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氧化铜纳米颗粒经p38和ERK信号通路诱导巨噬细胞自噬性损伤
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作者 吴琼 何会 +1 位作者 于超 张军 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期740-745,共6页
目的:分析氧化铜纳米颗粒(copper oxide nanoparticles,CuONPs)对Raw264.7巨噬细胞自噬的影响,并探讨调节自噬的相关信号通路。方法:用透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)观察CuONPs的形态特征;利用Raw264.7巨噬细... 目的:分析氧化铜纳米颗粒(copper oxide nanoparticles,CuONPs)对Raw264.7巨噬细胞自噬的影响,并探讨调节自噬的相关信号通路。方法:用透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)观察CuONPs的形态特征;利用Raw264.7巨噬细胞进行体外实验;不同浓度梯度的CuONPs处理巨噬细胞24 h,用MTS法检测细胞活力;TEM观察自噬小体的形成情况;自噬小体报告质粒GFP-LC3瞬时转染细胞,激光共聚焦显微镜观察CuONPs处理前后Raw264.7细胞胞质中GFP-LC3蛋白绿色点状聚集情况;利用Western blot检测细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达情况及相关的p38和ERK信号通路磷酸化水平。结果:CuONPs可显著抑制Raw264.7细胞活力,并呈一定的剂量依赖关系(F=35.987,P=0.000);TEM结果显示,CuONPs颗粒沉积于自噬体;激光共聚焦结果表明GFP-LC3转染细胞后,CuONPs处理组GFP-LC3点状聚集明显多于对照组,此外Western blot结果显示LC3-Ⅱ/Ⅰ表达水平明显呈剂量依赖性上升(F=156.585,P=0.000),上述结果说明CuONPs能促进巨噬细胞中自噬小体的生成;而且Western blot结果表明10μg/mL的CuONPs处理细胞,能明显上调p-p38、p-ERK蛋白水平,并呈现时间依赖性升高(p-p38:F=72.899,P=0.000;p-ERK:F=123.300,P=0.000)。结论:CuONPs能抑制细胞活力,并诱导巨噬细胞自噬活化,并且p38和ERK通路可能参与了自噬的分子调控。 展开更多
关键词 纳米氧化铜 巨噬细胞 细胞自噬 p38ERK信号通路
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