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马立克病病毒编码的miR-M11-5p宿主靶基因的筛选与鉴定 预览
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作者 刘豪丽 滕蔓 +5 位作者 李会珍 余祖华 刘金玲 丁轲 张改平 罗俊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1026-1038,共13页
作为α疱疹病毒的重要成员,马立克病病毒(MDV)感染鸡可引起免疫抑制及快速发作的T细胞淋巴瘤,即马立克病(MD)。此前发现MDV基因组编码大量病毒miRNA,可能在病毒复制、潜伏感染及肿瘤发生中起重要作用。基因敲除miR-M11-5p可显著增强MDV... 作为α疱疹病毒的重要成员,马立克病病毒(MDV)感染鸡可引起免疫抑制及快速发作的T细胞淋巴瘤,即马立克病(MD)。此前发现MDV基因组编码大量病毒miRNA,可能在病毒复制、潜伏感染及肿瘤发生中起重要作用。基因敲除miR-M11-5p可显著增强MDV致病性及致瘤性,表明其可能是MD肿瘤抑制因子。为进一步揭示miR-M11-5p介导的调控机制,本研究利用鸡胚成纤维细胞(CEF)总RNA的cDNA为模板,通过hybrid-PCR扩增miR-M11-5p的候选宿主靶基因片段,然后连接至pMD19-T载体、转化至E.coliJM109中构建cDNA文库。对文库菌落进行PCR鉴定、测序分析以及Blast序列对比,共获得77个候选宿主靶基因,其中37个miRNA结合靶点位于候选靶基因的3'-UTR中。进一步通过双荧光素酶报告试验、miR-M11-5p过表达以及RT-qPCR分析,最终鉴定鸡MAFB、LOC776816和RFX7为miR-M11-5p的宿主靶基因。本研究为进一步阐明miR-M11-5p在MDV肿瘤发生中的调控机制奠定了重要基础。 展开更多
关键词 马立克病病毒 微小RNA miR-M11-5p hybrid-PCR 靶基因 实时荧光定量PCR
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马立克病病毒miR-M4-5p宿主靶基因cDNA文库的构建及鉴定 预览
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作者 薛正飞 滕蔓 +5 位作者 李会珍 马圣明 宋利娜 张雅 罗俊 张改平 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期348-359,共12页
马立克病病毒(MDV)是少数感染自然宿主后可诱发淋巴瘤的疱疹病毒之一,是研究肿瘤发生及发展的理想动物模型。目前已报道MDV可编码数十种miRNA,其中MDV-1编码的miR-M4-5p被鉴定为宿主细胞miR-155的同源物,由于miR-155与人类多种肿瘤性... 马立克病病毒(MDV)是少数感染自然宿主后可诱发淋巴瘤的疱疹病毒之一,是研究肿瘤发生及发展的理想动物模型。目前已报道MDV可编码数十种miRNA,其中MDV-1编码的miR-M4-5p被鉴定为宿主细胞miR-155的同源物,由于miR-155与人类多种肿瘤性疾病密切相关,这意味着miR-M4-5p可能在MDV的致瘤过程中扮演重要角色。本研究旨在构建miR-M4-5p的宿主靶基因文库并进行初步鉴定。提取鸡胚成纤维细胞(CEF)总RNA,反转录合成cDNA,用hybrid-PCR扩增候选靶基因片段连接到pMD19-T载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞后挑选单克隆进行PCR鉴定及测序,通过BLAST比对分析,共获得88个宿主候选靶基因序列。优先选择miRNA结合靶点位于mRNA 3′-UTR且与miR-M4-5p种子序列(2-7nt)完全互补配对的29个候选靶基因,构建报告基因载体进行双荧光素酶报告试验,通过三轮双荧光素酶报告试验最终初步鉴定5个宿主靶基因:PRICKLE1、COLA、BCAT1、ANTXR1和TECPR1,为进一步揭示miR-M4-5p的分子调控机制奠定了重要基础。 展开更多
关键词 马立克病病毒 hybrid-PCR miR-M4-5p CDNA文库 宿主靶基因 肿瘤发生
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宫颈脱落细胞高危型人乳头状病毒核酸扩增微板杂交捕获检测的临床意义 预览
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作者 赵春辉 常月琴 《实用医技杂志》 2007年第5期 548-549,共2页
目的:探讨核酸扩增(PCR)微板杂交捕获检测宫颈脱落细胞内高危型人乳头状病毒(HPV)感染的临床意义,建立快速、灵敏的检测方法.方法:采用PCR微板杂交捕获检测140例宫颈脱落细胞高危型HPV(HPV16/18/31/33/35/39/45/51/52/56/58/59/6... 目的:探讨核酸扩增(PCR)微板杂交捕获检测宫颈脱落细胞内高危型人乳头状病毒(HPV)感染的临床意义,建立快速、灵敏的检测方法.方法:采用PCR微板杂交捕获检测140例宫颈脱落细胞高危型HPV(HPV16/18/31/33/35/39/45/51/52/56/58/59/68)感染状况.结果:细胞学诊断低度鳞状上皮内病变(LSIL)56例,高危型HPV DNA阳性18例(阳性率为32.5%);细胞学诊断高度鳞状上皮内病变(HSIL)42例,高危型HPV DNA阳性25例(阳性率为59.5%);未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)31例,高危型HPV DNA阳性11例(阳性率为35.5%);鳞状细胞癌9例,高危型HPV阳性8例(阳性率88.9%).结论:PCR微板杂交捕获检测宫颈脱落细胞内高危型HPV感染,具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点,适用于大规模筛查和临床常规工作. 展开更多
关键词 宫颈脱落细胞 人乳头状病毒 微板杂交捕获法
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滇1型水稻质核雄性不育恢复基因的PCR分子标记 预览 被引量:2
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作者 赵银河 谭学林 +3 位作者 谭亚林 张雪梅 洪汝科 黄大军 《种子》 CSCD 北大核心 2003年第2期 45-47,共3页
用混合品集分析方法(Bulked Line Analysis简称BLA),在保持系和测交父本中的DNA各取20个样等量混合,对PMRF、OSR-33、RM294、RG304、RG257五对引物进行筛选,结果发现PMRF和OSR-33俩对PCR引物在保持系和恢复系之间有遗传差异.用这俩对引... 用混合品集分析方法(Bulked Line Analysis简称BLA),在保持系和测交父本中的DNA各取20个样等量混合,对PMRF、OSR-33、RM294、RG304、RG257五对引物进行筛选,结果发现PMRF和OSR-33俩对PCR引物在保持系和恢复系之间有遗传差异.用这俩对引物分别对40个保持系和60个测交父本DNA样品进行扩增.另外,用滇1型杂交粳稻的保持系40份和测交父本60份与不育系进行测交,杂种F1花粉的育性经1%的I-KI染色.用扩增出的带型与F1花粉的育性进行相关分析,结果表明扩增出带型与花粉的育性呈显著正相关,两种带型对应的花粉可育率均值经t测验差异极显著,表明PMRF和OSR-33标记与滇1型细胞质雄性不育育性恢复基因连锁,由于PMRF和OSR-33 PCR引物是设计在第10染色体长臂的中部,所以,滇1型细胞质雄性不育育性恢复的一个基因可初步定位于第10染色体长臂的中部. 展开更多
关键词 滇1型水稻 质核雄性不育 恢复基因 PCR分子标记
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