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锶元素在骨组织工程研究中的应用与进展 预览
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作者 张骏 尤奇 +2 位作者 邹刚 葛振 刘毅 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第18期2936-2940,共5页
背景:锶元素在骨组织工程中已得到广泛应用,能够促进成骨细胞分化、抑制破骨细胞的吸收。目的:综述锶元素在骨组织工程中的应用与研究进展。方法:应用计算机检索CNKI数据库、PubMed数据库及Elsevier数据库中收录的相关文献,中文检索词为... 背景:锶元素在骨组织工程中已得到广泛应用,能够促进成骨细胞分化、抑制破骨细胞的吸收。目的:综述锶元素在骨组织工程中的应用与研究进展。方法:应用计算机检索CNKI数据库、PubMed数据库及Elsevier数据库中收录的相关文献,中文检索词为'锶元素,锶,骨,骨缺损,骨修复,组织工程',英文检索词为'strontium,Sr,bone,bonedefects,bone repair,tissue engineering'。查阅1960年1月至2018年12月期间收录的锶元素在骨组织工程中应用的相关文章,包括综述、基础研究及临床研究,通过阅读文题和摘要进行初步筛选,排除与文章主题不相关的文献,根据纳入标准和排除标准,最终纳入48篇文献进行结果分析。结果与结论:锶元素作为骨组织重要的组成成分,在骨的发育和形成过程中扮演着重要角色。掺锶的骨替代材料已成为目前骨组织工程研究的重点和热点,大量研究证实,锶的掺入能够有效改善骨替代材料的力学性能,提高对成骨细胞的招募能力及分化能力,同时促进体内成骨和成血管能力。但目前的研究还存在一定的不足:不同研究使用的掺锶方法不同,所以研究结果不具有可比性;不同掺锶量所得出的研究结论不同;目前尚无一个比较公认的掺锶浓度可用来诱导成骨分化。 展开更多
关键词 锶元素 骨组织工程 骨缺损 骨修复 成骨细胞 破骨细胞 成骨能力 成血管能力
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荷斯坦奶牛乳腺干细胞的成骨诱导及鉴定 预览
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作者 陈钰萌 韩哲先 +1 位作者 刘迎春 高峰 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第9期1359-1363,共5页
背景:课题组已经完成乳腺干细胞向神经细胞和脂肪细胞的诱导,该实验诱导乳腺干细胞分化为成骨细胞,进一步丰富其分化潜能多样性,对乳腺干细胞的研究具有重要意义。目的:探讨荷斯坦奶牛乳腺干细胞定向诱导分化为成骨细胞的潜能。方法:分... 背景:课题组已经完成乳腺干细胞向神经细胞和脂肪细胞的诱导,该实验诱导乳腺干细胞分化为成骨细胞,进一步丰富其分化潜能多样性,对乳腺干细胞的研究具有重要意义。目的:探讨荷斯坦奶牛乳腺干细胞定向诱导分化为成骨细胞的潜能。方法:分离纯化的荷斯坦奶牛乳腺干细胞系,由内蒙古生物制造重点实验室提供。取第4代乳腺干细胞加入成骨诱导液培养21 d,采用茜素红染色法和RT-PCR技术进行鉴定。结果与结论:荷斯坦奶牛乳腺干细胞经成骨诱导后,细胞边缘模糊,细胞中有颗粒状钙化结节出现,经茜素红染色呈阳性,诱导后成骨细胞标记性基因Alpl和Bglap呈阳性表达,表明了荷斯坦奶牛乳腺干细胞具有分化为成骨细胞的潜能。 展开更多
关键词 荷斯坦奶牛 乳腺干细胞 成骨诱导分化 成骨细胞 成骨标记基因 国家自然科学基金 乳腺 动物 干细胞 细胞分化 组织工程
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红芪中5种黄酮类成分对大鼠骨髓间充质干细胞和成骨细胞成骨分化的影响
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作者 方瑶瑶 薛志远 +3 位作者 杨秀艳 杨亚飞 赵良功 封士兰 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期632-638,共7页
目的研究红芪中毛蕊异黄酮、芒柄花素、芒柄花苷、异甘草素和美迪紫檀素5种黄酮类成分对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)和颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROBs)成骨性分化的影响。方法贴壁分离... 目的研究红芪中毛蕊异黄酮、芒柄花素、芒柄花苷、异甘草素和美迪紫檀素5种黄酮类成分对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)和颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROBs)成骨性分化的影响。方法贴壁分离法培养rBMSCs;酶消解法分离培养ROBs;MTT法检测rBMSCs和ROBs细胞的增殖情况;试剂盒检测rBMSCs和ROBs的碱性磷酸酶(ALP)活性和Ca2+含量;茜素红染色法检测矿化结节形成。结果 5种成分均能不同程度促进rBMSCs和ROBs的增殖,提高ALP活性,增加Ca2+含量,增加钙化结节面积和数量(P<0.05)。其中毛蕊异黄酮促进rBMSCs的成骨分化作用最佳,美迪紫檀素促进ROBs的成骨分化作用最佳,毛蕊异黄酮次之。结论这5种黄酮类成分对rBMSCs和ROBs的成骨功能均有一定程度地改善作用,而毛蕊异黄酮对2种细胞表现的成骨活性均较佳,可发展作为良好的骨诱导活性因子。 展开更多
关键词 红芪 美迪紫檀素 芒柄花素 芒柄花苷 毛蕊异黄酮 异甘草素 成骨分化 骨髓间充质干细胞 成骨细胞
干扰foxM1基因表达可增强骨髓间充质干细胞的成骨分化能力 预览
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作者 陈钦桂 曾勉 +2 位作者 何婉媚 张莉珊 郑海崇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第5期673-679,共7页
背景:foxM1基因被认为参与了干细胞分化命运的调控,但其对间充质干细胞成骨分化的影响尚未见报道,关于foxM1基因的研究也主要集中于肿瘤领域。目的:探索干扰foxM1基因表达水平对骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法:全骨髓贴壁法... 背景:foxM1基因被认为参与了干细胞分化命运的调控,但其对间充质干细胞成骨分化的影响尚未见报道,关于foxM1基因的研究也主要集中于肿瘤领域。目的:探索干扰foxM1基因表达水平对骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法:全骨髓贴壁法培养SD大鼠(中山大学实验动物中心提供)骨髓间充质干细胞,构建含嘌呤霉素抗性基因的foxM1shRNA重组慢病毒载体并转染大鼠骨髓间充质干细胞,经嘌呤霉素筛选建立foxM1稳定敲低细胞株,另设置空病毒载体组以及未转染组。使用骨髓间充质干细胞成骨诱导分化培养基诱导培养并行茜素红染色检测其成骨分化能力,使用定量RT-PCR检测成骨相关基因的表达水平,同时提取胞核蛋白,Westernblot检测β-catenin蛋白表达水平。结果与结论:①与空病毒载体组以及未转染组比较,foxM1敲低的大鼠骨髓间充质干细胞经成骨诱导分化后形成的骨结节数量明显增多,成骨相关基因col1a1和runx2表达水平均显著升高,但胞核β-catenin蛋白水平无明显改变;②干扰foxM1基因表达可增强骨髓间充质干细胞的成骨能力。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 成骨 诱导分化 慢病毒载体 foxM1基因 基因干扰 β-catenin 国家自然科学基金 叉头转录因子类 RNA干扰 骨髓 间质干细胞 细胞分化 成骨细胞 组织工程
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淫羊藿苷对UMR-106成骨细胞和RAW264.7细胞诱导的破骨细胞蛋白质组学的影响
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作者 沈燚 祝峥 +3 位作者 张奇 何玉琼 吴岩斌 张巧艳 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期268-273,共6页
目的研究淫羊藿苷基于成骨细胞和破骨细胞蛋白质组学的抗骨质疏松作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖,ELISA法测定碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的活性,茜素红染色观察成骨细胞骨矿化结节的形成,以骨片上... 目的研究淫羊藿苷基于成骨细胞和破骨细胞蛋白质组学的抗骨质疏松作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖,ELISA法测定碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的活性,茜素红染色观察成骨细胞骨矿化结节的形成,以骨片上形成的骨吸收陷窝的数目和面积表征破骨细胞的骨吸收活性,以二维凝胶电泳观察成骨及破骨细胞蛋白质组的变化,应用TOF/MS/MS对差异表达的蛋白进行鉴定。结果淫羊藿苷显著增加成骨细胞的骨形成,抑制破骨细胞的骨吸收,上调或下调成骨和破骨细胞各9个蛋白的表达。结论淫羊藿苷通过参与能量代谢、氧化应激、嘌呤合成和细胞生长分化的等生物学过程调控骨代谢。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 成骨细胞 破骨细胞 蛋白质组学 差异蛋白
分子信号通路及细胞层面的骨折愈合机制 预览
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作者 杨楠 陈跃平 章晓云 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第20期3188-3194,共7页
背景:骨不连和骨折延迟愈合不仅对个人和家庭造成了极大的困扰,对整个社会也会带来巨大的经济损失。而最佳的骨折治疗需要了解骨折愈合的复杂生理过程。目的:综述国内外相关文献,通过研究和对比骨折愈合机制,为临床诊断、治疗提供新的... 背景:骨不连和骨折延迟愈合不仅对个人和家庭造成了极大的困扰,对整个社会也会带来巨大的经济损失。而最佳的骨折治疗需要了解骨折愈合的复杂生理过程。目的:综述国内外相关文献,通过研究和对比骨折愈合机制,为临床诊断、治疗提供新的思路。方法:中文以'骨折愈合,骨折不愈合,炎症,信号通路,破骨细胞,成骨细胞,骨形态发生蛋白,Wnt,甲状旁腺激素,Hedgehog'检索CNKI、万方、维普数据库;英文以'Fracturehealing,Nonunion,Inflammation, Signaling pathways, Osteoclast,Osteoblast,BMP,Wnt,Hedgehog,PTH'检索PubMed数据库,收录与骨折愈合机制有关的分子信号通路和基因细胞研究相关的文献报道,并排除重复性研究,按照纳入和排除标准对文献进行筛选,共纳入46篇文章进行综述分析。结果与结论:(1)通过从炎症阶段、信号通路、细胞3个方面对骨折愈合机制进行综述讨论,发现临床和早期科研之间的矛盾(如副反应)能在更深层次的研究中得到统一;(2)但由于骨折愈合机制过于复杂,现在的研究结果并不足以解开所有临床问题;(3)不同分子之间相互影响,难以找到具有临床意义可以用于早期骨不连临床诊断的标志物;(4)需要研发更加精细的实验设备和设计更严密的科研方案,服务临床;(5)但是针对目前的科研结果,可以考虑配合仿生骨信号递送系统,使原本孤立、平面、静止的研究结果具有三维动态性更符合临床实际的治疗需求,这是下一步考虑的事情。 展开更多
关键词 骨折愈合 炎症阶段 信号通路 破骨细胞 成骨细胞 骨形态发生蛋白 WNT HEDGEHOG 甲状旁腺激素 国家自然科学基金
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地塞米松通过线粒体途径诱导成骨细胞凋亡的研究 预览
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作者 伍龙果 蔡劲薇 +1 位作者 潘吉铭 梁敏 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期380-384,403共6页
目的观察地塞米松对离体成骨细胞凋亡的影响,探讨地塞米松对成骨细胞凋亡的分子作用机制。方法采用不同浓度地塞米松(10-8、10-6、10-4mol/L)干预SD大鼠离体成骨细胞,DAPI染色观察细胞核形态,透射电镜观察细胞核及线粒体形态,流式细胞... 目的观察地塞米松对离体成骨细胞凋亡的影响,探讨地塞米松对成骨细胞凋亡的分子作用机制。方法采用不同浓度地塞米松(10-8、10-6、10-4mol/L)干预SD大鼠离体成骨细胞,DAPI染色观察细胞核形态,透射电镜观察细胞核及线粒体形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1荧光探针检测线粒体跨膜电位。结果 10-8、10-6、10-4mol/L地塞米松干预24 h后,DAPI染色发现,10-8mol/L地塞米松组的成骨细胞很少发生凋亡,10-6mol/L和10-4mol/L地塞米松组的成骨细胞凋亡明显,地塞米松的浓度越高,核固缩、核裂解等凋亡现象越明显;透射电镜观察发现,随着地塞米松浓度增加,细胞核固缩明显,线粒体肿胀、空泡样变化现象增多;成骨细胞的凋亡率随着地塞米松浓度的增加而逐渐增高,与空白对照组相比,10-8mol/L地塞米松组细胞凋亡率无明显升高(P>0.05),10-6 mol/L和10-4mol/L地塞米松组的成骨细胞凋亡率分别较空白对照组增加7.240%和31.173%(P<0.05);随着地塞米松浓度的增加,线粒体膜电位逐渐减低,与空白对照组相比较,10-8mol/L地塞米松组细胞膜电位下降不明显(P>0.05),10-6 mol/L和10-4mol/L地塞米松组膜电位下降分别较空白对照组降低6.814%和17.846%(P<0.05)。结论地塞米松通过激活线粒体途径诱导成骨细胞凋亡,存在浓度依赖性。 展开更多
关键词 地塞米松 成骨细胞 凋亡 超微结构
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大鼠不同胚层来源成骨细胞生物学行为比较研究 预览
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作者 陈玉玲 许雄程 +4 位作者 江俊 阳雪 吴玉铭 何梦娇 骆凯 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期196-200,共5页
目的:探讨大鼠不同胚层来源成骨细胞生物学行为的差异。方法:体外培养大鼠颌骨与股骨成骨细胞(MOBs与FOBs),通过MTT比色法检测细胞的增殖能力,采用碱性磷酸酶染色与活性测定、茜素红染色与定量比较细胞的成骨能力。应用荧光定量PCR及EL... 目的:探讨大鼠不同胚层来源成骨细胞生物学行为的差异。方法:体外培养大鼠颌骨与股骨成骨细胞(MOBs与FOBs),通过MTT比色法检测细胞的增殖能力,采用碱性磷酸酶染色与活性测定、茜素红染色与定量比较细胞的成骨能力。应用荧光定量PCR及ELISA检测细胞成骨与成血管相关细胞因子的表达情况。结果:与FOBs相比,MOBs的增殖能力、成血管相关细胞因子Angpt-1和FGF-2的表达更强,但碱性磷酸酶的表达、体外矿化结节形成能力以及成骨相关基因ALP、RUNX2、Col-Iα1和OC的表达均较低。结论:MOBs与FOBs相比较,增殖力较强,分化能力较弱。 展开更多
关键词 颌骨 股骨 成骨细胞 成骨 成血管
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促甲状腺激素与骨代谢
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作者 朱于青 孙琳 《中国医师杂志》 CAS 2019年第2期315-318,共4页
以往认为,促甲状腺激素(TSH)通过下丘脑-垂体-甲状腺轴增加甲状腺激素的表达与释放发挥骨调控作用。近年来的研究证据显示,TSH可独立于甲状腺激素直接调节骨代谢,有人据此提出了垂体-骨轴的概念。然而,TSH在骨代谢中的作用机制仍不明确... 以往认为,促甲状腺激素(TSH)通过下丘脑-垂体-甲状腺轴增加甲状腺激素的表达与释放发挥骨调控作用。近年来的研究证据显示,TSH可独立于甲状腺激素直接调节骨代谢,有人据此提出了垂体-骨轴的概念。然而,TSH在骨代谢中的作用机制仍不明确。本文就TSH与骨质疏松的临床关系,TSH对软骨细胞、成骨细胞、破骨细胞的作用,促甲状腺激素受体(TSHR)基因多态性与骨量,注射TSH对骨代谢的影响等方面进行阐述,为寻找防治骨质疏松的新靶点提供理论依据。 展开更多
关键词 促甲状腺激素 骨和骨组织 破骨细胞 成骨细胞 综述
miR-218-5p下调SD大鼠成骨细胞骨硬化蛋白的表达 预览
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作者 方钦正 徐芳 +3 位作者 叶林 菅永志 王维山 史晨辉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期749-752,共4页
目的:探讨SD大鼠成骨细胞中微小RNA-218-5p(miR-218-5p)对骨硬化蛋白(SOST)表达的影响及其作用机制。方法:用生物信息学数据库RNAhybrid和TargetScan预测miR-218-5p靶向SOST基因;构建携带靶基因野生型及突变型3’-非翻译区的双萤光素酶... 目的:探讨SD大鼠成骨细胞中微小RNA-218-5p(miR-218-5p)对骨硬化蛋白(SOST)表达的影响及其作用机制。方法:用生物信息学数据库RNAhybrid和TargetScan预测miR-218-5p靶向SOST基因;构建携带靶基因野生型及突变型3’-非翻译区的双萤光素酶报告基因质粒,采用脂质体Lipofectamine 2000包裹双萤光素酶重组质粒及miR-218-5p模拟物(mimic)或抑制剂(inhibitor),共转染293T细胞,应用双萤光素酶报告基因检测试剂盒测定萤光素酶活性;分离并培养SD大鼠成骨细胞,茜素红染色鉴定,设miR-218-5p mimic组、miR-218-5p inhibitor组及空白和阴性对照组,转染SD大鼠成骨细胞,RT-PCR检测SOST的mRNA表达,Western blot法检测SOST的蛋白表达水平。结果:双萤光素酶报告基因实验验证SOST是miR-218-5p的潜在靶基因;RT-PCR和Western blot实验结果示,SD大鼠成骨细胞转染miR-218-5p mimic后,SOST mRNA及蛋白表达均明显下调,转染miR-218-5p inhibitor后均明显上调,与空白及阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-218-5p靶向SOST基因,从而下调SD大鼠成骨细胞SOST蛋白的表达。 展开更多
关键词 骨硬化蛋白 成骨细胞 微小RNA-218-5p
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GSTO1基因沉默对氟致成骨细胞自噬与凋亡的影响 预览
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作者 王金明 高宇凤 +4 位作者 成小芳 杨镓蓉 徐慧淼 赵阳飞 李妍妍 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期183-192,共10页
为探讨氟致成骨细胞自噬和凋亡中GSTO1的作用机制,利用RNA干扰(RNAi)技术,抑制GSTO1基因在小鼠成骨细胞中表达,检测染氟小鼠成骨细胞中自噬和凋亡相关基因表达。针对小鼠成骨细胞GSTO1mRNA序列设计、合成3对21核苷酸序列siRNA(siRNA1、s... 为探讨氟致成骨细胞自噬和凋亡中GSTO1的作用机制,利用RNA干扰(RNAi)技术,抑制GSTO1基因在小鼠成骨细胞中表达,检测染氟小鼠成骨细胞中自噬和凋亡相关基因表达。针对小鼠成骨细胞GSTO1mRNA序列设计、合成3对21核苷酸序列siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3);从3对序列中筛选最佳有效片段,然后检测不同质量浓度氟化钠(10^4、10^3、10^2、10、1mg·L^-1)下GSTO1的mRNA转录,确定最佳氟浓度。试验分为空白对照组(control)、阴性对照组(NC-siRNA)、氟化钠组(1mg·L-1)、沉默目的基因组(siRNA-GSTO1)和氟化钠加沉默目的基因组(NaF/siRNA-GSTO1),用RT-PCR技术检测成骨细胞自噬相关基因LC3、p62、Beclin1、Atg3、Atg5和凋亡相关基因BCL2、Caspase-3的转录,同时应用Westernblot技术检测LC3、p62、Beclin1、Atg3和Atg5蛋白表达。结果显示:用HE、吉姆萨、碱性磷酸酶、茜素红四种染色法鉴定试验所用细胞为成骨细胞。确定试验模型中50nmol·L^-1为siRNA的最佳转染浓度,siRNA2为最佳沉默转染片段,NaF的最佳浓度为1mg·L^-1。成骨细胞染氟与GSTO1基因抑制均可使LC3、Beclin1、Atg5和BCL2基因转录显著升高,p62和Caspase-3基因转录显著下降;但与NaF组相比较,NaF/siRNA-GSTO1组LC3、Beclin1、和Atg5基因mRNA转录水平显著降低(P<0.05),而p62和Caspase-3基因转录显著升高(P<0.05)。Western blot检测成骨细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1、Atg5和p62的表达与基因转录趋势完全一致。结果表明,低剂量氟与沉默GSTO1表达均可致成骨细胞自噬增强的同时凋亡减弱,GSTO1对低剂量氟致成骨细胞自噬增强与抑制凋亡有一定的协同效应。 展开更多
关键词 成骨细胞 siRNA-GSTO1 自噬 凋亡
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仙茅苷对成骨细胞增殖分化和炎症因子表达的影响及机制分析 预览
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作者 朱芳兵 章英良 +2 位作者 侯桥 张治金 严世贵 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期642-648,共7页
目的仙茅苷(curculigoside,CCG)能有效防治去卵巢大鼠的骨量丢失,但是其分子机制尚不清楚,因此,研究CCG在地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导下对成骨细胞增殖分化和炎症因子释放的影响,并探讨其相关机制。方法将大鼠颅骨成骨细胞与DEX共... 目的仙茅苷(curculigoside,CCG)能有效防治去卵巢大鼠的骨量丢失,但是其分子机制尚不清楚,因此,研究CCG在地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导下对成骨细胞增殖分化和炎症因子释放的影响,并探讨其相关机制。方法将大鼠颅骨成骨细胞与DEX共同孵育24~72 h,同时采用不同浓度的CCG对其干预,采用细胞计数试剂盒检测成骨细胞增殖情况,流式细胞术检测成骨细胞线粒体膜电位(mitochondria membrane potential,MMP)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、重组人胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)等细胞因子的表达。采用蛋白质印迹法检测骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、β-连环蛋白(β-catenin)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activators of NF-κB ligand,RANKL)和核因子κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB,RANK)的蛋白表达。结果地塞米松1μmol/L处理成骨细胞后,成骨细胞增殖明显低于未处理组,25~100μg/mL CCG预处理可明显逆转DEX对成骨细胞的杀伤作用。25~100μg/mL的CCG预处理可提高DEX诱导下成骨细胞的MMP水平,降低ROS的生成。此外,CCG明显逆转DEX对碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、OPG、BMP-2、β-catenin、IGF-1和M-CSF水平的抑制作用以及对RANKL和RANK等分化指标的促进作用。CCG还能抑制DEX诱导的TNF-α、IL-1β、IL-6、COX-2等炎症细胞因子的释放。结论这些结果为进一步研究CCG的成骨细胞保护机制提供了新的思路,通过诱导细胞增殖和分化,减少炎症反应,提示CCG可用于防治骨质疏松症。 展开更多
关键词 仙茅苷 成骨细胞 骨质疏松 增殖 细胞因子
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长效、中效、短效3种激素影响miR-672-5p在大鼠成骨细胞的差异表达 预览
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作者 翟沛 李鹏飞 +4 位作者 梁正辉 曾建春 蔡国雄 曾意荣 樊粤光 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第5期809-814,共6页
背景:前期研究中发现,甲泼尼龙干预后miR-672-5p在大鼠成骨细胞的表达上调,提示miR-672-5p可能在激素性股骨头坏死中发挥作用。目的:分析长效、中效、短效3种激素影响miR-672-5p在大鼠成骨细胞的差异表达。方法:SD大鼠原代成骨细胞体外... 背景:前期研究中发现,甲泼尼龙干预后miR-672-5p在大鼠成骨细胞的表达上调,提示miR-672-5p可能在激素性股骨头坏死中发挥作用。目的:分析长效、中效、短效3种激素影响miR-672-5p在大鼠成骨细胞的差异表达。方法:SD大鼠原代成骨细胞体外培养,取第3代大鼠成骨细胞加入DMEM高糖培养基,并分别加入终浓度为1×10^-5mol/L的地塞米松(长效)、甲泼尼龙(中效)及氢化可的松(短效),并设空白对照组;4组分别细胞总RNA提取,反转录反应,定量PCR反应;算出2^-ΔΔCt值评估miR-672-5p的表达量。结果与结论:①与空白组相比,3组激素的miR-672-5p在大鼠成骨细胞的表达均显示出上调,其中甲泼尼龙组为2.35倍,提示表达最高;甲泼尼龙组miR-672-5p表达显著高于氢化可的松组和地塞米松组(均P<0.05),但氢化可的松组与地塞米松组比较差异无显著性意义;②结果说明,中效激素的miR-672-5p在大鼠成骨细胞的表达量最大,提示甲泼尼龙在激素性股骨头坏死中可能起重要角色。 展开更多
关键词 糖皮质激素 成骨细胞 激素性股骨头坏死 miR-672-5p 地塞米松 甲泼尼龙 氢化可的松 短效激素 中效激素 长效激素 组织构建 糖皮质激素类 股骨头坏死 组织工程
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去卵巢大鼠血清来源外泌体促进原代成骨细胞的增殖 预览
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作者 高坤 朱文秀 +5 位作者 李亨 刘伟东 李全 余伟吉 王立新 曹亚飞 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第7期985-989,共5页
背景:骨代谢过程中,成骨细胞的数量和功能的变化影响骨的生物学特性,外泌体能够通过细胞间的传递进行信号传递,具有促进细胞增殖、分化的潜能。目的:探讨骨质疏松大鼠血清中外泌体的性质及其对成骨细胞的作用。方法:32只成年健康雌性SD... 背景:骨代谢过程中,成骨细胞的数量和功能的变化影响骨的生物学特性,外泌体能够通过细胞间的传递进行信号传递,具有促进细胞增殖、分化的潜能。目的:探讨骨质疏松大鼠血清中外泌体的性质及其对成骨细胞的作用。方法:32只成年健康雌性SD大鼠,24h新生SD大鼠若干只用于原代成骨细胞分离培养,实验动物由广东省医学动物实验中心提供。①建立去卵巢骨质疏松大鼠模型,以假手术组大鼠为对照组。通过ExoQuick提取对照组和骨质疏松大鼠血清中外泌体,用电镜、nanosight、Westernblotting进行鉴定;②取对数期的原代成骨细胞接种于96孔细胞培养板中,接种浓度为2×10^4/孔。实验分为空白对照、外泌体对照组、骨质疏松外泌体组,分别加入DPBS、正常血清外泌体和骨质疏松血清外泌体,100μL/孔,CO2培养箱培育1d,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测成骨细胞的增殖;酶联免疫吸附试验法检测外泌体中血管内皮生长因子的浓度。结果与结论:①成功提取大小在100nm以下外泌体颗粒;②蛋白定量检测12周组外泌体蛋白质量浓度最高;不同时间点外泌体颗粒数12周组略高,但未见明显差异;③骨质疏松大鼠血清来源外泌体与空白对照组及正常外泌体组相比较,明显促进成骨细胞的增殖,且外泌体内血管内皮生长因子升高;④结果说明,骨质疏松大鼠血清中外泌体能够促进成骨细胞的增殖。 展开更多
关键词 骨质疏松 外泌体 成骨细胞 血管内皮生长因子 组织构建 血管内皮生长因子类 组织工程
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幼兔颅盖骨成骨细胞的分离培养及鉴定 预览
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作者 艾力麦尔旦·艾尼瓦尔 李鹏 +1 位作者 刁兆峰 木合塔尔·霍加 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第7期996-1000,共5页
背景:成骨细胞的提取分离尚无公认的高效简便的实验方法。目的:探讨用改良酶消化法体外分离、培养并鉴定新西兰幼兔颅盖骨成骨细胞的实验方法。方法:实验利用成纤维细胞胰酶消化时脱壁早,终止消化后贴壁快的特点,采用改良酶消化法分离3... 背景:成骨细胞的提取分离尚无公认的高效简便的实验方法。目的:探讨用改良酶消化法体外分离、培养并鉴定新西兰幼兔颅盖骨成骨细胞的实验方法。方法:实验利用成纤维细胞胰酶消化时脱壁早,终止消化后贴壁快的特点,采用改良酶消化法分离3d龄新西兰幼兔颅盖骨成骨细胞并用差速贴壁法纯化培养。倒置显微镜每日观察细胞形态及其生长状况,采用MTT法检测细胞增殖情况并绘制细胞生长曲线,测定碱性磷酸酶含量,免疫组织化学染色法检测Ι型胶原、骨钙素,Runt相关转录因子2(Runt related transcription factor 2,RUNX2)表达,茜素红染色矿化结节等对成骨细胞及其生物化学特性进行鉴定。结果与结论:①成功分离提取并差速贴壁法纯化培养成骨细胞;②分离培养的成骨细胞贴壁生长,显示正常的成骨细胞形态和生长特征;细胞增殖能力良好;③细胞碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨钙素、RUNX2染色均阳性,常规培养21d茜素红染色形成矿化结节;④结果证实,改良酶消化法培养出的成骨细胞具有典型的成骨细胞特征,成分单一,存活率高。 展开更多
关键词 成骨细胞 颅盖骨 改良酶消化法 差速贴壁法 分离培养 鉴定 组织构建 颅骨 细胞分离 组织工程
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苦味酸类成分蛇麻酮和葎草酮对大鼠成骨细胞和破骨细胞的干预作用
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作者 夏天爽 林柳悦 +3 位作者 蒋益萍 张巧艳 秦路平 辛海量 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期25-30,共6页
目的研究苦味酸类成分蛇麻酮和葎草酮对大鼠成骨细胞及破骨细胞活性的干预作用。方法以新生24h的Wistar大鼠所分离的成骨细胞和破骨细胞为研究对象,设置对照组,蛇麻酮处理低(10^-15mol/L)、中(10^-14mol/L)、高(10^-13mol/L)剂量组,以... 目的研究苦味酸类成分蛇麻酮和葎草酮对大鼠成骨细胞及破骨细胞活性的干预作用。方法以新生24h的Wistar大鼠所分离的成骨细胞和破骨细胞为研究对象,设置对照组,蛇麻酮处理低(10^-15mol/L)、中(10^-14mol/L)、高(10^-13mol/L)剂量组,以及葎草酮处理低(10^-15mol/L)、中(10^-14mol/L)、高(10^-13mol/L)剂量组。药物处理后,分别用MTT法、碱性磷酸酶(ALP)活性检测以及茜素红染色法评价蛇麻酮和葎草酮对成骨细胞增殖、分化及骨矿化水平的影响。采用破骨细胞计数以及抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性检测评价蛇麻酮和葎草酮对破骨细胞活性的影响。采用试剂盒法检测骨钙素(OCN)水平,采用蛋白质印迹法检测骨形成相关蛋白骨桥蛋白(OPN)、骨涎蛋白(BSP)、骨形成蛋白(BMP-2)以及骨吸收相关蛋白组织蛋白酶K(CK)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,评价蛇麻酮和葎草酮在骨代谢调控方面的作用。结果在大鼠成骨细胞水平上,与对照组相比,蛇麻酮在10^-15、10^-14mol/L浓度下可促进成骨细胞增殖(P<0.05),在10^-14、10^-13mol/L浓度下可提高ALP活性以及骨矿化水平(P<0.05,P<0.01),在10^-13mol/L浓度下可促进OCN的表达(P<0.01),在10^-14、10^-13mol/L浓度下可提高骨形成相关蛋白BSP和BMP-2的表达(P<0.05);葎草酮在10^-15~10^-13mol/L浓度下可促进成骨细胞增殖、提高ALP活性以及骨矿化水平(P<0.01)、提高骨形成相关蛋白OCN、OPN的表达(P<0.05,P<0.01),在10^-14、10^-13mol/L浓度下可促进BSP和BMP-2的表达(P<0.05)。在大鼠破骨细胞水平上,与对照组相比,蛇麻酮和葎草酮在10^-15~10^-13mol/L浓度下均可降低破骨细胞数目(P<0.01),抑制CK的表达(P<0.05,P<0.01);葎草酮在10^-15~10^-13mol/L浓度下可抑制MMP-9的表达(P<0.05,P<0.01)。结论本研究在细胞水平上初步明确了蛇麻酮和葎草酮可通过促进成骨细胞骨形成、抑制破骨细胞骨吸收来防治骨丢失,为骨质疏松药物的� 展开更多
关键词 苦味酸 成骨细胞 破骨细胞 蛇麻酮 葎草酮
异烟肼、利福平联合应用对体外培养成骨细胞生物活性的影响 预览
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作者 马永海 巩栋 +2 位作者 王伟 邵陇龙 甄平 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期141-145,151共6页
目的研究不同浓度的异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampin,RFP)联合应用对大鼠成骨细胞(osteoblast,OB)增殖、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、I型胶原蛋白表达和成骨细胞成熟与矿化能力的影响。方法分离、培养新生SD大... 目的研究不同浓度的异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampin,RFP)联合应用对大鼠成骨细胞(osteoblast,OB)增殖、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、I型胶原蛋白表达和成骨细胞成熟与矿化能力的影响。方法分离、培养新生SD大鼠乳鼠颅骨OB,分别采用CCK-8法、碱性磷酸酶试剂盒检测ALP活性、免疫荧光染色法和茜素红染色法检测,观察不同浓度INH+RFP [(10+3)μg/mL、(20+6)μg/mL、(30+12)μg/mL、(40+24)μg/mL、(50+48)μg/mL]对成骨细胞增殖、ALP活性、Ⅰ型胶原蛋白表达以及矿化能力的影响。结果与对照组相比,当INH+RFP的浓度在(20+6)μg/mL及以上时,抑制大鼠OB增殖、I型胶原合成、使ALP活性及矿化能力显著下降(P<0.05),且均随着浓度增加而加强抑制作用。结论 INH、RFP联合用药较低浓度对成骨细胞有抑制作用,因此,骨关节结核病灶清除术后,局部用药应该严格控制药物浓度。 展开更多
关键词 异烟肼 利福平 成骨细胞 碱性磷酸酶 Ⅰ型胶原
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Emdogain对共培养成骨样细胞及内皮细胞成骨及成血管基因表达的影响
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作者 王珊珊 XiaohuiRausch-Fan +3 位作者 OlehAndrukov 林毅 林李嵩 施斌 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2019年第1期32-39,共8页
目的:评价emdogain对直接与间接共培养条件下成骨样细胞和内皮细胞成骨及成血管基因表达的影响以及其间的相关性。方法:将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和成骨样细胞(MG63)按2∶1比例于12孔板内进行直接及间接共培养,并使用不同浓度(0、0.1、... 目的:评价emdogain对直接与间接共培养条件下成骨样细胞和内皮细胞成骨及成血管基因表达的影响以及其间的相关性。方法:将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和成骨样细胞(MG63)按2∶1比例于12孔板内进行直接及间接共培养,并使用不同浓度(0、0.1、1、10、50μg/mL)的emdogain共培养细胞72 h。采用细胞计数仪结合流式细胞仪评价细胞增殖情况,并通过荧光激活流式细胞分选技术分选共培养细胞。对分选后的成骨样细胞及内皮细胞采用实时荧光定量PCR分别检测成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、I型胶原蛋白(Col-1)及成血管相关基因血管内皮细胞生长因子(VEGF)、VEGF酪氨酸激酶受体1(Flt-1)、VEGF酪氨酸激酶受体2(KDR)、von Willebrand因子(vWF)、内皮细胞C蛋白受体(EPCR)、E选择素(E-Selectin)、促血管生成素2(Ang-2)的表达水平。采用SPSS24.0软件包对数据进行统计学处理。结果:在直接与间接共培养条件下,Emdogain对MG63及HUVEC细胞增殖的作用具有浓度依赖性。随着emdogain浓度增加,细胞增殖率逐渐下降。50μg/mL浓度的emdogain对MG63及HUVEC细胞增殖抑制作用最为明显。随着emdogain浓度增加,MG63表面ALP和Col-1表达水平逐渐增加;50μg/mL浓度条件下,表达水平最高且与其他组基因表达水平差异显著(P<0.01)。同一emdogain浓度条件下,直接共培养MG63表面ALP及Col-1表达水平均显著高于间接共培养(P<0.01)。除10μg/mL组外,直接共培养条件下,VEGF表达水平均显著高于间接共培养(P<0.01)。50μg/mL组直接共培养的HUVEC表面Flt-1、KDR、vWF、E-selectin基因表达水平显著高于间接共培养及直接共培养的其他各组(P<0.01)。间接共培养条件下,HUVEC表面EPCR及Ang-2基因表达水平显著高于直接共培养(P<0.05)。结论:Emdogain对共培养MG63和HUVEC增殖的作用具有浓度依赖性,50μg/mL可能是emdogain作用的关键浓度。在直接共培养条件下,50μg/mL emdogain抑制MG63及 展开更多
关键词 EMDOGAIN 成骨细胞 内皮细胞 直接共培养 间接共培养 细胞增殖 细胞分化 细胞交联
溶血磷脂酸刺激可影响成骨细胞表达结缔组织生长因子 预览
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作者 胡广 张开伟 徐远坤 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第19期2959-2964,共6页
背景:溶血磷脂酸可刺激上皮细胞和成肌细胞表达结缔组织生长因子2,但涉及的分子机制至今仍不清楚。成骨细胞是骨发育和骨折愈合中的重要细胞,其也表达溶血磷脂酸的受体,骨折局部高表达溶血磷脂酸和成骨细胞,且结缔组织生长因子2在骨折... 背景:溶血磷脂酸可刺激上皮细胞和成肌细胞表达结缔组织生长因子2,但涉及的分子机制至今仍不清楚。成骨细胞是骨发育和骨折愈合中的重要细胞,其也表达溶血磷脂酸的受体,骨折局部高表达溶血磷脂酸和成骨细胞,且结缔组织生长因子2在骨折愈合中发挥主要作用。目的:研究外源性溶血性磷脂酸对成骨细胞中结缔组织生长因子2表达水平的影响及其分子机制。方法:①体外培养MC3T3-E1细胞,将细胞分为对照组和实验组,对照组仅给予矿化诱导液,实验组在矿化诱导液中加入终浓度为20μmol/L的溶血磷脂酸,刺激0.5,1,2,4,6,8及12 h,提取RNA并检测结缔组织生长因子2 mRNA表达水平;②MC3T3-E1细胞预先经蛋白激酶A抑制剂(H-89)和蛋白激酶C抑制剂(Staurosporine)处理0.5 h,再加入溶血磷脂酸。定量PCR检测结缔组织生长因子2 mRNA表达水平、Western Blot法检测结缔组织生长因子2蛋白表达水平,Westernblot法和免疫荧光检测细胞蛋白激酶C转位情况。结果与结论:①溶血磷脂酸作用于MC3T3-E1细胞后,可迅速引起细胞内结缔组织生长因子2 mRNA和蛋白表达水平提高,刺激后2 h其表达量达到峰值,随后表达水平随时间逐渐降低,至8 h和12 h已基本恢复至刺激前的表达水平;②Staurosporine可明显减弱溶血磷脂酸刺激成骨细胞表达结缔组织生长因子2的能力;而H-89则可以使溶血磷脂酸刺激成骨细胞表达结缔组织生长因子2的能力进一步增强;③成骨细胞经溶血磷脂酸刺激15 min后,溶血磷脂酸可明显提高细胞膜蛋白激酶C表达水平,同时胞浆中蛋白激酶C表达水平降低;④结果提示,溶血磷脂酸可刺激成骨细胞表达结缔组织生长因子2,这一过程可能涉及蛋白激酶A和蛋白激酶C途径。 展开更多
关键词 溶血磷脂酸 骨折愈合 成骨细胞 骨形成 结缔组织生长因子 蛋白激酶A 蛋白激酶C 骨缺损
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尼尔样1型生长因子促进修复骨再生和治疗骨质疏松的应用潜力 预览
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作者 曹曦 崔伟 +2 位作者 陈跃平 冯洋 路通 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第8期1235-1240,共6页
背景:骨缺损再生修复是临床常见难题,骨组织的再生修复需要特定的微环境和生长因子参与。尼尔样1型生长因子(Nel-likemolecular1,Nell-1)是一种分泌性蛋白,同时也是是一种有效且无明显毒副作用的骨生长因子,目前大量研究表明Nell-1能够... 背景:骨缺损再生修复是临床常见难题,骨组织的再生修复需要特定的微环境和生长因子参与。尼尔样1型生长因子(Nel-likemolecular1,Nell-1)是一种分泌性蛋白,同时也是是一种有效且无明显毒副作用的骨生长因子,目前大量研究表明Nell-1能够用于促进骨再生修复,有望成为骨再生修复的新方法。目的:对Nell-1调控成骨机制及其在骨再生修复方面的应用和前景进行综述。方法:以“nell-1,nel-likemolecule1,nel-likeprotein1,neural EGF likeprotein1,bonerepairing,osteogenesis,osteogenic,regenerativemedicine”或“Nell-1,nell-1蛋白,nel样1型分子,神经源性表皮生长因子样分子1,骨生成,成骨作用,骨修复,再生医学”等作为检索词,利用PubMed、中国知网、万方数据库、embase进行检索,选择从1996年12月15日至2017年11月1日有关Nell-1生长因子与成骨及骨再生修复应用方面的文献资料,排除重复性研究。结果与结论:Nell-1的发现最早与颅缝早闭相关,后来被证实为一种有效的骨生长因子,其具有抗脂肪分化、抑制炎症反应和无明显毒副作用等优点。目前大量动物实验已证明Nell-1可应用于促进骨再生修复,除此之外,Nell-1同时还有作为治疗骨质疏松症有效药物的巨大潜力,有望在未来成为用于骨再生修复的新方法。 展开更多
关键词 骨和骨组织 成骨细胞 骨再生 组织工程 骨生长因子 成骨 骨修复 Nell-1蛋白 骨缺损 信号通路 骨形态发生蛋白 组织构建
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