。本文根据细胞培养制剂产品特点,提出细胞培养实验室质量控制思路,从细胞生产质量... 随着生物治疗技术发展,细胞制品也成为某些重大难治性疾病治疗的新亮点。由于细胞在临床应用之前须经实验室培养和扩增,每个相关环节都需要明确质量标准。本文根据细胞培养制剂产品特点,提出细胞培养实验室质量控制思路,从细胞生产质量管理规范、细胞制剂产品生产用辅助材料、制备工艺与过程控制、细胞质量控制等方面系统阐述,通过不断完善的质量管理推进细胞产业有序健康发展。 展开更多
关键词 细胞制剂 质量研究 质量控制 细胞培养
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大面积脑梗塞患者自体神经干细胞的培养与鉴定
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作者 王佳 史铁钧 +4 位作者 赵全军 王涛 崔绍杰 任飞 杨凯 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期300-304,共5页
目的:通过改进原代培养方法,从大面积脑梗塞患者废弃脑组织中培养、传代和鉴定自体神经干细胞(NSCs),并进行诱导分化研究。方法:收集2例右侧大面积脑梗塞患者手术中废弃脑组织各1 g以上,按改良方法进行原代培养并传代,通过细胞免疫荧光... 目的:通过改进原代培养方法,从大面积脑梗塞患者废弃脑组织中培养、传代和鉴定自体神经干细胞(NSCs),并进行诱导分化研究。方法:收集2例右侧大面积脑梗塞患者手术中废弃脑组织各1 g以上,按改良方法进行原代培养并传代,通过细胞免疫荧光染色检测NSCs标志物巢蛋白(nestin)的表达。传代培养至7代时选取部分细胞进行诱导分化研究,通过细胞免疫荧光染色检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和微管蛋白(β-tubulin)的表达来评估NSCs分化情况。结果:培养3~7 d后,2例患者废弃脑组织中均可见干细胞球生长,nestin检测呈阳性表达。经传代培养至第10代后,仍可维持其神经干细胞特征,选取7代贴壁细胞经β-Tubulin及GFAP免疫荧光检测可见阳性表达。结论:成功从大面积脑梗塞患者前颞叶(邻近于海马区)废弃脑组织中分离培养获得自体NSCs,并可向神经元样细胞及星形胶质样细胞分化。 展开更多
关键词 神经干细胞 细胞培养 脑梗塞 脑卒中
仔猪神经干细胞体外培养及鉴定 预览
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作者 李倩 关伟军 +1 位作者 于沿泽 张明海 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期49-56,67共9页
由仔猪脑部海马体齿状回分离得到神经干细胞,利用无血清培养基添加特定生长因子方式培养;采用RT-PCR鉴定神经干细胞和诱导分化后细胞生物特性;利用免疫荧光化学技术检测克隆的细胞抗原和分化后特异性成熟神经细胞抗原表达。由海马体齿... 由仔猪脑部海马体齿状回分离得到神经干细胞,利用无血清培养基添加特定生长因子方式培养;采用RT-PCR鉴定神经干细胞和诱导分化后细胞生物特性;利用免疫荧光化学技术检测克隆的细胞抗原和分化后特异性成熟神经细胞抗原表达。由海马体齿状回分离的细胞群具有连续克隆能力;根据免疫荧光检测,脑神经干细胞表达巢蛋白、配对盒因子6和解整合素样金属蛋白酶10;体外培养下NSCs可被诱导分化为神经源性细胞,且表达微管相关蛋白2、胶质纤维酸性蛋白和髓鞘碱性蛋白。分离和培育NSCs细胞结果显示,其具有更新能力和分化为神经元和胶质细胞的潜能,可为干细胞移植提供基础数据。 展开更多
关键词 神经干细胞 细胞培养 分化潜能 再生医学 仔猪
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黄芪总苷对H2O2诱导的衰老心肌细胞氧化应激及PI3K/AKT通路的影响
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作者 沈莹 柳湘洁 +3 位作者 雷超 曾永孝 艾娟 谭婉燕 《广州中医药大学学报》 CAS 2019年第3期391-395,共5页
【目的】观察黄芪总苷对H2O2诱导的衰老心肌细胞氧化应激及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路的影响,探讨黄芪总苷对心肌细胞的保护作用。【方法】通过H2O2诱导大鼠心肌H9C2细胞,建立衰老心肌细胞模型。将造模后的细胞随机分... 【目的】观察黄芪总苷对H2O2诱导的衰老心肌细胞氧化应激及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路的影响,探讨黄芪总苷对心肌细胞的保护作用。【方法】通过H2O2诱导大鼠心肌H9C2细胞,建立衰老心肌细胞模型。将造模后的细胞随机分成模型对照组,黄芪总苷低、中、高剂量组(剂量分别为10、20、40 mg/L),另设空白对照组。黄芪总苷低、中、高剂量组细胞分别给予对应质量浓度处理48 h,空白对照组和模型对照组不加黄芪总苷处理。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力,羟胺法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸(TBA)检测丙二醛(MDA)含量,化学荧光法检测活性氧(ROS)含量,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测PI3K/AKT通路蛋白PI3K、AKT磷酸化水平。【结果】与空白对照组比较,模型对照组细胞存活率、SOD活性、p-PI3K/PI3K比值和p-AKT/AKT比值显著降低,MDA、ROS含量显著升高(P<0.05);黄芪总苷低、中、高剂量组对上述指标有均显著改善作用,并呈剂量依赖性。【结论】黄芪总苷可减缓H2O2诱导的心肌细胞衰老,其机制可能与减轻氧化应激反应、激活PI3K/AKT通路有关。 展开更多
关键词 黄芪总苷 衰老 氧化应激 磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B通路 细胞模型 细胞培养
小鼠子宫内膜间充质干细胞的分离、培养及鉴定 预览
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作者 李红霞 李瑞娇 +2 位作者 张汝月 张引红 郭兴萍 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第9期1287-1292,共6页
目的 建立一种分离、纯化、培养及鉴定小鼠子宫内膜间充质干细胞的方法。方法 根据不同来源间充质干细胞特性相似,用小鼠骨髓间充质干细胞富集培养液对C57BL/6J小鼠子宫细胞群进行间充质干细胞培养,经过传代达到较高的纯度。倒置显微镜... 目的 建立一种分离、纯化、培养及鉴定小鼠子宫内膜间充质干细胞的方法。方法 根据不同来源间充质干细胞特性相似,用小鼠骨髓间充质干细胞富集培养液对C57BL/6J小鼠子宫细胞群进行间充质干细胞培养,经过传代达到较高的纯度。倒置显微镜观察子宫内膜干细胞形状特点。流式细胞术分析相关表面标记物表达。CCK-8法进行增殖曲线绘制。新赛美无血清细胞冻存液重悬细胞后,- 80 ℃冻存,37 ℃水浴复苏,台盼蓝染色观察细胞冷冻复苏后情况。结果 获得的子宫内膜干细胞呈梭形,融合后极性排列,可见大小不等漩涡状集落出现。培养1-3 d细胞增殖缓慢,4-6 d进入对数生长期,6-7 d进入平台期。流式细胞术分析第5代细胞CD29、CD73、CD105阳性,CD45、CD117阴性。细胞冷冻复苏后存活率达到96%以上,生长状态良好,增殖能力强,与冻存前细胞活力无明显差异。结论 本实验成功分离、培养和鉴定小鼠子宫内膜干细胞。 展开更多
关键词 子宫内膜 间充质干细胞 细胞培养
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模式籼稻品种Kasalath转基因胚性悬浮细胞系的建立 预览
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作者 龙起樟 黄永兰 +5 位作者 唐秀英 王会民 芦明 袁林峰 蔡耀辉 万建林 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期13-18,共6页
Kasalath是一种公认的组培再生性优异的模式籼稻品种。为建立具有G418抗性的Kasalath悬浮细胞系,通过农杆菌转化法获得转入G418抗性基因和GUS报告基因的Kasalath愈伤组织,然后利用获得的胚性转基因愈伤在NBL培养基中进行初步悬浮培养,... Kasalath是一种公认的组培再生性优异的模式籼稻品种。为建立具有G418抗性的Kasalath悬浮细胞系,通过农杆菌转化法获得转入G418抗性基因和GUS报告基因的Kasalath愈伤组织,然后利用获得的胚性转基因愈伤在NBL培养基中进行初步悬浮培养,后转至AA培养基进行终培养,在继代过程中通过持续的小颗粒愈伤筛选最终建立了Kasalath转基因悬浮细胞系;本研究获得的悬浮细胞系分散性良好,增值快(10 d可增殖约3.8倍),而且可从悬浮细胞中分离到高活性的原生质体,分离效率可达6.3×10^7个原生质体每毫升自然沉降细胞。本研究展示了Kasalath是一种建立悬浮细胞系的优良材料,为进一步进行栽培稻和野生稻的原生质体融合提供依据,建立的悬浮细胞系亦可用于生理生化研究或供分离原生质体以进行蛋白质亚细胞定位等试验。 展开更多
关键词 籼稻 悬浮细胞系 原生质体 细胞培养 转基因
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谷氧还蛋白2对高氧诱导的人晶状体上皮细胞过度迁移的抑制作用 预览
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作者 宁小娜 严宏 +2 位作者 郭辰峻 刘富伟 董茜 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期245-251,共7页
目的研究高氧环境对人晶状体上皮细胞(HLECs)迁移能力的影响及谷氧还蛋白2(Grx2)对高氧诱导的HLECs迁移的抑制作用。方法将HLECs分为高氧模型组和常氧对照组,高氧模型组采用含氧体积分数80%的混合气体培养HLECs2d,构建体外高氧诱导的HL... 目的研究高氧环境对人晶状体上皮细胞(HLECs)迁移能力的影响及谷氧还蛋白2(Grx2)对高氧诱导的HLECs迁移的抑制作用。方法将HLECs分为高氧模型组和常氧对照组,高氧模型组采用含氧体积分数80%的混合气体培养HLECs2d,构建体外高氧诱导的HLECs氧化损伤模型,常氧对照组常氧条件下培养HLECs。利用细胞划痕试验观察各组细胞迁移情况;用鬼笔环肽染色法评估细胞骨架形态变化;采用实时荧光定量PCR法检测细胞中Grx2mRNA的表达变化。分别将高氧模型组和常氧对照组细胞再分为空质粒转染组和Grx2质粒转染组,通过转染不同质粒,观察不同转染组高氧模型细胞的迁移行为和骨架形态变化,并利用MitoSOX法流式细胞仪检测不同转染组细胞线粒体活性氧簇(ROS)含量;采用JC-1染色法测定不同转染组细胞线粒体膜电位的变化并用激光扫描共焦显微镜进行观察。结果常氧对照组和高氧模型组细胞培养过程中,生长状态良好。细胞划痕后24h和48h,高氧模型组划痕距离小于常氧对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);高氧模型组细胞周长长于常氧对照组,差异有统计学意义(t=-2.254,P<0.05)。细胞培养后2d,高氧模型组细胞中Grx2mRNA相对表达量为0.54±0.11,低于常氧对照组的1.00±0.00,差异有统计学意义(t=7.128,P<0.01)。Grx2质粒转染组细胞转染效率高于90%。高氧环境下,划痕后24h和48hGrx2质粒转染组细胞划痕距离宽于空质粒转染组,差异均有统计学意义(均P<0.05);Grx2质粒转染组细胞中Grx2mRNA相对表达量高于空质粒转染组,差异有统计学意义(P<0.01);Grx2质粒转染组细胞线粒体ROS平均相对荧光强度弱于空质粒转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。高氧条件下,Grx2质粒转染组细胞红/绿荧光强度比高于空质粒转染组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论Grx2可能通过对高氧下HLECs线粒体氧化应激的调控来抑制HLECs的过度迁移� 展开更多
关键词 晶状体上皮细胞 高氧 谷氧还蛋白2 细胞迁移 细胞培养
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国内建立的人肿瘤细胞系的身份认证问题及对策
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作者 卞晓翠 刘玉琴 +1 位作者 杨振丽 冯海凉 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期201-210,共10页
目的为国内建立的人肿瘤细胞系进行身份认证,确认这些细胞系使用的可靠性。方法收集、整理国内实验室建立的人肿瘤来源细胞系,提取细胞的基因组DNA,PCR扩增其中的多个短串联重复序列(STRs)位点后进行毛细管电泳,分析获得细胞的STR图谱... 目的为国内建立的人肿瘤细胞系进行身份认证,确认这些细胞系使用的可靠性。方法收集、整理国内实验室建立的人肿瘤来源细胞系,提取细胞的基因组DNA,PCR扩增其中的多个短串联重复序列(STRs)位点后进行毛细管电泳,分析获得细胞的STR图谱作为细胞系的DNA指纹,然后与原始组织或国际数据库中已有细胞的STR谱进行比对,通过匹配度的高低判断该细胞是否被其他细胞交叉污染。对怀疑He La细胞污染的肿瘤细胞,检测其基因组中是否有人乳头瘤病毒18型(HPV-18)病毒插入片段。对怀疑T细胞白血病细胞污染的,则检测T细胞的各种特性(表面标志),根据表面标志表达情况判断是否为错误细胞。结果本研究共收集了37种国内建立的肿瘤细胞系46个样品。本中心建立的6株细胞系均STR正确。其他单位建立的细胞系中有8株系正确,有23(62. 2%)株系认定为错误细胞,人宫颈癌细胞He La是主要污染源;另外发现有些国内自建的细胞系被人结直肠癌细胞HCT-8、宫颈鳞癌细胞Si Ha、T细胞白血病细胞CCRF-CEM及大鼠细胞污染。结论国内建立的肿瘤细胞很高比例地发生了细胞间的交叉污染,科研人员在实验前一定要首先进行细胞身份认定,或者从国家实验细胞资源共享服务平台选择细胞。另外,建立细胞系时保留原始组织用于后续细胞系的身份认证。 展开更多
关键词 短串联重复序列分型 交叉污染 特性鉴定 聚合酶链反应 肿瘤细胞 细胞培养
海马神经元细胞培养及神经源性中药保护作用的研究进展 预览
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作者 郝雨蒙 冯玛莉 《世界最新医学信息文摘(电子版)》 2019年第20期67-69,共3页
海马神经元细胞来源于哺乳动物大脑皮层的边缘部分-海马区,参与个体学习、记忆并与多种神经、精神系统疾病的发生密切相关,体外培养的海马神经元与在体海马神经元非常相似,具有多向形态发育;神经源性中药及其生物活性成分在体内和体外... 海马神经元细胞来源于哺乳动物大脑皮层的边缘部分-海马区,参与个体学习、记忆并与多种神经、精神系统疾病的发生密切相关,体外培养的海马神经元与在体海马神经元非常相似,具有多向形态发育;神经源性中药及其生物活性成分在体内和体外作用于多种信号通路而对神经系统产生保护作用日益引起关注。本文拟归纳、总结国内外新生大鼠海马神经元细胞的培养方法及对海马神经元具有显著的神经源性保护作用的中药,拟为研究神经、精神系统疾病提供理论支持。 展开更多
关键词 海马神经元细胞 细胞培养 神经源性中药 复方中药制剂
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IL-6对体外培养的牛眼小梁细胞中纤维连接蛋白的影响 预览
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作者 刘攀 孟杰 +1 位作者 刘玉震 王强 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2019年第6期911-915,共5页
目的:探讨不同浓度白细胞介素-6(IL-6)刺激下体外培养的牛眼小梁细胞中纤维连接蛋白的表达变化。方法:采用组织块培养法取新鲜牛眼的小梁网组织,提取并培养第3代牛眼小梁细胞,采用细胞形态学对细胞进行鉴定。经终浓度为0、0.1、0.5、1ng... 目的:探讨不同浓度白细胞介素-6(IL-6)刺激下体外培养的牛眼小梁细胞中纤维连接蛋白的表达变化。方法:采用组织块培养法取新鲜牛眼的小梁网组织,提取并培养第3代牛眼小梁细胞,采用细胞形态学对细胞进行鉴定。经终浓度为0、0.1、0.5、1ng/mL的IL-6药物刺激24h后,采用荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测各浓度IL-6刺激下牛眼小梁细胞中FNmRNA和蛋白的表达。结果:培养出的牛眼小梁细胞符合第3代牛眼小梁细胞形态特征。实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法显示,不同浓度IL-6刺激下的牛眼小梁细胞所产生的FNmRNA量分别为1.000±0.000、0.213±0.004、0.056±0.001、0.019±0.002,FN蛋白表达量分别为1.167±0.012、0.662±0.009、0.238±0.011、0.061±0.011,均呈下调趋势(rs=-0.713、-0.901,均P<0.05),4组间FNmRNA和蛋白表达均有差异(P<0.05)。结论:体外培养的牛眼小梁细胞在外源性IL-6刺激下影响FNmRNA和蛋白的表达,且IL-6浓度与蛋白表达呈负相关性,推测IL-6可能通过影响FN基因与蛋白的表达,进而改变小梁网组织结构。 展开更多
关键词 青光眼 细胞培养 小梁细胞 白细胞介素-6 纤维连接蛋白
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自噬在高糖条件下视网膜色素上皮细胞表达血管内皮生长因子促进RF/6A细胞血管生成中的作用 预览
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作者 李蓉 姚杨 +3 位作者 杜军辉 姚国敏 王小娣 张进 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第8期714-718,共5页
目的研究高糖条件下诱导的人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19)自噬对其表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),及恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移和管腔形成的影响。方法根据不同干预将ARPE-19细胞... 目的研究高糖条件下诱导的人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19)自噬对其表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),及恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移和管腔形成的影响。方法根据不同干预将ARPE-19细胞随机分为对照组、高糖组及3-甲基腺嘌呤(3-MA)+高糖组。对照组细胞在无糖DMEM培养基中常规培养24 h,高糖组细胞在DMEM培养基中加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理24 h,3-MA+高糖组细胞先用10 mmol·L^-1 3-MA处理24 h,然后更换培养基再加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理24 h。Western blot法检测细胞自噬标志性蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule-related protein 1 light chain 3,LC3)II型和I型的比值(LC3-II/LC3-I)、Beclin-1及细胞中自噬相关基因3(autophagy-related gene 3,Atg3)的蛋白表达。ELISA法检测ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达。比较三组ARPE-19细胞LC3-II/LC3-I、Beclin-1、Atg3及VEGF的蛋白表达量。然后将以上三组ARPE-19细胞上清液分别加入RF/6A细胞培养基中,将RF/6A细胞也按以上方法分组,分别采用Transwell法及Matrigel胶法检测并比较三组RF/6A细胞迁移数及细胞管腔形成数。结果对照组、高糖组和3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-II/LC3-I比值分别为0.405±0.095、0.932±0.024和0.635±0.048;Beclin-1蛋白相对表达量分别为0.205±0.035、0.590±0.120和0.425±0.082;Atg3蛋白相对表达量分别为0.277±0.035、0.539±0.071和0.389±0.019。ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达量三组分别为(44.03±9.08)ng·L^-1、(205.70±17.90)ng·L^-1和(112.52±21.06)ng·L^-1;RF/6A细胞迁移数三组分别为(125.60±6.35)个、(153.60±19.20)个和(67.40±7.95)个;细胞管腔形成数三组分别为(12.22±0.84)个、(18.44±1.68)个和(5.44±0.51)个;整体比较差异均有统计学意义(均为P<0.01)。与对照组相比,高糖组ARPE-19细胞的LC3-II/LC3-I比值、Beclin-1及Atg3蛋白相对表达量均明显增加(均为P<0.01),VEGF表� 展开更多
关键词 自噬 血管生成 高糖 血管内皮生长因子 视网膜新生血管 糖尿病视网膜病变 细胞培养
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