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丹酚酸A激活AKT/mTOR/4EBP1通路缓解脂多糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡和氧化应激 认领
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作者 崔勤涛 王俊华 +3 位作者 刘晓晨 王学惠 马海英 苏国宝 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2020年第1期16-23,共8页
目的探究丹酚酸A(Sal A)对脂多糖(LPS)诱导的氧化应激性损伤H9c2心肌细胞增殖、凋亡,以及蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/起始因子4E结合蛋白(4EBP1)通路相关蛋白表达的影响。方法用LPS诱导制备H9c2心肌细胞氧化应激性损... 目的探究丹酚酸A(Sal A)对脂多糖(LPS)诱导的氧化应激性损伤H9c2心肌细胞增殖、凋亡,以及蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/起始因子4E结合蛋白(4EBP1)通路相关蛋白表达的影响。方法用LPS诱导制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,分别用含Sal A 5,10和20 mg·L^-1的DMEM培养基培养细胞24 h,加LPS 1 mg·L^-1继续孵育24 h。用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色观察H9c2心肌细胞存活;采用流式细胞术检测H9c2心肌细胞凋亡和线粒体膜电位;用试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量;Western印迹法检测胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶9、存活蛋白、Bax/Bcl-2,AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、mTOR、p-mTOR、4EBP1和p-4EBP1蛋白表达水平。结果与细胞对照组比较,模型组EdU红色标记的细胞减少(P<0.05);与模型组比较,Sal A 5,10和20 mg·L^-1处理组EdU红色标记的细胞增多(P<0.05)。Sal A能降低培养液中LDH活性及细胞内MDA和GSH含量,增加胞内SOD活性(P<0.05),减少心肌细胞的凋亡率(P<0.05),降低心肌细胞线粒体膜电位的下降速度(P<0.05)。Sal A 10和20 mg·L^-1处理后,活化胱天蛋白酶3、活化胱天蛋白酶9和Bax/Bcl-2蛋白水平显著下调(P<0.05),存活蛋白水平显著上调(P<0.05);与细胞对照组比较,模型组AKT/mTOR/4EBP1磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,Sal A 10和20 mg·L^-1组AKT和mTOR磷酸化水平均显著升高(P<0.05)。结论Sal A通过激活AKT/mTOR/4EBP1通路、减少心肌细胞凋亡并降低心肌细胞线粒体膜电位的下降速度,减缓了LPS诱导的H9c2心肌细胞凋亡和氧化应激,表明Sal A对LPS造成的氧化应激损伤心肌细胞具有保护作用。 展开更多
关键词 丹酚酸A 蛋白激酶B 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 起始因子4E结合蛋白 H9C2 细胞凋亡 氧化应激
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下调miRNA-99b表达对脑胶质瘤细胞侵袭及mTOR/4E-BP1信号通路调控的影响 认领 被引量:1
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作者 汲乾坤 任珂 +4 位作者 赵建华 尹志杰 马鹏举 刘瑞华 金保哲 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期886-891,共6页
目的探讨下调微小RNA(miRNA)-99b表达对脑胶质瘤细胞侵袭的影响及其作用机制。方法体外常规培养脑胶质瘤U251细胞。(1)将U251细胞分为空白对照组、无义序列对照组和miRNA.99b抑制物组,后2组分别转染无义序列和miRNA-99b抑制物,... 目的探讨下调微小RNA(miRNA)-99b表达对脑胶质瘤细胞侵袭的影响及其作用机制。方法体外常规培养脑胶质瘤U251细胞。(1)将U251细胞分为空白对照组、无义序列对照组和miRNA.99b抑制物组,后2组分别转染无义序列和miRNA-99b抑制物,空白对照组不做任何处理。采用RT-PCR检测U251细胞中miRNA-99b、哺乳动物雷帕霉素靶分子(mTOR)mRNA的表达,采用Westernblotting检测U251细胞中mTOR、真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)及磷酸化(p)-4E-BP1蛋白的表达,采用Transwell侵袭实验检测U251细胞的侵袭能力。(2)将U251细胞分为无义序列对照组、mTORsiRNA组,分别转染无义序列和mTORsiRNA。采用RT—PCR检测U251细胞中miRNA-99b、mTORmRNA的表达,采用Westernblotting检测U251细胞中mTOR、p-4E-BPl蛋白的表达。f3)将U251细胞分为miRNA-99b抑制物+无义序列对照组、miRNA-99b抑制物+mTORsiRNA组,分别转染miRNA-99b抑制物+无义序列、miRNA-99b抑制物+mTORsiRNA。采用Westcrnblotting检测U251细胞中P-4E-BP1蛋白的表达,采用Transwell侵袭实验检测U251细胞的侵袭能力。结果(1)与空白对照组、无义序列对照组比较,miRNA-99b抑制物组U251细胞中miRNA-99bmRNA表达明显降低,mTORmRNA及蛋白表达明显升高.P-4E.BPl蛋白表达明显升高,穿膜细胞数明显增多,差异均有统计学意义(P〈0.05),而4E-BP1蛋白表达差异无统计学意义(P〉0.05)。(2)与无义序列对照组比较,mTORsiRNA组U251细胞中mTORmRNA及蛋白表达明显降低,P-4E-BP1蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P〈0.05),而miRNA-99bmRNA表达差异无统计学意义(P〉O.05)。(3)与miRNA-99b抑制物+无义序列对照组比较,miRNA-99b抑制物+roTORsiRNA组U251细胞中P-4E.BP1蛋白表达明显降低.穿膜细胞数明显减少,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论下调miRNA.99b表达可 展开更多
关键词 微小RNA-99b 哺乳动物雷帕霉素靶分子 真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1 神经胶质瘤 细胞侵袭
mTOR与4EBP1在喉鳞状细胞癌中的表达及相关性研究 认领 被引量:3
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作者 张晓 巴云鹏 宋瑞彪 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第23期1077-1079,1082共4页
目的:研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、真核细胞始动因子4E结合蛋白l(4EBP1)在喉鳞状细胞癌组织中的表达及相关性。方法:采用免疫组织化学方法检测mTOR、4EBP1在77例喉癌组织和18例癌旁组织中的表达,分析其表达与常见临床病理... 目的:研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、真核细胞始动因子4E结合蛋白l(4EBP1)在喉鳞状细胞癌组织中的表达及相关性。方法:采用免疫组织化学方法检测mTOR、4EBP1在77例喉癌组织和18例癌旁组织中的表达,分析其表达与常见临床病理因素之间的关系。结果:mTOR、4EBP1在喉癌中的阳性表达率分别为54.5%、48.1%,均高于癌旁组织中的表达(P〈0.05)。mTOR、4EBP1的阳性表达与淋巴结转移及组织病理学分级有显著相关性(P〈0.05),而与临床分期无相关性(P〉0.05)。mTOR和4EBP1在喉癌中的表达呈正相关(P〈0.05)。结论:①mTOR和4EBP1的高表达与喉癌的发病、侵袭、转移有关;②mTOR和4EBP1在喉癌组织中的阳性率呈正相关,联合检测对喉癌的治疗和预后判断具有重要临床意义。 展开更多
关键词 MTOR 4EBP1 喉肿瘤 肿瘤转移 免疫组织化学
eIF4E与磷酸化eIF4E结合蛋白1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义 认领 被引量:4
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作者 万婕 吴人亮 周晟 《华中科技大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期 764-767,共4页
目的 观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)及磷酸化eIF4E结合蛋白1(p-4EBP1)在甲状腺乳头状癌组织中的表达,并探讨其与甲状腺乳头状癌的侵袭、转移等临床病理特征间的关系.方法 采用免疫组化EnVinsion法检测66例乳头状癌(经典型乳头状癌3... 目的 观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)及磷酸化eIF4E结合蛋白1(p-4EBP1)在甲状腺乳头状癌组织中的表达,并探讨其与甲状腺乳头状癌的侵袭、转移等临床病理特征间的关系.方法 采用免疫组化EnVinsion法检测66例乳头状癌(经典型乳头状癌37例,滤泡型乳头状癌29例)、20例结节性甲状腺肿伴乳头状增生及上述病例的肿瘤旁正常甲状腺组织中eIF4E与p-4EBP1的表达.结果 在肿瘤旁正常甲状腺组织、甲状腺肿伴乳头状增生及乳头状癌中,eIF4E的阳性率分别为11.6%(10/86)、50.0%(10/20)和84.8%(56/66)(P<0.01);p-4EBP1的阳性率分别为8.1%(7/86)、40.0%(8/20)和66.7%(44/66)(P<0.01),并且p-4EBP1在滤泡型乳头状癌中的表达显著高于其在经典型乳头状癌中的表达(P<0.01).eIF4E在有腺外侵袭和淋巴结转移的病例中的阳性率分别为96.7%(29/30)和100.0%(29/29),分别高于无腺外侵袭和无淋巴结转移的病例,后者阳性率分别为75.0%(27/36)和73.0%(27/37)(P<0.05).而p-4EBP1在这两组病例中的表达差异则无显著性意义(P>0.05).结论 和正常甲状腺及甲状腺良性病变相比,eIF4E和p-4EBP1在乳头状癌中存在过表达;eIF4E的过表达与乳头状癌的侵袭与转移关系密切,在乳头状癌的进展中可能发挥了重要作用. 展开更多
关键词 甲状腺肿瘤 乳头状 真核细胞翻译起始因子4E 真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1
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