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猪粪便中戊肝病毒实时荧光RT-PCR定性检测方法的建立及其分子流行病学特征
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作者 李延霞 江涛 +5 位作者 李凤琴 彭子欣 王佳慧 李楠 张宏元 张立实 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期545-551,559共8页
目的建立以TaqMan探针为基础的戊肝病毒(HEV)实时荧光RT-PCR检测方法和构建系统发育树,对戊肝病毒进行基因分型,检测中国部分省市猪场的猪粪便样本HEV污染水平。方法参照GenBank HEV基因型序列,针对HEV保守区设计引物和探针,优化反应体... 目的建立以TaqMan探针为基础的戊肝病毒(HEV)实时荧光RT-PCR检测方法和构建系统发育树,对戊肝病毒进行基因分型,检测中国部分省市猪场的猪粪便样本HEV污染水平。方法参照GenBank HEV基因型序列,针对HEV保守区设计引物和探针,优化反应体系,建立实时荧光RT-PCR和巢式RT-PCR检测体系。结果建立的HEV实时荧光RT-PCR检测方法的灵敏度为19.9拷贝/μL,扩增效率92.9%~109.1%,与札如病毒(Sa)、诺如病毒(Nov)、甲肝病毒(HAV)均不发生交叉反应。荧光RT-PCR检测猪粪便样本342份,其中HEV阳性样本210份,阳性率61.4%,育肥前阳性率56.6%,育肥后阳性率66.9%,育肥前后样本阳性率差异具有统计学意义(χ~2=24.8,P<0.05);经基因分型鉴定体系测定阳性毒株基因型均为HEV-4型,且存在4b、4d、4h三种基因亚型。结论中国部分省市猪场中HEV感染普遍,基因型均为HEV-4型,各省市猪场感染率和基因亚型存在差异。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 实时荧光RT-PCR 巢式RT-PCR 猪粪便
2015~2016年我国东北三省地区猪A、B、C群轮状病毒流行情况调查 预览
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作者 乔成鹏 翟军军 +4 位作者 邢宇昕 郜洪权 张鹏宇 王德海 孙东波 《黑龙江八一农垦大学学报》 2019年第2期33-39,共7页
为了解我国东北三省地区(黑龙江省、辽宁省、吉林省)规模化猪场新生仔猪的猪A群轮状病毒(GARV)、猪B群轮状病毒(GBRV)和猪C群轮状病毒(GCRV)的流行情况。利用巢式PCR方法对2015年1月至2016年10月从我国东北三省地区多个规模化猪场采集的... 为了解我国东北三省地区(黑龙江省、辽宁省、吉林省)规模化猪场新生仔猪的猪A群轮状病毒(GARV)、猪B群轮状病毒(GBRV)和猪C群轮状病毒(GCRV)的流行情况。利用巢式PCR方法对2015年1月至2016年10月从我国东北三省地区多个规模化猪场采集的108份仔猪腹泻病料和15份健康仔猪粪便样品进行分析。结果显示:黑龙江省GARV阳性率为47.4%,GBRV未检出,GCRV阳性率为5.3%;辽宁省GARV阳性率为51.5%,GBRV阳性率为3.03%,GCRV阳性率为6.1%;吉林省GARV的阳性率为21.1%,GBRV阳性率为7.1%,GCRV阳性率7.1%;并且存在GARV/GCRV混合感染的情况,因此,我国东北三省地区猪轮状病毒病的主要病原是GARV,但GBRV和GCRV也是幼龄猪群潜在的重要致病风险。为我国猪轮状病毒病的提前预防和综合防控提供流行病学参考数据。 展开更多
关键词 猪A群轮状病毒 猪B群轮状病毒 猪C群轮状病毒 巢式RT-PCR 流行病学调查
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2018年江西及福建省新现猪急性腹泻冠状病毒的分子流行病学调查 预览
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作者 张誉瀚 袁为锋 +4 位作者 张帆帆 李凯 李指全 宋德平 唐玉新 《养猪》 2019年第4期113-117,共5页
猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus,SADS-CoV)是2017年在我国广东首次发现的一种可导致新生仔猪急性水样腹泻及死亡的新型冠状病毒。为调查2018年江西及福建猪群中该病毒的感染情况,试验建立了一种SA... 猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus,SADS-CoV)是2017年在我国广东首次发现的一种可导致新生仔猪急性水样腹泻及死亡的新型冠状病毒。为调查2018年江西及福建猪群中该病毒的感染情况,试验建立了一种SADS-CoV套式RT-PCR检测方法,并调查2018年江西及福建腹泻猪只样本中SADS-CoV的流行情况。根据GenBank数据库中SADS-CoV GDS04毒株(登录号MF167434)的核衣壳蛋白(N)基因核酸序列,设计了两对特异性套式引物。以猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒等病毒的基因组为模板检测引物的特异性。通过优化反应条件建立了检测SADS-CoV的套式PCR方法,用建立的套式PCR方法对2018年从江西和福建两省8个猪场采集的492份腹泻样品进行检测。应用设计的两对套式引物扩增出了650 bp和291 bp两个特异性片段。试验建立的套式PCR检测方法特异性好,只能扩增SADS-CoV,其最低检测限度为102拷贝/μL。利用所建立的方法对来自江西和福建省的492份腹泻猪临床样品进行检测,从福建猪群样品中检出了2份SADS-CoV感染,未从江西临床样品中检出SADS-CoV。试验将为SADS-CoV的临床检测提供一种套式PCR检测方法,结果表明该病毒在福建猪群而未在江西腹泻猪群中流行,将对SADS-CoV的临床诊断等具有应用价值。 展开更多
关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 套式PCR 腹泻 分子流行病学
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江苏规模化奶牛场BVD与IBR流行病学调查 被引量:2
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作者 张信军 羊扬 +1 位作者 林航 朱国强 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期69-76,共8页
为了解江苏地区规模化奶牛场牛传染性鼻气管炎(IBR)及牛病毒性腹泻病(BVD)流行与分布情况,采用商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒时来自江苏省7个市和不同地区的13个大型规模化奶牛养殖场共540份血清中IBRV抗体进行检测,采... 为了解江苏地区规模化奶牛场牛传染性鼻气管炎(IBR)及牛病毒性腹泻病(BVD)流行与分布情况,采用商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒时来自江苏省7个市和不同地区的13个大型规模化奶牛养殖场共540份血清中IBRV抗体进行检测,采用商品化ELISA试剂盒对来自江苏省5个市和不同地区的11个大型规模化奶牛养殖场共460份血清中BVDV抗体进行检测,同时从中随机采集100份血清样本,采用巢式逆转录聚合酶链式反应(nRT-PCR)进行BVDV抗原检测与基因分型。结果表明:不同牛场的BHV-I抗体阳性率为0%~82.1%%,平均阳性率为21.1%(114/540);不同牛场的BVDV抗体阳性率为0%~98%,平均阳性率为51.5%(237/460);不同牛场的BVDV抗原阳性率为0%~100%,平均阳性率为55%(55/100);对相应样本的BVDV抗原与抗体检测结果进行比较表明,抗原+/抗体+牛占40%(40/100),抗原+/抗体+牛占15%(15/100),抗原-/抗体-牛占35%(35/i00),抗原-/抗体+牛占10%(10/100);基因分型结果显示,BVDV-Ⅰ型占11%(6/55),BVDV—Ⅱ型为78%(43/55),Ⅰ型与Ⅱ型混合感染占11%(6/55),未发现BVDV-Ⅲ型。研究表明,BVDV和BHV-Ⅰ在江苏省主要规模奶牛场普遍流行,但不同地区、不同牛场的阳性率存在明显差异,大部分牛场均能检测出抗原+/抗体-的持续感染牛,BVDV含基因Ⅰ、Ⅱ型,但主要以Ⅱ型感染为主。 展开更多
关键词 奶牛 牛病毒性腹泻病毒 牛传染性鼻气管炎病毒 ELISA nRTPCR 基因分型
小鼠诺如病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用
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作者 张旭亮 马畅 +3 位作者 刘捷 尤金炜 刘彪 恽时锋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期508-513,共6页
本研究旨在利用巢式RT-PCR技术,建立高效检测小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的方法。通过Gen Bank上公布的一系列小鼠诺如病毒的基因序列,设计内、外各一对特异性引物,通过优化PCR反应条件,建立巢式RT-PCR检测方法,并对临床样品... 本研究旨在利用巢式RT-PCR技术,建立高效检测小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的方法。通过Gen Bank上公布的一系列小鼠诺如病毒的基因序列,设计内、外各一对特异性引物,通过优化PCR反应条件,建立巢式RT-PCR检测方法,并对临床样品进行检测。结果显示,本研究建立的巢式PCR检测方法特异性好,最低检出量为1×102copies/L,高于使用参考引物RT-PCR的最低检出量1×105 copies/L,对临床样品检出率为73%,高于使用参考引物普通RT-PCR的检出率(60%),与RT-qPCR方法检出率一致。结果表明,本研究成功建立了一种检测小鼠诺如病毒的巢式RT-PCR方法,并能快速、高效地应用于临床样品的检测,为小鼠诺如病毒的诊断和检测提供了有力的手段。 展开更多
关键词 小鼠诺如病毒 巢式RT-PCR 敏感性
PEDV经典毒株与变异毒株套式RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 石坚 王飞 +3 位作者 苏丹萍 徐帅飞 罗天霞 贺东生 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第7期99-102,共4页
我国当前猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株与经典毒株相比,在S基因上存在多处变异,其中在58aa处有4个氨基酸QGVN的插入。为快速鉴别经典毒株与变异毒株,本试验根据Gen Bank中当前流行毒株S基因序列设计合成2对特异性扩增引物,在优化RT-... 我国当前猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株与经典毒株相比,在S基因上存在多处变异,其中在58aa处有4个氨基酸QGVN的插入。为快速鉴别经典毒株与变异毒株,本试验根据Gen Bank中当前流行毒株S基因序列设计合成2对特异性扩增引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立一套区分PEDV变异毒株与经典毒株的套式RT-PCR检测方法,并完成特异性、敏感性试验及对临床送检样品检测试验。结果表明:该套式PCR检测方法可以分别鉴定PEDV经典毒株和变异毒株,PEDV经典毒株仅在PCR外套产物有749 bp的条带,内套产物没有条带;而PEDV变异毒株在PCR外套产物中有760 bp的条带,而在内套产物中出现510 bp的条带。该检测方法特异性强、灵敏度高、操作简单,为猪流行性腹泻的快速诊断提供了一种较为方便的技术手段。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 套式RT-PCR 检测
陕西杨凌某蛋鸡场禽戊型肝炎病毒的检测 预览
7
作者 拓晓玲 刘宝元 +3 位作者 陈宜阳 孙亚妮 赵钦 周恩民 《动物医学进展》 北大核心 2017年第7期120-123,共4页
2014年-2015年陕西杨凌地区部分商品蛋鸡场产蛋量下降了10%~40%,剖检部分鸡只发现肝脏肿大出血。为确诊该疫情的病因,从发病的6个蛋鸡场采集了337份血清和268份粪便,利用间接ELISA和套式RT—PCR分别对血清中的禽戊型肝炎病毒(HE... 2014年-2015年陕西杨凌地区部分商品蛋鸡场产蛋量下降了10%~40%,剖检部分鸡只发现肝脏肿大出血。为确诊该疫情的病因,从发病的6个蛋鸡场采集了337份血清和268份粪便,利用间接ELISA和套式RT—PCR分别对血清中的禽戊型肝炎病毒(HEV)抗体和粪便中的禽HEVRNA进行了实验室检测。ELISA检测结果发现,168份血清为禽HEV抗体阳性,阳性率为49.85%;套式RT—PCR检测结果发现,63份粪便为禽HEVRNA基因片段阳性,阳性率为23.51%。基因片段的序列同源性分析发现,杨凌地区的禽HEV分离株与国内的同源性为93.0%~99.2%;进化树分析表明,其与国内其他地区的分离株在同一进化分支上,同属禽HEV基因3型。 展开更多
关键词 禽戊型肝炎病毒 酶联免疫吸附试验 套式RTPCR 序列分析
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2014—2015年武汉地区儿童乙型流感病毒检测分析 预览 被引量:1
8
作者 蓝文华 向赟 +5 位作者 艾洪武 宋德贵 吴建国 熊鹰 刘艳 刘映乐 《广西师范大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2016年第4期143-150,共8页
采用微量细胞板培养法分离流感病毒,RT-PCR、巢式PCR鉴定INFB及其HA1基因,运用Clustax、Mega 6.0、Megalign软件分析HA1核苷酸序列及氨基酸序列。结果:2014年4月—2015年3月共收集到发热呼吸道样本1 002株,分离到47株INFB阳性,分离出I... 采用微量细胞板培养法分离流感病毒,RT-PCR、巢式PCR鉴定INFB及其HA1基因,运用Clustax、Mega 6.0、Megalign软件分析HA1核苷酸序列及氨基酸序列。结果:2014年4月—2015年3月共收集到发热呼吸道样本1 002株,分离到47株INFB阳性,分离出INFB阳性高峰出现在2014年8月和2015年1月,13-24个月儿童INFB阳性率最高,0-6个月儿童阳性率最低。INFB患儿与患儿的性别及科室来源无显著关系,87.23%INFB患儿出现了发热、咳嗽症状。HA1片段分析结果表明,检测到的INFB属于Victoria系,与参考株B/Brisbane/60/2008核苷酸同源性在86.1%-88.0%,与B/HubeiJingzhouSongzi/1302/2010核苷酸同源性在86.1%-89.5%。3个氨基酸位点发生转换。结论:武汉地区儿童感染的INFB属于Victoria系,与北半球国际疫苗株B/Brisbane/60/2008、B/Texas/AF2741/2010以及湖北省INFB代表毒株B/Hubei JingzhouSongzi/1302/2010具有较高的亲缘关系,未发现新变种。 展开更多
关键词 INFB RT-PCR 巢式PCR HA1基因
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猪诺如病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用 预览 被引量:1
9
作者 陈燕君 唐玉新 +8 位作者 周信荣 宋德平 黄瑫 彭棋 李安琪 张帆帆 张田生 叶昱 吴琼 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期338-346,共9页
为了解中国猪群中猪诺如病毒感染情况,本研究根据猪诺如病毒保守的RNA依赖性RNA多聚酶(RNA Dependent RNA Polymerase,RDRP)基因序列设计了一套巢式RT-PCR引物,用该引物从猪粪便样品中扩增出与预期目的产物大小一致的条带,经克隆、测... 为了解中国猪群中猪诺如病毒感染情况,本研究根据猪诺如病毒保守的RNA依赖性RNA多聚酶(RNA Dependent RNA Polymerase,RDRP)基因序列设计了一套巢式RT-PCR引物,用该引物从猪粪便样品中扩增出与预期目的产物大小一致的条带,经克隆、测序后获得的序列与GenB ank数据库序列比对,证明所扩增的序列属于猪诺如病毒,表明本研究成功建立了猪诺如病毒巢式RT-PCR检测方法。该检测方法具有高特异性和敏感性,应用该方法检测某猪场健康育肥猪粪便样品,阳性率为54.5%。通过RDRP基因进行核苷酸同源比对发现本文获得的猪诺如病毒Wuning 1株属于GII群诺如病毒,与美国猪诺如病毒毒株OH-QW101/03/US、中国猪诺如病毒毒株Norovirus pig/GII/Ch6/China/2009核苷酸序列同源性最近。值得注意的是猪诺如病毒Wuning1毒株与武汉人诺如病毒毒株E2120/CHN/2010核苷酸同源性高达77.1%,说明猪诺如病毒Wuning 1毒株与武汉人诺如病毒基因组上亲缘性较近。本研究成功建立了一种检测猪诺如病毒的巢式RT-PCR方法,并应用于临床猪粪便样品的检测,为猪诺如病毒的诊断与监测提供了可供借鉴的方法、为猪诺如病毒的进化、分子病毒学及与人诺如病毒关系的深入研究提供依据。 展开更多
关键词 猪诺如病毒 巢式RT-PCR 同源性分析 系统进化树分析
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柑橘黄化脉明病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:6
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作者 周彦 陈洪明 +3 位作者 王雪峰 李中安 王亮 周常勇 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期255-259,共5页
为探索柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)引起的柑橘新病害—柑橘黄脉病的早期快速检测技术,针对CYVCV核酸结合蛋白基因的保守序列设计2对特异性引物,通过优化退火温度,建立了CYVCV巢式RT-PCR检测方法,并对... 为探索柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)引起的柑橘新病害—柑橘黄脉病的早期快速检测技术,针对CYVCV核酸结合蛋白基因的保守序列设计2对特异性引物,通过优化退火温度,建立了CYVCV巢式RT-PCR检测方法,并对采自不同柑橘品种的54个CYVCV疑似样品进行了检测。结果表明,CYVCV巢式RT-PCR检测中,以55℃和60℃分别作为第1轮和第2轮扩增的退火温度时检测效果最佳;该方法检测样品中病毒总核酸的最低浓度为2.40μg/L,灵敏度较RT-PCR提高100倍。在CYVCV疑似样品检测中,巢式RT-PCR和RT-PCR的阳性检出率分别为59.26%和57.41%,前者更适用于检测不同来源的CYVCV。当尤力克柠檬、锦橙北碚-447、天草和台湾椪柑嫁接接种CYVCV后,巢式RT-PCR比RT-PCR提前10~30 d检测出病毒。表明所建立的CYVCV巢式RT-PCR检测方法适用于田间病树的早期诊断。 展开更多
关键词 柑橘黄化脉明病毒 巢式RT-PCR 检测
Nested RT-PCR method for the detection of European avian-like H1 swine influenza A virus 预览
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作者 WEI Yan-di PEI Xing-yao +4 位作者 ZHANG Yuan YU Chen-fang SUN Hong-lei LIU Jin-hua PU Juan 《农业科学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2016年第5期1095-1102,共8页
Swine influenza A virus(swine IAV) circulates worldwide in pigs and poses a serious public health threat, as evidenced by the 2009 H1N1 influenza pandemic. Among multiple subtypes/lineages of swine influenza A virus... Swine influenza A virus(swine IAV) circulates worldwide in pigs and poses a serious public health threat, as evidenced by the 2009 H1N1 influenza pandemic. Among multiple subtypes/lineages of swine influenza A viruses, European avian-like(EA) H1N1 swine IAV has been dominant since 2005 in China and caused infections in humans in 2010. Highly sensitive and specific methods of detection are required to differentiate EA H1N1 swine IAVs from viruses belonging to other lineages and subtypes. In this study, a nested reverse transcription(RT)-PCR assay was developed to detect EA H1 swine IAVs. Two primer sets(outer and inner) were designed specifically to target the viral hemagglutinin genes. Specific PCR products were obtained from all tested EA H1N1 swine IAV isolates, but not from other lineages of H1 swine IAVs, other subtypes of swine IAVs, or other infectious swine viruses. The sensitivity of the nested RT-PCR was improved to 1 plaque forming unit(PFU) m L–1 which was over 104 PFU m L–1 for a previously established multiplex RT-PCR method. The nested RT-PCR results obtained from screening 365 clinical samples were consistent with those obtained using conventional virus isolation methods combined with sequencing. Thus, the nested RT-PCR assay reported herein is more sensitive and suitable for the diagnosis of clinical infections and surveillance of EA H1 swine IAVs in pigs and humans. 展开更多
关键词 猪流感病毒 PCR检测方法 禽流感 RT-PCR方法 欧洲 嵌套 病毒亚型 人类感染
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猪瘟病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用 预览 被引量:4
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作者 刘梅芬 王淑娟 +5 位作者 闫若潜 王东方 曹伟伟 赵雪丽 李勤楠 李宁 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2285-2290,共6页
为建立一种快速、特异、灵敏的检测猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)巢式RT-PCR(nested RTPCR)方法,本研究参照GenBank中公布的CSFVE2基因保守区域序列设计2对特异性引物,以CSFV总RNA为模板,优化反应条件,建立CSFV neste... 为建立一种快速、特异、灵敏的检测猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)巢式RT-PCR(nested RTPCR)方法,本研究参照GenBank中公布的CSFVE2基因保守区域序列设计2对特异性引物,以CSFV总RNA为模板,优化反应条件,建立CSFV nested RT-PCR方法,对其进行特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的方法对35份临床疑似CSFV感染样品进行了应用检测,并对阳性PCR产物进行克隆测序鉴定。结果表明,本研究成功建立了CSFV nested RT-PCR检测方法,能够特异性地扩增CSFV,但对ST正常细胞对照和其他8种病原对照未扩增出任何条带;稳定性和重复性好;敏感性高,最低检测病毒含量为1TCID50;自35份疑似CSFV感染样品中检出19份阳性样品,PCR阳性产物克隆测序结果表明均为CSFV E2基因片段。本研究成功建立了CSFV nested RT-PCR检测方法,可用于CSFV的快速检测,为CSF的早期检测诊断提供了特异、灵敏的方法。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 巢式RT-PCR 检测 建立 应用
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H4亚型禽流感病毒套式RT-PCR检测方法的建立 预览 被引量:3
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作者 吴嫒琼 谢芝勋 +7 位作者 胡庭俊 谢丽基 罗思思 邓显文 谢志勤 黄莉 黄娇玲 曾婷婷 《动物医学进展》 北大核心 2015年第2期11-15,共5页
旨在建立一种快速、准确检测H4亚型禽流感病毒(AIV)的方法,针对H4亚型AIV HA基因保守序列,设计并筛选出2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了H4亚型AIV套式RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,该法可特异性检测出H4亚型AIV,对其他... 旨在建立一种快速、准确检测H4亚型禽流感病毒(AIV)的方法,针对H4亚型AIV HA基因保守序列,设计并筛选出2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了H4亚型AIV套式RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,该法可特异性检测出H4亚型AIV,对其他常见禽病病原体无交叉;敏感性试验结果显示,该法对H4亚型AIV检测下限为360fg/μL;用该法对106份临床样品进行检测,临床样品检测结果与病毒分离结果一致。本研究建立的套式RT-PCR方法为H4亚型AIV的早期诊断及有效防控提供了快速、特异和敏感的检测方法。 展开更多
关键词 H4亚型 禽流感病毒 套式RT-PCR 检测
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2013年内蒙古地区蓝舌病流行情况调查 预览 被引量:6
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作者 张胜男 吕建华 +5 位作者 常建华 韩明浩 刘昆 海岩 刘威 吴树清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期759-762,共4页
为了解内蒙古地区蓝舌病(BT)流行情况,本研究于2013年对内蒙古存在疑似BT病例地区进行流行病学调查,收集了内蒙古6个盟市不同种类动物的抗凝血及其对应血清样品212份,采用竞争ELISA及套式RT-PCR方法对样品进行检测.竞争ELISA检测结果... 为了解内蒙古地区蓝舌病(BT)流行情况,本研究于2013年对内蒙古存在疑似BT病例地区进行流行病学调查,收集了内蒙古6个盟市不同种类动物的抗凝血及其对应血清样品212份,采用竞争ELISA及套式RT-PCR方法对样品进行检测.竞争ELISA检测结果显示212份血清样品中有63份为BT阳性样品,13份为BT弱阳性,总阳性率为35.85%(76/212).套式RT-PCR检测结果显示212份血液样品中有61份为BT阳性样品,总阳性率为28.77%(61/212),其中绵羊感染率为21.25%(17/80)、绒山羊感染率为35.35%(41/116)、牛感染率为18.75%(3/16).不同的饲养方式对动物感染BT也有影响,其中圈养感染率为16.67%(1/6),散养感染率为29.13%(60/206).本研究结果表明,内蒙古地区BT流行范围比较广泛,因此有必要加强该病的检测及预防. 展开更多
关键词 蓝舌病 流行病学调查 竞争ELISA 套式RT-PCR
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H6亚型禽流感病毒套式 RT-PCR 检测方法的建立 预览 被引量:3
15
作者 周辰瑜 谢芝勋 +6 位作者 罗思思 刘加波 谢丽基 邓显文 谢志勤 范晴 庞耀珊 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第11期10-13,共4页
为建立一种 H 6亚型禽流感病毒(AIV)的套式 RT-PCR检测方法,根据 GenBank 中 H 6亚型AIV HA 基因序列,设计了4条特异性引物,优化反应条件,并对所建立的方法进行特异性和敏感性的检验,用该法对154份活禽市场样品进行检测。结果表... 为建立一种 H 6亚型禽流感病毒(AIV)的套式 RT-PCR检测方法,根据 GenBank 中 H 6亚型AIV HA 基因序列,设计了4条特异性引物,优化反应条件,并对所建立的方法进行特异性和敏感性的检验,用该法对154份活禽市场样品进行检测。结果表明,所建立的套式 RT-PCR 方法对其他常见禽病病原体无扩增;对 H6亚型 AIV 的最小检测限为1×102拷贝/μL,灵敏度比常规 RT-PCR 方法高100倍;154份样品的检测结果与病毒分离一致。所建立的 H6亚型 AIV 套式 RT-PCR 检测方法具有特异性强和灵敏度高的特点。 展开更多
关键词 H6 亚型禽流感病毒 套式RT-PCR
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猪流行性腹泻病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用猪流行性腹泻病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用 预览 被引量:5
16
作者 邓祖丽颖 陈陆 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期34-37,共4页
为建立一种快速、敏感的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)检测方法,试验据GenBank中PEDV基因组序列,设计并合成针对M基因的内、外2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了检测PEDV的巢式RT-PCR方法。结果... 为建立一种快速、敏感的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)检测方法,试验据GenBank中PEDV基因组序列,设计并合成针对M基因的内、外2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了检测PEDV的巢式RT-PCR方法。结果显示,单一使用外引物或内引物进行常规RT-PCR时检测限量均为50 pg PEDV RNA模板,而使用巢式RT-PCR可检测到50 fg PEDV RNA模板。使用该方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒的扩增结果均为阴性。结果表明,建立的巢式RT-PCR方法特异性、敏感性好,可快速准确地检测出样本中微量PEDV核酸。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 巢式RT-PCR M 基因
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诺如病毒检测方法研究进展 被引量:16
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作者 李志凯 苏国成 +1 位作者 苏文金 周常义 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1417-1424,共8页
诺如病毒是引起人类非细菌性胃肠炎的主要病原之一,具有很高的传染性和变异性,可导致严重的公共卫生问题,尤其在抵抗力弱的人群中有很高的发病率,因此开发快速、准确的检测技术对预防和控制诺如病毒的传播是非常重要的。本文综述了... 诺如病毒是引起人类非细菌性胃肠炎的主要病原之一,具有很高的传染性和变异性,可导致严重的公共卫生问题,尤其在抵抗力弱的人群中有很高的发病率,因此开发快速、准确的检测技术对预防和控制诺如病毒的传播是非常重要的。本文综述了近年来RT-PCR、环介导等温扩增、实时荧光定量PCR、巢式PCR、ELISA、免疫层析、基因芯片等技术在诺如病毒检测中的应用及发展趋势。 展开更多
关键词 诺如病毒 检测方法 RT-PCR 环介导等温扩增 实时荧光定量PCR 巢式PCR ELISA 免疫层析 基因芯片
应用巢式RT-PCR检测水仙退化病毒
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作者 金金晶 蔡伟 +3 位作者 赵爽 邹文超 高芳銮 沈建国 《植物检疫》 北大核心 2014年第6期59-64,共6页
水仙退化病毒(Narcissus degeneration virus,NDV)是水仙上发生较为严重的病毒之一。本文根据 NDV 已报道的外壳蛋白基因序列,设计特异性引物,以感病水仙的总 RNA 为模板,建立了快速检测 NDV 的巢式 RT-PCR 方法。结果表明,巢式 ... 水仙退化病毒(Narcissus degeneration virus,NDV)是水仙上发生较为严重的病毒之一。本文根据 NDV 已报道的外壳蛋白基因序列,设计特异性引物,以感病水仙的总 RNA 为模板,建立了快速检测 NDV 的巢式 RT-PCR 方法。结果表明,巢式 RT-PCR 具有良好的特异性和灵敏度,能够从感染 NDV 的水仙样品上扩增出与预期大小相符的特异性目的条带,同时与其他病毒无交叉反应;灵敏度测定结果表示,巢式 RT-PCR 灵敏度较高,是普通 RT-PCR 的104倍,当 RNA 稀释到109倍时仍能被检测到。本文建立的巢式 RT-PCR 为水仙上 NDV 的快速检测提供了技术参考依据。 展开更多
关键词 水仙退化病毒 检测 特异性 灵敏度
180份流感样病例标本中腺病毒的感染特征分析 被引量:2
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作者 孙亚萍 陈燕 宋士利 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第15期2220-2222,共3页
目的了解急性呼吸道感染患者人类腺病毒(HAdV)感染及型别分布特点。方法收集2011年7月-2012年6月间杭州市余杭区第一人民医院儿科收集的急性呼吸道感染患儿咽拭子标本180份,采用巢氏RT-PCR法扩增Hexon区域,阳性PCR产物通过测序确定HAd... 目的了解急性呼吸道感染患者人类腺病毒(HAdV)感染及型别分布特点。方法收集2011年7月-2012年6月间杭州市余杭区第一人民医院儿科收集的急性呼吸道感染患儿咽拭子标本180份,采用巢氏RT-PCR法扩增Hexon区域,阳性PCR产物通过测序确定HAdV型别。结果 180例咽拭子标本中共检出HAdV阳性标本为25份,阳性率为13.8%。其中阳性标本型别构成为HAdV-3型15份,HAdV-7型3份,HAdV-4型1份,HAdV-6型2份,HAdV-2型4份。患者感染年龄均集中于11个月~9岁间,男女感染患儿性别构成比为2∶3。结论 HAdV是余杭区儿童急性呼吸道感染的重要病原体之一,发病以9岁以下幼儿及儿童为主,型别分布主要以3型为主,同时有多种型别散发存在。 展开更多
关键词 急性呼吸道感染 腺病毒 巢氏RT-PCR
尼帕病毒巢式RT-PCR方法的建立和初步应用 预览 被引量:1
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作者 张体银 张志灯 +3 位作者 郑腾 白泉阳 王武军 林素洁 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期599-602,共4页
目的建立灵敏、特异的检测尼帕病毒的巢式RT—PCR方法。方法根据GenBank公布的尼帕病毒N基因序列,设计2对特异性引物(外引物和内引物),建立巢式RT—PCR方法,优化反应体系,测定特异性和灵敏度,并进行临床样品的检测。结果该方法... 目的建立灵敏、特异的检测尼帕病毒的巢式RT—PCR方法。方法根据GenBank公布的尼帕病毒N基因序列,设计2对特异性引物(外引物和内引物),建立巢式RT—PCR方法,优化反应体系,测定特异性和灵敏度,并进行临床样品的检测。结果该方法扩增的片段序列与源序列同源性均为100%。特异性试验结果表明本试验设计的内外侧引物不能从新城疫病毒、牛瘟病毒和日本乙型脑炎病毒中扩增出条带。敏感性试验结果表明,该方法最低能检测出的标准模板RNA浓度为39fg/μL。100份临床样品检测结果全部为阴性。结论初步建立了快速、灵敏、特异的检测尼帕病毒N基因的巢式RT—PCR方法,可用于动物疫病监测和检验检疫等领域。 展开更多
关键词 巢式RTPCR 尼帕病毒 N基因
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