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牛传染性鼻气管炎病毒部分gB蛋白的原核表达及抗原性分析 预览
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作者 何小丽 李凡飞 +3 位作者 王文佳 张凯 程成 许立华 《江苏农业科学》 2019年第17期189-192,共4页
为对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因进行原核表达,并对表达产物进行抗原性分析,利用笔者所在实验室已构建好的gB-BL21重组阳性菌落,进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并对培养及诱导表达条件(IPTG最佳浓度、作用时间)等影响表... 为对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因进行原核表达,并对表达产物进行抗原性分析,利用笔者所在实验室已构建好的gB-BL21重组阳性菌落,进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并对培养及诱导表达条件(IPTG最佳浓度、作用时间)等影响表达的因素进行优化,然后将表达的gB重组蛋白进行亲和层析纯化。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明,gB蛋白在大肠杆菌中高效表达,表达蛋白的相对分子量约为32.4ku,与预期的蛋白大小一致。经BCA(聚氰基丙烯酸正丁酯)蛋白含量测定试剂盒测定,gB重组蛋白浓度为1.84mg/mL。Western Blot结果显示,纯化后的gB重组蛋白能被标准IBR阳性血清识别,说明表达的目的蛋白具有良好的反应原性,可作为IBRV检测的特异性抗原。试验为建立牛传染性鼻气管炎诊断方法及研究gB蛋白的功能特性提供了材料和技术理论支持。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎 gB蛋白 原核表达 纯化 抗原性分析
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猪源伪狂犬病病毒gB蛋白抗体阻断ELISA的建立与应用
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作者 孙海凤 徐旋 +3 位作者 董静 孙涛 白娟 姜平 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第6期712-716,共5页
利用伪狂犬病病毒(PRV)ZJ01毒株重组gB蛋白及其对应的HRP标记的单克隆抗体,旨在建立一种检测伪狂犬病病毒gB抗体的阻断ELISA。对ELISA反应条件进行了优化,具体为:包被抗原的质量浓度为0.5 g/mL;待检血清的稀释比例为1∶1,孵育条件是3... 利用伪狂犬病病毒(PRV)ZJ01毒株重组gB蛋白及其对应的HRP标记的单克隆抗体,旨在建立一种检测伪狂犬病病毒gB抗体的阻断ELISA。对ELISA反应条件进行了优化,具体为:包被抗原的质量浓度为0.5 g/mL;待检血清的稀释比例为1∶1,孵育条件是37℃作用1 h;酶标单抗的稀释度为1∶15 000,作用时间为37℃0.5 h。ELISA结果的判定标准为:血清样品阻断率PI≥28.67%时判为阳性;PI≤18.27%时判为阴性;18.27%〈PI〈28.67%时判为可疑。该ELISA能特异性地识别PRV阳性血清,而与PRRSV、PCV2、CSFV和FMDV阳性血清无交叉反应性。ELISA的重复性试验表明,批间和批内的变异系数均小于10%。比较试验结果表明,该ELISA的相对敏感性和特异性分别为80.9%和96.4%,与IDEXX PRV gB ELISA试剂盒的符合率为85.1%。用建立的此ELISA对田间采集的535份猪临床血清样品进行了检测,结果显示,PRV抗体阳性率达61.87%。综上所述,本试验建立的猪源伪狂犬病病毒gB蛋白抗体阻断ELISA具有特异、简单、快速的优点,为建立标准化的检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gB蛋白 阻断ELISA
猪伪狂犬病病毒HeN1株gB蛋白单克隆抗体的制备及B细胞线性表位鉴定 预览
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作者 赵微 田志军 +2 位作者 王倩 倪宏波 彭金美 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第9期854-857,共4页
为制备抗猪伪狂犬病病毒(PRV)gB蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究将PRV HeN1株全病毒免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,用间接免疫荧光方法筛选,获得了一株稳定分泌抗PRV gB蛋白的杂交瘤细胞株1E7。Western b... 为制备抗猪伪狂犬病病毒(PRV)gB蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究将PRV HeN1株全病毒免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,用间接免疫荧光方法筛选,获得了一株稳定分泌抗PRV gB蛋白的杂交瘤细胞株1E7。Western blot结果显示,MAb 1E7与PRV全病毒和真核表达的gB蛋白均能够反应。阻断ELISA试验显示MAb 1E7与PRV的结合可以被猪阳性血清阻断。抗体亚类鉴定显示MAb 1E7的重链为IgG2b亚类,轻链为kappa链。利用大肠杆菌原核表达系统,表达一系列截短的gB蛋白,最终确定1E7识别的抗原表位是~(81)SAEESLE~(87)。序列分析和western blot结果表明该表位在各PRV病毒株间相对保守。该MAb的制备为建立具有广泛适用性检测PRV野毒感染和疫苗免疫效果评价的阻断ELISA方法奠定了基础。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 gB蛋白 单克隆抗体 表位
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人巨细胞病毒抗原表位的重组表达及免疫原性分析
4
作者 王蒙 孙文辉 +3 位作者 姬芳玲 蒲中机 李寅生 包永明 《中国生物工程杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期27-33,共7页
目的:用大肠杆菌表达系统表达人巨细胞病毒(HCMV)pp65蛋白和gB蛋白的优势抗原表位基因,制成HCMV亚单位疫苗,探究其在Balb/c小鼠体内的体液免疫和细胞免疫活性。方法:选取pp65蛋白的490-508aa和gB蛋白的607-621aa的基因片段,经PC... 目的:用大肠杆菌表达系统表达人巨细胞病毒(HCMV)pp65蛋白和gB蛋白的优势抗原表位基因,制成HCMV亚单位疫苗,探究其在Balb/c小鼠体内的体液免疫和细胞免疫活性。方法:选取pp65蛋白的490-508aa和gB蛋白的607-621aa的基因片段,经PCR扩增目的片段,连接表达载体pET.32a(+),转化BL21(DE3)plys菌株,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分析蛋白质表达,金属螯合亲和镍柱法纯化目的蛋白。重组蛋白免疫Balb/c小鼠,Western blotting法和间接ELISA法检测重组蛋白的体液免疫活性;通过流式细胞仪和双抗夹心ELISA法检测重组蛋白的细胞免疫活性。结果:获得分子质量约为22kDa的融合蛋白,Western blotting检测显示抗体有特异性,间接ELISA法检测其效价为1:102400。与对照组相比,实验组小鼠外周血中CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的数量,以及IFN-γ、IL-2、IL-12的含量有显著提高(P〈0.01)。结论:制备的具有免疫优势抗原表位的重组蛋白能诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫反应。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 PP65蛋白 gB蛋白 体液免疫 细胞免疫
猪伪狂犬病病毒gB蛋白表达及免疫原性分析 预览
5
作者 贾刚 樊梅娜 谷巍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第4期1175-1181,共7页
本试验旨在研究猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gB蛋白的表达并分析其免疫原性,以PRV病毒液为模板,设计特异性引物,扩增大小为612bp的保守片段并测序,将其克隆到表达载体pET-28a中,转化表达菌BL21(DE3),经诱导表达、纯化得... 本试验旨在研究猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gB蛋白的表达并分析其免疫原性,以PRV病毒液为模板,设计特异性引物,扩增大小为612bp的保守片段并测序,将其克隆到表达载体pET-28a中,转化表达菌BL21(DE3),经诱导表达、纯化得到目的蛋白,进行Western blotting分析验证并分析免疫原性。结果表明,表达的gB蛋白大小为30ku,主要以包涵体形式存在,复性后浓度为106μg/mL,且具有良好的反应原性。应用市售试剂盒检测到样品中含13份PRV阳性血清和16份阴性血清,利用检出的阳性血清,初步可建立以PRV gB蛋白为包被抗原的PRV抗体ELISA检测方法。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 gB蛋白 原核表达 免疫原性
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猪伪狂犬病毒gB和gC蛋白B细胞表位编码序列的融合表达及活性测定 预览
6
作者 张冲 刘芳 +3 位作者 赵东 邓瑞广 张改平 李学伍 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2016年第1期119-123,共5页
依据猪伪狂犬病毒g B和g C蛋白的B细胞表位编码序列,分别设计g B和g C蛋白B细胞表位编码序列的融合扩增引物,利用融合PCR技术,将g B和g C蛋白B细胞表位编码序列有机地融合为g B-C表位编码序列。将融合基因片段插入到原核表达载体p ET28a... 依据猪伪狂犬病毒g B和g C蛋白的B细胞表位编码序列,分别设计g B和g C蛋白B细胞表位编码序列的融合扩增引物,利用融合PCR技术,将g B和g C蛋白B细胞表位编码序列有机地融合为g B-C表位编码序列。将融合基因片段插入到原核表达载体p ET28a,并转化大肠杆菌BL21(DE3),1.0 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,融合蛋白g B-C能够高效表达,重组蛋白的分子质量约为38 ku;经Western blot鉴定分析,小鼠抗His标签单克隆抗体和PRV阳性血清均能识别表达的重组蛋白。表明成功表达了融合蛋白g B-C,且表达的重组蛋白具有较好的免疫学活性。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 gB蛋白 gC蛋白 B细胞表位 融合表达
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鸭瘟病毒gB蛋白单克隆抗体的制备 预览 被引量:1
7
作者 赵丹丹 刁有祥 +3 位作者 杨国平 陈浩 提金凤 张璐 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2016年第10期7-11,共5页
【目的】制备鸭瘟病毒(DPV)gB蛋白单克隆抗体,为建立DPV快速诊断方法及进一步鉴定DPV的抗原表位奠定基础。【方法】克隆DPVgB基因,构建其表达载体并进行原核表达,纯化DPV gB蛋白,以其作为抗原免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0... 【目的】制备鸭瘟病毒(DPV)gB蛋白单克隆抗体,为建立DPV快速诊断方法及进一步鉴定DPV的抗原表位奠定基础。【方法】克隆DPVgB基因,构建其表达载体并进行原核表达,纯化DPV gB蛋白,以其作为抗原免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,进行间接ELISA及亚克隆筛选,并对单抗亚类及抗原性进行鉴定。【结果】PCR扩增出915bp的目的基因,成功连接于pET-28a载体,并转化大肠杆菌Rosetta进行诱导表达,获得4株稳定分泌抗DPV gB蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为A8D7、E6C3、H11F8、H6F6,间接ELISA检测其腹水效价分别为1∶10^3、1∶10^3、1∶10^5、1∶10^3,亚类鉴定结果分别为IgG2b、IgG2a、IgG2b、IgG1,轻链均为kappa链。Western blot结果显示4株单抗均能与DPV gB蛋白特异性结合,IFA结果表明4株单抗是针对DPV产生的。【结论】成功获得了特异性针对DPV gB蛋白的单克隆抗体。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 gB蛋白 单克隆抗体
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鸭瘟病毒单抗的制备及胶体金试纸条检测方法的建立 预览 被引量:2
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作者 赵丹丹 杨国平 +5 位作者 刁有祥 陈浩 提金凤 张璐 张英 李川川 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第14期2796-2804,共9页
【目的】鸭瘟(DP)是由鸭瘟病毒(DPV)引起的一种急性、败血性传染病,以头颈肿胀、食道黏膜和泄殖腔黏膜出血、黄白色溃疡,头颈部皮下有黄白色胶冻样渗出为特征。该病一旦发生,发病急、死亡快、死亡率高,对养鸭业危害严重。快速诊断... 【目的】鸭瘟(DP)是由鸭瘟病毒(DPV)引起的一种急性、败血性传染病,以头颈肿胀、食道黏膜和泄殖腔黏膜出血、黄白色溃疡,头颈部皮下有黄白色胶冻样渗出为特征。该病一旦发生,发病急、死亡快、死亡率高,对养鸭业危害严重。快速诊断是控制鸭瘟的重要措施之一,可以及时确定病原,以便采取有效的防制手段。试验旨在建立鸭瘟病毒(DPV)胶体金快速检测方法。【方法】利用生物学软件Protean分析,选择鸭瘟病毒抗原表位较多的一段序列设计引物,PCR扩增目的基因。连接到载体pMD-18T上,测序正确后再连接到原核表达载体pET-28a上。将获得的重组质粒转化至Rosetta感受态细胞中进行诱导表达。表达的蛋白经纯化后测其浓度并经Western blotting鉴定分析。以表达的DPV-gB蛋白作为抗原,免疫7周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选及亚克隆,获得DPV-gB特异性单克隆抗体。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,以制备的H6F6单抗作为标记抗体(标记的最适pH为8.0—8.5,最佳标记浓度为15倍原液稀释),将纯化的A8D7单抗(浓度为2倍原液稀释)和羊抗鼠IgG(浓度为10倍稀释)包被在硝酸纤维素膜(NC)上,分别作为检测线和质控线,经条件优化建立了鸭瘟病毒胶体金试纸条检测方法。【结果】共获得4株能稳定分泌抗DPV-gB蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为A8D7、E6C3、H11F8、H6F6。间接ELISA检测腹水效价分别为1:10^3、1:10^3、1:10^5、1:10^3。亚类鉴定结果分别为IgG2b、IgG2a、IgG2b、IgG1,轻链均为kappa链。Western blotting结果显示4株单抗均能与DPV-gB蛋白特异性结合。IFA结果显示制备的4株单抗是针对DPV产生的。建立的胶体金试纸条方法能够特异性地检测鸭瘟病毒,与鸭坦布苏病毒、H9N2亚型禽流感病毒、呼肠孤病毒、减蛋综合征病毒无反应。阳性尿� 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 gB蛋白 原核表达 单克隆抗体 胶体金试纸条
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伪狂犬病病毒gB和gE蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:1
9
作者 孙海凤 顾真庆 +3 位作者 董静 孙涛 白娟 姜平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期247-252,共6页
采用大肠杆菌表达系统表达获得了伪狂犬病病毒(PRV)超强毒株ZJ01的gB和gE重组蛋白,用其免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、克隆和间接ELISA筛选,获得了4株能稳定分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞,细胞培养上清的ELISA抗体效价在1∶1 600~1... 采用大肠杆菌表达系统表达获得了伪狂犬病病毒(PRV)超强毒株ZJ01的gB和gE重组蛋白,用其免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、克隆和间接ELISA筛选,获得了4株能稳定分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞,细胞培养上清的ELISA抗体效价在1∶1 600~1∶6 400之间,腹水抗体效价达1∶4×105;连续培养20代,抗体效价基本一致。抗gB单克隆抗体B1B6和B3D7属于IgG2b,抗gE单克隆抗体E1B11和E5C10属于IgG1,轻链均为κ型。Western-blot和IFA结果显示,4株单克隆抗体均能与PRV流行毒株ZJ01、HZ、SD、NJ、LA发生特异性反应,B1B6和B3D7还能与PRV gE基因缺失疫苗毒株Bartha-K61发生反应,但E1B11和E5C10不能与Bartha-K61发生反应。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gB蛋白 gE蛋白 单克隆抗体
表达传染性喉气管炎病毒gB主要抗原表位区域重组新城疫病毒的构建 预览 被引量:4
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作者 孙娜娜 王琪 +1 位作者 李慧昕 刘胜旺 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期414-417,共4页
为构建以新城疫病毒(NDV)为活病毒载体表达传染性喉气管炎病毒(ILTV) gB主要抗原表位区域的重组病毒,本研究以ILTV LJS09株的DNA为模板,通过PCR技术扩增1 323 bp ILTV编码gB主要抗原表位的基因片段(1 bp~440 bp),将其插入到NDV... 为构建以新城疫病毒(NDV)为活病毒载体表达传染性喉气管炎病毒(ILTV) gB主要抗原表位区域的重组病毒,本研究以ILTV LJS09株的DNA为模板,通过PCR技术扩增1 323 bp ILTV编码gB主要抗原表位的基因片段(1 bp~440 bp),将其插入到NDV感染性克隆pBR-FL中,构建含有ILTV gB主要抗原基因的NDVcDNA克隆pBR-FL-gB1-440.利用磷酸钙转染法,在辅助质粒pCI-neo-NP、pCI-neo-P和pCI-neo-L的共同作用下,将重组质粒转染于表达T7聚合酶重组痘病毒预感染的BSR-T7/5细胞,获得重组病毒rL-gB1-440.采用RT-PCR检测接种重组病毒的鸡胚尿囊液,结果表明重组病毒中含有相应的外源基因.利用gB的抗血清检测重组病毒中gB的表达,间接免疫荧光试验表明,在感染重组病毒的BSR-T7/5细胞中目的蛋白得到表达.本研究为研制和开发传染性喉气管炎重组新城疫二联活疫苗奠定基础. 展开更多
关键词 重组新城疫病毒 传染性喉气管炎病毒 gB蛋白 主要抗原表位基因
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牛传染性鼻气管炎病gB蛋白的截短表达及间接ELISA方法的建立 预览 被引量:3
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作者 曹翀 曹永生 +4 位作者 宋林 高明春 彭统全 张树栋 王君伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期123-127,共5页
为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的间接ELISA方法,本研究根据Gen Bank登录的IBRV全基因组序列,设计引物扩增糖蛋白B(g B)基因编码第190~524氨基酸残基(aa)的基因,构建重组质粒p ET-g B进行原核表达。SDS-PAGE结果显示目的... 为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的间接ELISA方法,本研究根据Gen Bank登录的IBRV全基因组序列,设计引物扩增糖蛋白B(g B)基因编码第190~524氨基酸残基(aa)的基因,构建重组质粒p ET-g B进行原核表达。SDS-PAGE结果显示目的蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达,大小约为40 ku。Western blot鉴定表明目的蛋白具有良好的反应原性。以纯化的g B蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA检测方法,该方法敏感性好,特异性强,与其他病原血清无交叉反应,其组内组间变异系数均低于11%。与IDEXX公司的g B-ELISA试剂盒进行对比,阳性符合率为84.28%,阴性符合率为85.71%。采用本研究建立的方法对黑龙江省10个农场的血清样品进行了IBR的流行性调查,阳性率最高为65.52%,最低为5.56%,平均阳性率为18.01%。本研究建立的ELISA方法为进出口检疫和该病防制工作提供一种可选方法。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gB蛋白 原核表达 间接ELISA
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猕猴B病毒gB蛋白胞外区基因片段的合成和真核表达 预览
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作者 刘慧芳 孙书芳 +6 位作者 曾林 易思萌 游颖 马雨楠 范君文 孙兆增 王新 《中国比较医学杂志》 2014年第11期6-9,I0003共5页
目的获得猕猴B病毒gB蛋白胞外区基因,并分析其表达特性。方法利用基因合成的方法合成B病毒gB蛋白胞外区的基因片段,经BamHI和Not I双酶切后连接到pEGFP-N3载体。将构建的pEGFP-N3-GB合重组质粒转染到293细胞。提取蛋白用Westernblot... 目的获得猕猴B病毒gB蛋白胞外区基因,并分析其表达特性。方法利用基因合成的方法合成B病毒gB蛋白胞外区的基因片段,经BamHI和Not I双酶切后连接到pEGFP-N3载体。将构建的pEGFP-N3-GB合重组质粒转染到293细胞。提取蛋白用Westernblot检测其在细胞内的表达情况,并利用激光共聚焦分析在细胞内的表达定位。结果pEGFP-N3-GB合重组质粒能在293细胞内正常表达,并且在细胞膜上表达。结论利用真核表达系统,可以产生B病毒gB蛋白的特异性抗原重组蛋白,且在细胞膜上表达。 展开更多
关键词 猕猴B病毒 gB蛋白 合成 真核表达
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伪狂犬病毒gB基因的表达及单克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 邱佳 符芳 +6 位作者 柴政 姜福成 田华彬 郎月坤 郑楠 李曦 张彦龙 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第3期17-20,共4页
为了研究伪狂犬病毒gB基因的原核表达并制备其单克隆抗体,试验采用含有伪狂犬病毒(PRV)gB蛋白抗原表位的基因作为模板进行扩增,得到大小为588bp的扩增产物,将其克隆到表达载体pET-32a(+)中,转化表达菌Transetta(DE3),经诱... 为了研究伪狂犬病毒gB基因的原核表达并制备其单克隆抗体,试验采用含有伪狂犬病毒(PRV)gB蛋白抗原表位的基因作为模板进行扩增,得到大小为588bp的扩增产物,将其克隆到表达载体pET-32a(+)中,转化表达菌Transetta(DE3),经诱导表达得到目的蛋白;以纯化后的重组gB蛋白为抗原,免疫Balb/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞。结果表明:表达的重组gB蛋白约为44ku,以包涵体形式存在,具有良好的反应原性;获得的2株杂交瘤细胞均能够稳定分泌抗gB蛋白的特异性单克隆抗体(McAb)。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 gB蛋白 原核表达 单克隆抗体
猕猴B病毒gB蛋白特异性抗原表位的合成和表达 预览 被引量:2
14
作者 隋丽华 刘一 +7 位作者 赵彦斌 张小飞 崔晓霞 叶华虎 白杰英 许琴 孙兆增 曾林 《中国比较医学杂志》 2013年第3期4-7,共4页
目的获得可以用于B病毒检测的gB蛋白特异性表位重组抗原。方法利用基因合成的方法,合成包含B病毒gB蛋白主要特性抗原表位的基因,通过定向克隆的方法,将该基因克隆到原核表达载体pET-22b中,构建了重组表达质粒。筛选出阳性重组质粒... 目的获得可以用于B病毒检测的gB蛋白特异性表位重组抗原。方法利用基因合成的方法,合成包含B病毒gB蛋白主要特性抗原表位的基因,通过定向克隆的方法,将该基因克隆到原核表达载体pET-22b中,构建了重组表达质粒。筛选出阳性重组质粒,转化到BL21感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。结果成功的获得了B病毒gB蛋白的特异性抗原蛋白,该蛋白以可潜的形式表达。结论利用原核表达系统,可以产生B病毒gB蛋白特异性表位重组抗原,可以作为B病毒的检测抗原。 展开更多
关键词 猕猴B病毒 gB蛋白 抗原表位 合成与表达
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鸭疱疹病毒1型的gB蛋白截短表达及其ELISA检测 预览 被引量:1
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作者 马力 杨丽梅 +6 位作者 郭时金 沈志强 李峰 张颖 徐倩倩 张志美 王艳萍 《家畜生态学报》 北大核心 2013年第10期62-67,共6页
参照已发表的鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)基因组序列,利用生物学软件DNAstar进行序列分析,设计并合成一对特异性引物,PCR扩增了长855 bp的gB基因片段.将目的片段克隆至pMD18-T载体,经PCR、酶切及测序鉴定后,定向克隆至pET30... 参照已发表的鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)基因组序列,利用生物学软件DNAstar进行序列分析,设计并合成一对特异性引物,PCR扩增了长855 bp的gB基因片段.将目的片段克隆至pMD18-T载体,经PCR、酶切及测序鉴定后,定向克隆至pET30a表达载体中,经PCR、酶切鉴定正确后,重组质粒转化BL21表达茵,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组蛋白.重组蛋白在变性的条件下采用Ni柱亲和层析法纯化,变性蛋白复性后,Western blot检测表明重组蛋白具有良好的反应活性,以该蛋白作为诊断抗原,初步建立了检测鸭肠炎病毒抗体的间接ELISA诊断方法,为鸭肠炎病毒抗体诊断试剂盒的研制奠定了基础. 展开更多
关键词 鸭疱疹病毒1型 gB蛋白 表达 活性检测
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牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及初步应用 被引量:2
16
作者 王蓓蕾 孟日增 +1 位作者 王为 钱爱东 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第2期 206-208,共3页
目的制备牛传染性鼻气管炎病毒(Infectiousbovinerhinotracheitisvirus,IBRV)gB蛋白单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA方法。方法应用重组IBRVgB蛋白免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,利用IBRV全病毒免疫家兔制备多... 目的制备牛传染性鼻气管炎病毒(Infectiousbovinerhinotracheitisvirus,IBRV)gB蛋白单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA方法。方法应用重组IBRVgB蛋白免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,利用IBRV全病毒免疫家兔制备多克隆抗体,采用方阵滴定法确定兔抗IBRVIgG多抗与单抗的最适工作浓度,建立双抗体夹心EHSA检测方法,并对该方法进行灵敏度和特异性验证。结果获得了1株稳定分泌抗IBRVgB单抗的杂交瘤细胞株,命名为2C4;兔抗IBRVIgG多抗和单抗的最适工作浓度分别为2.6209和2.6341I,zg/ml,酶标二抗的最适稀释度为1:30000;应用建立的双抗体夹心ELISA法对100份IBRV阳性血清样品进行检测,结果均呈阳性,符合率为100%;检测牛口蹄疫病毒、牛流行热病毒、牛副流感3型病毒的结果均呈阴性。结论成功制备了IBRVgB蛋白单克隆抗体,并建立了IBRV双抗体夹心ELISA检测方法,可用于牛传染性鼻气管炎的诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 疱疹病毒Ⅰ型 gB蛋白 抗体 单克隆 酶联免疫吸附测定
牛传染性鼻气管炎病毒截短gB基因原核表达与间接ELISA诊断方法建立 预览 被引量:4
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作者 李伟 孟日增 +3 位作者 石建平 何江帅 赵晓 卢强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第2期 83-86,共4页
用DNAstar-Protean分析牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白的亲水性、抗原性和表面展示概率,据IBRVgB全基因序列设计引物,PCR扩增编码385-550位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向连接到pET-28b载体上,转化表达菌DE3... 用DNAstar-Protean分析牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白的亲水性、抗原性和表面展示概率,据IBRVgB全基因序列设计引物,PCR扩增编码385-550位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向连接到pET-28b载体上,转化表达菌DE3并诱导表达。经SDS-PAGE分析,获得大小约为21.4 ku的目的蛋白,与预测值相符。纯化后的蛋白浓度约为2.0 mg/mL,纯度为95.27%。间接ELISA及Western blotting证明,表达的目的蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原建立的间接ELISA诊断方法,确定的抗原包被量为50μg/mL,血清的最佳稀释倍数为50。与进口IBRV全毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性为92.3%、敏感性为93.8%、符合率为93.3%;试验结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性。 展开更多
关键词 IBRV gB蛋白 原核表达 间接ELISA
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牛传染性鼻气管炎病毒gB、gE蛋白的研究概述 预览 被引量:4
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作者 牛德料 孟日增 石建平 《畜牧与饲料科学》 2008年第3期 61-62,72,共3页
牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)又名牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus Ⅰ,BHV-1)。BHV-1基因能编码11种糖蛋白,其中gB蛋白和gE蛋白在病毒致病过程和刺激机体产生抗体的过程中都起到较大... 牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)又名牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus Ⅰ,BHV-1)。BHV-1基因能编码11种糖蛋白,其中gB蛋白和gE蛋白在病毒致病过程和刺激机体产生抗体的过程中都起到较大的作用。笔者就关于gB、gE这2种糖蛋白的研究做一概述。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gB蛋白 gE蛋白
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鸭瘟病毒gB蛋白N端主要抗原域的表达及间接ELISA检测 预览 被引量:9
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作者 潘华奇 曹瑞兵 +4 位作者 刘磊 孙海亮 姬向波 陈勇军 陈溥言 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期 98-102,共5页
在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoRI和HindHI之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1。将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,... 在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoRI和HindHI之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1。将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培养和表达条件进行了优化,实现了DPVgB蛋白主要抗原域的高效表达。免疫印迹试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性。应用His-Bind亲和层析柱纯化重组DPVgB蛋白,以纯化的重组gBl蛋白作为检测抗原,初步建立了检测鸭瘟病毒抗体的igBl-ELISA。结果表明,抗原的最佳包被浓度为6.5gg/mL,血清的最佳稀释度为1:80,阳性标准初步定为:待检血清019490〉0.4,且待检血清OD49d阴性血清019490〉2。应用igB1-ELISA对鸭血清样品进行检测,结果表明igB1-ELISA与全病毒包被的iDPV-ELISA符合率达到95.6%。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 gB蛋白 原核表达 抗原域 间接ELISA
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牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白研究进展 预览 被引量:5
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作者 李兆利 薛飞 朱远茂 《动物医学进展》 CSCD 2006年第4期 1-4,共4页
牛传染性鼻气管炎病毒能引起牛多系统感染,是导致养牛业重大经济损失的一种重要病原。该病毒是有囊膜的双股DNA病毒,病毒囊膜蛋白在病毒致病中发挥了重要作用,其中gB蛋白对病毒的吸附、侵入、复制和细胞间扩散是必需的,可刺激机体... 牛传染性鼻气管炎病毒能引起牛多系统感染,是导致养牛业重大经济损失的一种重要病原。该病毒是有囊膜的双股DNA病毒,病毒囊膜蛋白在病毒致病中发挥了重要作用,其中gB蛋白对病毒的吸附、侵入、复制和细胞间扩散是必需的,可刺激机体产生大量的中和抗体。对gB蛋白的研究不仅是理解病毒分子生物学功能特征的需要,而且在临床诊断和疾病预防中也具有重要意义。文章就gB蛋白的结构特征、生物学功能以及在免疫学和诊断方面的研究做了综述,并对上述方面进行了展望。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gB蛋白 物学功能 免疫学 诊断
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