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配对盒基因6/小鼠胚胎干细胞细胞系的建立及干细胞生物学特性分析
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作者 丁玲 高杰 +2 位作者 李红 胡蓉 苏敏 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期451-458,共8页
目的建立配对盒基因6(Pax6)/小鼠胚胎干细胞(m ESCs)细胞系并鉴定其干细胞生物学特性。方法体外培养m ESCs,将重组载体p EF1α-Pax6-IRES-AcGFP和空载体p EF1α-IRES-AcGFP分别用脂质体法转染m ESCs,经G418梯度及荧光蛋白双筛选后,使用... 目的建立配对盒基因6(Pax6)/小鼠胚胎干细胞(m ESCs)细胞系并鉴定其干细胞生物学特性。方法体外培养m ESCs,将重组载体p EF1α-Pax6-IRES-AcGFP和空载体p EF1α-IRES-AcGFP分别用脂质体法转染m ESCs,经G418梯度及荧光蛋白双筛选后,使用细胞免疫荧光染色、免疫印迹法及RT-PCR技术检测Pax6的表达情况,流式细胞术检测Pax6/m ESCs阳性细胞的比例。将获得正确的细胞系分别采用细胞免疫荧光染色对其干细胞标志物阶段特异性胚胎抗原1(SSEA1)、八聚体结合转录因子4(OCT4)进行检测,碱性磷酸酶(AP)染色法对其多能性进行检测,流式细胞术检测增殖指数Ki67。将Pax6/m ESCs进行肾背囊下移植,移植物行HE染色观察其分化能力。结果 Pax6成功在m ESCs内表达,经G418筛选后,获得Pax6/m ESCs细胞系,流式结果显示,Pax6阳性率为90%,免疫荧光显示,干细胞标志物SSEA1、OCT4表达阳性且AP染色阳性,并且在体内移植后能向3个胚层分化。结论 Pax6成功在m ESCs内表达,经G418筛选后,获得细胞系Pax6/m ESCs并维持良好的干细胞特性。 展开更多
关键词 配对盒基因6 小鼠胚胎干细胞 基因转染 G418筛选 流式细胞术 小鼠
利用单细胞融合技术高效获得融合细胞的方法
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作者 郭佳 厉雪纯 +4 位作者 方园 赵剑超 李妍 郭诗萌 刘忠华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期782-786,799共6页
试验以小鼠胚胎干细胞(mESC)作为细胞融合对象,用0.25%胰酶将mESC消化成单细胞,利用细胞凝集素构建一对一的单细胞对,在含有50%聚乙二醇的ES培养液中培养1 min,随后将细胞继续培养7 d,获得既表达红色荧光也表达绿色荧光的克隆即为融合... 试验以小鼠胚胎干细胞(mESC)作为细胞融合对象,用0.25%胰酶将mESC消化成单细胞,利用细胞凝集素构建一对一的单细胞对,在含有50%聚乙二醇的ES培养液中培养1 min,随后将细胞继续培养7 d,获得既表达红色荧光也表达绿色荧光的克隆即为融合成功。结果显示,单细胞融合法的克隆效率(46.25%)显著高于传统融合的效率(0.001 7%)。进一步检测融合细胞的生物学特性发现,虽然细胞形态与mESC具有很大的差异,但依然呈AP阳性,RNA水平上表达Oct4、Sox2和Nanog,具有向三胚层分化的能力等。结果表明,单细胞融合法是一种高效构建融合细胞的新途径。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 单细胞融合法 细胞融合效率
异补骨脂甲素调控miR-124对小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的影响
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作者 王贝 袁晨燕 姚瑞芹 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1110-1116,共7页
目的探讨异补骨脂甲素(isobavachin,IBA)调控微小RNA-124(miR-124)对小鼠J1胚胎干细胞向神经细胞分化的影响。方法采用qRT-PCR和免疫荧光染色分别检测IBA干预或抑制miR-124表达的J1细胞中miR-124、八聚体转录因子4(octamer transcriptio... 目的探讨异补骨脂甲素(isobavachin,IBA)调控微小RNA-124(miR-124)对小鼠J1胚胎干细胞向神经细胞分化的影响。方法采用qRT-PCR和免疫荧光染色分别检测IBA干预或抑制miR-124表达的J1细胞中miR-124、八聚体转录因子4(octamer transcription factor-4,OCT4)和神经微丝H(neurofilament-H, NFH)的表达。使用Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-124和锌指蛋白18(zinc finger and BTB domain containing 18, ZBTB18)的靶向关系。在J1细胞中转染pcDNA-ZBTB18或miR-124 mimics、ZBTB18 shRNA,免疫荧光染色检测细胞中OCT4和NFH的表达。结果 IBA可显著抑制J1细胞中OCT4蛋白表达,并上调miR-124和NFH表达;而抑制miR-124表达后所得结果相反。miR-124可靶向调控ZBTB18蛋白表达。在J1细胞中过表达ZBTB18,OCT4阳性表达率升高而NFH阳性表达率降低;敲减ZBTB18可在一定程度上减弱miR-124对IBA干预J1细胞OCT4和NFH表达的促进或抑制作用。结论 IBA能够促进J1细胞中miR-124表达,而miR-124可靶向调控ZBTB18,从而调节OCT4和NFH蛋白表达,这可能是IBA促进小鼠胚胎干细胞分化为神经细胞的作用机制。 展开更多
关键词 异补骨脂甲素 微小RNA-124 锌指蛋白18 小鼠胚胎干细胞 神经细胞 细胞分化
PHC1基因敲降对小鼠胚胎干细胞多能干性的影响 预览
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作者 文欢 曾建平 《中南医学科学杂志》 CAS 2019年第2期125-129,共5页
探讨多梳家族蛋白PHC1敲降后对小鼠胚胎干细胞(mESCs)多能干性的影响,并探索其与多能干性基因nanog的转录调控机制。对mESCs细胞系进行PHC1蛋白沉默处理并设置阴性对照组(control组)和空白对照组(Empty vector组),采用qRT-PCR、Western ... 探讨多梳家族蛋白PHC1敲降后对小鼠胚胎干细胞(mESCs)多能干性的影响,并探索其与多能干性基因nanog的转录调控机制。对mESCs细胞系进行PHC1蛋白沉默处理并设置阴性对照组(control组)和空白对照组(Empty vector组),采用qRT-PCR、Western blot、免疫荧光染色检测PHC1的表达量;荧光素酶报告基因技术(Luciferase Reporter)检测PHC1与nanog reporter之间的转录活性。结果提示:实验组mESCs呈现分化状态,多能干性基因nanog、oct4、sox2的表达下调,且nanog下调最显著;荧光素酶报告基因结果提示PHC1和nanog可能会形成复合物参与nanog的转录调控( P <0.05)。实验表明,敲降PHC1基因后可能通过影响nanog转录调控,从而参与核心转录调控“铁三角”(nanog、oct4、sox2)之间的相互转录调控机制,导致mESCs出现分化,进而参与mESCs多能干性的维持。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 PHC1基因 转录调控 多能干性
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Notch信号通路对VEGF促小鼠胚胎干细胞分化成为造血干/祖细胞的作用
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作者 宋波 陈日玲 廖凤玲 《中国实验血液学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期1780-1784,共5页
目的:探讨Notch信号通路对小鼠胚胎干细胞(ESC)分化为造血干细胞/祖细胞(HSC/HPC)的影响。方法:小鼠胚胎干细胞体外增殖形成拟胚体;拟胚体体外诱导分化,分为EB组、实验对照组、VEGF、DAPT组、VEGF-DAPT组。流式细胞术检测HSC/HPC表型CD1... 目的:探讨Notch信号通路对小鼠胚胎干细胞(ESC)分化为造血干细胞/祖细胞(HSC/HPC)的影响。方法:小鼠胚胎干细胞体外增殖形成拟胚体;拟胚体体外诱导分化,分为EB组、实验对照组、VEGF、DAPT组、VEGF-DAPT组。流式细胞术检测HSC/HPC表型CD117^+CD34^+Sca1^+; RT-PCR检测相关基因表达。结果:VEGF组诱导形成的HSC/HPC数目较对照组及EB组明显增多(P<0.05),提示VEGF促进ESC分化为HSC/HPC;DAPT组诱导分化的HSC/HPC数目较对照组及EB组增多(P<0.05),提示Notch信号通路阻断剂DAPT促进ESC分化为HSC/HPC;VEGF-DAPT组HSC/HPC较VEGF组HSC/HPC和DAPT组增多(P<0.05),提示DAPT、VEGF对促进ESC分化为HSC/HPC有协同作用。结论:Notch信号通路在VEGF促ESC分化为HSC/HP中起抑制作用。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 NOTCH信号通路 造血干细胞 VEGF DAPT
逆转录病毒载体介导的蜘蛛拖丝蛋白转基因小鼠的制备
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作者 杜文敬 梁洋 +2 位作者 朴善花 王春生 安铁洙 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第17期10-12,230共4页
为了建立通过转基因动物获得蜘蛛拖丝蛋白的方法,试验利用前期构建的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)逆转录病毒载体侵染小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),通过嵌合体法制备转基因小鼠,并用PCR技术进行鉴定。结果表明:成功获得嵌合体... 为了建立通过转基因动物获得蜘蛛拖丝蛋白的方法,试验利用前期构建的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)逆转录病毒载体侵染小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),通过嵌合体法制备转基因小鼠,并用PCR技术进行鉴定。结果表明:成功获得嵌合体小鼠;目的基因2S-IRES-EGFP已整合入F0代及F1代嵌合体小鼠的鼠尾基因组中。说明利用逆转录病毒可成功获得表达蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)的转基因小鼠。 展开更多
关键词 蜘蛛拖丝蛋白基因 逆转录病毒载体 小鼠胚胎干细胞 嵌合体 转基因 显微注射
利用CRISPR/Cas9系统在小鼠胚胎干细胞中进行miR-22的功能研究 预览
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作者 张雪 陈亮亮 +2 位作者 戴红霞 张文胜 任文燕 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2018年第5期71-79,共9页
旨在构造neomycin筛选标记的sgRNA表达载体,并利用CRISPR/Cas9技术构建miR-22缺失的小鼠胚胎干细胞,探究miR-22在小鼠胚胎干细胞中的调控作用。首先通过点突变、搭桥PCR等手段,构造neomycin筛选标记的sgRNA表达载体,并获得靶向敲除miR-2... 旨在构造neomycin筛选标记的sgRNA表达载体,并利用CRISPR/Cas9技术构建miR-22缺失的小鼠胚胎干细胞,探究miR-22在小鼠胚胎干细胞中的调控作用。首先通过点突变、搭桥PCR等手段,构造neomycin筛选标记的sgRNA表达载体,并获得靶向敲除miR-22的sgRNA表达载体,电转至稳转Cas9的小鼠胚胎干细胞中;其次经药物筛选、基因型鉴定等步骤筛选miR-22纯合缺失的小鼠胚胎干细胞。RT-qPCR手段证实miR-22在小鼠胚胎干细胞中被成功敲除,纯合突变体的比例约为6.67%。此外,miR-22缺失并未影响胚胎干细胞的细胞形态以及Oct4、Sox2和Nanog等干性基因的表达。因此,miR-22对小鼠胚胎干细胞的干性维持并非必需,而对胚胎干细胞谱系分化和命运决定的影响还有待进一步研究。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 CRISPR/Cas9 miR-22
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邻苯二甲酸单乙基己基酯对小鼠胚胎干细胞多能性相关转录因子表达的影响
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作者 李玉秋 马林 +3 位作者 王天昱 李鑫 张康 马明月 《环境与职业医学》 CSCD 北大核心 2018年第3期228-233,共6页
[目的] 研究邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对小鼠胚胎干细胞多能性维持能力的影响。[方法] 不同浓度的MEHP(0、0.1、1、10、100、1 000 μmol/L)处理小鼠胚胎干细胞(mESCs)4 d,观察细胞形态,采用流式细胞术检测细胞凋亡指标;... [目的] 研究邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对小鼠胚胎干细胞多能性维持能力的影响。[方法] 不同浓度的MEHP(0、0.1、1、10、100、1 000 μmol/L)处理小鼠胚胎干细胞(mESCs)4 d,观察细胞形态,采用流式细胞术检测细胞凋亡指标;应用碱性磷酸酶染色法、real-time PCR及Western blot分别检测其分化情况、胚胎干细胞多能性相关转录因子SOX2、OCT4基因及其蛋白表达水平。[结果] 随着MEHP染毒浓度的增加,mESCs克隆的细胞团逐渐缩小,且数量也出现减少,以1 000 μmol/L组尤为明显;细胞凋亡检测结果发现,随着染毒浓度增加,凋亡率呈增加趋势,与对照组相比,仅1 000 μmol/L组mESCs总细胞凋亡率[(9.58±2.02)%]的升高有统计学意义(P 〈 0.05)。碱性磷酸酶染色结果显示,1 000 μmol/L组mESCs着色较浅,甚至未着色,即出现分化倾向,而其他组mESCs均被染成深蓝色或蓝紫色。与对照组相比,100、1 000 μmol/L组中SOX2、OCT4基因表达降低(均P 〈 0.05);1 000μmol/L组SOX2、OCT4蛋白表达降低(均P 〈 0.05)。[结论] 一定浓度MEHP对mESCs存在细胞毒性,抑制mESCs正常生长,降低mESCs中多能性相关转录因子SOX2、OCT4的表达,进而影响胚胎早期发育。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 邻苯二甲酸单乙基己基酯 细胞毒性 转录因子 SOX2 OCT4
miR-290 contributes to the low abundance of cyclin D1 protein in mouse embryonic stem cells
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作者 Zizhen Gong Detao Wang +4 位作者 Shaoliang Zhu Yuqing Xia Chunsun Fan Botao Zhao Youxin Jin 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第7期635-642,共8页
老鼠 miR-290 簇 miRNAs 在早胚胎和胚胎的细菌房间明确地被表示。这些 miRNAs 戏在 pluripotency 和自强的维护的关键角色。这里,我们证明 Cyclin D1 是 miR-290 簇 miRNAs 的直接目标基因。在在 pluripotent 和 non-pluripotent 房... 老鼠 miR-290 簇 miRNAs 在早胚胎和胚胎的细菌房间明确地被表示。这些 miRNAs 戏在 pluripotency 和自强的维护的关键角色。这里,我们证明 Cyclin D1 是 miR-290 簇 miRNAs 的直接目标基因。在在 pluripotent 和 non-pluripotent 房间,以及在区分 CGR8 房间的 Cyclin D1 蛋白质和 miR-290 簇 miRNAs 的表示之间的否定关系被观察。miR-290 簇 miRNAs 的抑制能在 G1 阶段逮捕房间并且在 CGR8 老鼠干细胞减慢房间增长。因为 miR-290 簇 miRNAs 是最主导的 stem-cell-specific miRNAs,我们的结果在老鼠为 Cyclin D1 的缺席揭示了一个重要原因胚胎的干细胞。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 细胞周期素 D1蛋白 细胞周期蛋白D1 miRNAs 低丰度 胚胎生殖细胞 多能干细胞
2-脱氧-D-葡萄糖逆转七氟醚引起胚胎干细胞自我更新能力下降的机制研究 预览
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作者 吴晓炀 严佳 +1 位作者 张磊 姜虹 《临床和实验医学杂志》 2017年第21期2088-2091,共4页
目的探讨2-脱氧-D-葡萄糖在逆转七氟醚引起胚胎干细胞自我更新能力下降的机制。方法采用鼠胚胎干细胞(m ESCs)作为研究七氟醚对孕早期胚胎毒性的模型,随机分成4组:对照组(暴露于5%CO2及21%O2的环境中)、七氟醚组(4.1%七氟醚的密... 目的探讨2-脱氧-D-葡萄糖在逆转七氟醚引起胚胎干细胞自我更新能力下降的机制。方法采用鼠胚胎干细胞(m ESCs)作为研究七氟醚对孕早期胚胎毒性的模型,随机分成4组:对照组(暴露于5%CO2及21%O2的环境中)、七氟醚组(4.1%七氟醚的密封塑料盒中处理6 h)、2-DG组(10 mmol/L 2-DG处理6 h)、2-DG+七氟醚组(4.1%七氟醚+10 mmol/L 2-DG处理6 h)。各组干预6 h后,通过从形态学观测细胞宏观改变,荧光测定细胞内活性氧自由基(ROS)水平,qRT-PCR检测干性基因的mRNA表达情况和免疫萤光染色直接观察干性基因的水平四个方面比较七氟醚组与对照组在ROS水平和自我更新能力方面的差异。结果与对照组相比,七氟醚组细胞呈现高ROS水平,干性基因及其表达也有显著降低(P〈0.05);对照组和2-DG组上述指标则无显著差异(P〉0.05);2-DG+七氟醚组较七氟醚组ROS水平低,干性基因及其表达显著升高(P〈0.05)。结论七氟醚通过诱导细胞内ROS产生从而导致了mESCs的自我更新能力的下降。2-DG缓解其引起的高水平ROS从而逆转其对胚胎干细胞自我更新能力的抑制。 展开更多
关键词 七氟醚 胚胎干细胞 自我更新能力 活性氧自由基 2-脱氧-D-葡萄糖
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诱导多能干细胞培养中饲养层制备的条件优化
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作者 王孟丽 刘俊晓 《中国优生与遗传杂志》 2017年第5期69-70,90共3页
目的建立分离培养小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast MEF)的体系,探讨诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)培养所需饲养层的最佳制备方法,制备高质量的IPSC饲养层细胞。方法采用胰蛋白酶消化法,将昆... 目的建立分离培养小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast MEF)的体系,探讨诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)培养所需饲养层的最佳制备方法,制备高质量的IPSC饲养层细胞。方法采用胰蛋白酶消化法,将昆明小鼠胚胎制成细胞悬液接种培养。用不同浓度的丝裂霉素C处理MEF细胞制备饲养层,观察处理后的细胞活力及有无再增殖现象,在制备的饲养层细胞上接种IPS细胞,观察各组IPS细胞生长状态。结果采用0.0625%胰蛋白酶消化孕12.5-14.5d雌鼠胚胎组织获得高活力的MEF细胞,用15μg/ml的丝裂霉素C处理后MEF细胞无明显增值,细胞活力在90%以上,其IPS细胞生长状况最好,效果最佳。结论该方法可获得高活力的MEF细胞。15μg/ml的丝裂霉素C处理1.5h后的MEF细胞制成的饲养层最适于IPS细胞生长。 展开更多
关键词 小鼠胚胎成纤维细胞 诱导多能干细胞 饲养层 丝裂霉素C
Role of circadian gene Clock during differentiation of mouse pluripotent stem cells
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作者 Chao Lu Yang Yang +5 位作者 Ran Zhao Bingxuan Hua Chen Xu Zuoqin Yan Ning sun Ruizhe Qian 《蛋白质与细胞:英文版》 SCIE CAS CSCD 2016年第11期820-832,共13页
生理节奏的钟控制的生物节奏在胚胎的干细胞(转换字符) 是不在的。然而,他们开始在 pluripotent 转换字符的区别期间发展到下游的房间。相反地,当他们是进导致的 pluripotent 干细胞(iPSCs ) 的 reprogrammed 时,在成年体的房间的生... 生理节奏的钟控制的生物节奏在胚胎的干细胞(转换字符) 是不在的。然而,他们开始在 pluripotent 转换字符的区别期间发展到下游的房间。相反地,当他们是进导致的 pluripotent 干细胞(iPSCs ) 的 reprogrammed 时,在成年体的房间的生物节奏消失。这些研究显示在转换字符的生物节奏的发展可能仔细与转换字符的维护和区别被联系。核心生理节奏的基因钟为生物节奏的规定是必要的。它在转换字符的生物节奏的发展的角色完全是未知的。这里,我们使用了 CRISPR/CAS9-mediated 基因编辑技术,完全在鼠标转换字符击倒钟表达式。由染色的 AP, teratoma 形成,量的即时 PCR 和 Immunofluorescent,我们没在 pluripotent 状态下面在形态学和 pluripotent 能力发现钟猛烈 mESCs 和野类型 mESCs 之间的任何差别。简言之,这些数据显示钟没影响维持 pluripotent 状态。然而,他们展出了减少的增长并且增加了 apoptosis。而且,生物节奏没能在自发的区别以后在钟猛烈 mESCs 发展,它显示在以前在老鼠模型描述了的很外部的纸巾没有赔偿因素(DeBruyne 等, 2007b ) 。在自发的区别以后,钟蛋白质的损失由于钟基因 silencing 导致了 mESCs 的自发的区别,显示来自 pluripotent 状态,或它的区分的能力的一个出口。我们的调查结果显示生理节奏的基因钟可以是的核心在由调整 mESCs 增长, apoptosis 和活动的正常 mESCs 区别期间必要。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 多能干细胞 分化过程 基因敲除 昼夜节律 生物节律 实时定量PCR 免疫荧光染色
高浓度青-链霉素诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化
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作者 宋海涛 陈静 +3 位作者 孙立辉 凌秋平 贾阿娜 张洪亮 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2016年第5期1824-1827,共4页
目的研究青-链霉素(双抗)对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)向心肌细胞分化的影响。方法采用常规悬滴法培养mESC形成拟胚体(embryonic body,EB),在分化培养基中加入不同浓度的双抗(1.0%、5.0%和10.0%)培养贴... 目的研究青-链霉素(双抗)对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)向心肌细胞分化的影响。方法采用常规悬滴法培养mESC形成拟胚体(embryonic body,EB),在分化培养基中加入不同浓度的双抗(1.0%、5.0%和10.0%)培养贴壁的EB,选择不同的时间点分化的细胞通过流式细胞术(FCM)、细胞免疫荧光、westem blotting等分析心肌特异性蛋白表达水平的差异。结果小鼠多能干细胞表面标志物SSEA-1表达呈阳性(绿色),H.E染色显示核质比〉〉1。正常自分化细胞免疫荧光显示cTnT、‘MLC2阳性(绿色),肌节清晰可见。高浓度双抗组,cTnT+阳性细胞率高于对照组和低浓度(1.0%)双抗组,western blotting显示其心肌特异性蛋白cTnT、cTnI、MLC2、connexin43等表达增加(p〈0.05)。结论高浓度双抗促进mESCs向心肌细胞分化,且有浓度依赖性。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 青-链霉素 心肌细胞 分化
葛根素对小鼠胚胎干细胞源心肌细胞超微结构的影响
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作者 王璐 《湖北医药学院学报》 CAS 2016年第5期465-468,共4页
目的:探讨葛根素对小鼠胚胎干细胞源心肌细胞肌节及线粒体结构发育的影响。方法:采用悬滴-悬浮-贴壁三步法诱导转基因D3系小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化,在分化过程中持续使用葛根素(100μmol/L)处理;在分化的中期(第16天)和晚期... 目的:探讨葛根素对小鼠胚胎干细胞源心肌细胞肌节及线粒体结构发育的影响。方法:采用悬滴-悬浮-贴壁三步法诱导转基因D3系小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化,在分化过程中持续使用葛根素(100μmol/L)处理;在分化的中期(第16天)和晚期(第20天)将拟胚体的跳动区域切下后制成超薄切片,应用电镜观察其超微结构,并测量肌节的长度。结果:⑴在分化第16天和第20天,葛根素组心肌细胞肌原纤维发育较对照组成熟;⑵分化第16天,葛根素组心肌细胞肌节长度为(1.67±0.02)μm,(n=9),明显长于对照组(1.44±0.15)μm,(n=4,P〈0.05)。分化第20天,葛根素组心肌细胞肌节长度(1.88±0.04)μm,(n=6),高于对照组(1.78±0.04)μm,(n=5);⑶与对照组相比,葛根素组心肌细胞线粒体体积较大,嵴较密集。结论:葛根素能促进小鼠胚胎干细胞源心肌细胞肌节结构成熟和线粒体的发育。 展开更多
关键词 葛根素 小鼠胚胎干细胞 心肌细胞 超微结构
小分子化合物XAV939诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究
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作者 许士俊 穆军升 +1 位作者 张健群 伯平 《中国胸心血管外科临床杂志》 CAS CSCD 2016年第7期714-718,共5页
目的 探讨采用小分子化合物XAV939对体外培养小鼠胚胎干细胞(mESC)诱导分化为心肌细胞的可行性。方法 复苏、培养未分化的胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)在小鼠胚胎成纤维细胞制作的滋养层上长至汇合,胰蛋白酶消化后经悬滴法... 目的 探讨采用小分子化合物XAV939对体外培养小鼠胚胎干细胞(mESC)诱导分化为心肌细胞的可行性。方法 复苏、培养未分化的胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)在小鼠胚胎成纤维细胞制作的滋养层上长至汇合,胰蛋白酶消化后经悬滴法形成拟胚体(EBs),拟胚体贴壁后用XAV939诱导分化为心肌细胞。通过光镜观察并记录跳动的心肌细胞,采用免疫荧光技术鉴定心肌细胞。结果 XAV939能有效地诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞的分化,诱导平均效率为71.85%±1.05%;分化的心肌细胞自发而有节律地收缩,心肌细胞特异性标志物心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达呈阳性。结论 小分子化合物XAV939能有效地诱导小鼠胚胎干细胞在体外分化为心肌细胞。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 心肌细胞 XAV939 细胞分化
TNNI3K基因过表达诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化 被引量:1
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作者 王银 徐瑞霞 +3 位作者 马春艳 姚雨宏 叶珏 李建军 《中国动脉硬化杂志》 CAS 北大核心 2016年第4期325-333,共9页
目的研究肌钙蛋白Ⅰ相关激酶(TNNI3K)对小鼠胚胎干细胞(m ESC)向心肌细胞分化的影响。方法从形态和细胞免疫荧光、碱性磷酸酶试验以及HE染色鉴定m ESC的多能性。采用悬滴法培养m ESC形成拟胚体(EB),自分化为跳动的心肌细胞,通过... 目的研究肌钙蛋白Ⅰ相关激酶(TNNI3K)对小鼠胚胎干细胞(m ESC)向心肌细胞分化的影响。方法从形态和细胞免疫荧光、碱性磷酸酶试验以及HE染色鉴定m ESC的多能性。采用悬滴法培养m ESC形成拟胚体(EB),自分化为跳动的心肌细胞,通过细胞免疫荧光和透射电镜(TEM)方法鉴定。慢病毒分别携带h TNNI3K基因和siRNA感染m ESC,并分别自分化为心肌细胞,通过流式细胞术(FCM)、细胞免疫荧光、Western blot等分析心肌特异性蛋白表达水平的差异。结果 m ESC表面蛋白分子SSEA-1和Oct-4表达呈阳性(绿色),ALP试验呈蓝紫色,核质比〉〉1。正常自分化的细胞免疫荧光显示cTnⅠ、cTnT、MLC2以及α-actinin阳性(绿色),肌节清晰可见。TEM显示心肌细胞独有的肌纤维亚细胞结构。过表达组cTnT+阳性细胞率高于对照组,Western blot显示心肌特异性蛋白cTnT、cTnⅠ、MLC2、α-actinin等显著高于对照组,且细胞免疫荧光结果显示MHC6蛋白提前表达。干扰组不仅cTnT+阳性细胞率显著低于对照组,而且心肌特异蛋白也显著低于对照组,MHC6蛋白表达延后。结论TNNI3K基因能增强心肌细胞的生成,促进m ESC向心肌细胞的分化。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 肌钙蛋白Ⅰ相关激酶 心肌细胞
左归丸、右归丸复方及相关成分对小鼠胚胎干细胞1B10向生殖细胞方向分化的影响 被引量:3
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作者 姚奏英 万谦 +1 位作者 陆华 刘霞 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期495-500,共6页
目的:探索左归丸、右归丸及其相关成分对干细胞向生殖细胞分化的影响。方法:制备左归丸、右归丸、左归丸和右归丸共有成分的大鼠含药血清,以此作为实验药物;以小鼠胚胎干细胞1810(MESC.1810)为干细胞代表;然后以上述大鼠含药血... 目的:探索左归丸、右归丸及其相关成分对干细胞向生殖细胞分化的影响。方法:制备左归丸、右归丸、左归丸和右归丸共有成分的大鼠含药血清,以此作为实验药物;以小鼠胚胎干细胞1810(MESC.1810)为干细胞代表;然后以上述大鼠含药血清干预MESC-1BIO,干预过程中进行显微照像追踪,干预72h后,提取相关被干预细胞的RNA,立即合成cDNA,最后利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测各干预细胞的10种与生殖分化相关基因的表达模式。结果:左归丸大鼠含药血清(ZGW—Rs)显著上调了Oct-4和SCP3,显著下调了GDF-9和Stra8;右归丸大鼠含药血清(YGW—RS)显著上调了Oct-4,GDF-9,Mvh和SCP3,显著下调了Stra8,Itga6和Itgbl;左归丸和右归丸共有成分的大鼠含药血清(ZGWYGW—RS)显著上调了Oct-4,SCP3和ZP3,显著下调了GDF-9,Stra8,Itga6和Itgbl。结论:ZGW—RS能启动MESC-1810向减数分裂方向变化,但是尚不足以推动1BIO向生殖细胞分化;YGW.RS能启动MESC-1BIO向减数分裂方向变化,同时推动1BIO向雌性生殖细胞分化;ZGWYGW—RS能启动MESC-1810向减数分裂方向变化,同时能轻微推动MESC-1810向雌性生殖细胞分化,但是作用弱于YGW—RS。实验结果-方面增强了对左归丸和右归丸及其相关成分影响干细胞生殖分化的认识,另-方面有助于解释左归丸和右归丸治疗不孕不育症的机制。 展开更多
关键词 左归丸 右归丸 大鼠含药血清 小鼠胚胎干细胞 减数分裂 生殖分化相关基因
Somatostatin receptor type 2 contributes to the self-renewal of murine embryonic stem cells
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作者 Xin-xiu XU Li-hong ZHANG Xin XIE 《中国药理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2014年第8期1023-1030,共8页
关键词 生长抑素受体 小鼠胚胎干细胞 自我更新 RT-PCR检测 2型 G-蛋白偶联受体 免疫荧光染色法 白血病抑制因子
稳定过表达Olig2的小鼠胚胎干细胞系的建立
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作者 王贝 罗梦娇 +5 位作者 郭瑞 董富兴 陈彦 王会平 曲学彬 姚瑞芹 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期425-430,共6页
目的:建立稳定过表达Olig2的小鼠胚胎干细胞(mESCs)系。方法:从含有Olig2的质粒中利用PCR技术克隆Olig2基因编码序列,酶切连接入GV218载体,形成Olig2-GV218重组载体。将构建好的Olig2-GV218载体与两种病毒辅助包装原件载体质粒共... 目的:建立稳定过表达Olig2的小鼠胚胎干细胞(mESCs)系。方法:从含有Olig2的质粒中利用PCR技术克隆Olig2基因编码序列,酶切连接入GV218载体,形成Olig2-GV218重组载体。将构建好的Olig2-GV218载体与两种病毒辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,制备并浓缩慢病毒颗粒,侵染mESCs,嘌呤霉素筛选的阳性克隆传代培养10代后鉴定细胞内Olig2的表达。结果:PCR扩增得到含Olig2基因编码序列的特异性条带。重组的0lis2-GV218载体中Olig2编码序列与目标序列几乎一致。携带有0lis2-GV218载体的慢病毒能够正常感染mESCs,表达Olig2-GFP融合蛋白,并稳定遗传。结论:成功建立了稳定过表达Olig2的小鼠胚胎干细胞系。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 OLIG2 过表达
小鼠胚胎干细胞钙敏感受体的表达和其对细胞增殖的影响 预览 被引量:4
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作者 孙健 于金凤 +6 位作者 栾海荣 李爽 许晓义 何志鹏 魏韬 李丽 徐长庆 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期651-657,共7页
目的:观察钙敏感受体(calcium.sensingreceptor,CaSR)在小鼠胚胎干细胞(mouseembryonicstemceils,mESCs)的功能性表达。方法:(1)采用Westernblotting技术及免疫荧光染色分析CaSR蛋白在129小鼠Es.D3细胞系的表达;采用激光... 目的:观察钙敏感受体(calcium.sensingreceptor,CaSR)在小鼠胚胎干细胞(mouseembryonicstemceils,mESCs)的功能性表达。方法:(1)采用Westernblotting技术及免疫荧光染色分析CaSR蛋白在129小鼠Es.D3细胞系的表达;采用激光共聚焦扫描技术检测不同处理因素(包括G蛋白.PLC.IP3通路)对细胞内钙离子浓度([Ca2+];)的影响;应用MTr法和流式细胞术分析CaSR活化对mESCs增殖的影响。结果:CaSR蛋白在mESCs有表达;增加细胞外钙或者给予CaSR激动剂新霉素均可引起[Ca2+];和CaSR表达增加;CaSR活化可增加mESCs的存活率和磷酸化ERK2蛋白的表达。NPS2390(CaSR抑制剂)则能减弱这种作用。结论:CaSR在mESCs有表达;CaSR的活化参与了mESCs的增殖。 展开更多
关键词 钙敏感受体 小鼠胚胎干细胞 细胞增殖
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