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双抗原夹心ELISA法与间接ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体对比分析 预览
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作者 孙丽 《临床研究》 2019年第6期156-157,共2页
目的分别探讨双抗原夹心酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)与间接ELISA法对丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)抗体(抗-HCV)的临床检测价值。方法回顾性分析2016年1月~2019年2月期间在本院进行无偿献血的100人... 目的分别探讨双抗原夹心酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)与间接ELISA法对丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)抗体(抗-HCV)的临床检测价值。方法回顾性分析2016年1月~2019年2月期间在本院进行无偿献血的100人次(100份标本)的临床资料,其中包括抗-HCV阴性标本79份,抗-HCV阳性标本21份,上述所有标本均需接受双抗原夹心ELISA法与间接ELISA法检测,分析不同检测方法的阳性检出率、特异度与准确度。结果双抗原夹心ELISA法的阳性检出率为97.47%,间接ELISA法的阳性检出率为86.08%,不同检测方法阳性检出率对比,差异有统计学意义(P<0.05);双抗原夹心ELISA法的准确度与特异度分别为98.00%、100.00%,间接ELISA法为85.00%、80.95%,不同检测方法对比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与间接ELISA法相较而言,双抗原夹心ELISA法为检测抗-HCV阳性标本的有效手段,且阳性检出率与特异度均较高,利于临床应用。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒抗体 双抗原夹心ELISA 间接ELISA
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柯萨奇病毒B组4型VP1蛋白原核表达及间接ELISA检测方法的建立
2
作者 张伟伟 周宏 +2 位作者 李娟 张振杰 史卫峰 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第3期303-308,共6页
目的 以柯萨奇病毒B组4型(Coxsackievirus B4,CV-B4)VP1基因的原核表达蛋白作为包被抗原,建立并优化间接ELISA方法,用于CV-B4的抗体检测.方法 采用RT-PCR技术扩增CV-B4病毒VP1基因,构建重组表达载体pET-32VP1,并转化至表达菌株大肠埃希... 目的 以柯萨奇病毒B组4型(Coxsackievirus B4,CV-B4)VP1基因的原核表达蛋白作为包被抗原,建立并优化间接ELISA方法,用于CV-B4的抗体检测.方法 采用RT-PCR技术扩增CV-B4病毒VP1基因,构建重组表达载体pET-32VP1,并转化至表达菌株大肠埃希菌Rosetta(DE3),进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和蛋白质谱鉴定目的蛋白成功表达.以纯化的重组蛋白为包被抗原,进行间接ELISA方法反应体系的建立和条件优化.结果 CV-B4的VP1基因可在大肠埃希菌中以包涵体形式稳定表达,确定抗体间接ELISA检测方法的抗原最佳包被浓度为7.5μg/孔,血清最佳稀释浓度为1:100,临界值为OD450值≥0.376,重组蛋白可与CV-B4阳性血清特异识别,与CV-B3阳性血清存在一定交叉反应,但与柯萨奇A组病毒以及CV-B1和CV-B5均无反应,表明蛋白具有良好的免疫原性.结论 大肠埃希菌表达的VP1重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性,可用于CV-B4血清抗体的检测. 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B组4型 VP1 原核表达 间接ELISA
猪伪狂犬病毒间接ELISA抗体检测方法的建立 预览
3
作者 刘旻翾 丁光明 +5 位作者 付钰广 刘爱红 陈佳宁 李宝玉 曾巧英 刘光亮 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期484-488,共5页
为了满足我国现阶段猪伪狂犬病病毒(PRV)高频突变引发新疫情诊断的需求,本实验通过生物信息学分析比较,设计合成了针对PRV g B糖蛋白高度保守的抗原优势表位区肽段,命名为g B872。以此肽段为包被抗原,经条件优化建立了新型的PRV-g B间接... 为了满足我国现阶段猪伪狂犬病病毒(PRV)高频突变引发新疫情诊断的需求,本实验通过生物信息学分析比较,设计合成了针对PRV g B糖蛋白高度保守的抗原优势表位区肽段,命名为g B872。以此肽段为包被抗原,经条件优化建立了新型的PRV-g B间接ELISA抗体检测方法。该ELISA方法检测结果显示,其仅对PRV血清检测为阳性,而与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒(O型)、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等主要猪源病毒阳性血清均无交叉反应,表明该方法具有较强的特异性;最低检测下限血清稀释度为1∶128,高于IDEXX PRV/ADV g B抗体检测试剂盒检测下限稀释度(1∶4),表明该方法敏感性高;批内、批间重复性试验结果显示,变异系数均低于10%,重复性良好。利用该方法与Bio Chek PRV-g B抗体检测试剂盒检测90份临床血清样品,对比结果分析显示,两者阳性符合率为100%,阴性符合率为97.67%,总体符合率为97.78%;同时,采用该方法与IDEXX-g I(gE)和IDEXX-g B试剂盒分别对野毒感染血清和疫苗免疫血清同时检测,该方法可以准确识别野毒阳性血清和疫苗免疫阳性血清,与IDEXX两种试剂盒的结果一致。本研究建立的间接ELISA检测方法对PRV疫苗免疫效果评价、流行病学调查及防控提供了可靠的方法。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 肽段 间接ELISA
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伊犁部分地区马泰勒虫抗体的检测
4
作者 王莉君 温镇豪 +2 位作者 李桢 闻秀秀 巴音查汗 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期74-77,共4页
为了解伊犁部分地区马场感染马泰勒虫(Theileria equi)的情况,试验将重组原核表达质粒pGEX4T-1/EMA1转化至大肠杆菌菌株BL21表达系统中,诱导表达56 ku的重组蛋白(EMA1);经KCl方法切胶纯化后作为间接ELISA包被抗原,对伊犁州六个不同地区... 为了解伊犁部分地区马场感染马泰勒虫(Theileria equi)的情况,试验将重组原核表达质粒pGEX4T-1/EMA1转化至大肠杆菌菌株BL21表达系统中,诱导表达56 ku的重组蛋白(EMA1);经KCl方法切胶纯化后作为间接ELISA包被抗原,对伊犁州六个不同地区随机采集的样品(n=352)进行马泰勒虫抗体的检测。结果表明:以GST-EMA1蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA法可明显区分马泰勒虫阳性血清和健康马血清。在所检测的血清样品中,马泰勒虫血清抗体阳性率为7.4%(26/352),其中乌尊布拉克乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为7.3%(4/55)、昭苏镇的马泰勒虫血清抗体阳性率为13.2%(10/76)、萨尔阔布乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为8.2%(6/73)、察汗乌苏乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为6.5%(4/62)、喀拉苏乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为2.0%(1/49)、喀夏加尔乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为2.7%(1/37);伊犁州等六个地区马场马泰勒虫血清抗体阳性率随年龄而改变,其中7岁马匹的马泰勒虫的血清抗体阳性率最高。说明马泰勒虫在伊犁地区马匹中普遍存在,应该加强对该病的检测、监控。 展开更多
关键词 马泰勒虫 EMA1蛋白 间接ELISA 抗体检测 临床试验
禽腺病毒4型中国流行株Fiber2蛋白的原核表达与间接ELISA抗体检测方法的建立
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作者 田开月 张玉菡 +4 位作者 郭慧芳 李宁 杨霞 王增 赵军 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第9期76-80,共5页
为建立禽腺病毒4型(FAdV-4)特异性抗体检测方法,将密码子优化合成的FAdV-4中国流行株Fiber2蛋白的编码基因克隆于pET-32a(+)载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。用纯化的Fiber2蛋白作为包被抗原,通过一系列条件的优化,建立了一种检测F... 为建立禽腺病毒4型(FAdV-4)特异性抗体检测方法,将密码子优化合成的FAdV-4中国流行株Fiber2蛋白的编码基因克隆于pET-32a(+)载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。用纯化的Fiber2蛋白作为包被抗原,通过一系列条件的优化,建立了一种检测FAdV-4抗体的间接ELISA方法。结果:该方法可以特异地检测抗FAdV-4抗体,与新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、H5和H9亚型禽流感病毒等常见禽病毒的抗血清均无交叉反应,表明所建立ELISA具有较好的特异性;FAdV-4阳性血清经1?3 200稀释后检测结果仍为阳性,表明所建立ELISA方法具有较高的敏感性;所建立ELISA的批内和批间重复试验的变异系数分别为1.5%~5.2%和1.1%~5.6%,表明其重复性良好。应用建立的ELISA方法对河南省及周边部分地区养禽场内FAdV-4的感染情况进行了血清流行病学调查,结果显示被检地区养禽场均存在不同程度的FAdV-4型抗体阳性,平均阳性率为59.53%。由此表明本研究所建立的ELISA方法可以用于FAdV-4感染的监测和流行病学调查。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 Fiber2蛋白 间接ELISA 流行病学调查
Ⅰ群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法的建立 预览
6
作者 张启龙 孙丹 +4 位作者 韦海涛 宋彦军 周德刚 冯小宇 王林 《中国兽药杂志》 2019年第8期1-7,共7页
利用纯化的 Ⅰ 群禽腺病毒4型重组Hexon蛋白,通过各反应条件筛选,建立了 Ⅰ 群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法.结果显示,抗原最佳包被浓度为1μg/mL;最佳封闭液为1% 牛血清白蛋白;待检血清最佳作用浓度是400倍稀释,37℃孵育60 min... 利用纯化的 Ⅰ 群禽腺病毒4型重组Hexon蛋白,通过各反应条件筛选,建立了 Ⅰ 群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法.结果显示,抗原最佳包被浓度为1μg/mL;最佳封闭液为1% 牛血清白蛋白;待检血清最佳作用浓度是400倍稀释,37℃孵育60 min;酶标抗体的最佳作用条件为稀释度1:8000,37℃孵育60 min;最佳显色时间为10 min.用所建方法对160只临床鸡只进行检测,同时与拭子PCR检测对比,一致性较好,表明该方法可有效用于临床检测. 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒4型 Hexon蛋白 间接ELISA 检测
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基于血清4型禽腺病毒Fiber-2间接ELISA方法的建立 预览
7
作者 梅楠 孙海伟 +3 位作者 李允章 汪凯 王桂军 陈鸿军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期807-811,共5页
为建立一种快速监测鸡群中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的方法,本研究通过PCR扩增FAd V-4 AQ强毒株的fiber-2基因截短体(112 bp~1 440 bp),克隆至p ET-32a(+)载体中进行原核表达,以重组表达的Fiber-2蛋白作为包被抗原,经优化反应条件,建立... 为建立一种快速监测鸡群中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的方法,本研究通过PCR扩增FAd V-4 AQ强毒株的fiber-2基因截短体(112 bp~1 440 bp),克隆至p ET-32a(+)载体中进行原核表达,以重组表达的Fiber-2蛋白作为包被抗原,经优化反应条件,建立了快速检测FAd V-4的间接ELISA方法,该方法特异性试验结果显示,除FAd V-4外,与其它病原无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法检测血清最低稀释度为1∶12 800,具有较高的敏感性;重复性试验结果显示,该方法批内、批间变异系数均小于10%。该方法对FAd V-4临床感染的阳性血清检出率为100%,与琼脂扩散试验结果完全吻合。本研究建立的以Fiber-2重组蛋白为包被抗原的间接ELISA方法能够用于FAd V-4灭活疫苗免疫后的血清学调查。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 FAdV-4 Fiber-2 原核表达 间接ELISA
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猪流行性腹泻病毒特异性SIgA抗体间接ELISA检测方法的建立及应用 预览
8
作者 丛广义 刘建波 +3 位作者 时洪艳 张鑫 陈建飞 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期812-817,共6页
为检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)特异性分泌性Ig A (PEDV SIg A)抗体,本研究以纯化的PEDV粒子作为包被抗原,以待检初乳或直肠拭子处理样品为检测样品,以HRP标记的鼠抗猪SIg A分泌成分(SC)的单克隆抗体(MAb)为酶标二抗,经过各条件优化,建... 为检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)特异性分泌性Ig A (PEDV SIg A)抗体,本研究以纯化的PEDV粒子作为包被抗原,以待检初乳或直肠拭子处理样品为检测样品,以HRP标记的鼠抗猪SIg A分泌成分(SC)的单克隆抗体(MAb)为酶标二抗,经过各条件优化,建立了检测初乳和直肠黏膜中PEDV SIg A的间接ELISA方法。并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验。结果显示,PEDV粒子的最佳包被浓度为5.8 ng/孔,HRP标记的鼠抗猪SC抗体的最佳稀释度为1∶3 000。该方法与TGEV、Po RV感染的初乳样品无交叉反应,特异性较强。当初乳的稀释度在1∶6 400时,该ELISA方法检测结果仍为阳性,敏感性较高;批内和批间重复试验的变异系数均小于10%,表明其重复性较好。该方法的建立为研究猪群感染PEDV和PEDV疫苗免疫后特异性SIg A水平及黏膜免疫评价提供了有效的技术手段,具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 SIGA 间接ELISA
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基于A型塞尼卡病毒结构蛋白VP1间接ELISA检测方法的建立及初步应用 预览
9
作者 赵月龙 闫若潜 +5 位作者 王淑娟 马震原 班付国 赵雪丽 谢彩华 杨朋霞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期818-823,共6页
为建立A型塞尼卡病毒(SVA)血清学检测方法,本研究根据GenBank中SVA基因序列设计引物,PCR扩增其VP1基因,将目的片段克隆于p ET-32a(+)表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3+)中诱导表达。利用纯化的重组VP1 (rVP1)蛋白作为包被抗原,通过矩阵法... 为建立A型塞尼卡病毒(SVA)血清学检测方法,本研究根据GenBank中SVA基因序列设计引物,PCR扩增其VP1基因,将目的片段克隆于p ET-32a(+)表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3+)中诱导表达。利用纯化的重组VP1 (rVP1)蛋白作为包被抗原,通过矩阵法优化ELISA反应条件,初步建立了SVA的间接ELISA抗体检测方法。对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检测;利用该方法对43份背景清晰的猪血清进行检测,并与中和试验结果进行比较;同时对205份临床猪血清样品进行检测。结果显示,本研究正确表达了约51.0 ku的可溶性重组蛋白,western blot试验表明纯化的r VP1蛋白具有良好的反应原性,以r VP1蛋白建立了间接ELISA方法。特异性试验结果显示该ELISA方法可以检测SVA抗体,而与FMDV (O/A/Asia I)、 PEDV、 PCV2、PRRSV、PRV等病原的抗血清均无交叉反应;敏感性试验结果显示样品经1∶800倍稀释后折OD450nm值仍大于临界值;批内、批间的重复性试验变异系数均小于10%,具有较好的重复性和稳定性。43份猪血清样品的检测结果与中和试验符合率为93.02%。205份临床猪血清样品的阳性检出率为5.37%。本研究为SVA血清学检测提供了技术手段。 展开更多
关键词 A型塞尼卡病毒 VP1基因 表达 间接ELISA
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基于绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白间接ELISA方法的建立 预览
10
作者 张洁 曹军军 +4 位作者 祝明松 杨亚军 王小凤 王璐 石峰 《动物医学进展》 北大核心 2019年第11期6-13,共8页
为解决绵羊肺炎支原体感染的预防问题,建立一种简单、快速、成本低的诊断方法,构建绵羊肺炎支原体EF-Tu基因原核表达载体,诱导纯化重组蛋白并用Western blot分析其反应原性,以重组蛋白为诊断抗原,建立绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法,... 为解决绵羊肺炎支原体感染的预防问题,建立一种简单、快速、成本低的诊断方法,构建绵羊肺炎支原体EF-Tu基因原核表达载体,诱导纯化重组蛋白并用Western blot分析其反应原性,以重组蛋白为诊断抗原,建立绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法,评估其特异性和灵敏性。结果表明,构建的重组蛋白纯度后,经Western blot证实具有良好的反应原性;间接ELISA反应条件优化显示,抗原稀释度为0.25μg/mL,一抗最佳稀释浓度为1∶50,最佳孵育时间为90 min,封闭液为50 g/L脱脂奶粉,二抗最佳稀释倍数为1∶8 000,最佳孵育时间为60 min,特异性与灵敏性良好;该方法与间接血凝法对100份血清进行检测,两者符合率为88.7%。说明试验建立的绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法可以推广使用。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 原核表达 EF-Tu蛋白 Western blot 间接ELISA
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基于猪丁型冠状病毒重组S1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用 预览
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作者 侯林杉 贾敬亮 +6 位作者 顾文源 刘宝京 师乾凯 袁广富 陈少杰 范京惠 左玉柱 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1642-1648,共7页
为了解猪丁型冠状病毒(PDCoV)的流行情况,为PDCoV血清抗体检测提供工具,本研究应用原核表达系统表达部分PDCoV纤突蛋白(S)作为检测抗原,建立了基于PDCoV S1蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并用该方法检测了2017年1月至12月自河北地区部分... 为了解猪丁型冠状病毒(PDCoV)的流行情况,为PDCoV血清抗体检测提供工具,本研究应用原核表达系统表达部分PDCoV纤突蛋白(S)作为检测抗原,建立了基于PDCoV S1蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并用该方法检测了2017年1月至12月自河北地区部分猪场收集的待检血清样品570份。结果显示:本研究建立的PDCoV间接ELISA方法能够特异地检测血清中的PDCoV抗体;与猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒及伪狂犬病病毒的抗血清无交叉反应;批内重复变异系数1.9%~5.4%、批间重复变异系数2.3%~5.1%。570份待检血样中105份呈阳性,阳性率为18.4%(105/570),高于之前本实验室检测2016年1月至2016年10月河北地区PDCoV IgG抗体阳性率(11%),提示河北地区PDCoV的感染率呈上升趋势。本研究建立的ELISA方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点,可用于临床PDCoV血清抗体的检测。 展开更多
关键词 猪丁型冠状病毒 重组S1蛋白 间接ELISA
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应用旋毛虫GAD和GLS重组抗原建立间接ELISA方法的研究
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作者 张妍 孟诗 +7 位作者 李晓云 于洁 李成 王爽 许浒 孟小晴 杨啸 宋铭忻 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期537-543,共7页
为了建立快速检测猪旋毛虫病的血清学方法,分别用旋毛虫GAD、GLS重组蛋白作为包被抗原,建立2种检测旋毛虫血清抗体的间接ELISA方法。对抗原包被条件、血清稀释度、封闭液的选择与封闭时间、酶标二抗的稀释度与孵育时间和TM B作用时间等... 为了建立快速检测猪旋毛虫病的血清学方法,分别用旋毛虫GAD、GLS重组蛋白作为包被抗原,建立2种检测旋毛虫血清抗体的间接ELISA方法。对抗原包被条件、血清稀释度、封闭液的选择与封闭时间、酶标二抗的稀释度与孵育时间和TM B作用时间等条件进行了优化。旋毛虫GAD包被抗原间接ELISA方法和GLS包被抗原间接ELISA方法的阴阳性临界值分别为0.848和0.963;这2种间接ELISA方法批内和批间重复试验的最大变异系数均小于10%,且用这2种方法分别对猪蛔虫阳性血清、华支睾吸虫阳性血清和弓形虫阳性血清进行了检测,均无交叉反应,表明这2种方法具有很好的稳定性和特异性。同时用这2种间接ELISA方法和旋毛虫抗体快速检测卡分别对感染旋毛虫不同数量、不同时间的小鼠血清进行检测,结果显示,这2种间接ELISA方法具有较高的敏感性。本研究中建立的这2种间接ELISA方法为旋毛虫病的早期诊断和流行病学调查提供了必要的手段。 展开更多
关键词 旋毛虫 谷氨酸脱羧酶重组蛋白 谷氨酰胺酶重组蛋白 间接ELISA
猪瘟病毒E^rns蛋白在杆状病毒系统中的表达及纯化 预览
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作者 牛康 徐璐 +6 位作者 张乾义 夏应菊 朱元源 邹兴启 李翠 赵启祖 王琴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期31-35,38,I0004共7页
采用杆状病毒表达系统表达并纯化猪瘟病毒E^rns蛋白,并对其反应原性进行鉴定。将猪瘟病毒的E^rns 基因克隆至pFastbac-HT-A 载体上,构建了pFA-E^rns重组质粒;经转座、转染后构建重组杆状病毒rBac-E^rns;通过优化接毒时间和接毒量等参数... 采用杆状病毒表达系统表达并纯化猪瘟病毒E^rns蛋白,并对其反应原性进行鉴定。将猪瘟病毒的E^rns 基因克隆至pFastbac-HT-A 载体上,构建了pFA-E^rns重组质粒;经转座、转染后构建重组杆状病毒rBac-E^rns;通过优化接毒时间和接毒量等参数,最终确定表达条件。将表达产物采用亲和层析法纯化后,采用Western Blotting 鉴定E^rns 蛋白的反应性,并采用间接ELISA 方法对其应用进行了初步探索。结果显示,获得了重组杆状病毒rBac-E^rns,经Western Blotting 和间接免疫荧光(IFA)鉴定,该重组病毒能够与猪瘟阳性血清和E^rns 单抗发生特异性反应。纯化后的E^rns 蛋白纯度较好,浓度为0. 2 mg/ mL,经Western Blotting 方法鉴定证明,纯化后的蛋白与E^rns单抗和猪瘟阳性血清能够发生特异性反应;初步建立了间接ELISA 方法检测猪瘟抗体,证明表达的蛋白可以区分猪瘟阳性血清和阴性血清。表明本研究利用杆状病毒表达系统成功表达并纯化了猪瘟病毒E^rns蛋白,纯化后的E^rns蛋白具有良好的反应性,可以作为开发鉴别诊断试剂的备选蛋白以及用于E^rns 蛋白的结构和生物学功能研究。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E^rns蛋白 杆状病毒系统 间接ELISA
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猫杯状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立 预览
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作者 孟凯闻 朱文壮 +3 位作者 张迪 金艺鹏 林德贵 孟赓 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期36-39,共4页
将构建的猫杯状病毒(Feline Calicivirus,FCV)衣壳蛋白VP1重组表达质粒转化感受态细胞,以表达的FCV-VP1蛋白作为包被抗原,以酶标记的兔抗猫IgG作为二抗,建立检测猫杯状病毒抗体的间接ELISA检测方法。确定了最佳封闭液、最佳血清稀释液... 将构建的猫杯状病毒(Feline Calicivirus,FCV)衣壳蛋白VP1重组表达质粒转化感受态细胞,以表达的FCV-VP1蛋白作为包被抗原,以酶标记的兔抗猫IgG作为二抗,建立检测猫杯状病毒抗体的间接ELISA检测方法。确定了最佳封闭液、最佳血清稀释液、最佳酶标二抗稀释液,当酶标记的兔抗猫IgG效价为1∶20 000时可以检出猫杯状病毒血清抗体。利用本实验室建立的检测方法对收集的96份临床血清进行检测,结果表明96份猫血清中检测出40份阳性。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 VP1 抗体 间接ELISA方法
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基于丝状支原体丝状亚种P35反应原性的验证及其间接ELISA方法的建立 预览
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作者 闫磊 潘巧 +3 位作者 赵雅芝 郝文君 李媛 辛九庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期716-720,共5页
为建立检测丝状支原体丝状亚种(Mmm)的间接ELISA方法,本研究利用生物信息学软件对Mmm的全基因组序列进行了分析,选定大小为540bp的0584基因,该基因是编码分子量为35ku的脂蛋白,并对其免疫反应原性进行研究。利用原核表达系统获得了0584... 为建立检测丝状支原体丝状亚种(Mmm)的间接ELISA方法,本研究利用生物信息学软件对Mmm的全基因组序列进行了分析,选定大小为540bp的0584基因,该基因是编码分子量为35ku的脂蛋白,并对其免疫反应原性进行研究。利用原核表达系统获得了0584基因的重组蛋白rP35,以牛传染性胸膜肺炎(CBPP)阳性血清为一抗进行western blot分析,试验结果为阴性,但Dot-blot试验结果为阳性,证明该蛋白可能是Mmm特有的一种构象依赖性免疫相关蛋白且具有反应原性。以rP35蛋白为包被抗原,通过反应条件优化初步建立了检测CBPP血清抗体的间接ELISA方法,特异性为88.0%,敏感性为89.8%,批内和批间变异系数均小于10%,与商品化试剂盒符合率为84.8%。本研究为研制CBPP血清检测试剂盒提供了一种候选蛋白。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 丝状支原体丝状亚种 间接ELISA
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布鲁氏菌OMP25与OMP31蛋白的表达及其间接ELISA诊断试剂盒研制 预览
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作者 王海丽 董炳梅 +2 位作者 李芬 许崇友 王金良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期404-410,共7页
目的为建立布鲁氏杆菌间接ELISA检测方法。方法本研究根据GenBank中已登录猪种布鲁氏菌S2株全基因组序列,分别针对omp25和omp31设计一对引物,分别扩增并回收573 bp与783 bp目的基因片段,将其分别克隆入pET-28a原核表达载体中,构建重组质... 目的为建立布鲁氏杆菌间接ELISA检测方法。方法本研究根据GenBank中已登录猪种布鲁氏菌S2株全基因组序列,分别针对omp25和omp31设计一对引物,分别扩增并回收573 bp与783 bp目的基因片段,将其分别克隆入pET-28a原核表达载体中,构建重组质粒pET-OMP25与pET-OMP31,进行酶切鉴定与基因序列测定后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导表达,OMP25与OMP31蛋白主要以包涵体形式存在;将目的蛋白纯化,应用Western blot进行蛋白活性的检测。结果纯化的目的蛋白具有良好的免疫学活性。以纯化的重组蛋白为包被抗原,在确定了OMP25与OMP31蛋白最佳配比为4∶1、抗原最佳包被浓度为10μg/mL、血清的最佳稀释倍数为1∶50倍稀释、临界值为0.314的基础上,建立羊布鲁氏菌病抗体间接ELISA诊断方法并组装成诊断试剂盒,并将试剂盒进行了特异性、敏感性、重复性、符合率试验、血清交叉反应性等检测。结论研制的羊布鲁氏菌病抗体ELISA诊断试剂盒具有良好的特异性、敏感性,可重复性,可应用于临床样本检测。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 OMP25 OMP31 间接ELISA
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新城疫病毒HN特异性多肽抗体间接ELISA方法的建立
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作者 任海洋 成泽 +1 位作者 万颖 张安定 《中国家禽》 北大核心 2019年第8期10-14,共5页
为建立快速检测新城疫病毒抗体的血清学方法,通过合成NDV主要保护性抗原HN蛋白和F蛋白上的特异性表位多肽,将其与BSA载体蛋白偶联,作为包被抗原,建立检测NDV抗体的间接ELISA方法。并对其进行敏感性、特异性、与HI方法阴阳性符合率检测... 为建立快速检测新城疫病毒抗体的血清学方法,通过合成NDV主要保护性抗原HN蛋白和F蛋白上的特异性表位多肽,将其与BSA载体蛋白偶联,作为包被抗原,建立检测NDV抗体的间接ELISA方法。并对其进行敏感性、特异性、与HI方法阴阳性符合率检测。结果显示:基于'PDEQDYQIRMAKSSYKPGRFGGKRIQQAILS'多肽的该ELISA方法与其他鸡主要传染病阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性。通过对112份临床鸡血清样品进行检测,该方法的敏感性为94.0%、特异性为100%,与HI方法检测的阴阳性符合率为96.4%。研究表明,建立的ELISA方法对血清中NDV的抗体水平检测具有较高的灵敏度和很好的特异性,可为ND疫苗免疫后抗体水平的检测和监测提供可靠工具。 展开更多
关键词 新城疫病毒 多肽 抗体 间接ELISA
中蜂囊状幼虫病毒结构蛋白VP2杆状病毒表达与间接ELISA方法建立
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作者 李明 张琳 +1 位作者 马鸣潇 侯振中 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期264-269,共6页
为了检测中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)抗体水平,用Bac‐to‐Bac 杆状病毒表达系统,构建含有CSBV VP2 的重组杆状病毒rBac‐VP2,并在昆虫细胞中获得表达。用经过纯化的重组VP2 蛋白作为包被抗原,建立CSBV 抗体的... 为了检测中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)抗体水平,用Bac‐to‐Bac 杆状病毒表达系统,构建含有CSBV VP2 的重组杆状病毒rBac‐VP2,并在昆虫细胞中获得表达。用经过纯化的重组VP2 蛋白作为包被抗原,建立CSBV 抗体的间接酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法。结果表明成功的表达了VP2 蛋白。优化反应条件后,建立的ELISA 检测方法仅与CSBV 阳性IgY 发生特异性反应,与其它蜜蜂病毒的阳性IgY 不发生交叉反应,且检测阳性IgY 的灵敏度达到了1∶6 400,证明其具有良好的特异性和敏感性。批内重复与批间重复变异系数均小于10%。与CSBV 全病毒包被进行比较,检测结果差异不显著,说明该方法适用于抗CSBV 抗体检测。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病毒(CSBV) 结构蛋白VP2 Bac‐to‐Bac杆状病毒表达 间接ELISA
草鱼细菌性烂鳃病病原菌的分离及其特异性卵黄抗体的初步研究 预览
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作者 李思泉 李娜 +2 位作者 罗玉双 张保平 张建平 《贵州畜牧兽医》 2019年第3期37-42,共6页
试验从患典型烂鳃病草鱼病变部位分离到1株柱状黄杆菌(FC-3株),采用0.4%甲醛灭活制成免疫原,接种健康120日龄桃源蛋鸡,收集鸡蛋并提纯卵黄抗体(IgY),并以此IgY为基础建立间接ELISA方法。结果:用FC-3株制备的IgY经初步提纯后电泳分离可... 试验从患典型烂鳃病草鱼病变部位分离到1株柱状黄杆菌(FC-3株),采用0.4%甲醛灭活制成免疫原,接种健康120日龄桃源蛋鸡,收集鸡蛋并提纯卵黄抗体(IgY),并以此IgY为基础建立间接ELISA方法。结果:用FC-3株制备的IgY经初步提纯后电泳分离可见重链和轻链2条蛋白条带,获得了IgY多克隆抗体。建立的间接ELISA方法检测柱状黄杆菌纯培养液的检出限值为1×10^7cfu/mL,抗原包被最佳浓度和抗体最佳工作浓度分别为1∶100和1∶512,辣根过氧化物酶标记兔抗鸡IgY最佳工作浓度为1∶4000。结论:建立的间接ELISA方法对柱状黄杆菌有明显的检测特异性,与其他菌株无交叉反应,重复性好。 展开更多
关键词 柱状黄杆菌 卵黄抗体 间接ELISA
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322例病毒性脑炎流行病学调查分析
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作者 邱会卿 刘娜 +2 位作者 张立海 贺新奇 孟丽 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第4期449-455,共7页
目的调查322例病毒性脑炎流行病学特点,为该的病防控提供参考。方法本院收治的来自周边地区的病毒性脑炎患者322例,采集血和脑脊液标本,采用间接ELISA法检测病毒IgM抗体;收集病毒性脑炎流行病学资料,采用χ^2进行统计学分析。结果322例... 目的调查322例病毒性脑炎流行病学特点,为该的病防控提供参考。方法本院收治的来自周边地区的病毒性脑炎患者322例,采集血和脑脊液标本,采用间接ELISA法检测病毒IgM抗体;收集病毒性脑炎流行病学资料,采用χ^2进行统计学分析。结果322例患者中春、夏、秋、冬季发病分别占12.11%、23.91%、48.76%和15.22%,差异无统计学意义(χ^2=0.357 9,P>0.05);男性患者和女性患者分别占58.70%和41.30%,差异有统计学意义(χ^2=19.478 3,P<0.01);患者年龄为0~12岁、13~18岁、19~38岁、39~58岁、>58岁者分别占36.02%、23.29%、11.49%、13.04%、16.15%,差异有统计学意义(χ^2=50.310 6,P<0.01);学生、教师、公务员、服务员、农民及其他职业患者分别占36.96%、9.01%、4.97%、16.15%、23.91%、9.01%,差异有统计学意义(χ^2=43.826 1,P<0.01);发热288例(占89.44%),恶心209例(占64.91%),呕吐84例(占26.09%);意识障碍63例(占19.57%),抽搐52例(占16.15%),嗜睡16例(占4.97%)。抗体检测确诊为单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、腮腺炎病毒、肠道病毒感染分别占25.24%、3.88%、15.53%和55.34%。其中感染的肠道病毒包括EV71、CoxA16和其他肠道病毒,分别占10.68%、8.74%、35.92%,差异无统计学意义(χ^2=2.349 5,P>0.05)。结论病毒性脑炎一年四季均有发生,以秋季病例较多,患者以男性、0~12岁学生占比较多,主要临床症状为发热、恶心、呕吐,主要流行株为肠道病毒和单纯疱疹病毒,可为该病的防控提供参考。 展开更多
关键词 病毒性脑炎 流行病学 间接ELISA 统计学分析
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