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受miRNA-205调控的重组柯萨奇病毒B3的构建及其复制 预览
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作者 戴潇逸 钟江 《微生物与感染》 2019年第4期209-215,共7页
本研究在柯萨奇病毒B3(coxsackievirus B3,CVB3)基因组P1编码区与P2编码区之间插入一段has-miRNA-205-3p和has-miRNA-205-5p(简称miR-205)的靶序列,得到重组病毒v205T,并比较分析了它在人宫颈癌细胞系HeLa细胞(miR-205低水平表达)和非... 本研究在柯萨奇病毒B3(coxsackievirus B3,CVB3)基因组P1编码区与P2编码区之间插入一段has-miRNA-205-3p和has-miRNA-205-5p(简称miR-205)的靶序列,得到重组病毒v205T,并比较分析了它在人宫颈癌细胞系HeLa细胞(miR-205低水平表达)和非小细胞肺癌细胞系A549细胞(miR-205高水平表达)中的复制情况。结果表明,插入的miR-205靶序列不影响病毒在HeLa细胞中的复制水平,但抑制了病毒在A549细胞中的复制,病毒滴度为对照的1%以下。为探讨v205T在2株细胞中复制差异的原因,进一步加入miR-205的类似物和抑制物。miR-205类似物可抑制v205T在HeLa细胞中复制和杀伤细胞的水平,而miR-205抑制物可提高v205T在A549细胞中的复制和杀伤细胞的水平。结果表明,v205T的复制确实受miR-205的调控。本研究为开发基于CVB3载体的溶瘤病毒和针对CVB3的减毒活疫苗提供了依据。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B3 miRNA-205 感染性克隆载体 细胞趋性
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鸡马立克病毒的研究进展
2
作者 崔治中 苏帅 +4 位作者 罗俊 钱琨 庄国庆 孙爱军 滕蔓 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1812-1826,共15页
马立克病毒(Marek’s disease virus,MDV)是一类可感染鸡诱发急性或亚急性淋巴细胞肉瘤的疱疹病毒。本文在对MDV的经典病毒学及分子生物学研究的早期成果进行概述的基础上,对近十多年来感染性克隆技术用于探索MDV主要蛋白基因的功能、... 马立克病毒(Marek’s disease virus,MDV)是一类可感染鸡诱发急性或亚急性淋巴细胞肉瘤的疱疹病毒。本文在对MDV的经典病毒学及分子生物学研究的早期成果进行概述的基础上,对近十多年来感染性克隆技术用于探索MDV主要蛋白基因的功能、以病毒编码的全部蛋白质为对象的蛋白组学、病毒编码的有调控作用的RNA及基因工程疫苗等方面的研究进展进行综述,并展望MDV进一步的研究方向和内容。 展开更多
关键词 马立克病毒 感染性克隆 蛋白组学 调控性RNA 重组疫苗
柯萨奇病毒A组16型cDNA感染性克隆的构建 被引量:1
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作者 李嘉祺 李洪哲 +5 位作者 郑惠文 宁若彤 范海涛 杨泽宁 胡雅洁 刘龙丁 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第1期14-17,23共5页
目的构建柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)c DNA感染性克隆。方法提取CA16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长c DNA,插入至TOPO-XL-PCR载体,获得CA16全长c DNA克隆。采用T7聚合酶系统将线性基因组c DNA体外转录出病毒基因组... 目的构建柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)c DNA感染性克隆。方法提取CA16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长c DNA,插入至TOPO-XL-PCR载体,获得CA16全长c DNA克隆。采用T7聚合酶系统将线性基因组c DNA体外转录出病毒基因组RNA,纯化后转染Vero细胞,获得拯救病毒。通过RT-PCR、基因测序及免疫荧光法对拯救病毒进行鉴定,并对拯救病毒与母本病毒的增殖特性进行比较。结果病毒基因组RNA转染Vero细胞后48 h,可见典型的肠道病毒致细胞病变。拯救病毒经RT-PCR、基因测序和免疫荧光鉴定为CA16,且与母本野生型病毒增殖特性基本一致。结论成功构建了具有感染性的CA16全长c DNA克隆,为研究CA16基因功能和研发CA16新型疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A组16型 感染性克隆 病毒拯救
大豆花叶病毒侵染性克隆研究进展
4
作者 张恩柱 赵伟 +2 位作者 张淋淋 韩庆玥 张俊华 《大豆科学》 CSCD 北大核心 2017年第5期808-812,共5页
大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)是一种株系复杂且不断变化、并对大豆的产量和质量造成恶劣影响的病毒,其严重的致病性受到学者的普遍关注。大豆花叶病毒侵染性克隆技术是研究其致病机理的行之有效的手段。该技术通过病毒... 大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)是一种株系复杂且不断变化、并对大豆的产量和质量造成恶劣影响的病毒,其严重的致病性受到学者的普遍关注。大豆花叶病毒侵染性克隆技术是研究其致病机理的行之有效的手段。该技术通过病毒侵染获得侵染性eDNA克隆,进一步分析引起症状的相应基因在植株生长过程中的作用机制,由此为SMV相关领域的研究奠定理论基础。本文就大豆花叶病毒侵染性克隆的构建策略和影响因素,以及其应用状况作一综述,以期为大豆花叶病毒的防治提供新的借鉴和思路。 展开更多
关键词 大豆 大豆花叶病毒 侵染性克隆
番茄黄化曲叶病毒(TY)侵染性克隆接种鉴定方法研究 预览 被引量:2
5
作者 张少丽 邵景成 胡志峰 《甘肃农业科技》 2014年第10期16-19,共4页
采用YEP1和YEP2培养基培养番茄黄化曲叶病毒侵染性克隆pBinPLUS-1.7A+2β,并用固体菌落、液体菌菌液浓度OD600≈0.6、液体菌菌液浓度OD600≈1.0对感病番茄品种MM、中蔬4号、98-B1在4~6叶苗期进行接种处理。结果显示,2种液体培养基的液... 采用YEP1和YEP2培养基培养番茄黄化曲叶病毒侵染性克隆pBinPLUS-1.7A+2β,并用固体菌落、液体菌菌液浓度OD600≈0.6、液体菌菌液浓度OD600≈1.0对感病番茄品种MM、中蔬4号、98-B1在4~6叶苗期进行接种处理。结果显示,2种液体培养基的液体菌菌液浓度为OD600≈0.6时接种处理发病率较高,并初步确立了无TY发病地区侵染性克隆接种鉴定方法。 展开更多
关键词 番茄 黄化曲叶病毒病 侵染性克隆 抗性鉴定
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PCV2 CC12毒株的分离及感染性克隆的构建与病毒拯救 被引量:3
6
作者 贾川川 邢泽黎 +3 位作者 郭昌明 朱利塞 余兴龙 王新平 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2014年第12期1861-1867,共7页
应用PCR技术从长春地区疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪检测到PCV2病毒基因组序列,并以PK15细胞分离获得1株病毒,命名为PCV2-CC12毒株。序列测定结果揭示:CC12毒株的完整基因组序列为1 767bp,含有2个较大的读码框架,编码病毒复制所需... 应用PCR技术从长春地区疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪检测到PCV2病毒基因组序列,并以PK15细胞分离获得1株病毒,命名为PCV2-CC12毒株。序列测定结果揭示:CC12毒株的完整基因组序列为1 767bp,含有2个较大的读码框架,编码病毒复制所需的Rep蛋白和病毒的结构蛋白Cap。核苷酸序列的比对分析发现,CC12株基因组的607位核苷酸存在一个独特的碱基突变(607A>G),导致其编码的Rep蛋白的186位氨基酸由天冬酰胺突变成丝氨酸(N186S)。应用PCR扩增病毒的全基因组序列并将其插入pBluescript II SK载体获得CC12株单拷贝基因组重组质粒,并以此构建了正向双拷贝重组质粒。重组质粒通过脂质体转染PK15细胞后,以RT-PCR、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和间接免疫荧光试验(IFA)等方法检测拯救病毒,结果从盲传第8代后的细胞培养物中检测到病毒粒子的存在,表明CC12毒株拯救成功,为进一步研究PCV2病毒的复制机理及致病机理打下基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 PCV2 病毒分离 病毒拯救 感染性克隆 突变
番茄不孕病毒BJ株系基因组测定与侵染性克隆 预览 被引量:2
7
作者 施伟 金圣塔 +3 位作者 张海峰 王婷 陈集双 廖乾生 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期 1120-1126,共7页
番茄不孕病毒(Tomato aspermy virus,TAV)可侵染包括藜科(Chenopodiaceae)、茄科(Solanaceae)等在内的24个双子叶家族和3个单子叶家族的100多种植物,是具有重要经济价值的植物病毒之一。为研究TAV BJ株系(Tomato aspermy virus,T... 番茄不孕病毒(Tomato aspermy virus,TAV)可侵染包括藜科(Chenopodiaceae)、茄科(Solanaceae)等在内的24个双子叶家族和3个单子叶家族的100多种植物,是具有重要经济价值的植物病毒之一。为研究TAV BJ株系(Tomato aspermy virus,TAV-BJ)的基因组功能,本实验对TAV-BJ基因组克隆测序,并构建侵染性克隆。以TAV-BJ侵染心叶烟(Nicotiana glutinosa)的总RNA为模板,RT-PCR获得其RNA2和RNA3;以TAV-BJ的dsRNA为模板,RT-PCR获得全长RNA1,目的片段PCR产物克隆测序获得TAV-BJ基因组全序列信息。RNA1全长3 409 nt,编码994个氨基酸的1a蛋白;RNA2全长3 023 nt,含2个开放阅读框(open reading frame,ORF),2a ORF编码829个氨基酸的2a蛋白,2b ORF编码78个氨基酸的2b蛋白;RNA3全长为2 216 nt,包含2个ORF,3a ORF编码247个氨基酸的3a蛋白,外壳蛋白(coat protein,CP)ORF编码219个氨基酸的CP蛋白(TAV-BJ基因组RNA1、2和3 GenBank登录号分别为HQ424163,HQ424164和HQ424165)。TAV-BJ基因组cDNA克隆体外转录成RNA并接种于心叶烟上,结果表明转录产物在寄主上的症状反应和TAV-BJ病毒粒子RNA的接种相一致,TAV-BJ基因组cDNA侵染性克隆具有活性。由TAV-BJ各个基因片段与缺失2b基因的黄瓜花叶病毒Fny株系(Cucumber mosaic virus,CMV-FnyΔ2b)构建的假重组病毒接种于心叶烟,结果显示TAV-BJ的RNA2和RNA3能恢复CMV-FnyΔ2b在寄主上症状反应。嵌合型RNA3F3aTcp和RNA3T3aFcp的症状反应结果表明,F1F2Δ2bRNA3T3aFcp在寄主上产生花叶症状与F1F2Δ2bT3相一致。本研究获得TAV-BJ的基因组序列,成功构建侵染性克隆,同时发现TAV-BJ的3a基因具有CMV-Fny的2b基因的某些功能。 展开更多
关键词 番茄不孕病毒 基因组序列 侵染性克隆 3a基因
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牛Asia 1型口蹄疫病毒感染性克隆的构建 被引量:2
8
作者 李爽 张润祥 +3 位作者 宋鸽 高明春 刘湘涛 王君伟 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1621-1626,共6页
本研究在完成Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)As01株全基因组测序的基础上,采用融合PCR扩增得到含有15个C碱基的5′端片段(约1800bp),并利用长片段PCR扩增得到基因组3′端片段(约6700bp)。再利用单一的酶切位点将2个片段克隆到pBluescrip... 本研究在完成Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)As01株全基因组测序的基础上,采用融合PCR扩增得到含有15个C碱基的5′端片段(约1800bp),并利用长片段PCR扩增得到基因组3′端片段(约6700bp)。再利用单一的酶切位点将2个片段克隆到pBluescript SK载体中,从而获得携带As01株基因组全长cDNA的重组质粒pBSAs。将该质粒线性化后作为模板体外转录并转染BHK-21细胞,可观察到典型的细胞病变。对收获的病毒采用RT-PCR、间接免疫荧光和电镜观察等检测及鉴定,结果表明,拯救出了具有感染性的Asia1型FMDV。拯救毒与亲本毒对乳鼠的致病力(LD50)差异不显著,具有相似的生物学特征。该感染性克隆的构建,为深入研究FMDV的致病机理及开发新型疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 全长CDNA 感染性克隆 反向遗传 病毒拯救 体外转录
猪圆环病毒2型双拷贝感染性DNA的构建及体外拯救 被引量:5
9
作者 李俊 时建立 +4 位作者 于周 徐绍建 丁鹏 程凯慧 王金宝 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1633-1638,共6页
感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将2个PCV2SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外课题... 感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将2个PCV2SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外课题组成功构建含单个PCV2全基因组的pSK-PCV2和自身环化质粒ds-PCV2。将所得3种质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经10次连续传代后,间接免疫荧光试验检测显示三者均在细胞核中聚集大量的病毒抗原;经RT-PCR检测都有PCV2特异性基因转录;透射电镜下可观察到直径约为17~20nm的典型PCV2病毒粒子;经测序鉴定所拯救出的病毒与亲本病毒核苷酸同源性为100%。拯救出的PCV2与亲本病毒具有相同的病毒学及分子生物学特性。本研究应用PCR诱变技术成功构建PCV2双拷贝感染性克隆,并经体外拯救证实其具有感染性,为进行PCV2分子特性及致病机理研究打下了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 单拷贝 双拷贝 自身环化 感染性克隆 体外拯救
Generation of VP5 deficient mutant of infectious bursal disease virus strain HZ2
10
作者 LI Long WEI Yongwei +1 位作者 HUANG Yaowei YU Lian 《中国科学通报:英文版》 SCIE CAS 2006年第15期1909-1912,共4页
传染芒刺柳安疾病病毒(IBDV ) 是一分割双性人, theBirnaviridae 的 dsRNA 病毒家庭。非结构的蛋白质 VPS 被报导了被联系导致 withvirus 的房间 apoptosis 和致病力,而是它在病毒的复制的角色 beenunequivocally 没识别。把介绍傻瓜... 传染芒刺柳安疾病病毒(IBDV ) 是一分割双性人, theBirnaviridae 的 dsRNA 病毒家庭。非结构的蛋白质 VPS 被报导了被联系导致 withvirus 的房间 apoptosis 和致病力,而是它在病毒的复制的角色 beenunequivocally 没识别。把介绍傻瓜发育不全策略基于 PCR,在 IBDV 紧张 HZ2 的 genomic 片断 A 的 ORF Aland ORF A2 之间的 96-129 bplocated 的 33 bp 被删除,并且 Nhe 我(GcTaGc ) 地点同时在 96-102 bp 被插入。变异的片断 A 被绑扎进 pCi,导致 pCI-ANhe3。妄想、缺乏的 IBDV 紧张,命名紧张 ANheS,从鸡肉被恢复由有 pCI-ANhe3 和 pCl-mB 的 co-transfection 的胚胎成纤维细胞(CEF ) 房间,源于 genomic 片断 B 紧张 HZ2。间接荧光灯的试金鉴别没有 VPS 的表示,紧张 ANhe3could 在 CEF 上复制房间。进一步的检查显示出在 SPF 鸡胚胎上复制的紧张 ANheS 的那 thepatho 开始与 strainHZ2 相比被稀释。这篇论文为删除基因的病毒提供新快速的营救策略。这策略为 IBDV 的删除基因的疫苗放一个基础。 展开更多
关键词 IBDV VP5 DSRNA 双核糖核酸病毒 基因突变
人类及动物RNA病毒的反向遗传系统 预览 被引量:9
11
作者 黄耀伟 李龙 于涟 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期 311-318,共8页
反向遗传系统可以对RNA病毒直接进行遗传操作,为RNA病毒的分子生物学研究提供了一种强大的工具.在过去20年,特别是自90年代中期第一例负链RNA病毒感染性克隆构建成功以来,动物RNA病毒的分子生物学研究取得了长足的进展,这很大程度上归... 反向遗传系统可以对RNA病毒直接进行遗传操作,为RNA病毒的分子生物学研究提供了一种强大的工具.在过去20年,特别是自90年代中期第一例负链RNA病毒感染性克隆构建成功以来,动物RNA病毒的分子生物学研究取得了长足的进展,这很大程度上归功于各种动物RNA病毒反向遗传系统的建立.这里系统总结了人类及动物非反转录RNA病毒中各类代表性成员在建立反向遗传系统时的方案设计、遇到的困难及研究者如何克服这些困难.分类讨论到的代表性病毒种属有脊髓灰质炎病毒、冠状病毒(包括SARS病毒)、黄病毒、野田村病毒、流感病毒、传染性法氏囊病病毒以及呼肠孤病毒等. 展开更多
关键词 人类及动物RNA病毒 反向遗传 感染性克隆 拯救 微基因组
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传染性法氏囊病病毒感染性克隆的快速构建 被引量:3
12
作者 黄耀伟 李龙 +1 位作者 李建荣 于涟 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期 338-344,共7页
用长距离RT-PCR一步扩增并克隆全长为2827bP的传染性法氏囊病病毒(IBDV)的B节段基因组cDNA,通过定点的沉默突变在B节段编码区引入一个EcoRV酶切位点作为分子标记。分别构建IBDV的A、B节段基因组真核表达载体,在脂质体介导下共转染Ver... 用长距离RT-PCR一步扩增并克隆全长为2827bP的传染性法氏囊病病毒(IBDV)的B节段基因组cDNA,通过定点的沉默突变在B节段编码区引入一个EcoRV酶切位点作为分子标记。分别构建IBDV的A、B节段基因组真核表达载体,在脂质体介导下共转染Vero细胞。RNA点杂交、间接免疫荧光分析表明重组子在Vero细胞得到了表达;用转染细胞的培养上溶液不断地接种新的Vero细胞,模拟病毒“传代”,观察到细胞形态学发生变化,产生了类似野生IBDV感染细胞时出现的细胞病变效应(CPE);电子显微镜下可以看到符合IBDV病毒粒子结构的物质;酶切鉴定验证了所引入的分子标记,证实人工IBDV获得拯救。建立的基于长距离RT—PCR和MA聚合酶Ⅱ系统的快速、简易的IBDV感染性克隆构建方案,为开发新一代抗IBDV的基因缺失疫苗创造了条件。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 感染性克隆 快速构建 长距离RT-PCR 定点突变
基于黄瓜花叶病毒(CMV)基因沉默载体的构建 被引量:3
13
作者 程晓东 施伟 +1 位作者 杜志游 廖乾生 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1550-1558,共9页
病毒介导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)广泛应用于植物基因功能分析。本研究以黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)不同株系的RNA2与CMV-Fny基因组R1和R3进行组合接种,获得在本氏烟(Nicotiana benthamiana... 病毒介导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)广泛应用于植物基因功能分析。本研究以黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)不同株系的RNA2与CMV-Fny基因组R1和R3进行组合接种,获得在本氏烟(Nicotiana benthamiana)中症状轻的病毒组合F1Tsh R2F3;将CMV-Fny基因组R1、R2、R3和Tsh2克隆到植物瞬时表达载体pCB301中,构建载体pCB301-R1R2R3。农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)浸润接种本氏烟结果显示,pCB301-R1R2R3引起寄主症状与病毒c DNA体外转录产物侵染所产生症状一致;Tsh R2的2b基因缺失3'端的95 nt碱基(Tsh2VIGS)后病毒能系统性侵染寄主植物,但降低病毒外壳蛋白(coat protein,CP)含量;F1Tsh R2VIGS-Su351F3接种10 d后整个植株的大部分叶片出现黄色表型;qRT-PCR结果表明,pCB301-F1Tsh R2VIGS-Su351F3接种植株中的镁离子螯合镁亚基基因Sulphur m RNA含量为对照植株20%。为进一步验证该载体能否沉默植物中其他基因,将烟草中细胞自噬相关基因Beclin1基因部分序列插入载体pCB301-Tsh R2VIGS并接种于NN三生烟(N.tabacum cv.Xanthi NN)中,烟草花叶病毒(Tobacco,mosaic virus,TMV)侵染结果表明,F1Tsh R2VIGS-Beclin337F3浸润接种寄主呈现系统性坏死症状反应,而对照植株仅在TMV接种区域产生局部枯斑。本研究所获得的CMV农杆菌侵染性克隆及其VIGS载体,为构建CMV其他寄主的VIGS载体奠定基础。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒(CMV) 农杆菌侵染性克隆 病毒诱导的基因沉默(VIGS)
农杆菌介导的CMV侵染性克隆及2b缺失突变体构建 预览 被引量:7
14
作者 姚敏 张天奇 +2 位作者 田志超 王源超 陶小荣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第14期3060-3068,共9页
【目的】构建农杆菌介导的黄瓜花叶病毒(CMV)侵染性克隆,测试缺失CMV2b基因后的侵染表型。【方法】首先将pHST40上的1x35S-MCS-HDVRZ-NOS转移到中间载体pB luescript SK II上,用pRTL2上的2x35S替换中闻载体上的1×35S增强子序... 【目的】构建农杆菌介导的黄瓜花叶病毒(CMV)侵染性克隆,测试缺失CMV2b基因后的侵染表型。【方法】首先将pHST40上的1x35S-MCS-HDVRZ-NOS转移到中间载体pB luescript SK II上,用pRTL2上的2x35S替换中闻载体上的1×35S增强子序列,然后将2×35S-MCS-HDVRZ-NOS转移到微型植物表达载体pCB301,构建适用于病毒侵染性克隆和农杆菌浸润的植物表达载体,在此基础上将CMVFny株系的全长eDNA基因组构建到该植物表达载体的2×35S启动子和HDV核酶之间,通过农杆菌浸润在本氏烟中瞬时表达产生具有侵染活性的CMV基因组RNA,进一步缺失励来测试该缺失突变体侵染植物的表型。【结果】构建了一个用于构建RNA病毒侵染性克隆的植物表达载体pCB301—2x35S—MCS-HDVRz-NOS,将CMVFny的3条基因组分别构建在这个植物表达载体上后,通过农杆菌浸润本氏烟可诱导产生曲叶、花叶和矮化等症状,进一步对2b进行缺失,表明该缺失突变体接种本氏烟早期具有微弱曲叶症状,中后期表现无症,RT-PCR检测表明CMVFny2b缺失突变体能够系统侵染本氏烟。【结论】在改造的微型植物表达载体pCB301—2x35S-MCS—HDVRZ-NOS上构建了CMV的侵染性克隆,构建的侵染性克隆通过农杆菌介导可快速高效侵染植物,26对CMVFny在本氏烟中的症状发展具有重要作用,但乃对其在本氏烟上的复制和系统侵染并不是必需。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 侵染性克隆 农杆菌浸润 2b缺失突变体
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鸡贫血病毒安徽分离株感染性克隆的构建及其感染特性
15
作者 刘雪兰 丁泠 +3 位作者 寇家倩 吴颖 周梦琴 谢小丽 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2019年第2期229-233,共5页
鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)是诱导雏鸡发生免疫抑制的重要病原之一。应用PCR方法从安徽某鸡场送检病鸡肝组织中检测并鉴定CAV,扩增病毒全基因组序列插入pc DNA3.1(+)载体,并引入含Kpn I(GGTACCCAG)酶切位点的9bp外源性标签,... 鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)是诱导雏鸡发生免疫抑制的重要病原之一。应用PCR方法从安徽某鸡场送检病鸡肝组织中检测并鉴定CAV,扩增病毒全基因组序列插入pc DNA3.1(+)载体,并引入含Kpn I(GGTACCCAG)酶切位点的9bp外源性标签,获得顺次连接的双拷贝CAV基因组的重组质粒,通过脂质体介导转染鸡MDCC-MSB1淋巴细胞并拯救出CAV感染性克隆毒株。经动物试验,感染性克隆毒株在接种1日龄健康雏鸡后15d,对胸腺等免疫器官指数影响较小,胸腺病变不明显,表明其感染能力减弱,为进一步分析CAV致病机制和筛选疫苗候选株奠定基础。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒:安徽毒株 感染性克隆:分子标签 特性
轮状病毒反向遗传学研究进展
16
作者 赵毕妍 曾渊君 +1 位作者 李廷栋 葛胜祥 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期544-550,共7页
反向遗传学技术可直接在基因水平上对病毒的基因组进行操作,从而快速直接的对病毒复制、致病等机制进行详细的研究。目前,呼肠孤病毒科的多种病毒,例如,哺乳动物正呼肠孤病毒(mammalian orthoreovirus,MRV)、蓝舌病毒(bluetongue virus,... 反向遗传学技术可直接在基因水平上对病毒的基因组进行操作,从而快速直接的对病毒复制、致病等机制进行详细的研究。目前,呼肠孤病毒科的多种病毒,例如,哺乳动物正呼肠孤病毒(mammalian orthoreovirus,MRV)、蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)等均已利用反向遗传学技术这一有力工具,在病毒各项基础研究中取得了较大进展。但是,对于呼肠孤病毒科轮状病毒属成员,反向遗传学操作系统的构建进展缓慢。自2006年成功建立依赖于辅助病毒的反向遗传学系统开始,直到2017年才成功建立完全只依赖于质粒的反向遗传学系统。本文将对轮状病毒反向遗传学发展过程作一简要综述,并对未来轮状病毒反向遗传学研究方向作一展望,以期为加快轮状病毒的感染机制等基础研究提供技术支撑。 展开更多
关键词 轮状病毒 反向遗传学 呼肠孤病毒科 感染性克隆 辅助病毒
嵌合猫杯状病毒F9株感染性克隆的构建及病毒拯救 预览
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作者 左智敏 康洪涛 +5 位作者 吴红霞 祖少坡 田进 刘永相 倪宏波 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期759-762,766共5页
为构建猫杯状病毒(FCV)弱毒株F9的感染性克隆,本研究利经PCR分段扩增了FCV各基因片段,并拼接出FCVF9全基因组序列。经测序显示,其1823位多出一个碱基造成该序列存在移码突变,经替换为pOK-2280(已构建出的FCV强毒株的感染性克隆)相应序... 为构建猫杯状病毒(FCV)弱毒株F9的感染性克隆,本研究利经PCR分段扩增了FCV各基因片段,并拼接出FCVF9全基因组序列。经测序显示,其1823位多出一个碱基造成该序列存在移码突变,经替换为pOK-2280(已构建出的FCV强毒株的感染性克隆)相应序列并对差异氨基酸逐个突变,最终获得嵌合FCVF9全基因组的重组质粒pOK-F9H。将线性化的pOK-F9H体外转录,获得的加帽RNA转染F81细胞,得到了拯救病毒rFCVF9。经过对拯救病毒与亲本病毒的蚀斑形成能力、CPE形成能力和多步生长曲线分析,结果显示rFCVF9与亲本株在复制能力和体外生长能力方面基本一致,表明构建了嵌合FCVF9株的感染性克隆并拯救出重组病毒。本研究构建的嵌合FCVF9株感染性克隆可以为FCV的基因功能研究以及新型FCV疫苗的研发奠定基础。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 F9株 感染性克隆 病毒拯救
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MDGPV PT株E-box缺失感染性克隆的构建及生物学特性分析
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作者 王劭 肖世峰 +5 位作者 程晓霞 江丹丹 林锋强 朱小丽 陈仕龙 陈少莺 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1099-1103,共5页
为获得含有缺失突变体病毒全基因组的番鸭小鹅瘟病毒(MDGPV)PT株缺失病毒并分析其生物学特性,本试验以含有MDGPV PT株全长感染性DNA克隆的质粒pMDGPVPT为模板,通过重叠延伸PCR方法将5′末端倒置重复序列(5′-ITR)第287位E盒基序(E-box)... 为获得含有缺失突变体病毒全基因组的番鸭小鹅瘟病毒(MDGPV)PT株缺失病毒并分析其生物学特性,本试验以含有MDGPV PT株全长感染性DNA克隆的质粒pMDGPVPT为模板,通过重叠延伸PCR方法将5′末端倒置重复序列(5′-ITR)第287位E盒基序(E-box)缺失,获得感染性重组质粒pPT△E287。pPT△E287经卵黄囊接种转染9日龄番鸭胚后拯救出缺失病毒rPT△E287。生物学特性试验显示,rPT△E287感染番鸭胚后能够引起特征性病变,与其亲本病毒株PT相比,rPT△E287的毒价及其在番鸭胚中增殖能力有所下降。本试验为进一步了解5′-ITR中E-box的缺失与MDGPV致病力之间的关系奠定基础。 展开更多
关键词 番鸭 小鹅瘟病毒 E盒基序 感染性克隆
黄病毒属虫媒病毒减毒疫苗研究新进展
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作者 徐铮昊 赵平 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期196-202,共7页
黄病毒属虫媒病毒多为新发突发传染病的病原体,已在全球引发多起突发公共卫生事件,对人类健康构成严重威胁。减毒疫苗是黄病毒属虫媒病毒最有效的疫苗类型,通过连续细胞传代筛选的黄热病病毒和乙型脑炎病毒减毒疫苗对预防这两种黄病毒... 黄病毒属虫媒病毒多为新发突发传染病的病原体,已在全球引发多起突发公共卫生事件,对人类健康构成严重威胁。减毒疫苗是黄病毒属虫媒病毒最有效的疫苗类型,通过连续细胞传代筛选的黄热病病毒和乙型脑炎病毒减毒疫苗对预防这两种黄病毒感染发挥了重要作用。近年来,利用病毒反向遗传学技术对黄病毒基因组进行定点改造以获得减毒表型,在黄病毒属虫媒病毒疫苗研制中取得重要进展。本文就黄病毒属虫媒病毒减毒疫苗的历史和研究现状进行综述。 展开更多
关键词 黄病毒属 病毒疫苗 减毒疫苗 感染性克隆
糖基化位点突变对猪圆环病毒2型增殖的影响
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作者 李佳暖 李得鑫 +2 位作者 崔元 孙继国 袁万哲 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1077-1081,共5页
为提高猪圆环病毒(PCV)的滴度,以本实验室已成功分离的1株PCV2d流行毒株PCV2 RC160307为模板,通过融合PCR突变其Rep蛋白上的1个N-糖基化位点,并成功构建自身环化感染性克隆HT—PCV2,转染ST细胞,盲传至F8代后,通过PCR、间接免疫... 为提高猪圆环病毒(PCV)的滴度,以本实验室已成功分离的1株PCV2d流行毒株PCV2 RC160307为模板,通过融合PCR突变其Rep蛋白上的1个N-糖基化位点,并成功构建自身环化感染性克隆HT—PCV2,转染ST细胞,盲传至F8代后,通过PCR、间接免疫荧光(IFA)及过氧化物酶单层试验(IMPA)进行验证,并通过IMPA测定TCID50发现,拯救成功的HT-PCV2病毒滴度为10^5.2×TCID50/0.1mL,较分离的流行毒株RC160307及未糖基化位点突变的感染性克隆HPCV2的病毒滴度有所提高。此种方法为PCV2复制机制的进一步研究疫苗的研制及其疾病的预防奠定基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 感染性克隆 糖基化位点突变
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