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浅谈如何提高“蔗糖酶酶学性质与酶促反应动力学”实验结果的可重复性 预览
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作者 邓祥宜 程占云 方雨婷 《农产品加工》 2019年第11期116-117,120共3页
为了提高“蔗糖酶酶学性质与酶促反应动力学”实验教学中实验结果的可重复性,在多年的教学中,找到了一些关键控制点:酶液制备与稀释、pH值梯度设置、体系混匀、反应时间及温度的科学控制等,提高了实验结果的可重复性。这些关键控制点也... 为了提高“蔗糖酶酶学性质与酶促反应动力学”实验教学中实验结果的可重复性,在多年的教学中,找到了一些关键控制点:酶液制备与稀释、pH值梯度设置、体系混匀、反应时间及温度的科学控制等,提高了实验结果的可重复性。这些关键控制点也可为其他酶学实验的教学或科研工作提供参考。 展开更多
关键词 生物化学实验 酶学性质 酶动力学 教学体会 实验重复性
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不同β-葡萄糖苷酶性能分析及对罗汉果苷的转化 预览
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作者 李登科 王欣驰 +4 位作者 陈雪佳 李家霖 胡小妍 路福平 李玉 《食品科学技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期48-54,共7页
以Pichia pastorisGS115为宿主,对来源于特异腐质霉Humicolainsolens、棘孢曲霉Aspergillus aculeatus和黑曲霉Aspergillus niger的β-葡萄糖苷酶基因bglHi、bglAa和bglAn进行异源表达。以对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷为底物,分析了3... 以Pichia pastorisGS115为宿主,对来源于特异腐质霉Humicolainsolens、棘孢曲霉Aspergillus aculeatus和黑曲霉Aspergillus niger的β-葡萄糖苷酶基因bglHi、bglAa和bglAn进行异源表达。以对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷为底物,分析了3种酶的酶学性质,其中BglAn的酶活力最高,为90.83U/mg。3种酶的最适反应温度和最适pH值范围分别为55~65℃和5.0~6.0。在pH值为6.0、温度50℃、酶量2U的条件下,利用3种酶水解不同浓度的罗汉果苷Ⅴ。结果表明:不同来源的酶水解底物的特异性差别较大,其中BglHi和BglAa水解罗汉果苷Ⅴ生成罗汉果苷ⅢE的转化率较低,仅为5%~7%;而BglAn在底物质量浓度1mg/mL,反应20min时转化率为96.5%;提高底物质量浓度到5mg/mL,反应1h时转化率也可达97.9%,基本实现完全转化。通过酶法转化罗汉果苷Ⅴ,获得了较高纯度的产物罗汉果苷ⅢE,为后期开发不同结构、不同功能罗汉果苷类甜剂提供了新的途径。 展开更多
关键词 Β-葡萄糖苷酶 克隆表达 酶学性质 酶法转化 罗汉果苷
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γ-戊内酯/水体系下稀酸预处理对玉米秸秆酶解特性的影响 预览
3
作者 秦玉洁 王锐 张军华 《林业工程学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期101-107,共7页
γ-戊内酯预处理可以打破纤维原料的抗降解屏障,改善底物的可降解性能。目前,有关戊内酯预处理对木质纤维原料水解特性和结构变化的研究较少。本试验在戊内酯/水体系下,采用硫酸和硫酸氢钠预处理玉米秸秆,研究了其对底物水解特性和结构... γ-戊内酯预处理可以打破纤维原料的抗降解屏障,改善底物的可降解性能。目前,有关戊内酯预处理对木质纤维原料水解特性和结构变化的研究较少。本试验在戊内酯/水体系下,采用硫酸和硫酸氢钠预处理玉米秸秆,研究了其对底物水解特性和结构的影响。结果表明,戊内酯/水体系能够脱除底物中的半纤维素和木质素。硫酸的催化效果优于硫酸氢钠,硫酸浓度分别为75和150mmol/L时(120℃下进行预处理1h),底物中纤维素相对含量从34.82%增至57.41%和72.57%,150mmol/L硫酸预处理时半纤维素和木质素脱除率为92.0%和77.4%,纤维素酶(10U/g底物)水解得率分别为52.4%和65.6%。对预处理前后玉米秸秆结构表征结果显示,戊内酯预处理后玉米秸秆纤维表面受到破坏,表面O/C明显增加,木质素和半纤维素被脱除,玉米秸秆结晶度增加。该试验表明戊内酯/水体系下稀硫酸预处理可高效溶出玉米秸秆中的半纤维素和木质素,提高纤维素酶水解效率,具有一定的应用前景。 展开更多
关键词 玉米秸秆 酶解特性 戊内酯 稀酸预处理 酶水解
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黄曲霉产β-1,4-木聚糖酶发酵条件的优化及其酶学特性 预览
4
作者 陈瑶瑶 陈洲 +3 位作者 刘璐 刘杨柳 李思霆 贾英民 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第7期131-137,共7页
研究发现一株高产β-1,4-木聚糖酶的黄曲霉,拟优化其产酶条件并分析该酶的酶学特性。采用单因素法优化其摇瓶发酵条件,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合酶谱法判定酶的特性以及薄层色谱分析法(TLC)判定酶的水解特异性。结果表明,产酶... 研究发现一株高产β-1,4-木聚糖酶的黄曲霉,拟优化其产酶条件并分析该酶的酶学特性。采用单因素法优化其摇瓶发酵条件,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合酶谱法判定酶的特性以及薄层色谱分析法(TLC)判定酶的水解特异性。结果表明,产酶最佳培养基为:麸皮3.5%、磷酸氢二铵3.0%、吐温-60 1.0%、NaCl 0.5%、MgSO4·7H2O 0.05%和KH2PO4 0.075%;黄曲霉在35℃下培养5 d达到最高酶活力115.08 U/mL,为未优化时的9.4倍。该菌能分泌两种β-1,4-木聚糖酶,分子量约为20.1和31.0 kDa,均不同于已有报道。粗酶的最适pH和最适温度分别为MOPS 7.5和55℃,在pH5.5~9.0及30~50℃范围内能保持酶活力的稳定。该酶不仅能水解榉木木聚糖产生低聚木糖,还能微弱降解大麦葡聚糖,有助于它在木质纤维素降解领域中的应用。 展开更多
关键词 黄曲霉 β-1 4-木聚糖酶 发酵条件 酶学特性 水解特异性
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1株产高温糖苷酶菌株的筛选鉴定及酶学性质研究
5
作者 杨力权 毛金山 +1 位作者 桑鹏 陈贵元 《食品科技》 CAS 北大核心 2019年第4期18-23,共6页
从云南大理市弥渡县石夹泉热泉的55℃底泥中筛选到1株高温葡萄糖苷酶的高产菌株,进行显微形态及生理生化特征、16S rRNA基因序列分析,将其初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)的1株菌,命名为Bacillus sp.Gly﹣55。对其生长条件及酶学性... 从云南大理市弥渡县石夹泉热泉的55℃底泥中筛选到1株高温葡萄糖苷酶的高产菌株,进行显微形态及生理生化特征、16S rRNA基因序列分析,将其初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)的1株菌,命名为Bacillus sp.Gly﹣55。对其生长条件及酶学性质进行了研究,结果表明:该菌株耐高温性较好,菌株在55℃仍能生长,菌株最适生长温度为45℃;所产葡萄糖苷酶最适酶活温度为65℃,最适反应pH值为4.0,该酶在37℃以下,能保持良好的稳定性,Zn2+、Ca2+、Mg2+、Mn2+、K+、Fe2+、Cu2+对该酶有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 高温葡萄糖苷酶 筛选 鉴定 酶学性质
海洋低温葡萄糖氧化酶细菌选育及其酶学性质研究 预览
6
作者 刘春莹 胡善松 +3 位作者 张庆芳 李美玉 于爽 迟乃玉 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期52-58,共7页
为获得产低温葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)的细菌,提高其产酶能力,研究GOD酶学性质,通过平板显色法从海泥样品中筛选低温GOD生产菌株,经形态特征、生理生化鉴定及分子生物学鉴定确定菌株分类。经诱变育种获得高产GOD菌株,并对所产... 为获得产低温葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)的细菌,提高其产酶能力,研究GOD酶学性质,通过平板显色法从海泥样品中筛选低温GOD生产菌株,经形态特征、生理生化鉴定及分子生物学鉴定确定菌株分类。经诱变育种获得高产GOD菌株,并对所产GOD进行酶学性质研究。研究获得1株编号8-Ⅲ的高产低温GOD细菌,鉴定为柠檬酸杆菌属(Citrobacters sp.8-Ⅲ),产GOD酶活力为0.75U/mL。经诱变得到可稳定遗传的突变菌株8-Ⅲ-a44,产GOD酶活力为1.77U/mL,为原始菌株的2.36倍。最适pH为6.5,最适作用温度为15℃,在0~35℃有较高酶活力,为低温酶。并且添加K^+、Ni^2+对GOD活性有明显促进作用。该研究为其在海产品保鲜、饲料防腐方面的应用奠定基础。 展开更多
关键词 海洋细菌 低温葡萄糖氧化酶 诱变育种 酶学性质
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CBM融合位置对AuMan5A酶学性质的影响 预览
7
作者 袁风娇 王春娟 +2 位作者 李雪晴 李剑芳 邬敏辰 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1-7,共7页
为探讨碳水化合物结合结构域(CBM)不同融合位置对Aspergillus usamii 5家族β-甘露聚糖酶AuMan5A酶学性质的影响,将Thermotoga maritima 27家族CBM分别融合至其C和N末端,构建出融合酶基因Auman5A-cbm27和cbm27-Auman5A。将Auman5A和融... 为探讨碳水化合物结合结构域(CBM)不同融合位置对Aspergillus usamii 5家族β-甘露聚糖酶AuMan5A酶学性质的影响,将Thermotoga maritima 27家族CBM分别融合至其C和N末端,构建出融合酶基因Auman5A-cbm27和cbm27-Auman5A。将Auman5A和融合酶基因分别在Pichia pastoris GS115中表达,分析比较表达产物AuMan5A、AuMan5A-CBM27和CBM27-AuMan5A的酶学性质。结果表明:AuMan5A、AuMan5A-CBM27和CBM27-AuMan5A的最适温度Topt分别为70、70℃和60℃;其中AuMan5A-CBM27在68℃及以下保温1 h残余酶活均大于85%,与原酶相比,其热稳定性提高了约8℃,而CBM27-AuMan5A在58℃及以下保持稳定,与原酶相比,降低了2℃。3种酶的最适pH均为4.0;AuMan5A在pH值2.5~7.5范围内保持稳定,2种融合酶在pH 2.0~9.0内均能保持稳定。与AuMan5A相比,AuMan5A-CBM27和CBM27-AuMan5A对角豆胶的Km分别降低了45.0%和26.3%。通过比较3种酶的酶学性质,证实CBM不同融合位置对AuMan5A酶学性质具有重要影响。 展开更多
关键词 Β-甘露聚糖酶 碳水化合物结合域 融合位置 酶学性质
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厌氧菌Sunxiuqinia sp. SH-52外切型海藻酸裂解酶的异源表达及酶学特征
8
作者 陈可可 何漫漫 +2 位作者 王康 严金平 伊日布斯 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期531-540,共10页
【背景】目前已报道的海藻酸分解菌多数为好氧菌,未见有关厌氧菌的报道。从分离的海藻酸分解菌中表征的海藻酸裂解酶大多为内切型海藻酸裂解酶,外切型较少。【目的】研究来自厌氧海藻酸分解菌的海藻酸裂解酶基因,表征新型海藻酸裂解酶... 【背景】目前已报道的海藻酸分解菌多数为好氧菌,未见有关厌氧菌的报道。从分离的海藻酸分解菌中表征的海藻酸裂解酶大多为内切型海藻酸裂解酶,外切型较少。【目的】研究来自厌氧海藻酸分解菌的海藻酸裂解酶基因,表征新型海藻酸裂解酶并阐明其酶学性质,为海藻酸裂解酶的多样性和微生物降解海藻酸机制提供理论依据。【方法】对来自厌氧海藻酸分解菌Sunxiuqinia sp. SH-52的海藻酸裂解酶SHA-4编码基因进行克隆,分析基因序列,构建重组质粒PGEX-4T-1-SHA-4并在大肠杆菌中实现异源表达,经纯化后对其酶学性质及降解特征进行研究。【结果】该酶在28°C、用0.1 mmol/L IPTG (异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)条件下诱导6 h达到最大表达量,纯化后酶的比活力达到21 U/mg。酶学性质分析表明SHA-4的最适温度为37°C;最适pH为7.5;对PolyMG (杂聚古罗糖醛酸-甘露糖醛酸嵌段)具有底物偏好性;Na+对该酶的活性具有抑制作用,而金属离子Cu2+具有明显促进作用,使活性提高了约168%;SHA-4催化海藻酸的Km值为2.5 mg/mL,Vmax为8.7 mg/(mL·min);SHA-4为外切型海藻酸裂解酶,降解海藻酸终产物为单糖。【结论】异源表达了来自一株厌氧海藻酸分解菌Sunxiuqiniasp.SH-52的海藻酸裂解酶SHA-4,该酶是PL6家族中第一个对PolyMG有底物偏好性的外切型海藻酸裂解酶,而且活性较高,作为工具酶有很好的应用前景,为海藻酸降解机制的探索提供了新的线索。 展开更多
关键词 厌氧海藻酸分解菌 Sunxiuqinia sp. SH-52 外切型海藻酸裂解酶 异源表达 酶学性质
蚕豆纳豆发酵工艺优化及其酶学性质 预览
9
作者 张杰 杨希娟 +1 位作者 党斌 张文刚 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第6期205-210,共6页
为开发新型蚕豆产品,提高蚕豆附加值研究以蚕豆为原料,通过单因素实验和正交试验优化出蚕豆纳豆的最佳工艺,并对发酵得到的纳豆激酶进行酶学性质研究。结果表明,最佳工艺条件为:蚕豆浸泡48 h,常压蒸煮20 min,接种量为6%,40℃下发酵72 h... 为开发新型蚕豆产品,提高蚕豆附加值研究以蚕豆为原料,通过单因素实验和正交试验优化出蚕豆纳豆的最佳工艺,并对发酵得到的纳豆激酶进行酶学性质研究。结果表明,最佳工艺条件为:蚕豆浸泡48 h,常压蒸煮20 min,接种量为6%,40℃下发酵72 h,此时,纳豆激酶活力值最高为(4860.13±470.02) U·g-1,感官评分为(95.67±0.71)分。酶学性质结果表明,该酶在25~40℃具有较好的热稳定性;在pH6~9范围内较为稳定,保持相对酶活89.05%以上;Mg2+和Ca2+对纳豆激酶活性具有促进作用,Cu2+、Fe3+抑制作用明显,Zn2+无明显作用。本研究为蚕豆产品的开发及蚕豆纳豆的产业化生产提供参考。 展开更多
关键词 蚕豆 纳豆激酶 工艺优化 酶学性质
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产低温纤维素酶菌株的分离鉴定及产酶特征研究 预览 被引量:1
10
作者 王继莲 陈芸 +1 位作者 李明源 库尔班江·艾买提 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期356-364,共9页
自东帕米尔高原布伦口湖群湿地10cm草甸中分离到一株高酶活低温纤维素酶产生菌BLKC2,经16S rDNA序列鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。BLKC2在10℃低温条件下保持繁殖能力,在20℃,pH7.0条件下发酵72h,酶活力达到最大值28.7U/mL... 自东帕米尔高原布伦口湖群湿地10cm草甸中分离到一株高酶活低温纤维素酶产生菌BLKC2,经16S rDNA序列鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。BLKC2在10℃低温条件下保持繁殖能力,在20℃,pH7.0条件下发酵72h,酶活力达到最大值28.7U/mL。酶学特性显示,BLKC2分泌的粗酶最适催化温度为30℃,对热敏感,最适反应pH8.0左右,在pH7.0~9.0的偏碱性环境中酶活力较稳定,Mn^2+、Zn^2+、Mg^2+对酶反应有明显激活作用,而Fe^3+、Cu^2+则抑制了酶反应。 展开更多
关键词 布伦口湖群 低温纤维素酶 枯草芽孢杆菌 酶学特性
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解淀粉芽孢杆菌产葡甘聚糖酶的条件优化及酶学性质研究 预览
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作者 吴丹丹 庄敏 +1 位作者 焦丹 周中凯 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期13-18,共6页
为了优化解淀粉芽孢杆菌产葡甘聚糖酶的条件,在单因素试验的基础上,利用响应面法分析发酵条件,并研究葡甘聚糖酶的酶学性质。结果表明,解淀粉芽孢杆菌产葡甘聚糖酶的最佳培养基成分为葡萄糖40g/L、酵母粉9g/L、硫酸铵0.8g/L;最佳发酵条... 为了优化解淀粉芽孢杆菌产葡甘聚糖酶的条件,在单因素试验的基础上,利用响应面法分析发酵条件,并研究葡甘聚糖酶的酶学性质。结果表明,解淀粉芽孢杆菌产葡甘聚糖酶的最佳培养基成分为葡萄糖40g/L、酵母粉9g/L、硫酸铵0.8g/L;最佳发酵条件为温度30℃、发酵时间80h、接种量8%(体积分数)、装液量100mL/250mL,在此条件得到的葡甘聚糖酶活力可达2509U/mL。该葡甘聚糖酶的最适反应条件为50℃、pH7;在30~40℃、pH3~7酶活力稳定;Al^3+、Fe^3+、Cu^2+等离子对葡甘聚糖酶有抑制作用,Mn^2+有激活作用。 展开更多
关键词 解淀粉芽孢杆菌 葡甘聚糖酶 发酵条件优化 酶学性质
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高产芽孢杆菌MS12木聚糖酶发酵条件优化及酶学性质研究 预览
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作者 马焕 张永战 +2 位作者 王一雯 权淑静 解复红 《河南科学》 2019年第6期919-923,共5页
从昆明某磷矿土壤中筛选出一株产木聚糖酶能力较强的菌株——MS12,通过单因素试验初步优化了该菌株的产酶条件.试验结果显示,该菌株最佳产酶培养基为玉米芯粉50g/L、麸皮40g/L、NH4Cl10g/L、CaCl25g/L、NaHPO42g/L,pH自然;最佳产酶发酵... 从昆明某磷矿土壤中筛选出一株产木聚糖酶能力较强的菌株——MS12,通过单因素试验初步优化了该菌株的产酶条件.试验结果显示,该菌株最佳产酶培养基为玉米芯粉50g/L、麸皮40g/L、NH4Cl10g/L、CaCl25g/L、NaHPO42g/L,pH自然;最佳产酶发酵条件为30℃,180r/min,装样量30mL/250mL三角瓶,震荡培养96h.经测定,菌株MS12所产木聚糖酶的最适反应温度为65℃,最适反应pH值为7.0,具有较好的pH稳定性.1mmol/LNa^+、Ba2+和10mmol/LCa^2+、Mg^2+对酶活有促进作用,Ag^+对酶活有明显的抑制作用. 展开更多
关键词 芽孢杆菌 木聚糖酶 产酶条件 粗酶性质
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Ganoderma sp.SYBC L48漆酶酶学性质及其对酸性红1的脱色性能
13
作者 窦欣 田乔鹏 +3 位作者 王琦 管政兵 蔡宇杰 廖祥儒 《环境工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期856-864,共9页
对灵芝菌Ganoderma sp. SYBC L48漆酶进行了纯化和酶学性质分析,并利用该漆酶对偶氮染料酸性红1进行脱色处理;考察了脱色体系中各因素对脱色效率的影响;采用小麦种子和水稻种子对酶处理后的染料进行了毒性测试。结果表明,以ABTS为底物时... 对灵芝菌Ganoderma sp. SYBC L48漆酶进行了纯化和酶学性质分析,并利用该漆酶对偶氮染料酸性红1进行脱色处理;考察了脱色体系中各因素对脱色效率的影响;采用小麦种子和水稻种子对酶处理后的染料进行了毒性测试。结果表明,以ABTS为底物时,该酶的最适pH为2.5,最适温度为60℃,在pH5~9和20~60℃具有良好的稳定性,Co2+、Cr3+和Fe3+离子对酶活性有较强的抑制作用。在染料浓度100 mg·L-1,酶浓度0.5 U·mL-1,介体HOBT浓度0.25 mmol·L-1,pH为4,50℃的条件下反应30 min后,该漆酶对酸性红1的脱色率可达90.3%;1 mmol·L-1的Cr3+、Cu2+、Al3+和Ni2+存在下,漆酶仍能催化酸性红1脱色;脱色后染料的植物毒性下降。上述结果表明该漆酶在纺织废水处理中具有一定的应用前景。 展开更多
关键词 灵芝漆酶 酶学性质 酶脱色 偶氮染料废水治理 酸性红1
产碱杆菌Alcaligenes sp.P156中龙胆酸1,2-双加氧酶GdoP的研究 预览
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作者 胡春辉 王菲 +1 位作者 郭立忠 于浩 《青岛农业大学学报:自然科学版》 2019年第3期176-182,共7页
龙胆酸是芳香族化合物微生物降解的核心代谢产物,龙胆酸降解研究对于芳香族化合物的降解研究具有重要意义。龙胆酸1,2-双加氧酶是催化龙胆酸降解的关键酶。本研究利用双加氧酶催化保守结构域在产碱杆菌P156的基因组上通过多序列比对找... 龙胆酸是芳香族化合物微生物降解的核心代谢产物,龙胆酸降解研究对于芳香族化合物的降解研究具有重要意义。龙胆酸1,2-双加氧酶是催化龙胆酸降解的关键酶。本研究利用双加氧酶催化保守结构域在产碱杆菌P156的基因组上通过多序列比对找到一个龙胆酸双加氧酶基因gdoP;利用分子生物学技术对该基因进行异源表达;并利用重组蛋白对酶学性质和动力学参数进行测定。酶学性质研究表明,GdoP催化反应的最适pH为7.5,最适温度为40℃。GdoP是一个Fe2+依赖型双加氧酶,含有Fe2+离子结合结构域。Fe2+离子能够明显促进GdoP酶活,Cu2+、Cd2+离子对GdoP的酶活有明显抑制。以龙胆酸为底物,GdoP的Km值和Vmax值分别为641μmol/L和23.9U/mg。GdoP具有较强的底物特异性,能够催化龙胆酸开环生成3-马来酰丙酮酸,不能催化5-氨基水杨酸、水杨酸和1-羟基-2-萘酸的转化。本研究系统的研究了龙胆酸1,2-双加氧酶GdoP的酶学性质,有助于更好的研究芳香族化合物的微生物降解过程。 展开更多
关键词 龙胆酸1 2-双加氧酶 产碱杆菌 基因表达 酶学性质
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大麦β-淀粉酶在枯草芽孢杆菌中异源表达 预览
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作者 汪薛良 钮成拓 +2 位作者 包敏 李崎 王金晶 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期34-40,共7页
该研究拟采用枯草芽孢杆菌异源表达大麦来源β-淀粉酶。选择枯草芽孢杆菌WB800作为宿主,采用同源重组的方法构建表达载体pP43NMK-amyB,获得重组枯草芽孢杆菌WB-amyB。重组枯草芽孢杆菌在摇瓶发酵条件下酶活最高可达386U/mL,纯化后测得... 该研究拟采用枯草芽孢杆菌异源表达大麦来源β-淀粉酶。选择枯草芽孢杆菌WB800作为宿主,采用同源重组的方法构建表达载体pP43NMK-amyB,获得重组枯草芽孢杆菌WB-amyB。重组枯草芽孢杆菌在摇瓶发酵条件下酶活最高可达386U/mL,纯化后测得其比酶活为613U/mg。重组酶的最适温度为55℃,最适pH值为5.0。重组β-淀粉酶水解产麦芽糖能力与大麦β-淀粉酶相当,与普鲁兰酶联用时麦芽糖最大转化率可达81.8%。重组枯草芽孢杆菌摇瓶发酵水平产酶量高于类似文献报道,重组β-淀粉酶的酶学性质与大麦β-淀粉酶相比几乎相同,完全可以替代大麦β-淀粉酶在工业上的应用。 展开更多
关键词 大麦β-淀粉酶 异源表达 枯草芽孢杆菌 酶学性质 麦芽糖
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米曲霉酸性蛋白酶基因在毕赤酵母中的异源表达及酶学性质
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作者 岳晓平 陈朋 +5 位作者 朱玥明 曾艳 刘汉民 刘红彦 王敏 孙媛霞 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期415-424,共10页
酸性蛋白酶作为一类重要的天冬氨酸蛋白酶,被广泛应用于食品、医药和皮革等领域。为推动酸性蛋白酶的研究及应用,通过对发酵豆制品样品进行宏基因组测序,从中获得米曲霉酸性蛋白酶基因pepA,在毕赤酵母GS115中进行异源表达,并对重组酶Pep... 酸性蛋白酶作为一类重要的天冬氨酸蛋白酶,被广泛应用于食品、医药和皮革等领域。为推动酸性蛋白酶的研究及应用,通过对发酵豆制品样品进行宏基因组测序,从中获得米曲霉酸性蛋白酶基因pepA,在毕赤酵母GS115中进行异源表达,并对重组酶PepA进行酶学性质分析。结果显示毕赤酵母发酵上清液中酸性蛋白酶的活性为50.62 U/mL。SDS-PAGE验证PepA的分子量约为50 kDa,且发酵上清液几乎无杂蛋白。PepA的最适pH值为4.5,最适温度为50℃,Mn2+和Cu2+对其具有激活作用,而Fe3+、Fe2+与Ca2+则具有抑制作用。上述研究结果可为米曲霉酸性蛋白酶的异源表达及其相关工业应用提供指导。 展开更多
关键词 米曲霉 酸性蛋白酶 毕赤酵母 异源表达 酶学性质
发酵乳杆菌多铜氧化酶的异源表达及酶学性质
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作者 徐洁 方芳 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1286-1294,共9页
生物胺是一种存在于发酵食品中的含氮小分子有机化合物,过量摄入可能引起过敏或其他不良反应。利用酶法降解是减少发酵食品中生物胺含量从而保障食品安全的有效方法之一。文中成功克隆了来源于发酵乳杆菌的多铜氧化酶基因,在大肠杆菌中... 生物胺是一种存在于发酵食品中的含氮小分子有机化合物,过量摄入可能引起过敏或其他不良反应。利用酶法降解是减少发酵食品中生物胺含量从而保障食品安全的有效方法之一。文中成功克隆了来源于发酵乳杆菌的多铜氧化酶基因,在大肠杆菌中表达的酶活水平为484U/L。通过镍柱亲和层析方法获得了此多铜氧化酶的纯酶。该多铜氧化酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为3.5,其Km为1.3mmol/L,Vmax为7.67×10^–2 mmol/(L·min)。对酶的应用特性研究表明,来源于发酵乳杆菌的多铜氧化酶对18%(W/V)NaCl有一定的耐受性,并可降解包括色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺和亚精胺在内的7种生物胺。其中它对组胺和酪胺的降解能力最高,分别为51.6%和40.9%。此外,该酶对酱油中的生物胺也有普遍降解作用,使用较低酶量(500 U/L)时,对酱油中总胺的降解率达到10.6%。多铜氧化酶具备降解发酵食品中生物胺的潜力,为进一步实现这类食品酶的实际应用奠定基础。 展开更多
关键词 多铜氧化酶 生物胺 克隆表达 酶学性质 发酵乳杆菌
K.paraultunense角蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究
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作者 羊希 李霞 +2 位作者 姜河 廖学品 石碧 《皮革科学与工程》 CAS 北大核心 2019年第3期5-11,共7页
将角蛋白降解菌Keratinibaculum paraultunense(K. paraultunense)所产角蛋白酶的粗酶液,依次通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose-FF阴离子交换以及Superdex 75凝胶色谱层析等分离纯化,最终得到一种电泳纯的角蛋白酶。其纯化倍数为14.55,... 将角蛋白降解菌Keratinibaculum paraultunense(K. paraultunense)所产角蛋白酶的粗酶液,依次通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose-FF阴离子交换以及Superdex 75凝胶色谱层析等分离纯化,最终得到一种电泳纯的角蛋白酶。其纯化倍数为14.55,回收率为7.24%。SDS-PAGE分析结果表明该酶的相对分子质量约为29 KDa。酶学性质研究表明,该酶最适作用温度为80 ℃;最适pH为7.5,在pH 6.0~9.0范围内酶活力较为稳定;当以酪蛋白为底物时,该酶的动力学常数Km为4.37 mg·mL^-1,Vm为14 556 U·(mg·min)^-1,而当以羊毛角蛋白为底物时,该酶的动力学常数Km为15.66 mg·mL^-1,Vm为2610 U·(mg·min)^-1;Ca2+对酶活有明显的促进作用,但苯基甲基磺酰氟(PMSF)对酶活有较强的抑制作用。 展开更多
关键词 K.paraultunense 角蛋白酶 分离纯化 酶学性质
Geobacillus thermodenitrificans α-半乳糖苷酶原核表达及其酶学性质 预览
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作者 石征宇 鲁晶娣 +4 位作者 韦盘秋 伍时华 程谦伟 黎娅 易弋 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第10期179-183,共5页
本文利用大肠杆菌原核表达系统对来源于Geobacillus thermodenitrificans的α-半乳糖苷酶编码基因进行了重组表达,并对该酶的酶学性质进行了研究。结果表明,该α-半乳糖苷酶的分子量为100~110 kDa,以p NPG为底物时,该酶的最适反应温度... 本文利用大肠杆菌原核表达系统对来源于Geobacillus thermodenitrificans的α-半乳糖苷酶编码基因进行了重组表达,并对该酶的酶学性质进行了研究。结果表明,该α-半乳糖苷酶的分子量为100~110 kDa,以p NPG为底物时,该酶的最适反应温度为70℃,最适pH6.0,且该酶具有较好的温度稳定性和pH稳定性;Hg^+、Ag^+、Cu^2+离子能完全抑制α-半乳糖苷酶的活性,Fe^3+、Mn^2+、Zn^2+等离子对α-半乳糖苷酶的活性具有不同程度的激活作用;以pNPG为底物测得该酶的米氏常数Km=10.04 mmol/L,最大反应速度Vmax=18.25μmol/min。 展开更多
关键词 GEOBACILLUS thermodenitrificans Α-半乳糖苷酶 原核表达 酶学性质
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猪肉12-脂肪氧合酶催化结构域的表达、纯化及其酶学性质分析 预览
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作者 王晶晶 王婷 +5 位作者 张新笑 卞欢 耿志明 李鹏鹏 王道营 徐为民 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第8期41-47,共7页
研究脂肪氧合酶(lipoxygenase,LOX)在猪肉贮藏、加工过程中对脂肪氧化及风味形成的作用机制。通过序列分析和聚合酶链式反应扩增获得了猪肉12-脂肪氧合酶催化结构域(12-lipoxygenase catalytic domain,12-LOXcd)的编码基因,采用大肠杆... 研究脂肪氧合酶(lipoxygenase,LOX)在猪肉贮藏、加工过程中对脂肪氧化及风味形成的作用机制。通过序列分析和聚合酶链式反应扩增获得了猪肉12-脂肪氧合酶催化结构域(12-lipoxygenase catalytic domain,12-LOXcd)的编码基因,采用大肠杆菌表达系统,经镍柱亲和层析和SuperdexG200凝胶过滤层析纯化得到12-LOXcd蛋白,并研究其酶学性质。结果表明,构建的原核表达载体pMBP-12-LOXcd在大肠杆菌中成功可溶性表达了猪肉12-LOXcd,该重组蛋白经纯化可达电泳纯。12-LOXcd以亚油酸为底物的比活力为2826.7U/mg,最适pH值为6.0,最适作用温度为30℃。亚油酸Km为0.40mmol/L,亚麻酸Km为0.55mmol/L,花生四烯酸Km为4.15mmol/L,表明最适底物为亚油酸。与大豆LOX相比,该酶在较高NaCl质量分数(9%)时仍保持活性稳定;对热较不稳定,在60℃条件下失活,但优于大豆LOX的热稳定性;此外,12-LOXcd的pH值稳定性也优于大豆LOX,在碱性条件下仍能保留部分活力。 展开更多
关键词 猪肉 脂肪氧合酶 表达 纯化 酶学性质
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