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梯度浓度顺铂处理对6种肿瘤细胞中CASP9的mR-NA选择性剪接的影响 预览 被引量:1
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作者 杨勤兴 马春霞 +7 位作者 陆成龙 杨艳波 杨梦莉 刘舒媛 李明阳 杨渊 史荔 俞建昆 《贵州医科大学学报》 CAS 2017年第9期1003-1009,共7页
目的:分析顺铂处理后多种肿瘤细胞中CASP9基因mRNA选择性剪接异构体的表达及其变化规律。方法:用梯度浓度的顺铂处理肺癌细胞(A549、H1299)、人胚肾细胞(293FT)、宫颈癌细胞(Si Ha、Ca Ski、C33A)6种细胞,提取各细胞的总RNA,用... 目的:分析顺铂处理后多种肿瘤细胞中CASP9基因mRNA选择性剪接异构体的表达及其变化规律。方法:用梯度浓度的顺铂处理肺癌细胞(A549、H1299)、人胚肾细胞(293FT)、宫颈癌细胞(Si Ha、Ca Ski、C33A)6种细胞,提取各细胞的总RNA,用半定量RT-PCR和琼脂糖凝胶电泳及胶图像分析软件检测分析CASP9基因mRNA异构体的组成及其比例和相对表达水平的变化。结果:6种细胞中,CASP9f∶r1引物检测到的CASP9a和c(NR-102732)两种异构体,但随着顺铂浓度的增加,两种异构体的比例在6种细胞中均无变化;而CASP9f∶r2引物可检测到的异构体CASP9a和b、a/b比例在A549、H1299、Si Ha、C33A、Ca Ski中呈逐渐增加趋势,而在293FT细胞中则呈相反趋势;在A549顺铂抗性株中,顺铂处理前后CASP9a/b的比例显著差异变化明显减弱。结论:在顺铂处理下,检测的5种细胞中的Casp9是通过增加casp9a/b的比例来应对,仅293FT例外;顺铂抗性A549细胞株在顺铂处理后casp9a/b的比例比例与细胞凋亡和抗性有关,提示调节casp9a/b的比例是治疗癌症的可能的有效途径之一。 展开更多
关键词 顺铂 CASP9 mRNA选择性剪接 mRNA异构体 细胞凋亡
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顺铂处理下肺癌细胞中剪接因子SRSF2 mRNA异构体的变化 预览 被引量:3
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作者 马春霞 杨梦莉 +5 位作者 陈香玲 李明阳 杨渊 刘淑媛 史荔 俞建昆 《贵州医科大学学报》 CAS 2017年第9期1010-1015,共6页
目的:分析不同浓度顺铂(CDDP)处理后肺癌细胞中剪接因子2(SRSF2)mRNA异构体及蛋白水平的变化及机制。方法:分别使用8、16、24、32、40、48及56μmol/L的CDDP处理肺癌细胞系A549和12、24、36、48、60、72及84μmol/L的CDDP处理肺... 目的:分析不同浓度顺铂(CDDP)处理后肺癌细胞中剪接因子2(SRSF2)mRNA异构体及蛋白水平的变化及机制。方法:分别使用8、16、24、32、40、48及56μmol/L的CDDP处理肺癌细胞系A549和12、24、36、48、60、72及84μmol/L的CDDP处理肺癌细胞系H1299为实验组,同时设立实验组最高浓度CDDP浓度组等体积的DMSO处理的两种细胞的对照组;提取处理后细胞的总RNA,设计SRSF2基因不同的引物(F1∶R1,F2∶F2,F2∶R1),RT-PCR检测mRNA剪接异构体的变化;采用Western-blot检测不同浓度CDDP处理后A549细胞中SRSF2蛋白的表达。结果:在A549和H1299细胞中检测到了6种异构体(a、b、c、d、e、f),且随着处理CDDP浓度的增加,非编码蛋白的mRNA异构体的比例明显上升,主要是Isoform-b和Isoform-e的上升;而编码蛋白的mRNA异构体所占比例明显下降,主要是Isoform-d的下降;同时处理后两种细胞SRSF2的总mRNA水平也逐渐降低,但SRSF2蛋白水平则逐渐升高。结论:在CDDP处理的肺癌细胞A549和H1299中,SRSF2蛋白水平被上调,这种上调可能被SRSF2通过向自身mRNA选择性剪接上调非编码蛋白和下调编码蛋白的mRNA异构体的转录水平来调节。 展开更多
关键词 顺铂 剪接因子2 mRNA选择性剪接 mRNA异构体 细胞凋亡
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顺铂处理后几种癌细胞中Bim基因mRNA异构体的变化 预览 被引量:2
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作者 王玺 马春霞 +10 位作者 陆成龙 杨艳波 杨梦莉 刘舒媛 李明阳 杨渊 袁梅 史荔 段金梅 王丽 俞建昆 《贵州医科大学学报》 CAS 2017年第8期885-892,共8页
目的:探讨不同浓度顺铂处理6种肿瘤细胞后,细胞中Bim基因mRNA选择性剪接异构体的表达及变化规律。方法:用梯度浓度的顺铂处理肺癌细胞(A549、H1299)、人胚肾细胞(293FT)、宫颈癌细胞(SiHa、CaSki、C33A),提取各细胞的总RNA,用... 目的:探讨不同浓度顺铂处理6种肿瘤细胞后,细胞中Bim基因mRNA选择性剪接异构体的表达及变化规律。方法:用梯度浓度的顺铂处理肺癌细胞(A549、H1299)、人胚肾细胞(293FT)、宫颈癌细胞(SiHa、CaSki、C33A),提取各细胞的总RNA,用半定量RT-PCR、琼脂糖凝胶电泳及凝胶图像分析软件检测分析Bim基因mRNA异构体的组成比例和相对水平的变化。结果:用顺铂处理后,在6种细胞中都检测到了BimEL、BimL、BimS、Bimα2、Bimα4和Bimβ7共6种mRNA异构体;随着顺铂处理浓度的增高,各细胞中BimL异构体所占比例和表达水平都有明显的增加。结论:顺铂可能通过转录和mRNA选择性剪接两种机制上调Bim基因的表达,从而促进细胞凋亡;且BimL是主要被上调的异构体。 展开更多
关键词 BCL-2家族 Bim 细胞凋亡 顺铂 mRNA剪接 选择性剪接 mRNA异构体
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p53β在肾细胞癌中的表达及其临床意义的研究 预览 被引量:3
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作者 宋伟 吕家驹 +1 位作者 方笑雷 夏庆华 《泌尿外科杂志(电子版)》 2010年第1期17-20,共4页
目的探讨p53β在肾癌中的表达与肾细胞癌的病理类型、分期以及核分级的相关性。方法采用逆转录PCR对47例肾细胞癌标本和癌旁正常肾组织进行了检测,并结合肾癌的分级和临床分期进行统计学分析。结果 p53β在肾癌组织中的表达显著高于正... 目的探讨p53β在肾癌中的表达与肾细胞癌的病理类型、分期以及核分级的相关性。方法采用逆转录PCR对47例肾细胞癌标本和癌旁正常肾组织进行了检测,并结合肾癌的分级和临床分期进行统计学分析。结果 p53β在肾癌组织中的表达显著高于正常肾组织,其表达与其临床分期有关与病理类型、核分级无关。结论 p53β的表达与肾细胞癌的发生发展有密切关系。p53β可以进一步研究作为肾细胞癌新的诊断分子标记和基因治疗的新的靶点。 展开更多
关键词 选择性剪接 P53 肾细胞癌 mRNA异构体 RT-PCR
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尼罗罗非鱼Ikaros基因的克隆及表达分析 预览
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作者 陈昆平 刘志刚 +7 位作者 卢迈新 高风英 张德锋 可小丽 曹建萌 朱华平 王淼 衣萌萌 《水生生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期77-85,共9页
为揭示尼罗罗非鱼Ikaros基因结构特征及其在抗病原感染中的免疫调控机制,实验采用RT-PCR和RACE方法克隆了尼罗罗非鱼Ikaros的cDNA序列以及利用PCR和染色体步移技术克隆了Ikaros的基因组DNA序列,通过荧光定量PCR分析了Ikaros mRNA的组织... 为揭示尼罗罗非鱼Ikaros基因结构特征及其在抗病原感染中的免疫调控机制,实验采用RT-PCR和RACE方法克隆了尼罗罗非鱼Ikaros的cDNA序列以及利用PCR和染色体步移技术克隆了Ikaros的基因组DNA序列,通过荧光定量PCR分析了Ikaros mRNA的组织分布及其对无乳链球菌感染的响应。结果表明,克隆的尼罗罗非鱼Ikaros基因组DNA为20454 bp,包括7个内含子和8个外显子,经可变剪接可形成6种不同的mRNA剪接异构体,其编码的氨基酸序列均具有Ikaros家族典型的锌指结构域且与硬骨鱼类Ikaros氨基酸序列同源性较高(70.6%—93.7%)。Ikaros基因在尼罗罗非鱼各组织中均有表达,在血液中的表达量最高,其次为胸腺、脾脏和头肾。人工感染无乳链球菌后,血液、胸腺、脾脏、头肾中Ikaros基因的相对表达量均显著上调,并在48h达到峰值,这表明Ikaros基因参与调控尼罗罗非鱼抵御无乳链球菌的免疫应答反应。研究可为进一步探索Ikaros基因在罗非鱼抗病原感染中的作用机制奠定理论基础。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 Ikaros基因 mRNA剪接异构体 无乳链球菌 表达
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顺铂处理癌细胞后CDC25 mRNA剪接异构体的变化 预览 被引量:3
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作者 杨梦莉 陈香岭 +4 位作者 马春霞 姚宇峰 史荔 马千里 俞建昆 《贵州医科大学学报》 CAS 2017年第2期159-164,共6页
目的:探讨顺铂(CDDP)对肺癌、宫颈癌细胞和人胚肾细胞CDC25磷酸酶mRNA的选择性剪接的影响。方法:将培养的肺癌A549和H1299细胞,宫颈癌C33A、SiHa、CaSki细胞及人胚肾293FT细胞分为实验组和对照组,实验组细胞用CDDP处理,对照组细胞用... 目的:探讨顺铂(CDDP)对肺癌、宫颈癌细胞和人胚肾细胞CDC25磷酸酶mRNA的选择性剪接的影响。方法:将培养的肺癌A549和H1299细胞,宫颈癌C33A、SiHa、CaSki细胞及人胚肾293FT细胞分为实验组和对照组,实验组细胞用CDDP处理,对照组细胞用DMSO处理,设计CDC25A、CDC25B、CDC25C引物,利用RTPCR检测CDC25 mRNA剪接异构体的表达变化。结果:与对照组细胞比较,随着CDDP浓度的增加,肺癌A549和H1299细胞,宫颈癌C33A、SiHa和CaSki细胞以及人胚肾293FT细胞中CDC25B、CDC25C mRNA剪接异构体比例有明显变化,而CDC25A mRNA剪接异构体变化不明显。结论:CDDP引起细胞DNA损伤时,可发生CDC25mRNA选择性剪接异构体的比例发生变化,这可能与肿瘤药物治疗时的抗性有关。 展开更多
关键词 CDC25磷酸酶 mRNA剪接异构体 顺铂 肿瘤细胞 培养的 聚合酶链式反应 DNA损伤
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ERCC1新的mRNA剪接异构体及其在顺铂处理细胞中的变化 预览
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作者 陈香岭 杨梦莉 +6 位作者 隋旭 廉亚茹 马春霞 姚宇峰 史荔 马千里 俞建昆 《中国科技论文》 CAS 北大核心 2016年第24期2765-2769,共5页
为了考察用顺铂处理肺癌和宫颈癌细胞后,ERCC1的mRNA选择性剪接是否发生变化,通过提取处理的肿瘤细胞和对照细胞的总RNA,进行RT-PCR检测,对出现的剪接异构体目的条带进行TA克隆、测序鉴定。结果发现了2个新的ERCC1的mRNA剪接异构体,其... 为了考察用顺铂处理肺癌和宫颈癌细胞后,ERCC1的mRNA选择性剪接是否发生变化,通过提取处理的肿瘤细胞和对照细胞的总RNA,进行RT-PCR检测,对出现的剪接异构体目的条带进行TA克隆、测序鉴定。结果发现了2个新的ERCC1的mRNA剪接异构体,其中缺失外显子7-9的异构体在所检测的多种癌细胞中普遍存在,并且在顺铂处理下,其所占比例会随顺铂浓度的升高而增加。该异构体的变化揭示细胞可能会通过pre-mRNA选择性剪接调控ERCC1的功能。 展开更多
关键词 生物化学 切除修复交叉互补族1 mRNA剪接异构体 顺铂 核苷酸切除修复
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人结肠癌组织环加氧酶-2 mRNA剪接异构体片段分离与克隆 预览 被引量:2
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作者 万敬员 叶笃筠 +7 位作者 吴萍 黄云峰 孙伟 应红刚 盘茜 袁萍 张代娟 张力 《华中科技大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期 467-470,共4页
目的探讨人结肠癌组织中是否存在环加氧酶-2(COX-2)选择性剪接异构体的表达及其可能意义.方法针对人COX-2 DNA第7、8外显子序列,设计一对全新引物,并采用RT-PCR技术,从结肠癌组织中分离COX-2mRNA,然后对电泳条带进行克隆、测序和分析.... 目的探讨人结肠癌组织中是否存在环加氧酶-2(COX-2)选择性剪接异构体的表达及其可能意义.方法针对人COX-2 DNA第7、8外显子序列,设计一对全新引物,并采用RT-PCR技术,从结肠癌组织中分离COX-2mRNA,然后对电泳条带进行克隆、测序和分析.结果正常结肠组织和结肠癌组织均发现COX-2目的条带(252bp),但结肠癌组织则出现了一条新的电泳带(534 bp),经克隆和测序证实,该条带除目的条带的COX-2 DNA的第7、8外显子序列外,还包含第7、8外显子间的内含子序列,即保留的内含子(282 bp).根据阅读框推测,在保留的内含子第48~50碱基出现终止密码.结论首次发现结肠癌组织中存在COX-2基因的选择性剪接异构体(Genbankaccession number:BU493602,AY1512980),其所编码蛋白可能较已报道的COX-2酶蛋白小,且蛋白质的C末端缺少阿斯匹林作用位点. 展开更多
关键词 人结肠癌组织 环加氧酶-2 mRNA剪接异构体 分离 克隆
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