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陆地棉钾转运体基因GhHAK5启动子的克隆与功能分析 预览
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作者 晁毛妮 胡海燕 +4 位作者 王润豪 陈煜 付丽娜 刘庆庆 王清连 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期40-51,共12页
KUP/HAK/KT钾转运体基因的转录调控是植物响应低钾胁迫的一项重要机制。克隆和分析棉花钾转运体基因的启动子,不仅有助于了解其表达模式及调控机制,对于改良棉花的钾吸收特性也具有重要意义。陆地棉钾转运体基因GhHAK5是一个在根中特异... KUP/HAK/KT钾转运体基因的转录调控是植物响应低钾胁迫的一项重要机制。克隆和分析棉花钾转运体基因的启动子,不仅有助于了解其表达模式及调控机制,对于改良棉花的钾吸收特性也具有重要意义。陆地棉钾转运体基因GhHAK5是一个在根中特异性高表达的基因,其表达受低钾胁迫诱导,目前关于该基因启动子的功能还不清楚。本研究以陆地棉品种百棉1号为材料,通过PCR方法对GhHAK5上游2000bp启动子片段(pGhHAK5)进行克隆,并通过转化拟南芥、GUS组织定位和低钾诱导表达特性分析来研究其功能。结果表明, pGhHAK5除具有TATA-box和CAAT-box等基本顺式作用元件外,还含有多个响应于光、逆境胁迫、植物激素和生物钟等的顺式作用元件。pGhHAK5与雷蒙德氏棉pGrHAK5在重要调控元件的数量和位置分布上具有较高的一致性,均具有5个参与根特异性表达调控的元件(ATAAAAT)和1个参与低钾条件下转录调控的ARF转录因子结合位点(TGTCNN)。GUS组织化学染色结果显示,转基因拟南芥幼苗的叶脉和胚轴维管束组织染色较深,根系染色较浅;成熟期转基因拟南芥植株的根、叶脉和花萼维管束组织染色较深,茎和荚皮染色较浅,表明pGhHAK5驱动的GUS主要在拟南芥成熟的根和地上部维管束组织中表达。进一步低钾诱导表达特性分析表明, PGhHAK5驱动的GUS在拟南芥幼苗幼嫩根中的表达很弱,且其表达不受低钾胁迫诱导而增强,表明PGhHAK5可能是一个主要在成熟根中具有功能的低钾诱导型启动子。转录组分析和荧光定量PCR结果表明, GhHAK5主要在成熟的根中表达,且其表达受发育时期的影响,该结果与pGhHAK5驱动的GUS在拟南芥根中的表达结果一致。本研究结果有助于深入了解GhHAK5表达调控的分子机制,并为棉花钾吸收效率的提高及钾高效棉花品种的培育提供理论依据。 展开更多
关键词 启动子 维管束组织 钾转运体 低钾 陆地棉
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Analysis of the Promoter Region, Motif and CpG Islands in AraC Family Transcriptional Regulator ACP92 Genes of <i>Herbaspirillum seropedicae</i> 预览
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作者 Mihret Yirgu Mulugeta Kebede 《生命科学与技术进展(英文)》 2019年第6期150-164,共15页
Identification of promoters and their regulatory elements are the most important phases in bioinformatics. To understand the regulation of gene expression, identification, and analysis of promoters region, motif and C... Identification of promoters and their regulatory elements are the most important phases in bioinformatics. To understand the regulation of gene expression, identification, and analysis of promoters region, motif and CpG islands are the most important steps. The accurate prediction of promoter’s is basic for proper interpretation of gene expression patterns, construction and understanding of genetic regulatory system. Therefore, the objective of this study was to analyze the promoter region, motif such as a transcription factor and CpG islands in AraC family transcriptional regulator ACP92 genes of Herbaspirillum seropedicae. The analysis was carried out by identifying transcription start sites in ACP92 genome sequences taken from the H. seropedicae assembly of NCBI genome browser, and 29 ACP92 genes sequences. Accordingly, transcription start sites (TSS) were identified, and the result indicated that 37.9% had more than one TSS whereas only 62.1% had one TSS. In the analysis, seven motifs were identified from the thought sequences and MV6 was revealed the common promoter motif for all (100%) in H. seropedicae ACP92 gene that serves as binding sites for transcription factors which shared a minimum of 48.27%. Based on a common motif MV6 to find out similar motifs using TOMTOM from the databases of prokaryotes DNA, most of them are transcription factors of fur family. The others are bacterial histone-like protein family, matp and sigma-54 factor family also transcription factor families that are binding candidate to MV6. H. seropedicae ACP92 genes are CpG Island which implies that the regulation of gene expression plays an important role. 展开更多
关键词 Gene Expression MOTIFS Promoter TRANSCRIPTIONAL
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助剂对顺酐加氢制备γ-丁内酯催化剂页硅酸镍性能的影响 预览
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作者 夏晓丽 谭静静 +1 位作者 卫彩云 赵永祥 《工业催化》 CAS 2019年第3期25-32,共8页
采用蒸氨法制备含Mo、Ce、Zn助剂的页硅酸镍催化剂,考察助剂对催化剂催化顺酐加氢制备γ-丁内酯的影响。结合N2吸附-脱附、XRD、H2-TPR、NH3-TPD、TEM、XPS等表征和活性评价对催化剂的织构性质及其催化性能进行研究。结果表明,不同性质... 采用蒸氨法制备含Mo、Ce、Zn助剂的页硅酸镍催化剂,考察助剂对催化剂催化顺酐加氢制备γ-丁内酯的影响。结合N2吸附-脱附、XRD、H2-TPR、NH3-TPD、TEM、XPS等表征和活性评价对催化剂的织构性质及其催化性能进行研究。结果表明,不同性质的助剂对催化剂结构及其催化性能具有显著影响。助剂Mo的掺杂,提高催化剂中镍物种的还原,增加催化剂表面金属Ni0的数目,在金属和酸性位协同催化下,促进催化剂催化顺酐CO基加氢的能力,在反应温度160℃、氢气压力5MPa、反应时间180min条件下,γ-丁内酯产率可达21.3%,是未掺杂催化剂催化活性的1.5倍。助剂Zn和Ce的加入,降低催化剂酸性,进而降低其催化活性。 展开更多
关键词 催化剂工程 顺酐 页硅酸镍催化剂 催化加氢 助剂 Γ-丁内酯
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水稻OsTFL2基因启动子的克隆及功能验证 预览
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作者 陈立 张晓东 +6 位作者 王心怡 韦清源 李虎 綦熿松 刘芳 关和新 邱永福 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2188-2195,共8页
【目的】克隆水稻TFL2(OsTFL2)启动子序列,并分析其结构和功能,为深入研究OsTFL2基因对水稻开花和花发育的调控机理提供理论参考。【方法】采用同源克隆方法克隆OsTFL2基因启动子序列,利用PLACE和PlantCARE分析其结构和功能,并将其连接... 【目的】克隆水稻TFL2(OsTFL2)启动子序列,并分析其结构和功能,为深入研究OsTFL2基因对水稻开花和花发育的调控机理提供理论参考。【方法】采用同源克隆方法克隆OsTFL2基因启动子序列,利用PLACE和PlantCARE分析其结构和功能,并将其连接至携带β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因的pCAMBIA1301载体以构建pCAMBIA1301-Promoter植物表达载体,通过农杆菌介导转化水稻品种农垦58愈伤组织,通过对转基因植株进行GUS组织化学染色以分析该基因启动子的表达特性和调控功能。【结果】克隆获得的OsTFL2基因起始密码子上游启动子序列1.8 kb,该序列除含有真核生物典型启动子元件TATA-box和CAAT-box外,还含有花粉特异识别的顺式作用元件Pollen1lelat52(AGAAA)、开花基因转录相关的多功能转录因子CACTFTPPCA1(PACT,Y=C/T)、CCAAT box1(CCAAT)、DOFCORE(AAAG)和GATA box(GATA)、分生组织特异性元件CCGTCC-box及多个光诱导元件或光诱导相关元件如G-box、Box I、CATT-motif、GATA-motif和GT1-motif等,推测OsTFL2基因通过上述作用元件参与调控水稻花发育及开花。通过PCR检测共筛选获得16株阳性转基因植株,对其进行GUS组织化学染色,结果发现水稻的外颖、花、花药、柱头和子房中均可检测到明显的GUS色斑,而在叶片、茎尖和根尖无明显的GUS色斑,说明OsTFL2启动子能驱动GUS基因在水稻外颖、花药和子房中表达。【结论】OsTFL2基因启动子具有启动活性和组织表达特异性,可在一定程度上影响OsTFL2基因表达,对水稻花生长发育和开花发挥重要调控作用。 展开更多
关键词 水稻 开花 TFL2基因 启动子 转基因 GUS染色
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A methylated-DNA-binding complex required for plant development mediates transcriptional activation of promoter methylated genes
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作者 Qiang-Qiang Zhao Rong-Nan Lin +2 位作者 Lin Li She Chen Xin-Jian He 《植物学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第2期120-139,共20页
Although the mechanism of DNA methylationmediated gene silencing is extensively studied, relatively little is known about how promoter methylated genes are protected from transcriptional silencing. SUVH1, an Arabidops... Although the mechanism of DNA methylationmediated gene silencing is extensively studied, relatively little is known about how promoter methylated genes are protected from transcriptional silencing. SUVH1, an Arabidopsis Su(var)3-9 homolog, was previously shown to be required for the expression of a few promoter methylated genes. By chromatin immunoprecipitation combined with sequencing, we demonstrate that SUVH1 binds to methylated genomic loci targeted by RNA-directed DNA methylation. SUVH1 and its homolog SUVH3 function partially redundantly and interact with three DNAJ domain-containing homologs, SDJ1, SDJ2, and SDJ3, thus forming a complex which we named SUVH-SDJ. The SUVH-SDJ complex components are co-localized in a large number of methylated promoters and are required for the expression of a subset of promoter methylated genes. We demonstrate that the SUVHSDJ complex components have transcriptional activation activity. SUVH1 and SUVH3 function synergistically with SDJ1,SDJ2, and SDJ3 and are required for plant viability. This study reveals how the SUVH-SDJ complex protects promoter methylated genes from transcriptional silencing and suggests that the transcriptional activation of promoter methylated genes mediated by the SUVH-SDJ complex may play a critical role in plant growth and development. 展开更多
关键词 A methylated-DNA-binding COMPLEX REQUIRED for plant development mediates TRANSCRIPTIONAL activation of PROMOTER methylated GENES Figure DNA
鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区启动子活性鉴定与分析 预览
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作者 王宁 靳艳飞 +4 位作者 邢天宇 崔婷婷 黄佳新 闫晓红 李辉 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期57-67,共11页
文章采用基因定点突变和报告基因技术作A/T富集区启动子鉴定和转录调控分析,研究鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区是否具有启动子活性。PromPredict预测分析提示miR-17-92基因簇上游-388~-444 bp处可能是启动子区域。转录因子结合位点分... 文章采用基因定点突变和报告基因技术作A/T富集区启动子鉴定和转录调控分析,研究鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区是否具有启动子活性。PromPredict预测分析提示miR-17-92基因簇上游-388~-444 bp处可能是启动子区域。转录因子结合位点分析发现,A/T富集区存在3个E2F1潜在结合位点,分别位于miR-17-92基因簇上游-1 273 bp(结合位点1)、-1 186 bp(结合位点2)和-753 bp(结合位点3)处。报告基因活性分析发现,鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区具有启动子活性,其中miR-17-92基因簇上游-440/-1区域启动子活性最强。共转染分析显示,转录因子E2F1极显著抑制该A/T富集区启动子活性(P<0.01);进一步定点突变分析表明E2F1通过E2F1结合位点1和2抑制A/T富集区启动子活性。报告基因分析发现,与对A/T富集区启动子作用不同,E2F1促进miR-17-92基因簇宿主基因(MIR17HG)启动子活性。文章首次发现鸡miR-17-92基因簇上游存在一个新的转录调控区,对揭示鸡miR-17-92基因簇转录调控具有重要意义。 展开更多
关键词 miR-17-92基因簇 A/T富集区 启动子 E2F1
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Let-7家族启动子区多态性与胃癌的关联研究 预览
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作者 张麒 艾良 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第12期1489-1492,共4页
目的探讨let-7i启动子区rs10877887和let-7a-1/let-7f-1/let-7d簇启动子区rs13293512多态性与胃癌发生的关系。方法采用TaqMan探针法检测172例胃癌患者和224例健康对照中rs10877887和rs13293512的分布频率,运用χ2检验分析其与胃癌的相... 目的探讨let-7i启动子区rs10877887和let-7a-1/let-7f-1/let-7d簇启动子区rs13293512多态性与胃癌发生的关系。方法采用TaqMan探针法检测172例胃癌患者和224例健康对照中rs10877887和rs13293512的分布频率,运用χ2检验分析其与胃癌的相关性。结果胃癌患者中rs10877887CC、CT/CC基因型和C等位基因频率明显高于健康对照组(20.9%vs.13.4%,63.4%vs.53.1%,42.2%vs.33.3%),调整优势比(OR)分别为1.98、1.53和1.46(P=0.02、0.04和0.01)。rs13293512位点在胃癌组和健康对照组中的分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论let-7i启动子区rs10877887多态性与中国汉族人群胃癌的发病有关。 展开更多
关键词 微小RNA LET-7 启动子 单核苷酸多态性 胃癌
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白桦BpSPL8启动子的克隆及异源过表达BpSPL8对拟南芥耐旱性的影响
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作者 张勇 胡晓晴 +1 位作者 李豆 刘雪梅 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期67-75,共9页
【目的】目前对植物SPL8的基因功能研究主要集中在开花和育性方面,而其在干旱胁迫响应中的作用却鲜有报道。本文克隆、分析了白桦BpSPL8启动子,并研究了BpSPL8基因在拟南芥中响应干旱胁迫的功能。【方法】通过PCR克隆技术得到了白桦BpS... 【目的】目前对植物SPL8的基因功能研究主要集中在开花和育性方面,而其在干旱胁迫响应中的作用却鲜有报道。本文克隆、分析了白桦BpSPL8启动子,并研究了BpSPL8基因在拟南芥中响应干旱胁迫的功能。【方法】通过PCR克隆技术得到了白桦BpSPL8启动子;利用PLACE和PlantCARE软件对BpSPL8启动子顺式作用元件进行了预测。构建了BpSPL8启动子驱动GUS(β-葡萄糖苷酸酶编码基因)的植物表达载体,并采用浸花法将其转化至拟南芥中;继而利用GUS染色分析了BpSPL8启动子的组织表达模式;同时对BpSPL8在PEG处理下的表达水平进行了qRT-PCR分析。最后,以过表达BpSPL8拟南芥为材料来探究BpSPL8在干旱胁迫下的生物学功能。【结果】启动子元件分析显示,BpSPL8启动子中含有组织特异表达、光响应、激素响应及多个胁迫响应元件。GUS染色结果表明,BpSPL8启动子可在拟南芥的下胚轴、叶片、叶柄、根和花序中启动GUS基因表达。BpSPL8基因在PEG处理下的野生型白桦的根和叶片中均呈现先上调后下调的表达趋势。干旱胁迫下,过表达BpSPL8拟南芥的存活率和脯氨酸含量均显著低于野生型,丙二醛含量显著高于野生型;两个已知的抗逆基因DR29B和P5CS1在干旱处理后的野生型和转基因拟南芥中均上调表达;但在转基因拟南芥中呈现出延迟上调的表达模式。【结论】异源过表达白桦BpSPL8能够降低拟南芥的耐旱性,并在干旱胁迫下影响抗性基因DR29B和P5CS1的表达模式。 展开更多
关键词 启动子 BpSPL8 白桦 转基因 干旱
不同启动子调控的两种半纤维素酶分泌表达的比较 预览
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作者 熊海容 汪斌 +1 位作者 杨青 张莉 《中南民族大学学报:自然科学版》 CAS 2019年第1期39-44,共6页
为提高耐热木聚糖酶DSB和耐热甘露聚糖酶ManB在毕赤酵母GS115中分泌表达的酶活力,选择了3个调控蛋白表达能力较强的启动子PFLD1,PGAP和PTEF1,以PAOX1为参照,分别在毕赤酵母GS115中进行分泌表达.摇瓶发酵结果表明:PFLD1,PTEF1,PGAP和PAOX... 为提高耐热木聚糖酶DSB和耐热甘露聚糖酶ManB在毕赤酵母GS115中分泌表达的酶活力,选择了3个调控蛋白表达能力较强的启动子PFLD1,PGAP和PTEF1,以PAOX1为参照,分别在毕赤酵母GS115中进行分泌表达.摇瓶发酵结果表明:PFLD1,PTEF1,PGAP和PAOX1能有效介导DSB和ManB的分泌,但其胞外酶活相差较大.对于DSB,使用PAOX1时酶活力明显高于PFLD1,PTEF1和PGAP,最高酶活达846 U/mL;对于ManB,使用PFLD1时酶活力高于PAOX1,最高酶活达222 U/mL.故在GS115中分泌表达DSB时选用PAOX1,而分泌表达ManB时选用PFLD1. 展开更多
关键词 启动子 巴斯德毕赤酵母 分泌表达 半纤维素酶
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玉米转录因子NF-YB基因家族的生物信息学分析
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作者 徐志军 刘洋 +1 位作者 徐磊 安东升 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期3807-3816,共10页
为揭示玉米NF-YB基因家族的功能,本研究利用生物信息学手段,鉴定了玉米NF-YB基因家族,并系统的分析了该基因家族各蛋白的理化性质、基因的染色体定位、保守结构域、基因结构、系统进化、磷酸化位点、启动子和基因组织表达。结果表明:玉... 为揭示玉米NF-YB基因家族的功能,本研究利用生物信息学手段,鉴定了玉米NF-YB基因家族,并系统的分析了该基因家族各蛋白的理化性质、基因的染色体定位、保守结构域、基因结构、系统进化、磷酸化位点、启动子和基因组织表达。结果表明:玉米基因组中含有21个NF-YB基因,所编码的蛋白质均位于细胞核,且不含有跨膜结构。这些基因不均匀地分布于玉米的9条染色体上,均含有高度保守的结构域CBFD_NFYB_HMF,系统进化分析将其分为3类。磷酸化位点分析表明,玉米NF-YB家族存在着大量的磷酸化位点。启动子分析表明,基因家族启动子区域均含有大量的逆境胁迫应答顺式作用元件。组织表达分析发现,至少有18个基因可以进行表达,其中有5个基因表现出组织特异性,不同基因在不同组织、不同时期的表达具有时序性。玉米NF-YB基因家族核心结构域的保守性、基因功能的分化、启动子序列中的大量逆境相关元件、基因表达的差异性,可能都是玉米更好调控自身生长发育和适应逆境的结果。研究结果为进一步解析玉米NF-YB基因家族的功能提供参考。 展开更多
关键词 NF-YB基因家族 理化性质 基因结构 启动子 表达分析
柚皮素合成关键基因表达水平对目标产物积累水平的量化影响
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作者 焦亭亭 周景文 徐沙 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1256-1265,共10页
柚皮素是一种天然黄酮类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗病毒、预防动脉粥样硬化等多种药理活性,也是其他黄酮类化合物合成的重要前体,具有重要的应用价值。目前,微生物法生产柚皮素等黄酮类化合物由于代谢通路不平衡等原因导致产量较低,... 柚皮素是一种天然黄酮类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗病毒、预防动脉粥样硬化等多种药理活性,也是其他黄酮类化合物合成的重要前体,具有重要的应用价值。目前,微生物法生产柚皮素等黄酮类化合物由于代谢通路不平衡等原因导致产量较低,在很大程度上限制了其工业应用。文中以一株产柚皮素的酿酒酵母菌株Y-01为研究对象,利用启动子和拷贝数控制柚皮素合成代谢途径关键酶4-香豆酸:CoA连接酶(4CL)、查尔酮合成酶(CHS)和查尔酮异构酶(CHI)编码基因的表达水平,考察这些基因的表达水平对目标产物积累水平的量化影响。结果表明,柚皮素产量与4CL或CHI编码基因的表达量之间关联性较低,而与chs基因的表达量存在显著的正相关性。通过调控chs基因的表达水平,获得一株高产柚皮素的酿酒酵母工程菌株Y-04,产量较出发菌株Y-01提高了4.1倍。研究结果表明,CHS是柚皮素合成过程的关键调控靶点,合理调控CHS表达可以显著促进酿酒酵母积累柚皮素。相关结果为采用代谢工程强化微生物合成柚皮素等重要黄酮类化合物提供了重要的理论参考。 展开更多
关键词 柚皮素 表达量 关键基因 启动子 拷贝数
猪LPAR3基因克隆及其在子宫内膜细胞的表达 预览
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作者 廖妙容 吴龙 +6 位作者 张爱玲 钟玉宜 温丽娟 张豪 袁晓龙 李加琪 张哲 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期31-39,共9页
【目的】获得猪LPAR3基因完整mRNA及基因结构,研究其启动子活性;探究LPAR3基因在子宫内膜的转录调控及可能影响母猪产仔的机制。【方法】应用5’RACE和3’RACE技术获取LPAR3基因完整mRNA序列;预测5’调控区潜在的启动子转录因子结合位点... 【目的】获得猪LPAR3基因完整mRNA及基因结构,研究其启动子活性;探究LPAR3基因在子宫内膜的转录调控及可能影响母猪产仔的机制。【方法】应用5’RACE和3’RACE技术获取LPAR3基因完整mRNA序列;预测5’调控区潜在的启动子转录因子结合位点及CpG岛,构建不同长度的启动子双荧光素酶报告基因重组载体,与pRL-TK质粒共同转染至猪子宫内膜细胞,检测启动子活性;应用RT-qPCR比较LPAR3基因在妊娠第12天的二花脸猪和长大二元猪子宫内膜的相对表达量;应用亚硫酸氢钠修饰后测序比较LPAR3基因在妊娠第12天的二花脸猪和长大二元猪子宫内膜的甲基化状态。【结果】猪LPAR3 mRNA全长为2 127 bp,其中5’UTR和3’UTR的长度分别为202和860 bp,CDS区为1 065 bp。克隆获得包括LPAR3转录起始位点上游3 080 bp(–2 430/+650bp)的5’调控序列,分析预测显示该调控区不存在TATA box,存在GC元件、CPBP及糖皮质激素受体IR3等调控因子结合位点,且在–190/–84和–44/+651 bp处存在2个潜在CpG岛。成功构建9个不同长度的5’缺失报告重组载体并转染猪子宫内膜细胞。双荧光素酶活性检测结果显示,启动子P4(+454/+80 bp)的转录活性最高,其次是P6(–123/+80 bp)。RT-qPCR结果显示,妊娠第12天二花脸猪LPAR3基因在子宫内膜的表达量高于在其他组织的表达量,且极显著高于在妊娠第12天长大二元猪子宫内膜的表达量,LPAR3在2个猪种子宫内膜均处于低甲基化状态且差异不显著。【结论】猪LPAR3 mRNA全长为2 127 bp,妊娠第12天LAPR3基因在二花脸猪子宫内膜表达高于其在长大二元猪子宫内膜的表达,显示LPAR3可能参与了猪早期妊娠并影响产仔数。 展开更多
关键词 LPAR3基因 启动子 子宫内膜 妊娠 甲基化
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水貂DCT基因启动子的克隆及转录调控元件分析
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作者 王亚琪 胡露露 +4 位作者 王瑞宁 刘铮铸 巩元芳 李祥龙 彭永东 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期146-150,183共6页
为了找到水貂多巴色素异构酶(DCT)基因启动子活性区域及转录因子结合位点,试验采用PCR扩增与克隆,构建双荧光素酶报告基因重组质粒,分别转染到293T细胞和A375细胞,测定其活性,并利用在线软件对序列进行生物信息学分析,预测水貂DCT基因... 为了找到水貂多巴色素异构酶(DCT)基因启动子活性区域及转录因子结合位点,试验采用PCR扩增与克隆,构建双荧光素酶报告基因重组质粒,分别转染到293T细胞和A375细胞,测定其活性,并利用在线软件对序列进行生物信息学分析,预测水貂DCT基因核心启动子区域的转录因子结合位点。结果表明:得到的6个不同长度的启动子片段均具有明显的启动子活性,且-1 292~+113 bp区域活性最高,提示其为水貂DCT基因核心启动子区域;成功筛选出337 bp水貂DCT基因活性较高的启动子片段,发现转录因子特异性蛋白1(Sp1)可能是调控启动子活性的重要转录因子。 展开更多
关键词 水貂 启动子 DCT基因 克隆 活性
山梨B-box基因PuBBX24表达特性及其在童期调控中的功能分析
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作者 王日红 宋敏燕 +1 位作者 王然 杨英杰 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1458-1472,共15页
为了解PuBBX24基因在梨生长发育过程中的功能,以山梨(Pyrus ussuriensis Maxim.)实生苗为试材,分离PuBBX24及其启动子序列,qRT-PCR分析PuBBX24在山梨根、茎、花、叶片以及果实中的表达特性,对启动子顺式作用元件进行预测,获得PuBBX24启... 为了解PuBBX24基因在梨生长发育过程中的功能,以山梨(Pyrus ussuriensis Maxim.)实生苗为试材,分离PuBBX24及其启动子序列,qRT-PCR分析PuBBX24在山梨根、茎、花、叶片以及果实中的表达特性,对启动子顺式作用元件进行预测,获得PuBBX24启动子驱动GUS基因表达的转基因拟南芥并进行不同组织、不同生长发育阶段,以及ABA、非生物胁迫和不同光处理下PuBBX24基因启动子活性分析,同时在拟南芥中异源表达PuBBX24并验证其功能。结果表明,PuBBX24在山梨根、茎、叶、花以及果实中均有表达,但在茎中表达量最高,叶片表达量最低,且在由童期向成年期发育的叶片中表达水平逐渐降低。PuBBX24上游启动子序列中包含一系列响应激素、光、胁迫等顺式作用元件。而PuBBX24启动子驱动的GUS基因主要在转基因拟南芥叶片、下胚轴以及萼片中表达,且在叶片中的表达水平随童期向成年期的发育而逐渐降低,在根中表达不均匀,在柱头和花柄中表达水平较低,在角果中未检测到GUS活性。PuBBX24启动子显著响应ABA、光、低温、渗透以及盐胁迫处理,且PuBBX24的过量表达影响了转基因拟南芥植株童期—成年期阶段转变进程。这些结果表明,山梨PuBBX24可能参与ABA、光以及胁迫响应,同时在童期—成年期阶段转变过程中起负调控作用。 展开更多
关键词 山梨 PuBBX24 表达特性 启动子 童期
草莓ARF4基因启动子的克隆及转录活性分析 预览
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作者 董向向 王矢乔 +2 位作者 关宇涵 张志宏 李贺 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期513-521,共9页
草莓果实成熟的早晚,直接影响果农的收益。课题组前期研究发现,草莓ARF4基因能够调控草莓开花时间。启动子是基因转录的开关,其转录活性影响着基因表达的强弱。克隆ARF4基因启动子并分析其转录活性,对进一步明确ARF4基因的功能具有重要... 草莓果实成熟的早晚,直接影响果农的收益。课题组前期研究发现,草莓ARF4基因能够调控草莓开花时间。启动子是基因转录的开关,其转录活性影响着基因表达的强弱。克隆ARF4基因启动子并分析其转录活性,对进一步明确ARF4基因的功能具有重要意义。根据草莓基因组信息设计特异引物,克隆草莓ARF4基因启动子。使用Plant CARE在线软件,预测其序列上的顺式作用元件。将ARF4启动子进行分段缺失克隆,利用农杆菌介导的果实注射法及GUS组织染色,确定GUS基因表达的强弱。通过农杆菌介导的叶盘转化法,获得转proARF4::GUS基因草莓植株,利用GUS组织染色法分析启动子的组织表达特异性。对转基因草莓植株进行非生物胁迫处理,通过qRT-PCR方法确定影响ARF4基因启动子转录活性的因素。结果表明:在ARF4基因启动子序列上,除了存在基本的核心元件外,还包含一些光响应、胁迫响应、厌氧诱导及激素响应等作用元件。GUS组织染色结果显示,随着启动子序列长度逐渐变短,GUS基因表达变弱。在转proARF4::GUS基因草莓植株叶柄、嫩叶及新茎中GUS表达水平较高,且在嫩叶中表达量最高。在非生物胁迫处理下,IAA和GA可使GUS基因表达显著提高。这些结果提供了影响ARF4基因表达的相关因素,为调控草莓开花时间奠定了基础。 展开更多
关键词 草莓 ARF4 启动子 转录活性分析
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调控民猪ZBED6基因转录元件的筛选与分析 预览
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作者 张冬杰 刘洋 +2 位作者 汪亮 李忠秋 刘娣 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2019年第7期76-81,共6页
ZBED6是锌指蛋白家族的一员,在胎盘哺乳动物中极其保守,可通过对IGF2的调控参与骨骼肌生长。为进一步探究ZBED6基因自身的表达调控机制,本研究以民猪基因组DNA为模板,通过常规PCR扩增ZBED6基因启动子区系列截短片段,构建克隆质粒,通过... ZBED6是锌指蛋白家族的一员,在胎盘哺乳动物中极其保守,可通过对IGF2的调控参与骨骼肌生长。为进一步探究ZBED6基因自身的表达调控机制,本研究以民猪基因组DNA为模板,通过常规PCR扩增ZBED6基因启动子区系列截短片段,构建克隆质粒,通过双酶切和连接反应定向连入pGL3-basic载体,利用PK15细胞和双荧光素酶检测系统测定重组质粒的相对荧光素酶活性;利用在线软件预测启动子区的转录因子结合位点,使用重叠PCR定点缺失转录因子结合位点,构建突变载体并在PK15细胞中检测突变载体的相对荧光素酶活性。结果表明:ZBED6基因启动子区-2053~-1777 bp存在多个转录因子结合位点,尤其是-1808~-1777 bp,该片段缺失造成启动子活性下降(P<0.01);利用在线软件在该区间预测到3个转录因子HINFP、Adf-1和CREB3,经实验验证后发现这3个转录因子均可调控ZBED6基因的转录,其中Adf-1效果最为明显。据此推测,民猪ZBED6基因的转录调控机制较为复杂,其启动子区存在HINFP、Adf-1和CREB3等多个调控元件的结合位点。 展开更多
关键词 ZBED6基因 启动子 荧光素酶活性 重叠PCR 民猪
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猪SERPINC1基因对PCV2复制的效应及其转录调控 预览
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作者 王昌英 鹿红宇 +4 位作者 隋敏敏 王岩超 刘根 孙亿 姜运良 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1545-1553,共9页
旨在研究猪SERPINC1基因对PCV2复制的影响,并探究SERPINC1基因的转录调控。本研究以15头纯种的莱芜猪(LW)和15头大约克夏-长白杂交的商品猪(YL)为试验动物。每个品种分为2组:接毒组(10头)和对照组(5头)。对接毒组的猪肌肉注射3 mL 6.3&#... 旨在研究猪SERPINC1基因对PCV2复制的影响,并探究SERPINC1基因的转录调控。本研究以15头纯种的莱芜猪(LW)和15头大约克夏-长白杂交的商品猪(YL)为试验动物。每个品种分为2组:接毒组(10头)和对照组(5头)。对接毒组的猪肌肉注射3 mL 6.3×10^-3 TCID50的PCV2-SD毒株,对照组的猪肌肉注射3 mL的磷酸盐缓冲液。在前期转录组测序的基础上,分析SERPINC1基因对PCV2复制的效应,并分析检测SERPINC1基因启动子和转录活性。结果表明,过表达SERPINC1能显著抑制猪肺泡巨噬细胞(PAM)中PCV2的复制。分别克隆了LW和YL猪SERPINC1基因转录起始位点上游3 854 bp的序列,并进行启动子活性的分析,发现PCV2接毒后LW猪SERPINC1基因的启动子活性显著升高(P<0.05),而YL猪的启动子活性无显著变化。在SERPINC1基因的5′调控区找到4个调控该基因转录的关键区段,并对上述关键调控区中的4个多态性位点对SERPINC1基因启动子活性的影响进行了分析。综上表明,这4个多态位点均不影响SERPINC1基因的启动子活性。该研究结果为找到与猪抗PCV2有关的基因及分子标记奠定了基础。 展开更多
关键词 SERPINC1 PCV2 启动子
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中国水仙DFR基因启动子的克隆及功能
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作者 姚红 周平 +3 位作者 范雨昕 孙瑞琦 Muhammad Anwar 曾黎辉 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期993-998,共6页
为了解中国水仙花青素合成途径关键基因DFR(NtDFR)的表达调控以及中国水仙不能合成花青素的分子机制,采用染色体步移法从中国水仙中克隆NtDFR基因起始密码子上游962 bp的启动子序列.生物信息学分析结果表明启动子序列除包含TATA-box、CA... 为了解中国水仙花青素合成途径关键基因DFR(NtDFR)的表达调控以及中国水仙不能合成花青素的分子机制,采用染色体步移法从中国水仙中克隆NtDFR基因起始密码子上游962 bp的启动子序列.生物信息学分析结果表明启动子序列除包含TATA-box、CAAT-box等基本启动子元件外,还包含光调控元件、植物激素响应元件、胁迫响应元件等多个顺式作用元件.此外,该启动子序列还含有MYB转录因子结合位点.为验证启动子的表达特性,将NtDFR启动子取代植物表达载体pBI121上35S启动子,构建pBI121-pNtDFR::GUS载体,利用农杆菌转化烟草叶片瞬时表达,通过GUS组织染色法确定了克隆的启动子的活性.将中国水仙R2R3-MYB转录因子NtMYB2、NtMYB5分别和pBI121-pNtDFR::GUS共同注射烟草,定量PCR和GUS组织化学染色结果表明NtMYB2和NtMYB5都使NtDFR启动子诱导的烟草叶片GUS颜色变浅以及GUS基因表达量下降,表明NtMYB2和NtMYB5是NtDFR的抑制因子.本研究结果有助于了解中国水仙花青素合成途径的分子调控机制. 展开更多
关键词 中国水仙 二氢黄酮醇4-还原酶基因 启动子 功能鉴定
人WRAP53基因启动子区的生物信息学分析 预览
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作者 杨潮 曾旭芳 +3 位作者 张小艳 戴京 张欣宇 陈慧 《赣南师范大学学报》 2019年第3期73-77,共5页
人WRAP53基因隶属于WD重复蛋白家族,被发现在端粒酶的组装、卡哈尔体的形成和DNA损伤的修复等过程中发挥着重要作用,但WRAP53基因表达调控的分子机制尚不明确.利用生物信息学软件对人WRAP53基因近端启动子-2 000 bp~-1 bp区域的结构特... 人WRAP53基因隶属于WD重复蛋白家族,被发现在端粒酶的组装、卡哈尔体的形成和DNA损伤的修复等过程中发挥着重要作用,但WRAP53基因表达调控的分子机制尚不明确.利用生物信息学软件对人WRAP53基因近端启动子-2 000 bp~-1 bp区域的结构特征、转录因子结合位点和CpG岛进行预测分析.Promotor 2.0和NNPP均预测出人WRAP53β基因有2个启动子;JASPAR和AliBaba 2.1发现有众多转录因子潜在结合位点存在该序列上;CpG Plot、CpG Finder和MethPrimer软件均预测出人WRAP53基因启动子-2 000 bp~-1 bp区域存在1个CpG岛.对人WRAP53基因启动子区开展的生物信息学分析,有助于了解该基因启动子区的结构和功能,为后续开展人WRAP53基因表达调控机制研究奠定了基础. 展开更多
关键词 WRAP53 启动子 生物信息学
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MGMT is down-regulated independently of promoter DNA methylation in rats with all-trans retinoic acidinduced spina bifida aperta 预览
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作者 He-Nan Zhang Yi Guo +3 位作者 Wei Ma Jia Xue Wei-Lin Wang Zheng-Wei Yuan 《中国神经再生研究:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第2期361-368,共8页
O6-methylguanine DNA methyltransferase (MGMT), a DNA repair enzyme, has been reported in some congenital malformations, but it is less frequently reported in neural tube defects. This study investigated MGMT mRNA expr... O6-methylguanine DNA methyltransferase (MGMT), a DNA repair enzyme, has been reported in some congenital malformations, but it is less frequently reported in neural tube defects. This study investigated MGMT mRNA expression and methylation levels in the early embryo and in different embryonic stages, as well as the relationship between MGMT and neural tube defects. Spina bifida aperta was induced in rats by a single intragastric administration of all-trans retinoic acid on embryonic day (E) 10, whereas normal control rats received the same amount of olive oil on the same embryonic day. DNA damage was assessed by detecting γ-H2A.X in spina bifida aperta rats. Real time-polymerase chain reaction was used to examine mRNA expression of MGMT in normal control and spina bifida aperta rats. In normal controls, the MGMT mRNA expression decreased with increasing embryonic days, and was remarkably reduced from E11 to E14, reaching a minimum at E18. In the spina bifida aperta model, γ-H2A.X protein expression was increased, and mRNA expression of MGMT was markedly decreased on E14, E16, and E18. Bisulfite sequencing polymerase chain reaction for MGMT promoter methylation demonstrated that almost all CpG sites in the MGMT promoter remained unmethylated in both spina bifida aperta rats and normal controls, and there was no significant difference in methylation level between the two groups on either E14 or E18. Our results show that DNA damage occurs in spina bifida aperta rats. The mRNA expression of MGMT is downregulated, and this downregulation is independent of promoter DNA methylation. 展开更多
关键词 nerve REGENERATION NEURAL tube defects spina bifida aperta spinal cord ALL-TRANS retinoic acid O6-methylguanine DNA methyltransferase gene expression DNA methylation PROMOTER BISULFITE sequencing polymerase chain reaction NEURAL REGENERATION
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