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细胞周期分析新方法 预览
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作者 方涵书 郎明非 孙晶 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1293-1301,共9页
细胞周期是细胞生命活动的基本过程,对细胞周期的分析能更深入地了解疾病发生的本质。目前,分析细胞周期的方法以流式细胞术为主,主要是通过检测细胞内DNA含量和细胞周期特异性蛋白而分析细胞周期。随着分析技术的发展,细胞周期分析在... 细胞周期是细胞生命活动的基本过程,对细胞周期的分析能更深入地了解疾病发生的本质。目前,分析细胞周期的方法以流式细胞术为主,主要是通过检测细胞内DNA含量和细胞周期特异性蛋白而分析细胞周期。随着分析技术的发展,细胞周期分析在图像分析、单细胞分析、减少样本量、提高通量等方面不断地提高和改进,近年出现了许多分析细胞周期的新方法,如成像流式细胞术、质谱流式细胞术、微流控技术、拉曼光谱法等,这些方法极大地丰富了细胞周期的检测方法,提高了细胞周期测量的精确度。本文对细胞周期的新分析方法进行了介绍,并对其发展方向进行了展望。 展开更多
关键词 细胞周期 细胞周期蛋白 DNA含量 微流控技术 流式细胞术 评述
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ERH基因对人膀胱癌T24和5637细胞迁移、侵袭的影响
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作者 庞昆 李美丽 +5 位作者 陈波 郝林 史振铎 周荣升 臧光辉 韩从辉 《中国医师杂志》 CAS 2019年第6期856-861,共6页
目的研究基本同源物增强子(ERH)对人膀胱癌T24和5637细胞迁移和侵袭作用的影响。方法将人膀胱癌T24和5637细胞的ERH敲除后,采用细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验、Transwell细胞侵袭实验验证其迁移和侵袭功能变化,Western blot检测... 目的研究基本同源物增强子(ERH)对人膀胱癌T24和5637细胞迁移和侵袭作用的影响。方法将人膀胱癌T24和5637细胞的ERH敲除后,采用细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验、Transwell细胞侵袭实验验证其迁移和侵袭功能变化,Western blot检测细胞迁移与侵袭相关蛋白的表达,并通过裸鼠尾静脉转移实验验证敲除ERH基因后在体内对膀胱癌细胞转移能力的影响。结果 (1)细胞划痕实验结果显示,敲除ERH基因后的人膀胱癌5637和T24细胞迁移率均明显降低(P <0. 05);(2)Transwell细胞迁移实验、Transwell细胞侵袭实验结果显示,敲除ERH基因后的人膀胱癌5637和T24细胞迁移细胞计数和侵袭细胞计数均明显减少(P <0. 05)。(3)Western blot实验结果显示,敲除ERH基因后的人膀胱癌5637细胞和T24细胞中E-Cadherin表达明显升高(P <0. 05),而Fibronectin、Twist、Vimentin、Snail2蛋白的表达明显降低(P <0. 05)。(4)裸鼠尾静脉转移实验显示,与ERH正常组相比,ERH敲除组小鼠肺转移灶明显减少。结论体外和体内实验均提示,ERH基因敲除影响人膀胱癌T24和5637细胞的迁移与侵袭。 展开更多
关键词 转录因子 细胞周期蛋白质类 膀胱肿瘤 细胞迁移分析 体外研究
视网膜母细胞瘤组织pRb与Cyclin D1蛋白表达及意义 预览
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作者 罗文 明媚 《青岛大学学报(医学版)》 CAS 2019年第5期514-517,522共5页
目的 探讨视网膜母细胞瘤组织细胞周期调节蛋白(Cyclin D1)及视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)的表达及其与病理学特征的相关性,为视网膜母细胞瘤临床诊治和预后判断提供依据。方法 选取视网膜母细胞瘤病人62例(70眼)手术切除的癌组织及其配对... 目的 探讨视网膜母细胞瘤组织细胞周期调节蛋白(Cyclin D1)及视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)的表达及其与病理学特征的相关性,为视网膜母细胞瘤临床诊治和预后判断提供依据。方法 选取视网膜母细胞瘤病人62例(70眼)手术切除的癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用Western blot及免疫组化方法检测两组Cyclin D1、pRb表达水平,分析两种蛋白表达与病人临床病理特征及预后的关系。结果 视网膜母细胞瘤肿瘤组织中Cyclin D1表达水平显著高于癌旁组织( t =-15.79, P <0.01),pRb表达水平显著低于癌旁组织( t =183.51, P <0.01);视网膜母细胞瘤肿瘤组织分化型Cyclin D1、pRb表达均高于未分化型( t =55.30、43.91, P <0.01);伴神经浸润和淋巴结转移的肿瘤组织中Cyclin D1表达高于未出现神经浸润和淋巴结转移者( t =71.03、49.44, P <0.01),pRb表达低于未出现神经浸润和淋巴结转移者( t =-151.80、-69.97, P <0.01)。结论 Cyclin D1与pRb水平均与视网膜母细胞瘤恶性程度有关,二者检测可为临床诊治和预后判断提供一定的依据。 展开更多
关键词 视网膜母细胞瘤 细胞周期蛋白质类 视网膜母细胞瘤蛋白质 病理学 临床
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不同年龄腰突出椎间盘组织CCNDBP1表达及意义 预览
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作者 慈延东 邱晨生 +3 位作者 吴晓淋 方晓露 相宏飞 陈伯华 《青岛大学学报(医学版)》 CAS 2019年第2期128-132,共5页
目的比较细胞周期D1型结合蛋白1(CCNDBP1)在不同年龄阶段腰椎间盘突出症病人椎间盘中的表达,探讨其与腰椎间盘退变的关系。方法收集不同年龄阶段腰椎间盘突出症病人共42例,其中30~岁、40~岁、50~岁年龄段病人各14例。取病人突出的椎间... 目的比较细胞周期D1型结合蛋白1(CCNDBP1)在不同年龄阶段腰椎间盘突出症病人椎间盘中的表达,探讨其与腰椎间盘退变的关系。方法收集不同年龄阶段腰椎间盘突出症病人共42例,其中30~岁、40~岁、50~岁年龄段病人各14例。取病人突出的椎间盘组织,苏木精-伊红染色观察其退变情况,采用免疫组化法、PCR法、Western印迹法从细胞、基因、蛋白水平检测CCNDBP1的表达量。结果苏木精-伊红染色结果显示,各个年龄阶段腰椎间盘突出症病人腰椎间盘组织均有不同程度退变,退变程度与年龄呈正相关。免疫组化法、PCR法和Western印迹法检测结果显示,腰椎间盘组织CCNDBP1的表达随病人年龄的增加而减少,其中30~岁年龄段病人CCNDBP1的表达显著高于40~岁年龄段病人,差异有统计学意义(F=15.42~168.30,t=3.06~6.78,P<0.05),40~岁年龄段病人CCNDBP1的表达显著高于50~岁年龄段病人,差异有统计学意义(t=2.58~9.91,P<0.05)。结论人腰椎间盘髓核组织退变过程中有CCNDBP1的参与,随着年龄的增长,CCNDBP1在退变腰椎间盘组织中的表达量逐渐减少。 展开更多
关键词 椎间盘移位 腰椎 细胞周期蛋白质类 年龄因素
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CDCA7L蛋白在脑胶质瘤中的表达及功能研究
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作者 陈婧 张克难 +1 位作者 王宽宇 赵征 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期1059-1064,共6页
目的分析细胞分裂周期相关7样蛋白(CDCA7L)在脑胶质瘤患者中的表达情况、临床意义和可能参与的生物学过程,并通过实验初步验证该蛋白在脑胶质瘤中的功能。方法回顾性纳入中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)mRNA芯片数据库中309例脑... 目的分析细胞分裂周期相关7样蛋白(CDCA7L)在脑胶质瘤患者中的表达情况、临床意义和可能参与的生物学过程,并通过实验初步验证该蛋白在脑胶质瘤中的功能。方法回顾性纳入中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)mRNA芯片数据库中309例脑胶质瘤患者的临床资料及mRNA芯片数据,分析CDCA7L蛋白的表达特征。同时以TCGARNA测序数据库中的胶质瘤数据作为独立验证数据集,采用t检验、方差分析和秩和检验分析CDCA7L基因的表达特征。利用Kaplan-Meier生存曲线和Log-rank检验评价CDCA7L蛋白对胶质瘤患者预后的作用。通过基因本体分析获得CDCA7L蛋白相关基因的功能和可能参与的信号通路。采用Transwell小室检测敲低CDCA7L蛋白表达对胶质瘤细胞株垂直迁移的影响。应用流式细胞术检测敲低CDCA7L蛋白对胶质瘤细胞株凋亡的作用。结果在世界卫生组织(WHO)II、Ⅲ和Ⅳ级脑胶质瘤中,GDCA7L的表达量随着病理级别的增加而逐渐升高[分别为0.053(0.051)、0.083(0.078)和0.133(0.152),均P〈0.05];CDCA7L在异柠檬酸脱氢酶(IDH)野生型脑胶质瘤中的表达水平高于突变型[分别为0.123(0.165)和0.068(0.068),P〈0.001]。在胶质瘤中CDCA7L蛋白高表达组患者的累积:_主存率明显低于低表达组(P〈0.001)。在胶质瘤细胞株中敲低CDCA7L抑制细胞的垂直迁移,增加了凋亡细胞的百分比(均P〈0.01)。结论CDCA7L蛋白可能与胶质瘤细胞的细胞周期、细胞分裂、DNA复制、DNA损伤修复和染色体分离等生物学过程和信号通路有关。CDCA7L蛋白可促进脑胶质瘤的发展和肿瘤细胞的迁移,抑制肿瘤细胞的凋亡,可作为患者预后判断的指标及潜在的治疗靶点。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 细胞周期蛋白质类 基因表达 预后 靶点治疗
长链非编码RNA NR_033474对C3H10T1/2间质干细胞增殖的影响 预览
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作者 潘亚琼 戴忠 +1 位作者 左长清 汪宗桂 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第5期766-772,共7页
背景:最近研究发现,长链非编码RNA可调控干细胞的增殖与分化,但关于长链非编码RNA NR_033474在干细胞增殖及细胞周期调控中的作用,目前尚不清楚。目的:通过在C3H10T1/2间质干细胞中过表达NR_033474,观察NR_033474对C3H10T1/2细胞增殖... 背景:最近研究发现,长链非编码RNA可调控干细胞的增殖与分化,但关于长链非编码RNA NR_033474在干细胞增殖及细胞周期调控中的作用,目前尚不清楚。目的:通过在C3H10T1/2间质干细胞中过表达NR_033474,观察NR_033474对C3H10T1/2细胞增殖和细胞周期的影响,进一步分析NR_033474影响间质干细胞C3H10T1/2增殖的可能作用机制。方法:通过慢病毒载体在C3H10T1/2细胞中过表达NR_033474,应用Real-time PCR检测其表达效率,以转染空载体慢病毒的C3H10T1/2细胞为对照,利用细胞计数法绘制生长曲线,观察过表达NR_033474后C3H10T1/2细胞的生长变化;PI染色流式细胞仪检测细胞周期改变;通过Western蛋白印迹法检测过表达NR_033474后,细胞周期相关蛋白(P53、Cyclin B1、CDK1、Cyclin D1)的表达。结果与结论:(1)与对照组比较,感染NR_033474慢病毒后的C3H10T1/2间质干细胞NR_033474表达上调约100倍(P〈0.01);(2)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2细胞增殖能力明显降低(P〈0.05);(3)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2间质干细胞阻滞于G2/M期;(4)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2间质干细胞Cyclin B1和CDK1蛋白表达下调,P53、Cyclin D1蛋白水平无明显变化;(5)结果表明,NR_033474可能通过下调Cyclin B1及CDK1蛋白表达水平,抑制C3H10T1/2间质干细胞的增殖生长能力,使细胞阻滞于G_2/M期。 展开更多
关键词 间质干细胞 细胞增殖 细胞周期 细胞周期蛋白质类 流式细胞术 组织工程 干细胞 分化 长链非编码RNA 慢病毒感染 国家自然科学基金
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胆囊癌组织CyclinD1和CDC25A基因表达及其临床病理意义 预览 被引量:2
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作者 张桂东 《齐鲁医学杂志》 2017年第1期31-32,37共3页
目的探讨细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和细胞分裂周期蛋白25A(CDC25A)mRNA在胆囊癌组织中的表达及其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链式反应方法测定44例胆囊癌以及35例慢性胆囊炎黏膜组织中CyclinD1、CDC25A mRNA的表达水平。结果... 目的探讨细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和细胞分裂周期蛋白25A(CDC25A)mRNA在胆囊癌组织中的表达及其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链式反应方法测定44例胆囊癌以及35例慢性胆囊炎黏膜组织中CyclinD1、CDC25A mRNA的表达水平。结果胆囊癌组织中CyclinD1、CDC25A mRNA表达量与慢性胆囊炎黏膜组织比较,差异均有显著性(t=5.84、11.44,P〈0.05);但胆囊癌组织中CyclinD1、CDC25A mRNA表达量与淋巴结转移无关。结论 CyclinD1、CDC25A mRNA的表达与胆囊癌的发病有关,但与病人预后无关。 展开更多
关键词 胆囊肿瘤 细胞周期蛋白D1 细胞周期蛋白质类 病理学 临床
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抗Thy1系膜增殖性肾炎大鼠模型中G0/G1期细胞周期蛋白表达变化 预览
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作者 陈大鹏 张铮 +3 位作者 杨悦 马也娉 卓莉 李文歌 《中日友好医院学报》 2016年第6期352-355,F0002,F0004共6页
目的:探讨抗Thy-1系膜增殖性肾炎大鼠模型中各病理时间点G0/G1期细胞周期蛋白变化。方法:利用OX-7杂交瘤细胞株产生抗Thy1抗体,纯化后经尾静脉注射Wistar大鼠建立抗Thy1系膜增殖性肾炎大鼠模型。用免疫组化方法,检测各病理时间点(第0... 目的:探讨抗Thy-1系膜增殖性肾炎大鼠模型中各病理时间点G0/G1期细胞周期蛋白变化。方法:利用OX-7杂交瘤细胞株产生抗Thy1抗体,纯化后经尾静脉注射Wistar大鼠建立抗Thy1系膜增殖性肾炎大鼠模型。用免疫组化方法,检测各病理时间点(第0、3、5、7、10、14d)Ki-67及细胞周期蛋白cyclin D1的表达变化趋势;Western Blot检测各实验组时间点G0/G1期细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin E、CDK2、CDK4、CDK6、p27kip1表达变化趋势。结果:PAS染色显示各时间点Ki-67表达与病理变化正相关。与对照组比较,病理组d7Ki-67表达量显著增加(P〈0.05),并随病理转归而下降。细胞周期蛋白cyclin D1的表达与Ki-67趋势相同,在病理最终的d7表达量最高(P〈0.05),随病理转归而回到正常。Western Blot检测病理组细胞周期相关蛋白,与对照组相比,病理组d7,cyclin D1、cyclin E、CDK2、CDK4、CDK6的表达最高(P〈0.05),p27^kip1表达量最低(P〈0.05)。结论:在抗Thy-1系膜增殖性肾炎大鼠模型中证实,G0/G1期细胞周期蛋白与病理变化正相关。 展开更多
关键词 系膜增殖性肾炎 细胞周期 细胞周期蛋白 KI-67
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mTOR—Cdc42信号通路对慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响 被引量:4
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作者 王云洁 刘晓菊 +2 位作者 党苗苗 曾晓丽 包海荣 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第46期3745-3750,共6页
目的探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)信号通路对慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)小鼠肺泡巨噬细胞(AM)吞噬功能的影响。方法40只小鼠按随机数字表法随机分为对照组、模型组各20只。模型组采用烟草烟雾暴露法... 目的探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)信号通路对慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)小鼠肺泡巨噬细胞(AM)吞噬功能的影响。方法40只小鼠按随机数字表法随机分为对照组、模型组各20只。模型组采用烟草烟雾暴露法建立慢阻肺模型;不连续密度梯度离心法分离AM。对照组AM分为健康对照组、雷帕霉素对照组、模型组AM分为慢阻肺组、雷帕霉素慢阻肺组,其中雷帕霉素对照组和雷帕霉素慢阻肺组AM培养基中加入终浓度10 nmol/L雷帕霉素干预24 h;流式细胞术测AM吞噬荧光素标记大肠杆菌的能力;实时荧光定量PCR及Western印迹法测mRNA和蛋白;小G蛋白活性试剂盒测Cdc42活性;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架。结果慢阻肺组平均荧光强度(MFI)和吞噬荧光素标记大肠杆菌阳性细胞百分比(吞噬%)均显著低于健康对照组[4 060±590比9 190±988和(28.65±1.26)%比(67.50±4.56)%];雷帕霉素慢阻肺组[4 856±762、(38.31±1.71)%]均显著高于慢阻肺组(均P〈0.05)。慢阻肺组mTOR mRNA、蛋白及活性(p-mTOR)均显著高于健康对照组(2.62±0.46、1.30±0.52、1.46±0.43比1.00±0.00、0.48±0.27、0.58±0.26);雷帕霉素慢阻肺组(1.40±0.36、0.90±0.66、0.92±0.28)均显著低于慢阻肺组(均P〈0.05)。慢阻肺组Cdc42 mRNA、蛋白及活性均显著高于健康对照组(2.56±0.50、1.61±0.37、0.46±0.09比1.00±0.00、0.67±0.22、0.30±0.07);雷帕霉素慢阻肺组(1.38±0.34、0.91±0.48、0.36±0.06)均显著低于慢阻肺组(均P〈0.01)。健康对照组及雷帕霉素对照组AM细胞骨架未见丝状伪足;慢阻肺组可见丝状伪足伸出杂乱;雷帕霉素慢阻肺组可见长伪足。基础状态、雷帕霉素干预后,mTOR和Cdc42 mRNA、蛋白及活性均与MFI呈负相关。结论mTOR-Cdc42信号通路活化与慢阻肺小鼠AM细胞吞噬功能低下有关,其可能参 展开更多
关键词 肺疾病 慢性阻塞性 巨噬细胞 肺泡 他克莫司结合蛋白质类 细胞周期蛋白质类 吞噬作用
细胞分裂周期蛋白6在肝细胞癌中的表达及其临床意义 被引量:2
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作者 吕波 李明杰 +1 位作者 郑小林 蔡常春 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1017-1022,共6页
目的:探讨细胞分裂周期蛋白6(CDC6)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床意义。方法:分别用qRT-PCR、Western blot和免疫组化法检测85例手术切除的HCC及对应癌旁组织标本中CDC6mRNA及蛋白的表达,分析CDC6的表达与HCC患者临床病理因... 目的:探讨细胞分裂周期蛋白6(CDC6)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床意义。方法:分别用qRT-PCR、Western blot和免疫组化法检测85例手术切除的HCC及对应癌旁组织标本中CDC6mRNA及蛋白的表达,分析CDC6的表达与HCC患者临床病理因素及预后关系。结果:HCC组织中CDC6的mRNA与蛋白表达水平均高于对应癌旁组织,qRT-PCR结果定量分析显示差异有统计学意义(P〈0.05);CDC6表达与肿瘤大小、临床分期、分化程度及卫星结节有关(均P〈0.05);CDC6高表达的患者无瘤生存时间和总生存时间均低于CDC6低表达患者(均P〈0.05);单因素与多因素分析显示,CDC6是影响HCC患者无瘤生存率(HR=1.089,95%CI=0.986~1.186, P=0.033)及总生存率(HR=2.441,95%CI=1.128~3.652,P=0.012)的独立危险因子。结论:CDC6在HCC组织中高表达并与恶性临床病理特征及不良预后密切相关,CDC6可能参与HCC发生及进展,并可作为判断肿瘤复发及预后评价的重要指标。 展开更多
关键词 肝细胞 细胞分裂周期蛋白质类 预后
TRIB3基因rs2295490多态性与冠心病血脂异常的相关性研究 被引量:2
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作者 张继旺 唐治贵 袁永强 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期273-276,共4页
目的探讨TRIB3基因rs2295490多态性与冠心病(CHD)血脂异常的关系。方法病例对照研究。收集2013年10月至2014年10月于重庆医科大学附属永川医院心内科住院的220例冠心病患者作为观察组(平均年龄60.15岁,男性150例,女性70例),同... 目的探讨TRIB3基因rs2295490多态性与冠心病(CHD)血脂异常的关系。方法病例对照研究。收集2013年10月至2014年10月于重庆医科大学附属永川医院心内科住院的220例冠心病患者作为观察组(平均年龄60.15岁,男性150例,女性70例),同时收集151名健康体检者做为对照组(平均年龄59.22岁,男性102名,女性49名),利用PCR和基因测序技术检测两组的TRIB3基因rs2295490多态性,同时对患者的生化指标如葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)进行检测,分析TRIB3基因rs2295490多态性在各组中的分布及各组不同基因型与生化指标的关系。各组间基因型和等位基因频率比较采用X。检验,生化指标间的比较采用独立样本t检验。结果TRIB3基因rs2295490多态性在健康对照组中的分布是AA基因型频率为57%,AG为35%,GG为8%,A、G等位基因频率分别为75%、25%;CHD组AA、AG、GG基因型频率分别为50%、41%、9%,A、G等位基因频率分别是71%、29%。健康对照组和CHD组间基因型和等位基因分布频率差异没有统计学意义(x2=1.74,P=0.42;X2=1.26,P=0.243);CHD组AA基因型携带者的HDL—C水平明显高于AG+GG基因型(t=-9.78,P=0.00),TG和LDL-C水平明显低于AG+GG基因型(t=2.59,P=0.01;t=6.15,P=0.00)。结论TRIB3基因rs2295490多态性与CHD可能无相关性,但G等位基因可能与CHD患者的血脂代谢紊乱有关。 展开更多
关键词 冠心病 血脂异常 阻遏蛋白质类 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 细胞周期蛋白质类 多态现象 遗传
沉默Cdc42对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响 被引量:2
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作者 解英俊 鄂长勇 +4 位作者 盛基尧 杨永生 李巍 李晓萌 张学文 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期957-962,共6页
目的探讨Cdc42-shRNA重组质粒对肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为的影响。方法Cdc42-shRNA重组质粒及空载体转染人肝癌细胞株SMMC-7721,建立Cdc42-shRNA组和对照组U6-control。采用MTT法检测细胞增殖情况,划痕愈合... 目的探讨Cdc42-shRNA重组质粒对肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为的影响。方法Cdc42-shRNA重组质粒及空载体转染人肝癌细胞株SMMC-7721,建立Cdc42-shRNA组和对照组U6-control。采用MTT法检测细胞增殖情况,划痕愈合实验测定细胞迁移能力,Transwell法观察细胞的侵袭能力,免疫印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和甲胎蛋白(AFP)表达水平。建立裸鼠皮下人肝癌移植瘤模型,观察裸鼠成瘤情况,免疫组化法检测裸鼠瘤块中Cdc42的表达情况。组间数据两两比较采用t检验。结果MTr实验结果显示,Cdc42-shRNA2组、U6-control组和SMMC7721组细胞倍增时间分别为42.7、34.9、35.1h;划痕实验结果显示,转染Cdc42-shRNA2组和U6-control组细胞36h相对迁移距离分别为(47.1±4.1)%和(86.6±5.3)%,差异有统计学意义(t=-10.21,P〈0.05);Transwell法检测结果显示,Cdc42-shRNA2组24h穿膜细胞数为(18.2±2.1)个,低于U6-control组的(41.0±3.5)个(t=-9.67,P〈0.05);与对照组相比,Cdc42-shRNA组细胞的AFP和PCNA的蛋白表达水平降低;裸鼠成瘤实验结果显示,接种28d后Cdc42-shRNA2组平均肿瘤重量分别为(335.1±178.2)nag,低于SMMC-7721组的(925.3±241.4)mg和U6-control组的(910.5±225.6)mg(t=-4.47、-4.39,P〈0.05)。免疫组化结果显示Cdc42蛋白在肝癌细胞质内广泛表达。其中SMMC7721组及U6-control组呈强阳性表达;sMMC7721/cdc42-shRNA2组呈弱阳性表达。结论沉默Cde42表达,可以降低人肝癌细胞种植瘤的增殖、迁移及侵袭能力,抑制肿瘤细胞生长。 展开更多
关键词 肝肿瘤 细胞周期蛋白质类 RNA干扰 短发夹RNA
LPS通过调节Cdc2蛋白表达诱导HeLa细胞凋亡的研究 预览
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作者 赵丽君 周辉 赵明 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第16期2012-2015,共4页
目的:构建细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)真核表达载体,并在 P16基因缺失的肿瘤细胞 HeLa细胞中表达,利用 LPS诱导细胞凋亡,并探讨 LPS诱导 HeLa细胞凋亡的机制。方法从人 U2OS细胞中提取 RNA,反转录克隆 Cdc2 cDNA片段,利用Gateway... 目的:构建细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)真核表达载体,并在 P16基因缺失的肿瘤细胞 HeLa细胞中表达,利用 LPS诱导细胞凋亡,并探讨 LPS诱导 HeLa细胞凋亡的机制。方法从人 U2OS细胞中提取 RNA,反转录克隆 Cdc2 cDNA片段,利用Gateway技术构建 pDEST27-Cdc2质粒。将 pDEST27-Cdc2质粒瞬时转染人宫颈癌 HeLa细胞,免疫印迹分析 Cdc2的表达情况,并用 LPS刺激,观察其对 LPS引起的细胞凋亡和细胞周期的影响。结果成功构建 pDEST27-Cdc2质粒,质粒酶切及测序结果完全正确。LPS刺激 HeLa细胞24 h后,流式细胞仪检测发现大量细胞凋亡,而转染pDEST27-Cdc2质粒的细胞凋亡率明显降低,提示Cdc2的重要作用。免疫印迹分析研究发现,LPS诱导 HeLa细胞 Cdc2蛋白水平下降,进一步研究发现 LPS诱导 HeLa细胞 G2/M期阻滞,过表达Cdc2可以降低 G2期细胞阻滞的发生。结论 LPS诱导 HeLa细胞凋亡是由于其导致 Cdc2表达下降,细胞分裂停止在 G2/M期,过表达Cdc2可以阻止死亡信号诱导的细胞凋亡。 展开更多
关键词 细胞周期蛋白质类 周期素依赖性激酶1 细胞凋亡 细胞周期
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人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2放射生物学特性及MRN复合体表达的研究 被引量:2
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作者 黄健聪 张革化 +5 位作者 黎景佳 严睿成 吴喜福 郑坚 吕明月 谢逢安 《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期195-199,共5页
目的探讨人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的放射生物学特性及其MRN(Mrell一Rad50.Nbs1)复合体放射线照射前后的表达改变。方法电子直线加速器照射对数生长期CNE1和CNE2细胞,克隆形成实验和四甲基偶氮唑蓝(MTI")法绘制细胞增殖曲线了解... 目的探讨人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的放射生物学特性及其MRN(Mrell一Rad50.Nbs1)复合体放射线照射前后的表达改变。方法电子直线加速器照射对数生长期CNE1和CNE2细胞,克隆形成实验和四甲基偶氮唑蓝(MTI")法绘制细胞增殖曲线了解两株细胞的放射生物学特性;免疫印迹实验检测两株细胞MRN复合体天然表达及放射线照射后表达情况。结果CNE1细胞株的2Gy照射后存活分数(survival fraction at2Gy,SF2)、准阈剂量(quasi—threshold dose,Dq)和平均致死剂量(rtlean lethal dose,Do)分别为0.56、1.449Cy和1.480Gy;CNE2细胞株的SF2、Dq和Do分别为0.44,0.776Gy和1.685Gy。4Gy放射线照射后两株细胞增殖曲线与对照组相比差异有统计学意义(F=881.70,F=858.18,P值均〈0.05),至第6天时CNE1存活分数为0.59,CNE2为0.79。Westernblot法显示两株细胞均天然表达MRN复合体3个组分(Mrell,Rad50,Nbs1);4Gy放射线照射后,CNE1细胞Rad50蛋白表达上调(t=8.13,P〈0.05),CNE2细胞Mrell、Rad50和Nbs1蛋白表达均上调(t值分别为5.54,9.49和13.08,P值均〈0.05)。结论CNE1和CNE2细胞株均对放射线照射总体敏感,但本株CNE2中可能存在对放射线照射抵抗的亚群;CNE1和CNE2细胞均天然表达MRN复合体,放射线照射后,两株细胞均上调MRN复合体组分的表达进行损伤修复。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 细胞系 肿瘤 辐射效应 辐射耐受性 DNA结合蛋白质类 DNA修复酶类 核蛋白质类 细胞周期蛋白质类
泡球蚴感染对宿主肝细胞增殖影响的初步研究 被引量:2
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作者 张传山 王俊华 +3 位作者 吕国栋 李亮 温浩 林仁勇 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期228-233,共6页
目的探讨泡球蚴感染对宿主肝细胞增殖和细胞周期的影响。方法8~10周龄雌陛BALB/c小鼠随机分为实验组和假手术组。分别于感染后2、8、30、印、90d采集小鼠肝脏标本。观察小鼠肝脏病理改变。检测泡球蚴感染不同阶段的增殖细胞核抗原(P... 目的探讨泡球蚴感染对宿主肝细胞增殖和细胞周期的影响。方法8~10周龄雌陛BALB/c小鼠随机分为实验组和假手术组。分别于感染后2、8、30、印、90d采集小鼠肝脏标本。观察小鼠肝脏病理改变。检测泡球蚴感染不同阶段的增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白(cycUns)表达的动态变化及其定位。组间数据比较采用t检验。结果随着泡球蚴持续感染,实验组病灶与肝细胞交界区出现炎性细胞浸润、脂肪变性和纤维结缔组织增生等病理变化,感染早期(2、8、30d)病灶周围肝细胞存在细胞核增大、双核或多核细胞增多等现象。感染30、60、90d,实验组PCNA表达呈上升趋势,阳性率明显高于假手术组(7.01%±1.89%与1.03%±0.52%、8.41%±2.80%与0.93%土0.31%、13.40%士4.43%与1.07%士0.940/0,t值分别为-6.817,-5.931,-6.102,P值均〈0.05)。感染30d和60d时,实验组cyclinD1表达上升,阳性率明显高于假手术组(6.73%±2.52%与0.48%土0.43%、8.22%土3.09%与0.55%±0.34%,f值分别为-5.479,-5.504,P值均〈0.05);感染90d时,cyclinD1呈下降的趋势(从“+++”降至“+”)。感染30、60、90d时,实验组cyclinA阳性率明显高于假手术组(7.75%±3.05%与0.69%±0.360/0、3.42%±1.80%与1.14%±0.42%、3.03%士1.50%与0.69%±0.31%,t值分别为-5.131,-2.774,-3.415,P值均〈0.05)。感染2、8、30d时,实验组cyclinB1表达呈上升趋势(从“+”升至“++”),感染60、90d时,cyclinB1表达呈下降趋势(从“++”降至“+”)。结论体内泡球蚴感染促进宿主肝细胞的增殖和抗凋亡,并对其细胞周期产生影响。 展开更多
关键词 肝肿大 多房棘球蚴 泡型包虫病 细胞周期 细胞周期蛋白质类
煤焦沥青烟提取物致BEAS-2B恶性转化细胞中心体及其调控蛋白的变化
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作者 李智涛 冯艳铭 +6 位作者 王威 燕贞 王丽霞 祝寒松 赵勇 吴拥军 吴逸明 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期661-666,共6页
目的 分析煤焦沥青烟提取物诱导人支气管上皮细胞BEAS-2B恶变过程中细胞内中心体及其调控蛋白的变化,探讨中心体在煤焦沥青烟提取物致肺癌中的作用及机制.方法 用中温煤焦沥青烟提取物作为诱导剂,建立永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B的... 目的 分析煤焦沥青烟提取物诱导人支气管上皮细胞BEAS-2B恶变过程中细胞内中心体及其调控蛋白的变化,探讨中心体在煤焦沥青烟提取物致肺癌中的作用及机制.方法 用中温煤焦沥青烟提取物作为诱导剂,建立永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B的恶性转化模型,作为煤焦沥青烟提取物染毒组(煤焦沥青组),设溶剂对照组和正常对照组平行传代培养,用细胞爬片间接免疫荧光法检测中心体改变,用实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测相关基因的mRNA表达;细胞爬片免疫组化半定量法检测相关蛋白表达.结果 煤焦沥青组第20代细胞中心体总异常率为6.56%±1.01%,明显高于正常对照组(3.40%±0.86%)和溶剂对照组(3.14%±0.59%),差异有统计学意义(P<0.05).与正常对照组(4.34%±1.04%)和溶剂对照组(4.33%±1.20%)比较,煤焦沥青组第30代细胞中心体总异常比例(22.39%±9.5%)明显增大,差异有统计学意义(P<0.05).煤焦沥青组第20、30代细胞的P53、P21基因和蛋白表达明显降低,Cyclin E基因和蛋白表达明显升高,与正常对照组相和溶剂对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 在煤焦沥青烟提取物诱导BEAS-2B细胞恶性转化过程中,中心体异常出现在细胞恶性改变前.中心体异常可能是通过P53/P2 1/CyclinE通路异常而引起. 展开更多
关键词 煤焦沥青 细胞转化 肿瘤 中心体 细胞周期蛋白质类
c-Src regulates cell cycle proteins expression through protein kinase B/glycogen synthase kinase 3 beta and extracellular signal-regulated kinases 1/2 pathways in MCF-7 cells
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作者 Xiang Liu Liying Du Renqing Feng 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2013年第7期586-592,共7页
我们表明了禁止的那 c-Src 抑制对在人的乳癌房间的间充质的转变上皮。这里,我们用 siRNAs 和小分子禁止者 4-amino-5-(4-chlorophenyl ) 在房间周期前进上调查了 c-Src 的角色 -7-(t-butyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidine (PP2 ) 。西方... 我们表明了禁止的那 c-Src 抑制对在人的乳癌房间的间充质的转变上皮。这里,我们用 siRNAs 和小分子禁止者 4-amino-5-(4-chlorophenyl ) 在房间周期前进上调查了 c-Src 的角色 -7-(t-butyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidine (PP2 ) 。西方的污点分析由 PP2 在 c-Src 抑制以后表明了 cyclin D1 和 cyclin E 的下面规定和 p27 Kip1 的起来规定。房间的孵化显著地面对 PP2 堵住了细胞外的调整信号的 kinases 的 phosphorylation 1/2 (ERK1/2 ) ,蛋白质 kinase B (AKT ) ,和肝糖 synthase kinase 3 贝它(GSK3 ) 。MEK1/2/ERK1/2 和 phosphatidylinositide 3-kinase/AKT 小径的特定的药理学禁止者被用来表明在信号串联和房间周期蛋白质表示之间的关系。cyclin D1 和 cyclin E 的表示在 ERK1/2 或 AKT 活动的抑制以后被减少,而 p27 Kip1 表示被增加。另外,由 siRNAs 的 c-Src 击倒减少的房间增长和 ERK1/2, AKT,和 GSK3 的 phosphorylation。在由 siRNAs 的 c-Src 弄空以后,我们观察了 p27 Kip1 的 cyclin D1 和 cyclin E,和起来规定的重要下面规定。这些结果由 PP2 建议那 c-Src 抑制或 siRNAs 可以通过 AKT/GSK3 和 ERK1/2 小径调整房间周期的前进。 展开更多
关键词 细胞外信号调节激酶 细胞周期蛋白D1 MCF-7细胞 蛋白激酶B 蛋白表达 通路 合酶 糖原
表达大鼠Cdh1基因的重组慢病毒载体的构建及鉴定
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作者 邱瑾 姚文龙 +1 位作者 钱巍 张传汉 《国际麻醉学与复苏杂志》 CAS 2012年第3期 182-185,共4页
目的构建表达大鼠Cdh1基因的重组慢病毒载体。方法根据大鼠Cdh1基因的核苷酸序列,合成目的基因片段并亚克隆到慢病毒表达载体pGC-FU的AgeI酶切位点间,命名为pGC-FU-Cdh1。对pGC-FU-Cdh1进行PCR扩增及测序鉴定。将293T细胞按完全随机... 目的构建表达大鼠Cdh1基因的重组慢病毒载体。方法根据大鼠Cdh1基因的核苷酸序列,合成目的基因片段并亚克隆到慢病毒表达载体pGC-FU的AgeI酶切位点间,命名为pGC-FU-Cdh1。对pGC-FU-Cdh1进行PCR扩增及测序鉴定。将293T细胞按完全随机法分为实验组(每组3只)及对照组(每组3只),分别将pGC-FU-Cdh1及空质粒pGC-FU以脂质体法转染至293T细胞,倒置荧光显微镜观察后,Western blot法检测Cdh1-GFP的表达情况,慢病毒载体LV-Cdh1的包装浓缩及滴度测定。结果重组慢病毒表达载体pGC-FU-Cdh1经PCR扩增鉴定及测序鉴定均显示有特异性基因片断,证明大鼠Cdh1基因正向插入慢病毒表达载体pGC-FU中;转染293T细胞后,Westernblot法检测到实验组有外源性融合蛋白Cdh1-GFP的表达(每组3只),对照组无Cdh1-GFP的表达(n=0)(P=0.014);慢病毒载体LV-Cdh1包装浓缩后,Reahime PCR法测定滴度为2E+8TU/ml。结论成功构建表达大鼠Cdh1基因的重组质粒pGC-FU-Cdh1,并包装为慢病毒,为进一步研究Cdh1功能及基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 细胞周期蛋白 APC-Cdh1 慢病毒 转基因技术
乙型肝炎病毒Ⅹ蛋白对原代小鼠肝细胞周期的影响 被引量:2
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作者 蔡园 何松 +2 位作者 罗娜 罗莉 龚倩 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期 211-215,共5页
目的探讨HBV复制过程中HBx蛋白对原代小鼠肝细胞周期的影响。方法采用原代小鼠肝细胞为研究系统,用野生型HBV质粒(pHBV)和HBx蛋白表达缺失的HBV质粒(pHBV△X)分别转染细胞。Westernblot检测细胞周期蛋白cyclinD1、cyclin E、cyclin... 目的探讨HBV复制过程中HBx蛋白对原代小鼠肝细胞周期的影响。方法采用原代小鼠肝细胞为研究系统,用野生型HBV质粒(pHBV)和HBx蛋白表达缺失的HBV质粒(pHBV△X)分别转染细胞。Westernblot检测细胞周期蛋白cyclinD1、cyclin E、cyclinA及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p16(p16)、p21的表达水平l实时荧光定量PCR和Southernblot检测HBVDNA复制水平。两组之间比较用两样本均数f检验,多样本均数间的比较用方差分析及q检验。结果新分离肝细胞和原代培养24、48、72h肝细胞的细胞周期蛋白表达水平无明显差异;转染48h后,pHBV组细胞与pHBV△X组细胞周期蛋白条带灰度值相比,前者cyclinD1、p21、cyclinE表达量较高,p16的表达量较低,统计量t值分别为15.713,22.897,14.680,-19.584,P值均〈0.05。培养72h后提取HBVDNA,Southernblot检测HBVDNA复制中间体松散环状DNA、双链线性DNA、单链DNA的水平,经条带灰度扫描,pHBV组的水平(分别为3288.336±448.011、6458.318±182.163、2760.613±393.561)明显高于pHBV△X组(分别为515.721±62.530、2122.228±28.347、1632.013±207.021)及空白对照组,P值均〈0.05 实时荧光定量PCR检测HBVDNA复制水平,pHBV组【每个细胞(987.50±47.80)拷贝】也明显高于pHBVAX组【每个细胞(303.67±33.94)拷贝】,t=20.203,P〈0.05。结论HBx蛋白能通过调节细胞周期中各蛋白的表达,使细胞由静止期(G0)进入DNA合成前期(G1)并停滞于G1期,从而促进HBV的复制。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 转染 小鼠 肝细胞 细胞周期蛋白质类 HBX蛋白
骨髓间充质干细胞体外分化过程中细胞周期蛋白的表达变化 被引量:3
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作者 吕翠 付文玉 +3 位作者 刘倩 潘顺 季泰令 曾现伟 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2012年第1期 5-7,共3页
目的:研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外定向分化为多巴胺(DA)能神经元过程中细胞周期相关蛋白的表达变化。方法:体外分离、扩增和鉴定大鼠骨髓MSCs。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h后,用1μmoL/L全反式维甲酸(ATR... 目的:研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外定向分化为多巴胺(DA)能神经元过程中细胞周期相关蛋白的表达变化。方法:体外分离、扩增和鉴定大鼠骨髓MSCs。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h后,用1μmoL/L全反式维甲酸(ATRA)和50ng/mlGDNF联合诱导6d,检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、酪氨酸羟化酶(TH)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK2)、细胞周期蛋白(Cyclin)B1的表达。结果:诱导后大鼠骨髓MSCs能分化为具有典型神经元形态的细胞,大鼠MSCs经诱导后PCNA、CDK2、CyclinB1的表达均较对照组明显减弱,Bcl-2表达与对照组无明显差别。结论:骨髓间充质干细胞体外开始分化后细胞增殖力下降。 展开更多
关键词 间充质干细胞 多巴胺能神经元 分化 细胞周期相关蛋白 大鼠
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