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猪波形蛋白的原核表达及其对口蹄疫病毒浸染PK-15细胞的作用 预览
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作者 令瑛 马雪青 +7 位作者 李平花 张婧 李坤 付元芳 冯若飞 马忠仁 卢曾军 刘在新 《动物医学进展》 北大核心 2019年第1期12-19,共8页
为研究波形蛋白在病毒侵染过程中发挥的作用,原核表达猪波形蛋白与病毒互感后检测其复制能力。根据GenBank中已发表的波形蛋白序列,设计特异性引物,从PK-15细胞中扩增波形蛋白基因,并将其克隆至pET-28a(+)载体,转化大肠埃希菌BL21进行... 为研究波形蛋白在病毒侵染过程中发挥的作用,原核表达猪波形蛋白与病毒互感后检测其复制能力。根据GenBank中已发表的波形蛋白序列,设计特异性引物,从PK-15细胞中扩增波形蛋白基因,并将其克隆至pET-28a(+)载体,转化大肠埃希菌BL21进行原核表达,表达产物经SDS-PAGE和Westernblot鉴定后,进行目的蛋白的纯化及复性,并利用病毒抑制试验,检测其在病毒感染过程中的作用。结果表明,成功地克隆了猪波形蛋白基因,并克隆至pET-28a(+)载体,经诱导后高效表达,经纯化复性获得的波形蛋白抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)侵染Marc-145细胞,然而并不抑制口蹄疫(FMDV)侵染PK-15细胞。随后借助细胞流式术检测PK-15细胞中波形蛋白的分布,显示其主要存在于细胞膜内的基质中。猪源波形蛋白的克隆表达,为进一步研究猪源波形蛋白与口蹄疫病毒蛋白之间的相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪波形蛋白 原核表达 口蹄疫病毒 PK-15细胞
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口蹄疫病毒WFL株全基因组结构及遗传变异分析 预览
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作者 任林柱 王兴龙 +2 位作者 刘锴 王学理 张辉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期 293-298,共6页
目的 对FMDV WFL株全基因组进行克隆及测序,并对其基因组进行了比较分析,结果 表明WFL株全长为8155nt,该毒株5’UTR长1 059nt(untranslatable region,UTR),编码区核苷酸长度为6969nt,3’UTR包括93nt非编码碱基和34nt poly(A);WFL株... 目的 对FMDV WFL株全基因组进行克隆及测序,并对其基因组进行了比较分析,结果 表明WFL株全长为8155nt,该毒株5’UTR长1 059nt(untranslatable region,UTR),编码区核苷酸长度为6969nt,3’UTR包括93nt非编码碱基和34nt poly(A);WFL株与HKN/2002的核苷酸及氨基酸同源性最高;WFL株的polyC长17nt,其中C碱基占94.12%,仅有一个U碱基;3A基因有10个氨基酸的缺失。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 基因组 遗传变异
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口蹄疫病毒P12A^*3C基因转化饲草玉米高效表达载体的构建 预览 被引量:2
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作者 张素芝 潘丽 +1 位作者 荣廷昭 张永光 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期 549-554,共6页
为了研究饲草玉米可饲口蹄疫疫苗,将O型口蹄疫病毒的VP1和2A基因序列按照玉米的偏爱性密码子优化后,再与P1的其他基因及3C基因连接。同时,通过使用高效的Ubiquitin启动子以及在P1的起始密码子处添加Kozak序列和在3C基因3′末端添加... 为了研究饲草玉米可饲口蹄疫疫苗,将O型口蹄疫病毒的VP1和2A基因序列按照玉米的偏爱性密码子优化后,再与P1的其他基因及3C基因连接。同时,通过使用高效的Ubiquitin启动子以及在P1的起始密码子处添加Kozak序列和在3C基因3′末端添加内质网引导肽序列等措施提高免疫原基因的表达。结果显示,高效植物表达载体pC1300P1^*3C构建正确,可以用于后续的饲草玉米可饲口蹄疫疫苗的研究。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 饲草玉米 可饲疫苗 高效表达载体
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口蹄疫病毒非结构蛋白基因的克隆表达及免疫活性的研究 预览 被引量:2
4
作者 蒲静 张鹤晓 +9 位作者 杨汉春 高志强 柏亚铎 刘继红 汪琳 吴丹 乔彩霞 张伟 段向英 谷强 《动物医学进展》 CSCD 2007年第12期 6-12,共7页
从口蹄疫病毒(FMDV)细胞培养物中提取总RNA,设计简并引物通过RT-PCR获得了完整的3ABC基因片段,将3AB基因和部分3ABC基因分别克隆到原核表达载体上构建重组表达质粒pET-3AB和pET-3ABC,然后转化BL21(DE3)plysS进行诱导表达,将表达产... 从口蹄疫病毒(FMDV)细胞培养物中提取总RNA,设计简并引物通过RT-PCR获得了完整的3ABC基因片段,将3AB基因和部分3ABC基因分别克隆到原核表达载体上构建重组表达质粒pET-3AB和pET-3ABC,然后转化BL21(DE3)plysS进行诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定。结果表明,3AB基因和3ABC基因可以在大肠埃希菌中高效表达,且表达产物能够与FMDV阳性血清产生免疫反应。进一步摸索重组蛋白的纯化条件,制备纯化蛋白,以纯化的表达产物为包被抗原进行间接ELISA检测,结果表明,重组蛋白具有特异的免疫学活性,能够用于鉴别FMDV感染动物血清和免疫动物血清。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 3AB基因 3ABC基因 原核表达 间接ELISA
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口蹄疫病毒YN株VPI-2A基因的克隆及遗传变异分析 预览
5
作者 任林柱 王兴龙 +3 位作者 段小宇 梅英武 刘锴 王学理 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期 444-446,共3页
以口蹄疫病毒YN株RNA为模板,用设计的特异引物RT—PCR扩增出大小为1055bp的基因片段,并对PCR产物克隆测序进行序列分析。结果表明:供试病毒的VP1-2A基因的核苷酸序列与参考毒株的同源性为77.65%-93.00%,对应的氨基酸序列同源性... 以口蹄疫病毒YN株RNA为模板,用设计的特异引物RT—PCR扩增出大小为1055bp的基因片段,并对PCR产物克隆测序进行序列分析。结果表明:供试病毒的VP1-2A基因的核苷酸序列与参考毒株的同源性为77.65%-93.00%,对应的氨基酸序列同源性为87%-97%。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 VP1-2A基因克隆 遗传变异
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蓝舌病病毒VP2蛋白展示口蹄疫病毒中和表位的研究 预览
6
作者 罗小暖 王芳 +1 位作者 崔玉东 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期731-734,共4页
为在蓝舌病病毒(BTV) VP2蛋白中鉴定展示表达外源B细胞表位的位点,本研究通过同源建模预测VP2蛋白的结构,采用SOE-PCR方法,将O型口蹄疫病毒编码保守的中和表位(8E8)序列分别插入BTV-8 VP2基因编码的两个不同loop区序列中,并分别构... 为在蓝舌病病毒(BTV) VP2蛋白中鉴定展示表达外源B细胞表位的位点,本研究通过同源建模预测VP2蛋白的结构,采用SOE-PCR方法,将O型口蹄疫病毒编码保守的中和表位(8E8)序列分别插入BTV-8 VP2基因编码的两个不同loop区序列中,并分别构建了两种嵌合VP2基因.将嵌合表位编码序列的VP2基因克隆于杆状病毒转移载体pFastBac HTb中,转化感受态细胞DH 10Bac,筛选阳性重组杆粒rBacmid-VP2-8E8,转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-VP2-8E8.经western blot和间接免疫荧光验证,嵌合8E8表位的VP2蛋白在Sf9细胞中正确表达,并且8E8表位能够正确展示在VP2蛋白表面;VP2蛋白三聚体分析表明,嵌合8E8表位的VP2蛋白仍能形成三聚体.以上结果表明,BTV VP2蛋白至少存在两个插入位点,能够容纳12个氨基酸短肽的插入.该结果为BTV病毒样颗粒展示8E8表位的研究提供实验依据. 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 VP2蛋白 O型口蹄疫病毒8E8表位 杆状病毒表达
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O型口蹄疫病毒核酸检测标准样品的制备 预览 被引量:2
7
作者 孙涛 梁成珠 +5 位作者 邓明俊 郑小龙 王群 雷质文 曹丙蕾 凌宗帅 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第2期45-50,共6页
利用基因克隆和体外转录技术制备O型口蹄疫病毒(FMDV)核酸检测标准样品.设计O型FMDV 3D基因的全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至PGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标... 利用基因克隆和体外转录技术制备O型口蹄疫病毒(FMDV)核酸检测标准样品.设计O型FMDV 3D基因的全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至PGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物.采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值.通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量(拷贝数),并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算.均一性结果显示瓶间差异小于5%,稳定试验表明室温20℃~25℃(相对湿度20%~50%)14 d,2℃~8℃3个月及-20℃保存1年的含量均无明显变化.核酸标准物质定值为(1.260士0.485)×108 copies,可用作O型FMDV通用核酸检测的标准质控品. 展开更多
关键词 定值 O型口蹄疫病毒 实时定量RT-PCR 标准样品
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嵌合O型口蹄疫病毒多表位基因猪细小病毒VLPs载体疫苗的构建 预览 被引量:8
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作者 潘群兴 诸玉梅 +5 位作者 王永山 何孔旺 王晓丽 欧阳伟 毕振威 夏兴霞 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期101-107,共7页
综合运用生物信息学和分子生物学技术,模拟PPVVP2蛋白表面不同Loop区插入O型FMDVVPl蛋白上多表位基因(VPl:21-40、141~160和200~213残基)空间构象,并在VP2N端引入通用型辅助性T淋巴细胞表位(PADRE),人工合成嵌合基因并克隆到... 综合运用生物信息学和分子生物学技术,模拟PPVVP2蛋白表面不同Loop区插入O型FMDVVPl蛋白上多表位基因(VPl:21-40、141~160和200~213残基)空间构象,并在VP2N端引入通用型辅助性T淋巴细胞表位(PADRE),人工合成嵌合基因并克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,转化E.coliDH10Bac感受态细胞,经三抗筛选,获得重组杆状病毒表达质粒rBac-FMDVVPl:PPVVP2,用脂质体法转染Sf9细胞。对rBac.FMDVVP1:PPVVP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;用Western-blotting分析,在64000处出现一条特异蛋白条带;电镜观察,重组VP2蛋白能够自主组装成病毒样颗粒。红细胞凝集试验证实,表达的嵌合蛋白PPV:VP2-FMDV:VPl具有与全病毒类似的血凝活性。 展开更多
关键词 猪细小病毒 O型口蹄疫病毒 病毒样颗粒 分子设计
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链特异性RT-PCR方法检测口蹄疫病毒负链RNA 预览 被引量:2
9
作者 王继华 信爱国 +5 位作者 朱明旺 苗海生 胡骑 廖德芳 李乐 李华春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期 130-133,144,共5页
旨在建立一种快速、灵敏、特异的检测口蹄疫病毒在复制过程中产生的负链RNA的方法。根据口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)病毒5'-非编码区(5'-UTR)基因序列,设计了5条引物链特异性RT-PCR引物,建立检测口蹄疫病毒负... 旨在建立一种快速、灵敏、特异的检测口蹄疫病毒在复制过程中产生的负链RNA的方法。根据口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)病毒5'-非编码区(5'-UTR)基因序列,设计了5条引物链特异性RT-PCR引物,建立检测口蹄疫病毒负链RNA的链特异性RT-PCR方法。提取FMD病毒RNA,应用设计的正向引物T1-H1做反转录引物,经反转录和RNA酶A消化后,再经两轮链特异性PCR扩增,可特异性地检测FMDV在复制过程中产生的负链RNA。所建立的检测口蹄疫病毒负链RNA的链特异性RT-PCR方法是一种可靠的方法,在确定细胞培养物和动物感染FMDV的病毒复制和了解病毒的致病性研究中具有应用前景。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 链特异性RT-PCR 复制中间体 负链RNA 感染
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重组表达口蹄疫病毒T细胞表位猪细小病毒病毒样颗粒的制备 预览 被引量:5
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作者 潘群兴 王永山 +4 位作者 何孔旺 欧阳伟 王晓丽 诸玉梅 夏兴霞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期 844-848,共5页
为增强表位疫苗的免疫原性,本研究将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1中编码T细胞表位肽(aa 21~aa 40)序列连接于猪细小病毒(PPV)VP2的5'端,并插入到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV-VP1-PPV-VP2,转化... 为增强表位疫苗的免疫原性,本研究将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1中编码T细胞表位肽(aa 21~aa 40)序列连接于猪细小病毒(PPV)VP2的5'端,并插入到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV-VP1-PPV-VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的E.coli DH10Bac中,经蓝白菌落筛选获得重组杆状病毒表达质粒rBac-FMDV-VP1-PPV-VP2,转染昆虫草地夜蛾(Sf9)细胞,并在Sf9中进行了表达。电镜观察显示,表达的重组蛋白能够自我组装成病毒样颗粒rPPV∶VLP(FMDV)。用间接免疫荧光试验(IFA)、western blot分析表明,表达产物具有与PPV VP2天然蛋白相似的免疫原性。小鼠免疫实验证实,在低浓度FMDV抗原下能够产生特异性T淋巴细胞增殖反应;而且该病毒样颗粒能诱导机体产生抗FMDV特异性细胞免疫反应。 展开更多
关键词 猪细小病毒 病毒样颗粒 O型口蹄疫病毒 T细胞表位
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某高中一起柯萨奇病毒A组6型手足口病暴发疫情的流行病学调查 被引量:3
11
作者 刘潇潇 初艳慧 +2 位作者 秦迪 孙小宇 王永全 《国际病毒学杂志》 2016年第3期160-163,167共5页
目的了解某高中一起手足口病暴发疫情的流行病学特征,寻找导致该暴发发生的危险因素,同时了解柯萨奇病毒A组6型(CVA6)手足口病的临床表现。方法按照病例定义开展病例搜索。采用统一设计的调查表调查患者一般情况和临床表现,采用病... 目的了解某高中一起手足口病暴发疫情的流行病学特征,寻找导致该暴发发生的危险因素,同时了解柯萨奇病毒A组6型(CVA6)手足口病的临床表现。方法按照病例定义开展病例搜索。采用统一设计的调查表调查患者一般情况和临床表现,采用病例对照研究分析暴发危险因素。结果该学校从8月17日-9月10Et出现28名病例(24例学生,4例家长),其中23例临床诊断病例,5例实验室确诊病例(检出病原体CVA6)。患者中82.1%(23/28)的病例出现发热症状,64.3%(18/28)的病例体温≥38.5℃;21,4%(6/28)的病例出现皮疹部位疼痛症状;46.4%(13/28)的病例恢复期出现脱皮症状;17.9%(5/28)的病例出现脱甲症状。发病前1周与手足口病患者接触、饭前不洗手是手足口病发病的危险因素。结论患者未及时隔离、与患者密切接触和饭前不洗手是造成疾病蔓延的主要原因。CVA6导致的手足口病患者常出现高热、脱甲、脱皮等非典型手足口病临床症状。 展开更多
关键词 手足口病 暴发 柯萨奇病毒A组6型 流行病学
感染肠道病毒71型手足口病患儿粪便排毒时间及病毒载量的相关因素研究 预览 被引量:1
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作者 黎梅花 黄延风 +1 位作者 朱朝敏 苏薇 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1582-1586,共5页
目的:通过连续性监测EV71病毒核酸,研究手足口病患儿感染EV71病毒后在粪便中的排毒时间、病毒载量及其相关因素。方法:观察45例EV71患儿12周,及非EV71组27例作为对照。每隔7 d收集粪便1次,采用real-time PCR Taq Man探针法定量检测病... 目的:通过连续性监测EV71病毒核酸,研究手足口病患儿感染EV71病毒后在粪便中的排毒时间、病毒载量及其相关因素。方法:观察45例EV71患儿12周,及非EV71组27例作为对照。每隔7 d收集粪便1次,采用real-time PCR Taq Man探针法定量检测病毒核酸。并用Kaplan-Meier生存分析法进行数据分析。结果:57例(79.2%)患儿为持续排毒(EV71 39例,非EV7118例),有15例(20.8%)为间歇排毒(EV71组6例,非EV71组9例)。在持续性排毒中,EV71组患儿在第1-7周病毒核酸阳性率均为100%,第8-12周分别为94.4%、91.2%、81.6%、81.6%、81.6%,非EV71组在第1-10周病毒核酸阳性率分别为100%、88.9%、83.3%、72.2%、55.5%、23.2%、38.9%、22.2%、14.8%、14.8%、14.8%。这2组粪便核酸阳性率分布有统计学差异(t=4.00,P=0.00)。EV71组与非EV71组患儿的病毒载量在第9周有统计学意义(Z=-2.17,P=0.03)。EV71与非EV71重症组、EV71与非EV71普通组及EV71普通组与重症组患儿的病毒载量在各随访时间内均无统计学意义(P〉0.05)。EV71组患儿病毒载量在年龄和性别上均无统计学差异(χ-2=3.15,P=0.21;Z=-0.03,P=0.98)。结论:手足口病患儿多数为持续排毒,可持续12周以上,EV71组排毒时间长于非EV71组;但EV71组病毒载量低于非EV71组。EV71组病毒载量与年龄和性别无关。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒属 排毒时间 排毒量
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手足口病患儿EV71的检测及分离鉴定 被引量:2
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作者 刘芳 陈淑红 +3 位作者 陈露菲 张静 李冀宏 孟仁 《中国公共卫生管理》 2011年第3期334-335,共2页
目的了解手足口病患儿感染EV71的情况,为科学防治疾病提供依据。方法采集手足口病患儿的咽拭子标本,接种于RD细胞,出现致细胞病变效应(CPE),运用RT-PCR方法,EV71引物检测样本和细胞培养物上清。结果标本直接用RT-PCR扩增,阳性率为30%... 目的了解手足口病患儿感染EV71的情况,为科学防治疾病提供依据。方法采集手足口病患儿的咽拭子标本,接种于RD细胞,出现致细胞病变效应(CPE),运用RT-PCR方法,EV71引物检测样本和细胞培养物上清。结果标本直接用RT-PCR扩增,阳性率为30%(6/20),细胞培养后出现CPE的阳性率为45%(9/20),培养后经RT-PCR扩增阳性率为70%(14/20)。结论病毒分离和RT-PCR方法联合应用可以提高肠道病毒EV71的检出率,RT-PCR方法可以满足病毒流行期间同时处理大量样本的需要。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒EV 病毒分离
Cyanidin-horseradish peroxidase-hydroperoxide reaction system and its application in enzyme-linked immunosensing assays
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作者 FuChun Gong (1) DingZhong Li (1) +4 位作者 Rong Yang (1) JianKe Wei (1) Zhong Cao (1) ShuZhen Tan (1) YaFei Tan (1) 《中国科学:化学英文版》 SCIE EI CAS 2009年第8期1142-1147,共6页
A cyanidin-based horseradish peroxidase(HRP)-catalyzed reaction system was established in this work.In B-R buffer solutions(pH 6.8),a UV-visible absorbance peak of cyanidin(CAG) at 540 nm(Ap1) appeared.After the oxid... A cyanidin-based horseradish peroxidase(HRP)-catalyzed reaction system was established in this work.In B-R buffer solutions(pH 6.8),a UV-visible absorbance peak of cyanidin(CAG) at 540 nm(Ap1) appeared.After the oxidation reaction of CAG catalyzed by HRP in the presence of H2O2,a significant absorbance peak at 482 nm(Ap2) occurred.The ratio R(AP2/AP1)was proportional to the HRP concentration.The application of CAG in the enzyme-linked immunosensing assays was investigated using food and mouth disease virus antigen(FMDVAg) as a model analyte.In sandwich immunoreaction,the analyte FMDVAg and food and mouth disease virus antibody(FMDVAb)-modified magnetic nanoparticles bound the supported conconvalina(Con A) bound with HRP-FMDVAb.After de-absorbing and separating,the HRP-FMDVAb-FMDVAg-FMDVAb-magnetic nanoparticles complexes were subject to enzymatic reaction and UV-visible absorbance measurements.The HRP moiety of the immunoreaction complexes can catalyze the oxidation reaction of CAG by H2O2,and the substrate CAG is converted to products.Based on this principle,a sandwich assay model has been employed to determine FMDVAg in rabbit serum samples with the aid of FMDVAb-Fe3O4 magnetic nanoparticles.The linear range of the FMDVAg determination is 1.5×10-8-2.7×10-6 g/mL with the relatively standard deviation of 3.7%(n = 11).The detection limit is 3.1×10-9 g/mL.Additional advantages of the typical substrate such as OPD,OAP and TMB are good water-solubility and stability. 展开更多
关键词 CYANIDIN HRP SUBSTRATE enzyme-linked IMMUNOSENSING food and MOUTH disease virus
禽流感病毒、新城疫病毒、猪瘟病毒和口蹄疫病毒多联RT-PCR诊断技术的建立 预览 被引量:7
15
作者 刘维全 刘海鹏 +6 位作者 江禹 王本旭 王吉贵 杨淑艳 孙绍光 涂长春 刘芃芃 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 2005年第1期 92-95,共4页
选择禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、猪瘟病毒(CSFV)和口蹄疫病毒(FMDV)基因组序列高保守区,按照多联PCR引物的设计要求,利用DNAsis计算机软件设计并合成了4对特异性扩增引物,扩增片段大小分别为470、320、200和140bp.以AIV、NDV、C... 选择禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、猪瘟病毒(CSFV)和口蹄疫病毒(FMDV)基因组序列高保守区,按照多联PCR引物的设计要求,利用DNAsis计算机软件设计并合成了4对特异性扩增引物,扩增片段大小分别为470、320、200和140bp.以AIV、NDV、CSFV和FMDV的培养物提取RNA并反转录,进行RT-PCR特异性扩增.结果表明,各单项RT-PCR扩增产物与设计的4对引物之间的序列大小一致.在分别建立了各病毒单项RT-PCR及AIV与NDV、CSFV与FMDV二联RT-PCR的基础上,进一步优化各种多联PCR扩增条件,成功建立了上述4种病毒的四联RT-PCR技术.经特异性和灵敏度实验证明,本方法具有高度的特异性和灵敏性,其灵敏度为10 pg总RNA.在3 h内即可完成样品的检测. 展开更多
关键词 CSFV FMDV 口蹄疫病毒 猪瘟病毒 AIV 禽流感病毒 新城疫病毒 RT-PCR 特异性 扩增
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绵羊口蹄疫病毒整联蛋白受体αv亚基基因不同组织表达差异 预览 被引量:1
16
作者 吾热力哈孜 陈创夫 +3 位作者 徐宁迎 胡圣伟 王遵宝 马柿委 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期 530-534,共5页
为了建立检测绵羊口蹄疫病毒(Footand mouth disease virus,FMDV)整联蛋白受体αv亚基基因mRNA相对表达量的荧光定量RT-PCR方法,本研究根据报道的绵羊FMDV整联蛋白受体αv亚基(integrin,alphaV,ITGAV)基因序列设计实时定量PCR引物,... 为了建立检测绵羊口蹄疫病毒(Footand mouth disease virus,FMDV)整联蛋白受体αv亚基基因mRNA相对表达量的荧光定量RT-PCR方法,本研究根据报道的绵羊FMDV整联蛋白受体αv亚基(integrin,alphaV,ITGAV)基因序列设计实时定量PCR引物,以β-actin为内参基因,采用相对荧光定量RT-PCR方法,检测分析αv基因在绵羊体内不同组织器官中的mRNA表达谱。结果显示αv基因在绵羊19种组织中均有不同程度的转录表达,在乳腺组织中表达量最高,蹄组织次之,肌肉组织最少,卵巢、瘤胃、气管、小肠、肺等组织上也有不同程度的表达。本研究成功建立了检测FMDV整联蛋白受体αv亚基基因在绵羊不同器官组织中mRNA表达水平的相对荧光定量RT-PCR方法,并明确了αv基因在不同组织间的表达差异,为FMDV组织嗜性研究及分子生物学检测方法的建立提供了资料。 展开更多
关键词 绵羊 口蹄疫病毒(FMDV)受体αv mRNA转录水平 荧光定量PCR
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用proteinG纯化口蹄疫病毒单克隆抗体的特性分析 预览 被引量:3
17
作者 宋帅 林彤 +4 位作者 邵军军 丛国正 独军政 高闪电 常惠芸 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期 139-142,共4页
目的为了获得高效价和高纯度的O型口蹄疫病毒单克隆抗体。方法用O型口蹄疫乳鼠毒(LD50=10^-8.5)感染免疫小鼠,按有限稀释法和ELISA方法筛选出阳性杂交瘤细胞株,制备单抗腹水,所收腹水用50%和45%的饱和硫酸铵沉淀,再用proteinG... 目的为了获得高效价和高纯度的O型口蹄疫病毒单克隆抗体。方法用O型口蹄疫乳鼠毒(LD50=10^-8.5)感染免疫小鼠,按有限稀释法和ELISA方法筛选出阳性杂交瘤细胞株,制备单抗腹水,所收腹水用50%和45%的饱和硫酸铵沉淀,再用proteinG亲和层析柱进行亲和层析纯化单体,并用SDS-PAGE和单抗检测方法分析其纯化抗体的纯度和活性。结果经3次亚克隆获得了一株杂交瘤细胞株(10E6),抗体亚类鉴定为IgG2a;SDSPAGE电泳显示,纯化的抗体纯度较高,只有IgG2a的重链和轻链,而没有其它杂蛋白带;单抗ELISA检测方法显示,纯化的抗体具有良好的活性,其效价为1:102400,高于腹水效价。结论用proteinG亲和层析法获得了高纯度和高效价的单克隆抗体,将为O型口蹄疫病毒的基础研究和应用研究奠定基础。 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 单克隆抗体 链球菌G蛋白 亲和层析
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