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实时荧光环介导等温扩增技术检测猪肉中的假单胞菌 预览
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作者 李宁 张友雄 +5 位作者 吴清平 古其会 张银志 王加生 孙秀兰 张菊梅 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2019年第6期264-272,共9页
根据假单胞菌16S rDNA基因序列设计引物,并向反应体系中加入饱和型核酸染料Eva Green,利用实时荧光检测仪,建立假单胞菌属实时荧光环介导等温扩增技术(LAMP)。研究中对62株假单胞菌的16SrDNA基因通过DNAMAN软件进行序列比对后,针对共有... 根据假单胞菌16S rDNA基因序列设计引物,并向反应体系中加入饱和型核酸染料Eva Green,利用实时荧光检测仪,建立假单胞菌属实时荧光环介导等温扩增技术(LAMP)。研究中对62株假单胞菌的16SrDNA基因通过DNAMAN软件进行序列比对后,针对共有片段设计扩增引物。对扩增体系进行了优化,优化结果经电泳鉴定。通过12株假单胞菌和23株非假单胞菌进行特异性验证,并比较了实时荧光LAMP与普通LAMP的灵敏度,对人工污染样品的检出限进行了测定。结果表明,特异性验证中12株假单胞菌为阳性,23株非假单胞菌为阴性。实时荧光LAMP检测纯菌的灵敏度为36 CFU/mL,是普通LAMP灵敏度的10倍。人工污染样品的检出限为1.73×10^3 CFU/g。本研究中建立了一种检测冷鲜猪肉中假单胞菌属的方法,实现了多个菌种的同时检测,避免了单一菌种检测的局限性,该方法快速、准确、灵敏度高,可在2h内完成冷鲜猪肉中假单胞菌的检测。 展开更多
关键词 实时荧光环介导等温扩增 假单胞菌 检测 猪肉
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犬细小病毒实时荧光环介导等温扩增检测方法的建立 被引量:2
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作者 陈珍容 陈进会 +4 位作者 黄杰 龚永平 文继峰 郗立新 颜其贵 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2017年第5期577-581,共5页
参照GenBank中犬细小病毒(CPV)VP2基因保守区域序列设计合成特殊的内、外引物,在扩增反应体系中加入荧光染料SYBR GreenⅠ,通过恒温荧光检测仪Deaou-308C扩增检测,建立了一种快速检测CPV的实时荧光环介导等温扩增(LAMP)方法。结果显... 参照GenBank中犬细小病毒(CPV)VP2基因保守区域序列设计合成特殊的内、外引物,在扩增反应体系中加入荧光染料SYBR GreenⅠ,通过恒温荧光检测仪Deaou-308C扩增检测,建立了一种快速检测CPV的实时荧光环介导等温扩增(LAMP)方法。结果显示,这种方法对CPV具有特异性的扩增反应,对照病毒核酸的扩增结果均为阴性。灵敏度试验最低可检出3.72 copies/μL的病毒核酸。重复性试验结果表明,其检测重复性良好。对30份临床宠物犬的粪便样品进行检测,与免疫胶体金检测试纸方法进行比较,符合率为90%。将本方法初步应用于大熊猫粪便中犬细小病毒的检测,结果表明,从大熊猫基地采集的84份粪便样品中有16份为细小病毒阳性,阳性率为19.0%。本方法在63℃下恒温45 min可以完成检测,操作简单、灵敏度高、特异性强,通过恒温实时荧光检测仪可实时检测及自动判读检测结果,对大熊猫的早期诊断非常重要。 展开更多
关键词 犬细小病毒 实时荧光环介导等温扩增 大熊猫
新城疫病毒实时荧光RT-LAMP检测方法的建立 预览 被引量:4
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作者 陈兵 胡运发 +12 位作者 孙洁 陈书琨 刘建利 曾少灵 曹琛福 张彩虹 阮周曦 林庆燕 吕建强 杨俊兴 花群义 卢体康 秦智锋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第7期11-14,共4页
新城疫是影响家禽养殖业的重大动物疫病,建立现场快速分子学检测方法是其防控关键。借助热裂解法抽提病毒RNA,在筛选出最佳核酸染料Calcein的基础上,建立新城疫病毒(NDV)实时荧光反转录环介导等温扩增(rRT-LAMP)检测法,并对该法进... 新城疫是影响家禽养殖业的重大动物疫病,建立现场快速分子学检测方法是其防控关键。借助热裂解法抽提病毒RNA,在筛选出最佳核酸染料Calcein的基础上,建立新城疫病毒(NDV)实时荧光反转录环介导等温扩增(rRT-LAMP)检测法,并对该法进行特异性、敏感性及准确性分析。试验结果显示,本试验所建立的NDV-rRT-LAMP方法可有效鉴别NDV,其敏感性可检测至50个基因拷贝,与国家标准实时荧光定量RT-PCR检测法一致;该法特异性强,与AIV、IBV等常见禽呼吸道传染病病原无交叉反应。小规模田间试验显示,该法用于NDV的普查监测,结果可靠。结果表明,建立的NDV-rRT-LAMP检测法可满足NDV现场快速分子检测需求。 展开更多
关键词 新城疫病毒 实时荧光反转录环介导等温扩增 现场检测
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LAMP技术在感染乙脑病毒致倦库蚊混合样本检测中的应用 预览
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作者 郭晓霞 高剑 +3 位作者 李春晓 邢丹 董言德 赵彤言 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2019年第1期36-40,共5页
为建立媒介蚊虫自然感染种群样本携带病原体快速灵敏的检测技术,本研究将实验室经口感染乙脑病毒的致倦库蚊阳性样品和未感染乙脑病毒的阴性样品按一定比例混合成混合样本,分别采用环介导等温扩增技术(Loop Mediated Isothermal Amplifi... 为建立媒介蚊虫自然感染种群样本携带病原体快速灵敏的检测技术,本研究将实验室经口感染乙脑病毒的致倦库蚊阳性样品和未感染乙脑病毒的阴性样品按一定比例混合成混合样本,分别采用环介导等温扩增技术(Loop Mediated Isothermal Amplification,LAMP)和实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time Fluorescent Quantitative PCR,qPCR)检测方法,对感染乙脑病毒的致倦库蚊混合样本进行检测。结果显示:当阳性样本在混合样本中所占比例为0.01%时,LAMP仍然可检测到病原体;定量PCR的最低检出比例是阳性样本在混合样本中所占0.14%以上。通过进一步优化反应体系各组分的浓度、反应时间和温度,建立了灵敏性高的LAMP扩增方法。 展开更多
关键词 LAMP 乙脑病毒 混合样本
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