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Effects of protein properties on ultrafiltration membrane fouling performance in water treatment
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作者 Yanyan Ding Baiwen Ma +1 位作者 Huijuan Liu Jiuhui Qu 《环境科学学报:英文版》 SCIE EI CAS CSCD 2019年第3期273-281,共9页
Protein-like substances always induce severe ultrafiltration(UF) membrane fouling. To systematically understand the effect of proteins, regenerated cellulose UF membrane(commonly used for protein separation) performan... Protein-like substances always induce severe ultrafiltration(UF) membrane fouling. To systematically understand the effect of proteins, regenerated cellulose UF membrane(commonly used for protein separation) performance was investigated in the presence of bovine serum albumin(BSA) under various water conditions. Results showed that although trypsin enhanced the membrane flux via proteolysis, catalysis took a long time. Membrane fouling was alleviated at high solution p H and low water temperature owing to the strong electrostatic repulsion force among BSA molecules. Both Na+ and Ca2+could increase membrane flux. However, Ca2+played a bridging role between adjacent BSA molecules,whereas membrane fouling was alleviated via a hydration repulsion force with Na+. The order of influence on membrane fouling was as follows: Ca2+concentration > Na+concentration > pH > temperature > trypsin concentration. Furthermore, a polyvinylidene fluoride UF membrane experiment showed that Ca2+could reduce the fouling induced by BSA. Thus, the differences in UF membrane performance will have application potential for alleviating UF membrane fouling induced by proteins during water treatment. 展开更多
关键词 ULTRAFILTRATION MEMBRANE Protein PROPERTIES Influencing FACTORS MEMBRANE PERFORMANCE
19F固体核磁共振技术研究膜蛋白相互作用的进展 预览
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作者 徐小俊 王申林 《波谱学杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期238-251,共14页
固体核磁共振技术因其可实现细胞膜环境中的蛋白质结构研究而广受关注.19F元素由于灵敏度高、天然丰度高,无生物背景等优点,被广泛应用于生物核磁共振技术中.氟标固体核磁共振技术常被用于细胞膜中蛋白质的相互作用研究,如:抗菌肽与细... 固体核磁共振技术因其可实现细胞膜环境中的蛋白质结构研究而广受关注.19F元素由于灵敏度高、天然丰度高,无生物背景等优点,被广泛应用于生物核磁共振技术中.氟标固体核磁共振技术常被用于细胞膜中蛋白质的相互作用研究,如:抗菌肽与细胞膜的相互作用、聚合膜蛋白结构分析等.此篇综述介绍了常用的蛋白质氟标修饰的实验方法,总结了常用的19F生物固体核磁共振实验技术,以及介绍了应用19F固体核磁共振研究膜蛋白的成功案例.此外,此篇综述讨论了19F固体核磁共振技术在蛋白质研究中的局限性. 展开更多
关键词 19F固体核磁共振 蛋白相互作用 综述 膜蛋白
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拉莫三嗪与丙戊酸钠对Ⅰ型钠离子通道Nav1.1膜蛋白表达的影响 预览
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作者 汤斌 蔡秀曲 +2 位作者 徐海清 廖卫平 何娜 《临床医学工程》 2019年第3期301-303,共3页
目的比较Ⅰ型钠离子通道Nav1.1在拉莫三嗪(LTG)及丙戊酸钠(VPA)处理后的蛋白表达水平,探讨LTG和VPA参与癫痫治疗的可能机制。方法构建带YFP标签的Nav1.1蛋白表达载体(pCMV-YFP-SCN1A),转染HEK293T细胞。使用LTG、VPA处理24 h,提取总蛋... 目的比较Ⅰ型钠离子通道Nav1.1在拉莫三嗪(LTG)及丙戊酸钠(VPA)处理后的蛋白表达水平,探讨LTG和VPA参与癫痫治疗的可能机制。方法构建带YFP标签的Nav1.1蛋白表达载体(pCMV-YFP-SCN1A),转染HEK293T细胞。使用LTG、VPA处理24 h,提取总蛋白和生物素标记的膜蛋白,采用Western blotting检测Nav1.1总蛋白及膜蛋白的表达水平。结果与对照组比较, Nav1.1膜蛋白表达水平在VPA处理24 h后显著增加(P <0.05),而在LTG处理24 h后无显著改变(P>0.05);Nav1.1总蛋白表达水平在LTG、VPA处理24 h后无明显变化(P>0.05)。结论 VPA可促进Nav1.1膜蛋白表达,可能是参与抗癫痫治疗过程的潜在机制。 展开更多
关键词 Nav1.1蛋白 拉莫三嗪 丙戊酸钠 膜蛋白
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红球菌跨膜运输荧蒽的差异膜蛋白分析 预览
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作者 孔德康 李艺 +2 位作者 王红旗 许洁 关晶晶 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第1期274-280,共7页
提取不同时间荧蒽诱导下红球菌BAP-1分泌的膜蛋白,利用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ技术)结合液相二级质谱对差异膜蛋白进行聚类以及生物信息学分析.旨在从蛋白质层面上研究红球菌BAP-1跨膜运输荧蒽过程中起关键作用的膜蛋白种... 提取不同时间荧蒽诱导下红球菌BAP-1分泌的膜蛋白,利用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ技术)结合液相二级质谱对差异膜蛋白进行聚类以及生物信息学分析.旨在从蛋白质层面上研究红球菌BAP-1跨膜运输荧蒽过程中起关键作用的膜蛋白种类及其作用机制.结果共鉴定到172个差异膜蛋白.通过差异膜蛋白的COG和GO功能分析,发现荧蒽的加入主要影响了红球菌BAP-1细胞膜上与能量、转运相关的膜蛋白.ABC转运蛋白和TonB依赖转运蛋白作为微生物主要的载体蛋白对BAP-1跨膜运输荧蒽起到了重要作用.过氧化氢酶和超氧化物歧化酶在第6d有一个显著上调,作为抗氧化防御机制来保护微生物.各种膜蛋白在不同阶段发挥着各自作用,这些蛋白共同组成蛋白互作网络调控红球菌BAP-1的跨膜运输过程. 展开更多
关键词 红球菌BAP-1 荧蒽 膜蛋白 跨膜运输 ITRAQ
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生物复杂环境下的核磁共振技术和应用:机遇与挑战并存
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作者 刘重旭 王玉娟 +1 位作者 喻志武 王俊峰 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第8期773-787,共15页
核磁共振(nuclear magnetic resonance, NMR)技术是研究生物大分子结构、动力学和相互作用最理想的工具之一.近年来,高场NMR波谱仪的使用和NMR实验方法的不断创新,在很大程度上提高了NMR技术检测的灵敏度和分辨率,使NMR技术得到快速发... 核磁共振(nuclear magnetic resonance, NMR)技术是研究生物大分子结构、动力学和相互作用最理想的工具之一.近年来,高场NMR波谱仪的使用和NMR实验方法的不断创新,在很大程度上提高了NMR技术检测的灵敏度和分辨率,使NMR技术得到快速发展和广泛应用.目前,生命科学与物质科学的交叉融合使生命科学研究从观察、描述性科学转向定量、可预测性科学,多种学科交叉渗透发展已成为科学研究领域十分普遍的现象.在这种趋势下,生物复杂环境下的磁共振谱学研究体系日趋成熟,本文重点回顾和讨论了多学科交叉研究趋势下NMR技术在生物复杂体系中的应用和发展,主要包括复杂膜环境下的膜蛋白研究、复杂细胞环境下的细胞内NMR(in-cell NMR)研究以及骨组织的固体NMR研究等. 展开更多
关键词 核磁共振 生物复杂环境 膜蛋白 in-cell NMR 骨生物材料
蛋白质及无机离子对纳滤膜去除PFOS的影响 预览
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作者 岳向雷 王磊 +2 位作者 王佳璇 梁童 吕永涛 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第5期2007-2013,共7页
以全氟辛烷磺酸(PFOS)为目标去除物,选取牛血清蛋白(BSA)为典型蛋白质类有机物,考察了BSA及其浓度,以及BSA与无机离子共存时,离子强度、离子种类对聚酰胺纳滤膜去除水中PFOS的影响.研究发现,原液中存在BSA时,PFOS的去除率有显著提高,而... 以全氟辛烷磺酸(PFOS)为目标去除物,选取牛血清蛋白(BSA)为典型蛋白质类有机物,考察了BSA及其浓度,以及BSA与无机离子共存时,离子强度、离子种类对聚酰胺纳滤膜去除水中PFOS的影响.研究发现,原液中存在BSA时,PFOS的去除率有显著提高,而且BSA浓度越高,PFOS的去除率越高;当BSA与无机离子共存时,离子强度越大, PFOS去除率越高.这可能是因为BSA不但会吸附一部分PFOS,还会造成膜污染, BSA浓度越大,膜污染越严重,膜的筛分能力越强,且膜面与PFOS之间的静电排斥力越大,从而提高了PFOS的截留率.而无机离子的存在减小了BSA分子之间及与膜面之间的静电排斥力,使BSA污染层更加厚实,进一步增强了膜的筛分能力.此外, Ca^2+提高PFOS去除率的能力优于Na^+. 展开更多
关键词 全氟辛烷磺酸 纳滤膜 蛋白质 无机离子
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梅毒螺旋体膜蛋白Tp0971激活MAPKs和NF-κB诱导巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β 预览
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作者 张跃军 蒋传好 +3 位作者 肖鹏程 刘佳强 彭俊 吴移谋(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期545-548,共4页
目的:探讨梅毒螺旋体(Tp)膜蛋白Tp0971诱导巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β的分子机制。方法:课题组前期表达的Tp0971重组蛋白为研究对象,将不同浓度的重组Tp0971刺激巨噬细胞,分别采用ELISA和实时定量PCR检测TNF-α和IL-1β的分泌及其mRNA... 目的:探讨梅毒螺旋体(Tp)膜蛋白Tp0971诱导巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β的分子机制。方法:课题组前期表达的Tp0971重组蛋白为研究对象,将不同浓度的重组Tp0971刺激巨噬细胞,分别采用ELISA和实时定量PCR检测TNF-α和IL-1β的分泌及其mRNA的表达。采用Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)p38,ERK1/2以及JNK1/2的磷酸化,并用相应的抑制剂处理观察TNF-α和IL-1β的变化。同时采用Western blot观察核转录因子κB(NF-κB)的核转位情况,并采用抑制剂处理观察其在介导TNF-α和IL-1β分泌中的作用。结果:ELISA结果显示,重组Tp0971能在0.5~10μg/ml剂量范围内诱导巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β。并能促进其mRNA表达,采用转录抑制剂放线菌素D(ActD)或翻译抑制剂放线菌酮(CHX)处理后,TNF-α和IL-1β的转录和分泌水平显著降低。Tp0971也可诱导p38,ERK1/2以及JNK1/2磷酸化,采用其相应的抑制剂处理后,TNF-α和IL-1β分泌明显减少。Western blot结果也显示Tp0971能诱导NF-κB p65亚基核转位,采用NF-κB抑制剂PDTC处理后,TNF-α和IL-1β分泌水平降低。结论:Tp0971激活MAPKs和NF-κB诱导巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β。 展开更多
关键词 梅毒螺旋体 膜蛋白 肿瘤坏死因子α 白细胞介素-1Β
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猪肺泡巨噬细胞膜表面类补体受体分子的鉴定
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作者 王春 尹伟 +3 位作者 范阔海 孙娜 孙耀贵 李宏全 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期13-17,共5页
为了鉴定猪肺泡巨噬细胞( PAM)膜表面是否存在类补体受体Ⅰ型( CR1-like),试验采用PCR技术、SDS-PAGE 电泳、Western-blot 技术及流式细胞术对 PAM 膜表面存在的分子进行研究。结果表明: PAM 中存在 CR1-like 基因,并且 PAM 膜表面存在... 为了鉴定猪肺泡巨噬细胞( PAM)膜表面是否存在类补体受体Ⅰ型( CR1-like),试验采用PCR技术、SDS-PAGE 电泳、Western-blot 技术及流式细胞术对 PAM 膜表面存在的分子进行研究。结果表明: PAM 中存在 CR1-like 基因,并且 PAM 膜表面存在分子质量约为 55 ku 的 CR1-like 分子;运用流式细胞术检测 PAM 膜表面的 CR1-like 分子,用 CR1-like McAb 处理过的 PAM 的平均荧光强度为 3 478. 14±357. 11,用 IgG1 同型抗体处理过的 PAM 的平均荧光强度为 1 411. 89±313. 33,而用单独二抗处理过的 PAM 的平均荧光强度为 1 205. 89±372. 27,用 CR1-like McAb 处理过的 PAM 的荧光强度高于其他两组,且差异极显著( P<0. 01),而其他两组间 PAM 的荧光强度差异不显著( P>0. 05)。说明 PAM 膜表面存在 CR1-like 分子,其分子质量大小约为 55 ku。 展开更多
关键词 猪肺泡巨噬细胞( PAM) 类补体受体Ⅰ型( CR1-like) 免疫沉淀技术 流式细胞术 单克隆抗体 膜蛋白
ε-聚赖氨酸盐酸盐与Nisin对蜡状芽孢杆菌的协同作用及机理 预览
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作者 史文艳 孙震 《食品与机械》 北大核心 2019年第3期15-19,103共6页
以碱性磷酸酶、紫外吸收物、丙酮酸含量以及SDSPAGE凝胶电泳结果等为指标,通过单独及联合使用ε-聚赖氨酸盐酸盐、乳酸链球菌素(Nisin),综合评价了ε-聚赖氨酸盐酸盐、Nisin对蜡状芽孢杆菌的抑菌作用。结果表明:ε-聚赖氨酸盐酸盐与Nisi... 以碱性磷酸酶、紫外吸收物、丙酮酸含量以及SDSPAGE凝胶电泳结果等为指标,通过单独及联合使用ε-聚赖氨酸盐酸盐、乳酸链球菌素(Nisin),综合评价了ε-聚赖氨酸盐酸盐、Nisin对蜡状芽孢杆菌的抑菌作用。结果表明:ε-聚赖氨酸盐酸盐与Nisin对蜡状芽孢杆菌具有协同抑制作用,Nisin主要是通过破坏细胞壁膜结构以增加细胞壁膜的通透性,而ε-聚赖氨酸盐酸盐主要是通过影响ATP酶活性、蛋白质合成与表达及能量代谢过程来影响菌体的生长代谢活动。二者联合使用,可在较低浓度下达到更好抑菌效果。 展开更多
关键词 ε-聚赖氨酸盐酸盐 乳酸链球菌素 蜡状芽孢杆菌 膜渗透性 蛋白表达 能量代谢
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易位子辅助膜蛋白插入热力学
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作者 高健 孙素娟 李英 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期1257-1265,共9页
易位子辅助膜蛋白插入内质网膜是膜蛋白质生物生成的关键过程。了解不同类分子插入生物膜的机制是预测溶质分子透膜速度的先决条件,这也是药物设计和药理学领域的关键因素。根据插入机制,可以设计插膜肽直接用于疾病治疗,或者作为载体... 易位子辅助膜蛋白插入内质网膜是膜蛋白质生物生成的关键过程。了解不同类分子插入生物膜的机制是预测溶质分子透膜速度的先决条件,这也是药物设计和药理学领域的关键因素。根据插入机制,可以设计插膜肽直接用于疾病治疗,或者作为载体有选择性地将药物靶向特定细胞。自从2004年第1个易位子通道蛋白(Sec)的晶体结构被解析后,近十几年来大量的实验和理论研究,都在致力于揭示Sec辅助膜蛋白插入过程的分子机制。本文总结了过去该领域的实验和分子动力学模拟研究进展,从热力学方面重点分析了造成膜蛋白插入自由能分子动力学模拟计算值,以及实验值间偏差的原因。其中,根据研究条件精确设置模拟参数、插入造成的膜变形对自由能计算有很大的影响;核糖体为新生肽插入到Sec通道过程提供了能量,核糖体与Sec的结合影响Sec侧门的开放程度和Sec通道的结构,从而降低膜插入自由能。Sec辅助膜蛋白插入是一个极其复杂的过程,但整个过程仍然符合热力学和动力学的基本原理,尽管疏水性是Sec辅助膜蛋白质插入的关键性因素,但也不能忽略动力学因素的影响。 展开更多
关键词 膜蛋白质 易位子 膜蛋白插入 自由能 核糖体
膜蛋白的表达:在无细胞体系中实现功能性表达、折叠和组装
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作者 李剑勇 满亚辉 +2 位作者 陈倩 裴迪 吴文健 《生物化学与生物物理进展》 CSCD 北大核心 2018年第4期389-400,共12页
膜蛋白在人类和其他物种的生命活动中都起着至关重要的作用.在已完成测序的基因组中,膜蛋白占据30%.药物作用靶向位点、细胞之间的信号传递以及对外界环境的探测等功能,大多是通过生物膜上的特殊膜受体蛋白实现的.膜蛋白研究在工业、环... 膜蛋白在人类和其他物种的生命活动中都起着至关重要的作用.在已完成测序的基因组中,膜蛋白占据30%.药物作用靶向位点、细胞之间的信号传递以及对外界环境的探测等功能,大多是通过生物膜上的特殊膜受体蛋白实现的.膜蛋白研究在工业、环境、国防、医学等领域具有重大意义.嗅觉受体蛋白是一类典型的膜蛋白,属于G蛋白偶联受体家族.嗅觉受体蛋白调控着生物的食物寻找、危险趋避和求偶行为.其主要分布于脊椎动物鼻腔和昆虫触角.嗅觉受体蛋白可以直接识别气味分子,将生物信号转化为电信号,最终传递至神经中枢,进而做出相关应答.膜蛋白的获取并不容易.天然组织中的膜蛋白含量太低不足以支撑学术研究.异源表达难以实现膜蛋白整合上膜,这给膜蛋白的结构和功能研究带来很大挑战.无细胞蛋白质合成系统是一个开放体系,且不依赖细胞活性,是体外表达蛋白质的有效方法.通过无细胞蛋白合成体系,在体外实现膜蛋白二聚体的自组装,将为膜蛋白研究带来全新突破.本文总结了用于无细胞表达的膜蛋白研究进展. 展开更多
关键词 嗅觉受体蛋白 无细胞蛋白质合成系统 膜蛋白 生物传感 信号传导
重组蛋白酶切方法的比较与分析
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作者 封瑞 吕丽婷 +4 位作者 苏敬阳 康泽 毛建伟 郝丽英 曾晓荣 《解剖科学进展》 2018年第4期408-410,414共4页
目的探讨制备纯化重组蛋白的酶切方法,比较不同蛋白纯化方法的差异。方法在大肠杆菌BL-21中分别诱导表达pGEX-6p-3/CT1,pGEX-6p-3/CT3,pGEX-6p-3/CaM,pGEX-6p-3/CaMKⅡ。采用超声破碎、B-per试剂以及B-per试剂加变性复性试剂盒等方法制... 目的探讨制备纯化重组蛋白的酶切方法,比较不同蛋白纯化方法的差异。方法在大肠杆菌BL-21中分别诱导表达pGEX-6p-3/CT1,pGEX-6p-3/CT3,pGEX-6p-3/CaM,pGEX-6p-3/CaMKⅡ。采用超声破碎、B-per试剂以及B-per试剂加变性复性试剂盒等方法制备带GST标签的融合蛋白,进一步在不同条件下使用蛋白酶进行酶切获得相应蛋白。将制备得到的蛋白进行SDS-PAGE电泳鉴定,同时,使用pull-down方法对蛋白活性进行鉴定。结果采用B-per试剂以及变性再复性试剂盒,同时酶切时加入DTT,能得到较高浓度与纯度的CT1蛋白。而无论采用B-per试剂或超声破碎,只要酶切时加入DTT均能获得CT3蛋白。采用简单的超声破碎,酶切时不需加入任何试剂即可得到高浓度与高纯度的胞浆蛋白CaM,而目前仍没找到纯化CaMKⅡ蛋白的理想方法,需进一步的实验研究。结论重组蛋白酶切纯化方法存在差异,DTT可能在酶切纯化蛋白时起到关键作用。 展开更多
关键词 重组蛋白 钙通道 酶切 膜蛋白
New design for multi-crystal data collection at SSRF 预览
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作者 Bing Li Sheng Huang +7 位作者 Qiang-Yan Pan Min-Jun Li Huan Zhou Qi-Sheng Wang Feng Yu Bo Sun Jian-Qiao Chen Jian-Hua He 《核技术:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第2期48-56,共9页
Data collection with microcrystals at synchrotron radiation facilities is challenging because it is difficult to harvest and locate microcrystals.Moreover,microcrystals are sensitive to radiation damage;thus,typically... Data collection with microcrystals at synchrotron radiation facilities is challenging because it is difficult to harvest and locate microcrystals.Moreover,microcrystals are sensitive to radiation damage;thus,typically,a complete data set cannot be obtained with a single microcrystal.Herein,we report a new method for data collection with multiple microcrystals having a crystal size ranging from1to30lm.This method is suitable for not only low-temperature(100K)data collection but also room-temperature data collection.Thin Kapton membranes were used to capture multiple crystals simultaneously.The microcrystals were visible under an optical microscope and easily located because the membrane was transparent and sufficiently thin.The film was fixed to a bracket that was prepared using a three-dimensional printer.The bracket was fixed on a magnetic base via screwing and employed by the goniometer system for data collection.Multiple data sets of fatty acid-binding protein4(FABP4)and lysozyme microcrystals were collected using this novel designed device.Finally,the structures of protein FABP4and lysozyme were obtained from these data via the molecule replacement method.The data statistics reveal that this method provides a comparable result to traditional methods such as a nylon loop. 展开更多
关键词 KAPTON membrane MICROCRYSTALS Multicrystal data COLLECTION Protein structure
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大肠杆菌MG1655三个膜蛋白的生物信息学分析
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作者 王永刚 杨光瑞 +3 位作者 冷非凡 杨明俊 王鸣刚 陈凯 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第11期4763-4768,共6页
从NCBI数据库中检索大肠杆菌MG1655膜蛋白pspD、yiaW和yeeE的氨基酸序列,采用生物信息学在线分析软件对三种膜蛋白的理化性质、保守结构域、跨膜区、信号肽、磷酸化位点、糖基化位点及相互作用蛋白拓扑网络进行了预测分析。实验表明psp... 从NCBI数据库中检索大肠杆菌MG1655膜蛋白pspD、yiaW和yeeE的氨基酸序列,采用生物信息学在线分析软件对三种膜蛋白的理化性质、保守结构域、跨膜区、信号肽、磷酸化位点、糖基化位点及相互作用蛋白拓扑网络进行了预测分析。实验表明pspD为亲水性蛋白,分子中不存在跨膜结构,yiaW和yeeE为疏水性蛋白,分子中分别有2个和9个跨膜区;3个蛋白分子中均不存在信号肽序列,也没有磷酸化位点,pspD中有1个糖基化位点,yiaW和yeeE中分别有2个和7个糖基化位点。3个蛋白二级结构中组成最多的是α-螺旋分别占56.16%、57.94%$1142.61%。三级结构的预测结果与二级结构预测一致。对其相互作用蛋白的拓扑网络预测发现,pspD属于噬菌体休克蛋白操纵子家族成员,与pspA、pspB和pspC蛋白关系最为密切,推测其可能在特殊环境中对于维持膜功能有极其重要的作用;yiaW与yiaV蛋白为膜融合蛋白(外排泵组件,信号锚,与物质外排有关),和ycdZ(DUF1097家族内膜蛋白)、nrfA(亚硝酸还原酶)、nrfD(甲酸依赖亚硝酸盐还原酶)蛋白相互作用关系最为密切。yeeE蛋白与保守蛋白yeeD和yedF为同源蛋白,关系最为密切。此外,yeeE蛋白与cysJ、Cysp、cysN、cysD等硫酸盐跨膜运输蛋白关系密切,根据前面的预测其有9个跨膜区,推测其可能与物质的跨膜转运相关。 展开更多
关键词 大肠杆菌MG1655 膜蛋白 生物信息学 预测分析
牛支原体vspY基因克隆及序列分析研究 预览
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作者 谢晓东 罗维 +5 位作者 苟昌勇 吴巧群 唐沙 杨源 王军 程振涛 《贵州畜牧兽医》 2018年第2期1-4,共4页
通过对牛支原体vspY蛋白基因的扩增、克隆及序列分析,研究vspY蛋白基因的保守性。结果:扩增vspY基因片段长度约为1121bp,vspY基因克隆测序显示基因片段确定为1121bp,与引物设计扩增长度相符;vspY基因序列分析显示,与牛支原体参考株基因... 通过对牛支原体vspY蛋白基因的扩增、克隆及序列分析,研究vspY蛋白基因的保守性。结果:扩增vspY基因片段长度约为1121bp,vspY基因克隆测序显示基因片段确定为1121bp,与引物设计扩增长度相符;vspY基因序列分析显示,与牛支原体参考株基因同源性为98%,仅在533、728位点存在点突变;系统进化树显示,牛支原体贵州分离株与参考株处于不同系统进化分支,存在一定进化距离。结果表明:牛支原体vspY蛋白基因相对保守,不同地区分离株存在一定进化关系。 展开更多
关键词 牛支原体 vspY基因 克隆 序列分析 膜蛋白
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Recombinant Expression and Purification of Mouse Nectin-like 4 Glycoprotein in 293ET Cell Line 预览
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作者 Dongdong Li Tai An +3 位作者 Xiao Liu Bin Yin Xiaozhong Peng Pengcheng Shu 《中国医学科学杂志:英文版》 CAS CSCD 2018年第1期1-8,共8页
To screen the transient and stable cell lines with high production of Nectin-like 4(Necl-4)protein.Methods First,cDNA sequences encoding the extracellular domain of Necls were cloned into the modified vector pAPtag at... To screen the transient and stable cell lines with high production of Nectin-like 4(Necl-4)protein.Methods First,cDNA sequences encoding the extracellular domain of Necls were cloned into the modified vector pAPtag at the N terminus of alkaline phosphatase(AP)for fusion expression.Next,293ET cells stably expressed Necls-AP fusion protein and secreted it into the culture medium which were detected by the AP activity assay and Western blot analysis.Then,by adding N-glycosylation processing inhibitor kifunensine into the medium,complex glycan was inhibited to generate.The residual glycan of purified protein was removed by endoglycosidase H.Finally,AP protein was removed by using human rhinovirus protease and size exclusion chromatography.The concentration of purified Necl-4 protein was monitored by measuring the absorbance at 280 nm and analyzed by SDS-PAGE.Results The transient and stable cell lines with high production of Necl-4 protein were screened by the color reaction with the AP-tag in the recombinant vector.The soluble and active form of purified Necl-4 protein was obtained after deglycosylation of native N-glycan protein with an expression level of 4 mg/L culture and purity of 95%.Conclusions By using modified AP mammalian protein expression system,we can easily screen the high productive stable cell lines by using AP activity assay.By adding mannosidase inhibitor kifunensine into the medium and cutting purified protein by using endoglycosidase H,we can obtain deglycosylated Necl-4 protein in milligram quantities.Our method might throw a light on the expression and purification of glycoprotein for structural and functional studies. 展开更多
关键词 Nectin-like IMMUNOGLOBULIN membrane protein fast and easy screening GLYCOSYLATION mammalian cell
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基于蛋白质组学技术探讨小鼠心脏缺血再灌注损伤早期膜蛋白的变化特点 预览 被引量:1
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作者 尤宏钊 李玉琳 +4 位作者 乔博康 王绿娅 陈博雅 智莹 杜杰 《心肺血管病杂志》 2018年第4期359-363,368共6页
目的:应用相对和绝对定量的同位素标记(iTRAQ)结合液相色谱和质谱技术,对小鼠缺血再灌注损伤心脏组织膜蛋白进行鉴定和定量分析。方法:选取C57小鼠,15只,分为正常组和缺血再灌注损伤(I/R)组。I/R组结扎前降支30min,分别于1d和3d... 目的:应用相对和绝对定量的同位素标记(iTRAQ)结合液相色谱和质谱技术,对小鼠缺血再灌注损伤心脏组织膜蛋白进行鉴定和定量分析。方法:选取C57小鼠,15只,分为正常组和缺血再灌注损伤(I/R)组。I/R组结扎前降支30min,分别于1d和3d后处死,收取正常组及再灌注损伤组小鼠的心脏组织。采用梯度离心纯化膜蛋白,并免疫印迹膜蛋白检测纯度。利用iTRAQ技术检测I/R后1d、3d及正常对照心脏组织中的膜蛋白质,鉴定出显著差异表达蛋白质(差异倍数〉1.5或者〈0.67,P〈0.05)并结合公共数据信息,探讨差异蛋白的生物学信息及信号通路。结果:共检测出2 224种蛋白质,具有跨膜结构共有901个。与正常心脏组织相比,I/R后1d共有211个膜蛋白显著升高,有217个蛋白显著降低,均为P〈0.05;与I/R后1d相比,I/R后3d组有205个膜蛋白显著升高,222个膜蛋白显著降低,均为P〈0.05。生物信息学分析差异蛋白发现,I/R早期(1d和3d),膜蛋白所涉及的生物进程主要是能量代谢和氧化磷酸化,主要涉及的通路是氧化应激、能量代谢和心肌收缩。结论:iTRAQ技术可有效地用于组织蛋白鉴定和定量,利于发现膜蛋白与I/R早期病理变化的关系,为I/R的干预寻找潜在的治疗靶点。 展开更多
关键词 缺血再灌注损伤 蛋白质组学 生物信息学 膜蛋白
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Structural roles of lipid molecules in the assembly of plant PSII-LHCII supercomplex
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作者 Xin Sheng Xiuying Liu +2 位作者 Peng Cao Mei Li Zhenfeng Liu 《生物物理学报:英文版》 CSCD 2018年第4期189-203,共15页
关键词 类脂化合物 超分子 植物 结构 PSII 高分辨率 相互作用 光合作用
植物光系统Ⅱ捕光过程的超分子结构基础
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作者 李安节 柳振峰 《生物化学与生物物理进展》 CSCD 北大核心 2018年第9期935-946,共12页
光系统Ⅱ(photosystemⅡ,PSⅡ)是位于植物、藻类和蓝细菌等放氧光合生物类囊体膜上的重要超分子复合物,它可通过捕获光能用于激发反应中心的电荷分离并驱动电子传递过程,在常温常压下可将水分子裂解产生氧气和质子.植物光系统Ⅱ的外... 光系统Ⅱ(photosystemⅡ,PSⅡ)是位于植物、藻类和蓝细菌等放氧光合生物类囊体膜上的重要超分子复合物,它可通过捕获光能用于激发反应中心的电荷分离并驱动电子传递过程,在常温常压下可将水分子裂解产生氧气和质子.植物光系统Ⅱ的外周存在主要和次要捕光复合物Ⅱ(major and minor light-harvesting complexⅡ,LHCⅡ),它们负责吸收光能并向光系统Ⅱ传递激发能,并且还参与非光化学淬灭和状态转换相关的捕光调节过程.近年来,围绕光系统Ⅱ和LHCⅡ的结构生物学研究取得了一系列重要进展,本文总结了PSⅡ、LHCⅡ和二者共同组成的PSII-LHCII超级复合物的结构生物学研究历程以及最新进展,并对该领域的未来研究方向做出展望. 展开更多
关键词 光系统Ⅱ 捕光复合物Ⅱ 结构生物学 膜蛋白 光合作用
Acidianus manzaensis菌硫氧化相关膜蛋白基因的筛选及鉴定 预览
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作者 朱薇 马亚龙 杨云 《包装学报》 2018年第1期67-75,共9页
基于比较蛋白质组学的方法,筛选和鉴定了嗜酸热古菌A.manzaensis中与硫氧化相关的膜蛋白。首先利用温度诱导TritonX-114两相分离萃取技术分别对以单质硫(S0)和亚铁(Fe2+)为能源底物生长的A.manzaensis菌的膜蛋白进行选择性分离,再用聚... 基于比较蛋白质组学的方法,筛选和鉴定了嗜酸热古菌A.manzaensis中与硫氧化相关的膜蛋白。首先利用温度诱导TritonX-114两相分离萃取技术分别对以单质硫(S0)和亚铁(Fe2+)为能源底物生长的A.manzaensis菌的膜蛋白进行选择性分离,再用聚丙烯酰胺凝胶电泳和双向电泳对所提取的膜蛋白作进一步分析,最后利用基质辅助激光解吸附电离飞行时间串联质谱对以S0为能源底物下的差异表达膜蛋白斑点进行鉴定,并通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术进行初步验证。实验结果表明:A.manzaensis菌在2种不同能源底物下生长时所提取的膜蛋白存在明显的差异,并发现8个与S0氧化相关的膜蛋白,其中,一个未知功能的膜蛋白富含巯基(—SH)及—CXXC—功能域,该膜蛋白可能通过巯基对S0进行键和并生成Pr—SSnH(n≥2)化合物,以协助S0跨膜转运;实验还筛选得到了硫醌氧化还原酶、电子传递蛋白、转录激活蛋白和与细胞生长相关的蛋白,这些膜蛋白在嗜热古菌A.manzaensis氧化S0的过程中起重要作用。 展开更多
关键词 Acidianus manzaensis 硫氧化 膜蛋白 比较蛋白质组学
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