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蓖麻延伸因子基因的克隆与表达分析 预览
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作者 王芳 董美玲 +5 位作者 董乐 王云 朱国立 许珊珊 吕冬雪 王建颖 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期464-472,共9页
为探讨蓖麻延伸因子基因(RcEF-1α)作为参考基因进行相关研究的可行性,以蓖麻雌性花为试验材料,扩增RcEF-1α(GenBank登录号:XM002518027. 3)的编码序列(CDS),并将其亚克隆至原核表达载体pET32a(+)构建成重组载体p ET32a(+)-RcEF-1α;将... 为探讨蓖麻延伸因子基因(RcEF-1α)作为参考基因进行相关研究的可行性,以蓖麻雌性花为试验材料,扩增RcEF-1α(GenBank登录号:XM002518027. 3)的编码序列(CDS),并将其亚克隆至原核表达载体pET32a(+)构建成重组载体p ET32a(+)-RcEF-1α;将p ET32a(+)-RcEF-1α转化至大肠杆菌表达菌株BL21 (DE3)中进行优化表达,表达蛋白经纯化后进行Western blot验证。结果表明,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)可诱导一个分子量约66 kD的特异蛋白;采用纯化的表达蛋白免疫新西兰白兔制备抗RcEF-1α的多克隆抗血清,用多克隆抗血清进行Western blot验证,发现多克隆抗血清具有针对RcEF-1α的特异性,经ELISA检测,其效价为1∶51 200;以抗血清为一抗,通过Western blot分析RcEF-1α在时空条件一致且正常生长的根、茎、叶、雌花、雄花和果实中的表达量,结果显示,蓖麻各组织中RcEF-1α蛋白质的含量存在显著差异,其中雌花和雄花中的含量显著高于其他组织。RT-qPCR分析结果表明,蓖麻各组织中RcEF-1αmRNA差异不显著。本研究结果为蓖麻功能基因表达分析参考基因的筛选提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 蓖麻 转录延伸因子-1α 基因克隆 原核表达 组织表达
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布氏鲳鲹GHRH基因克隆、组织和胚胎表达模式
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作者 朱凡 王茜 +5 位作者 李岩强 周智 王海洋 叶恒振 骆剑 陈国华 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1969-1976,共8页
促生长激素释放激素(growth hormone releasing hormone, GHRH)主要生物学功能是刺激垂体细胞分泌生长激素,已被证实是动物体生长轴的重要调控因子之一,布氏鲳鲹是一种生长快速的海洋鱼类,为了揭示其代谢旺盛的调节机制,本研究从GHRH入... 促生长激素释放激素(growth hormone releasing hormone, GHRH)主要生物学功能是刺激垂体细胞分泌生长激素,已被证实是动物体生长轴的重要调控因子之一,布氏鲳鲹是一种生长快速的海洋鱼类,为了揭示其代谢旺盛的调节机制,本研究从GHRH入手,利用RACE技术和qPCR方法对布氏鲳鲹GHRH基因进行了克隆、组织和胚胎表达模式研究。实验结果显示,布氏鲳鲹GHRH基因cDNA序列全长1019bp,5’UTR、3’UTR长度分别为327 bp和164 bp,开放阅读框528 bp,共编码175个氨基酸;同源性分析结果表明,布氏鲳鲹GHRH基因与其它鲈形目鱼类的同源性在91%以上。布氏鲳鲹GHRH基因的表达区域大多都集中在中枢系统,其中下丘脑表达量最高;GHRH在受精卵期到后续发育过程中均检测到表达,其表达水平在仔鱼期达到最高。序列分析、组织及胚胎表达的结果表明,布氏鲳鲹GHRH的调节模式仍然可能通过下丘脑调节垂体释放GH,GHRH在个体发育的较早阶段即开始发挥作用。本研究掌握了布氏鲳鲹GHRH基因的基本规律,为进一步研究生长轴的调控提供了理论参考。 展开更多
关键词 布氏鲳鲹 GHRH基因 基因克隆 组织表达 胚胎表达
藏绵羊HMOX1基因表达及其多态性与低氧适应性的关联分析
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作者 何建文 张伟 +4 位作者 刘秀 李少斌 王继卿 胡江 罗玉柱 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期441-448,共8页
血红素加氧酶1(heme oxygenase 1, HMOX1)是血红素加氧酶家族的应激诱导型酶,在机体低氧胁迫代谢调控过程中扮演着重要角色。藏绵羊(Ovis aries)在长期进化过程中形成了独特的低氧适应策略来维持自身的氧平衡。为了探讨HMOX1基因的组织... 血红素加氧酶1(heme oxygenase 1, HMOX1)是血红素加氧酶家族的应激诱导型酶,在机体低氧胁迫代谢调控过程中扮演着重要角色。藏绵羊(Ovis aries)在长期进化过程中形成了独特的低氧适应策略来维持自身的氧平衡。为了探讨HMOX1基因的组织表达及其第三外显子(Exon3)区域多态性与藏绵羊高原低氧适应的关系,以寻找与藏绵羊低氧适应相关的分子标记,本研究以不同海拔地区的藏绵羊和湖羊(对照组)为研究对象,利用q RT-PCR及PCR-单链构象多态性(PCR-single-strand conformation polymorphism, PCR-SSCP)方法检测HMOX1基因的组织表达,以及Exon3区域多态位点,分析不同基因型及等位基因与绵羊血液指标的相关性,以及SNPs与绵羊血液指标的关联性。结果表明,HMOX1基因在藏绵羊和湖羊各组织中均有表达。其中同一品种内,HMOX1在藏绵羊脾脏中高表达(P<0.01),其次在肝、肾脏和背最长肌中表达量也较高(P<0.05);而在湖羊中,HMOX1在肺脏和脂肪中高表达(P<0.01),其次在脾脏、肾脏及肝脏中的表达量也较高(P<0.05)。2个品种间同一组织表达比较结果显示,HMOX1基因在肺、脂肪中的表达量差异极显著(P<0.01)。HMOX1基因Exon3区检测到4个SNPs位点和A、B及C 3个等位基因;通过2个品种间不同基因型比较发现,湖羊的AB型个体血红蛋白含量(hemoglobin, HGB)和红细胞压积(hematokrit, HCT)值明显低于藏绵羊的其他基因型(P<0.01),藏绵羊的AA和BB型个体的HGB和HCT值显著高于AB型(P<0.01),AC型血氧饱和度(oxygen saturation, SO2)值显著高于AA和BB型个体;而c.3775G>A位点上MM基因型个体的SO2、HGB、HCT值显著高于NN基因型(P<0.05)。由此说明AA、BB和AC基因型的c.3775G>A位点变异与血液指标存在相关性,且为G时更有利于对低氧环境的适应。因此,HMOX1基因可作为低氧适应的候选基因,为探索藏绵羊低氧适应分子机制提供基础资料。 展开更多
关键词 藏绵羊 血红素加氧酶1基因(HMOX1) 组织表达 多态性 血液分析
小尾寒羊GnRH基因组织表达、多态性及其与产羔性状关联分析
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作者 寸静宇 刘秋月 +6 位作者 王翔宇 狄冉 胡文萍 张效生 张金龙 赵永聚 储明星 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期73-80,共8页
为揭示GnRH基因在小尾寒羊下丘脑-垂体-卵巢轴(Hypothalamic-pituitary-ovarian axis,HPOA)中的表达规律、多态性及其与产羔数的关系,深入了解其对小尾寒羊多羔的作用,采用实时荧光定量PCR技术对6只小尾寒羊(FecB++型单、多羔母羊各3只... 为揭示GnRH基因在小尾寒羊下丘脑-垂体-卵巢轴(Hypothalamic-pituitary-ovarian axis,HPOA)中的表达规律、多态性及其与产羔数的关系,深入了解其对小尾寒羊多羔的作用,采用实时荧光定量PCR技术对6只小尾寒羊(FecB++型单、多羔母羊各3只)的生殖组织及脑组织中GnRH基因的表达谱进行分析,同时采用Sequenom MassARRAY~?SNP技术对380只小尾寒羊和共380只的小尾寒羊、滩羊、苏尼特羊、策勒黑羊、湖羊和草原型藏羊GnRH基因2个单核苷酸多态性位点(Single nucleotide polymorphisms,SNPs)的进行多态性检测,并与小尾寒羊产羔数进行关联分析。结果显示,GnRH基因在下丘脑、卵巢和子宫组织均有表达,其中在下丘脑高表达。在小尾寒羊多羔群体中,GnRH基因在卵巢、大脑、下丘脑、垂体的表达均极显著高于单羔群体(P<0.01),暗示其可能参与了小尾寒羊多羔性状调控。分型发现GnRH基因2个位点基因型频率和等位基因频率在单、多羔品种间差异均不显著(P>0.05)。关联分析表明,GnRH基因的2个SNPs位点的多态性与小尾寒羊各胎产羔数差异均不显著(P>0.05);2个SNPs在所有绵羊品种中均表现为低度多态(PIC<0.25);卡方适合性检验表明,2个SNPs在各个绵羊品种中均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。 展开更多
关键词 绵羊 多羔 GnRH基因 组织表达 SNP 关联
山麻鸭SHH基因克隆和组织表达 预览
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作者 李秀金 陈永浩 +5 位作者 孙敬帅 石逸夫 林晓冰 欧阳宏佳 黄运茂 田允波 《仲恺农业工程学院学报》 CAS 2019年第2期1-5,共5页
本研究旨在克隆鸭SHH基因了解其组织表达情况,以山麻鸭为试验材料,采集下丘脑、垂体和卵巢组织样品,提取RNA逆转录后进行SHH基因克隆,并采用实时荧光定量PCR方法检测其表达水平.本试验克隆获得山麻鸭SHH基因cDNA序列878bp,包含了5′UTR1... 本研究旨在克隆鸭SHH基因了解其组织表达情况,以山麻鸭为试验材料,采集下丘脑、垂体和卵巢组织样品,提取RNA逆转录后进行SHH基因克隆,并采用实时荧光定量PCR方法检测其表达水平.本试验克隆获得山麻鸭SHH基因cDNA序列878bp,包含了5′UTR113bp和编码序列765bp,编码255个氨基酸.氨基酸序列同源性比对发现,山麻鸭SHH基因与其他禽类的同源性较高,在物种间的保守性高.山麻鸭SHH基因在下丘脑表达量显著高于垂体和各级卵泡组织(P<0.01);而在大黄卵泡中表达极显著低于大白卵泡和小黄卵泡(P<0.01).本研究克隆获得SHH基因部分序列并检测其组织表达规律,为后续功能研究打下基础. 展开更多
关键词 山麻鸭 SHH 基因克隆 组织表达
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芝麻赤霉素合成相关基因鉴定与表达分析 预览
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作者 盛晨 张艳欣 +5 位作者 于景印 高媛 黎冬华 周瑢 张秀荣 王林海 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期399-408,共10页
赤霉素的生物合成是多种酶促反应的过程,与植株发育、逆境响应密切相关。为分析芝麻基因组中赤霉素合成相关基因的分布、结构和活性特征,本研究以芝麻基因组序列和不同组织转录组为对象,通过生物信息学方法,从中共鉴定出32个赤霉素合成... 赤霉素的生物合成是多种酶促反应的过程,与植株发育、逆境响应密切相关。为分析芝麻基因组中赤霉素合成相关基因的分布、结构和活性特征,本研究以芝麻基因组序列和不同组织转录组为对象,通过生物信息学方法,从中共鉴定出32个赤霉素合成相关基因,分属7个不同的基因家族,分布在除5号染色体外芝麻所有的染色体上。不同基因家族蛋白质肽链长度存在较大差异,其中CPS家族的蛋白质序列最长,平均包含776个氨基酸残基;KAO家族蛋白序列长度的变异最大,在401~834个氨基酸之间。所有芝麻赤霉素合成相关基因编码的蛋白质预测为亲水性蛋白。与拟南芥、水稻、大豆、葡萄、高粱、番茄等物种相比,芝麻中赤霉素合成相关基因数目处于中等水平,但CPS家族中芝麻的基因数目明显多于其他物种,进化分析表明,在分析的7个物种中,芝麻与番茄具有较近的进化关系。在不同组织中,7个相关基因家族表达模式不同。KS家族基因在种子、茎尖和叶片中表达相对较高;CPS家族基因在心皮和种子中活性较强,但在茎尖和叶片中几乎没有表达;KAO和KO家族基因在不同组织中整体上具有相对较高的活性,而KS、GA3ox家族的基因在不同组织中整体表达量较低。就不同组织而言,种子中的GA合成相关基因活性整体较高;而在根尖、茎尖、叶片等与芝麻植株形态建成密切相关的3个组织中,这些基因表达以根尖较突出、其次为茎尖,在叶片中的活性整体较低。本研究为解析芝麻赤霉素合成相关基因的结构特征及其在不同组织中的作用特点提供了基因信息和理论参考。 展开更多
关键词 芝麻 赤霉素基因 进化 组织 基因表达
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瘤背石磺钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅳ(CaMKⅣ)基因的克隆及组织表达 预览
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作者 梁威 杨铁柱 +3 位作者 沈和定 许国绿 顾冰宁 薛宝宝 《水产学报》 CSCD 北大核心 2019年第11期2336-2346,共11页
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅳ(CaMKⅣ)是一种广泛存在于真核生物中的调控因子,在生物体内具有多种生理功能。为了探究瘤背石磺中CaMKⅣ的作用和分子机制,为进一步阐述CaMKⅣ的生理功能提供科学的理论依据。本实验以瘤背石磺神经节为实... 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅳ(CaMKⅣ)是一种广泛存在于真核生物中的调控因子,在生物体内具有多种生理功能。为了探究瘤背石磺中CaMKⅣ的作用和分子机制,为进一步阐述CaMKⅣ的生理功能提供科学的理论依据。本实验以瘤背石磺神经节为实验材料,利用RACE-PCR技术克隆得到CaMKⅣ基因的cDNA序列,并进行生物信息学分析和qRT-PCR实验。结果显示,瘤背石磺CaMKⅣ基因的cDNA全长1603bp,开放阅读框为1032bp,5′非编码区315bp,3′非编码区256bp,共编码343个氨基酸;预测该基因编码的多肽链原子数量是5490,分子量约为3.87ku,理论等电点6.12,分子式为C1741H2768N452O514S15,N端信号肽由1~29个氨基酸组成。氨基酸序列比对及系统进化树结果显示,瘤背石磺CaMKⅣ基因与加州海兔、光滑双脐螺CaMKⅣ基因的亲缘关系最为接近,其系统进化分析与传统的形态学分类相吻合。荧光定量PCR结果显示,CaMKⅣ基因在各个组织均有表达,其中在腹足的相对表达量最高,其次是背部皮肤、口器,而在神经节组织、蛋白腺、肠、肝胰腺等脏器组织的相对表达量较低,初步推测,该基因在瘤背石磺的神经调节中发挥重要作用,或为生物机体感知外界环境变量因素的分子基础。本实验为今后进一步了解瘤背石磺神经结构生理功能的调节以及与CaMKⅣ基因功能研究奠定理论支撑,也为探究海洋动物由海洋向陆地进化过程中对环境的适应机制提供参考。 展开更多
关键词 瘤背石磺 CaMKⅣ 基因克隆 实时荧光定量PCR 组织表达分析
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厚壳贻贝MyD88-4基因的生物学特性及其对沙氏弧菌的免疫应答 预览
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作者 梁箫 刘钰珠 +2 位作者 陈珂 李一峰 杨金龙 《水产学报》 CSCD 北大核心 2019年第11期2347-2358,共12页
为理解髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)基因的生物学特性以及对细菌胁迫的响应,本研究克隆了厚壳贻贝MyD88基因(命名为McMyD88-4)cDNA全长序列,其全长3 930 bp,开放阅读框2 607 bp,编码868个氨基酸。其中,13~... 为理解髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)基因的生物学特性以及对细菌胁迫的响应,本研究克隆了厚壳贻贝MyD88基因(命名为McMyD88-4)cDNA全长序列,其全长3 930 bp,开放阅读框2 607 bp,编码868个氨基酸。其中,13~109位的氨基酸序列为死亡结构域(death domain,DD),347~481位的氨基酸序列为TIR(toll/interleukin-1 receptor)结构域,TIR结构域包含3个高度保守的区域Box1、Box2和Box3;McMyD88-4蛋白的空间结构包含6个α螺旋(α-helix)和4个β折叠(β-sheet)。同源性分析显示,McMyD88-4蛋白序列与长牡蛎MyD88最相似,其一致性和相似性分别为60%和77%;其次,与虾夷扇贝、海湾扇贝和菲律宾蛤仔相似度较高,其一致性和相似性分别为40%~51%和58%~67%。系统进化树结果显示,McMyD88-4先与长牡蛎和扇贝聚为一支,然后与黑腹果蝇聚为一支,脊椎动物单独聚为一支。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测发现,McMyD88-4基因在厚壳贻贝各组织和器官中均有表达,其中在外套膜和鳃中的表达量最高,而血细胞中表达量最低。厚壳贻贝经沙氏弧菌感染后,McMyD88-4基因表达量在免疫相关组织中急剧上升,分别在感染后3和6 h达到峰值,且在消化腺中的上调水平显著高于鳃和外套膜。研究表明,McMyD88-4在厚壳贻贝抵御外界病原体侵染过程中,尤其是弧菌感染方面发挥重要作用。 展开更多
关键词 厚壳贻贝 髓样分化因子88(MyD88) 基因克隆 组织表达 弧菌感染
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绵羊SMAD1基因组织表达及其多态性与产羔数关联分析 预览
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作者 田志龙 汤继顺 +4 位作者 孙庆 王玉琴 张效生 张金龙 储明星 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期755-766,共12页
【目的】绵羊产羔数是一个极其复杂的性状,受诸多因素影响。绵羊排卵数是最重要的因素之一,而SMAD蛋白在哺乳动物卵泡发育和颗粒细胞生长分化过程中发挥着重要作用。因此本文基于前期绵羊基因组重测序数据,深入研究SMAD家族成员1 (SMAD ... 【目的】绵羊产羔数是一个极其复杂的性状,受诸多因素影响。绵羊排卵数是最重要的因素之一,而SMAD蛋白在哺乳动物卵泡发育和颗粒细胞生长分化过程中发挥着重要作用。因此本文基于前期绵羊基因组重测序数据,深入研究SMAD家族成员1 (SMAD family member 1, SMAD1)基因在不同繁殖力小尾寒羊组织表达模式,并探讨其多态性与绵羊产羔数的关系,以揭示其影响产羔数的机制,为绵羊分子育种提供科学依据。【方法】首先,采用反转录PCR技术检测SMAD1基因在不同繁殖力小尾寒羊群体大脑,小脑,下丘脑,垂体,子宫,卵巢,输卵管,心脏,肝脏,脾脏,肺脏,肾脏,肾上腺,甲状腺,大肠,小肠,胰腺,瘤胃,肾脂19种组织的表达模式,然后利用实时荧光定量PCR技术检测SMAD1基因在不同繁殖力小尾寒羊下丘脑,垂体,子宫,卵巢,输卵管5种繁殖组织的相对表达量。随后采用Sequenom MassARRAY?SNP技术对SMAD1基因5个单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism, SNP)位点在小尾寒羊(n=380)、湖羊(n=101)、苏尼特羊(n=21)、草原型藏羊(n=161)、策勒黑羊(n=52)、滩羊(n=22)6个绵羊品种中进行基因型检测,计算其群体遗传学指标,利用SPSS19.0软件分析5个SNPs与小尾寒羊产羔数的相关性。【结果】PCR结果显示,SMAD1基因在不同繁殖力小尾寒羊全身性组织均有表达,在小尾寒羊单羔群体卵巢的表达量极显著高于多羔群体(P<0.01),小尾寒羊单羔群体下丘脑、垂体的表达量显著高于多羔群体(P<0.05);基因分型结果表明,g.12485895A>G,g.12487558G>A和g.12487190G>T位点在单、多羔绵羊品种中基因型和等位基因频率均差异显著(P<0.05);而g.12508874T>C和g.12487467A>G位点在单、多羔绵羊品种中基因型和等位基因频率均差异不显著(P>0.05);群体遗传学分析表明,g.12485895A>G、g.12487558G>A、g.12508874T>C、g.12487467A>G、g.12487190G>T位点在小尾寒羊、湖羊、策勒黑羊、苏尼特 展开更多
关键词 绵羊 SMAD1基因 组织表达 SNP分型 产羔数
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湘村黑猪sirt2基因多态性及其与肉质性状的关联分析和组织表达研究 预览
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作者 崔清明 张星 +9 位作者 彭英林 高峰 陈晨 邓缘 任慧波 胡雄贵 朱吉 罗璇 刘莹莹 左剑波 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第4期1086-1093,共8页
本研究旨在探索沉默信号调节子家族(silent information regulator 1-7,SIRT1-7)sirt2基因在湘村黑猪不同组织间的表达及其多态性与肉质性状间的关联性,以期寻找与湘村黑猪肉质性状相关的分子标记。采用PCR-RFLP方法和基因测序技术对湘... 本研究旨在探索沉默信号调节子家族(silent information regulator 1-7,SIRT1-7)sirt2基因在湘村黑猪不同组织间的表达及其多态性与肉质性状间的关联性,以期寻找与湘村黑猪肉质性状相关的分子标记。采用PCR-RFLP方法和基因测序技术对湘村黑猪sirt2基因多态位点进行分析,采用实时荧光定量PCR技术对sirt2基因在湘村黑猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺、后腿肌和背最长肌8个组织中的相对表达量进行分析,利用SAS 9.4软件对sirt2基因突变位点不同基因型与肌肉色值、pH 45 min、pH 24 h、滴水损失、失水率、肌内脂肪、嫩度和眼肌面积进行关联分析。结果显示,在湘村黑猪sirt2基因第8外显子扩增片段中的240 bp处发现1处C→T碱基突变,编码氨基酸由精氨酸(Arg)变为半胱氨酸(Cys),为错义突变,并形成CC、CT和TT3种基因型,CC基因型为优势基因型,C为优势等位基因,经χ^2检验表明该突变位点偏离哈代-温伯格平衡;该位点群体纯合度较高,有效等位基因数为1.301,多态信息含量为0.205,为低度多态(PIC<0.25)。基因多态性与肉质性状关联分析结果表明,TT基因型肉色L*值和滴水损失显著低于CC和CT基因型(P<0.05),CC基因型失水率显著高于CT和TT基因型(P<0.05)。sirt2基因在湘村黑猪8个组织中均有表达,其中在背最长肌中相对表达量最高,与肺脏中表达量差异不显著(P>0.05),但显著高于心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胰腺和后腿肌(P<0.05),且心脏、肝脏、脾脏、肾脏和胰腺中相对表达量差异均不显著(P>0.05)。本试验结果表明,sirt 2基因对湘村黑猪肉质性状的发育有一定影响,可作为影响湘村黑猪肉质性状的候选基因进行深入研究。 展开更多
关键词 湘村黑猪 sirt2基因 肉质性状 组织表达 关联分析
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绒毛组织中肝细胞生长因子和转化生长因子-β1与稽留流产的关系 预览
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作者 石春燕 《中国性科学》 2019年第2期99-101,共3页
目的探讨绒毛组织中肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)与稽留流产的关系。方法选择2017年1月至2018年1月江苏大学附属医院诊治的600名受检者作为研究对象,将其中已经免疫组化染色法确诊的300例稽留流产患者设为研究组,将... 目的探讨绒毛组织中肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)与稽留流产的关系。方法选择2017年1月至2018年1月江苏大学附属医院诊治的600名受检者作为研究对象,将其中已经免疫组化染色法确诊的300例稽留流产患者设为研究组,将300例正常早孕女性设为对照组。采用半定量法检测两组受检者HGF、TGF-β1表达水平,并就两组受检者的HGF、TGF-β1表达水平及其在同一绒毛组织中的相关性进行统计学分析。结果①研究组受检者绒毛组织中HGF阳性表达率(22.7%)明显低于对照组受检者(42.7%),其差异具有统计学意义(P<0.05);两组受检者绒毛组织中的TGF-β1阳性表达率之间差异无统计学意义(P>0.05);②研究组受检者的同一绒毛组织中HGF、TGF-β1表达相关系数是0.458,P<0.05,显示HGF、TGF-β1表达之间存在正相关关系。结论研究组受检者的绒毛组织中HGF表达水平明显低于对照组受检者,而TGF-β1可以调控HGF表达水平的方式参与稽留流产的产生和进展。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 绒毛组织 正常早孕女性 转化生长因子-Β1 稽留流产 表达水平 相关性
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绵羊KISS1基因组织表达及其多态性与产羔数关联分析 预览
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作者 安雪姣 赵生国 +4 位作者 潘章源 文禹粱 田志龙 蔡原 储明星 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2019年第6期45-50,共6页
为研究 KISS1基因在常年发情的小尾寒羊和季节性发情的草地型藏羊中的表达模式,以及 KISS1基因多态性与绵羊繁殖之间的关系,实验采用 qPCR技术对比分析 KISS1基因在 2个品种绵羊的 10种繁殖相关组织中的表达差异,同时利用 Sequenom Mass... 为研究 KISS1基因在常年发情的小尾寒羊和季节性发情的草地型藏羊中的表达模式,以及 KISS1基因多态性与绵羊繁殖之间的关系,实验采用 qPCR技术对比分析 KISS1基因在 2个品种绵羊的 10种繁殖相关组织中的表达差异,同时利用 Sequenom MassARRAY SNP 技术对常年发情绵羊(小尾寒羊、策勒黑羊和湖羊)和季节性发情绵羊(滩羊、苏尼特羊和草地型藏羊)KISS1基因 2 个 SNPs 位点多态性进行检测,并与小尾寒羊产羔数进行关联分析。qPCR 结果显示:KISS1基因在小尾寒羊下丘脑、大脑、垂体和甲状腺中的表达量高于草原型藏羊(P<0.05);分型结果表明,g.1317523C>T 位点基因型频率和等位基因频率在常年发情和季节性发情绵羊品种间差异均达到极显著水平(P<0.01);群体遗传学分析表明,g.1317523C>T 位点在 6 个绵羊群体中均表现为中度多态(0.25<PIC<0.5);卡方适合性检验表明,g.1317523C>T 位点在小尾寒羊、滩羊、苏尼特羊和湖羊中均处于哈代温伯格平衡状态(P>0.05),g.1311578G>T 位点在苏尼特羊和湖羊中处于哈代温伯格平衡状态(P>0.05);关联分析表明,这 2个 SNPs位点与小尾寒羊前 3胎产羔数均无显著关联(P>0.05),但 g.1311578G>T 位点 TT 型各胎产羔数均大于 GT 和 GG 型。综上, KISS1基因与绵羊的季节性繁殖密切相关,并且 g.1311578G>T 位点对绵羊产羔性状有潜在调控作用。 展开更多
关键词 绵羊 KISS1基因 组织表达 SNP 分型 季节性繁殖 产羔数
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山羊CXCR1基因的克隆及组织表达谱研究
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作者 徐涛 王利 魏勇 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第19期19-24,29,177共8页
为了探究山羊C-X-C趋化因子受体1(C-X-C motif chemokine receptor 1,CXCR1)基因的特点,试验以金堂黑山羊脾脏cDNA为模板克隆了CXCR1基因,借助生物信息学软件及在线软件分析序列,并采用实时荧光定量PCR方法检测CXCR1基因在金堂黑山羊脾... 为了探究山羊C-X-C趋化因子受体1(C-X-C motif chemokine receptor 1,CXCR1)基因的特点,试验以金堂黑山羊脾脏cDNA为模板克隆了CXCR1基因,借助生物信息学软件及在线软件分析序列,并采用实时荧光定量PCR方法检测CXCR1基因在金堂黑山羊脾脏、肺脏、肌肉、心脏和肠的5个组织中的相对表达量。结果表明:克隆得到的CXCR1基因序列全长为1 140 bp,完整CDS编码区长1 107 bp,共编码368个氨基酸;所得氨基酸序列与牛进行比对,两者同源性为96.8%;编码蛋白为带正电荷、具有疏水性的稳定蛋白;有7个跨膜结构和32个磷酸化位点,无信号肽;二级结构中α-螺旋比例最高,为54.35%;获得的三级结构模型与人的CXCR1蛋白(PDB:2lnl.1.A)同源性最高,为81.49%;氨基酸比对结果与系统进化树结果相近,金堂黑山羊与牛的亲缘关系最近;CXCR1基因主要表达于肌肉和心脏。说明CXCR1基因可能在山羊肌肉发育相关的信号通路中发挥作用。 展开更多
关键词 CXCR1基因 PCR扩增 金堂黑山羊 克隆 生物信息学分析 组织表达
黄体期和卵泡期小尾寒羊KiSS-1与RFRP-3组织表达研究
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作者 安雪姣 潘章源 +10 位作者 赵生国 李春艳 田志龙 狄冉 刘秋月 胡文萍 王翔宇 张效生 张金龙 蔡原 储明星 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期82-90,共9页
为分析KiSS-1和RFRP-3基因在小尾寒羊不同繁殖时期(黄体期和卵泡期)下丘脑、垂体、性腺轴各组织中的表达差异,阐明这2个基因在绵羊发情转换中的表达模式,以常年发情的小尾寒羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术,对比分析了KiSS-1和RFR... 为分析KiSS-1和RFRP-3基因在小尾寒羊不同繁殖时期(黄体期和卵泡期)下丘脑、垂体、性腺轴各组织中的表达差异,阐明这2个基因在绵羊发情转换中的表达模式,以常年发情的小尾寒羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术,对比分析了KiSS-1和RFRP-3基因在黄体期和卵泡期的小尾寒羊下丘脑—垂体—性腺轴各组织中的表达差异。结果表明:1)KiSS-1和RFRP-3基因在下丘脑、垂体、卵巢等10种组织中均有表达;2)黄体期和卵泡期下丘脑中KiSS-1基因表达量均显著高于其他组织(P<0.05),卵泡期下丘脑和松果体中KiSS-1基因表达量均显著高于黄体期(P<0.05);3)黄体期和卵泡期下丘脑和卵巢中RFRP-3基因的表达量均显著高于其他组织(P<0.05),且卵巢中RFRP-3基因在黄体期的表达量显著高于卵泡期(P<0.05)。综上,研究发现KiSS-1和RFRP-3基因在绵羊发情调控中均发挥重要作用,KiSS-1促进发情而RFRP-3抑制发情。 展开更多
关键词 小尾寒羊 繁殖时期 KISS-1 RFRP-3 组织表达
小尾寒羊ACAA 1基因CDS克隆及组织表达谱分析 预览
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作者 王延莉 梁祎凡 +3 位作者 肖成 金花子 曹阳 金海国 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期2823-2833,共11页
为探索乙酰辅酶A酰基转移酶1(acetyl-coenzyme A acyltransferase 1,ACAA1)基因的生物学功能,明确该基因在小尾寒羊不同组织中的表达差异,试验采集小尾寒羊心脏、肝脏、胃、十二指肠、小肠、背最长肌、皮下脂肪组织,提取总RNA,根据GenB... 为探索乙酰辅酶A酰基转移酶1(acetyl-coenzyme A acyltransferase 1,ACAA1)基因的生物学功能,明确该基因在小尾寒羊不同组织中的表达差异,试验采集小尾寒羊心脏、肝脏、胃、十二指肠、小肠、背最长肌、皮下脂肪组织,提取总RNA,根据GenBank中公布的绵羊ACAA 1基因序列(登录号:XM_004018227.3)设计引物,利用RT-PCR和分子克隆技术获得小尾寒羊ACAA 1基因完整CDS,并对其进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR检测该基因在小尾寒羊不同组织中的表达差异。结果显示,小尾寒羊ACAA 1基因CDS长为1 071 bp,编码356个氨基酸;小尾寒羊ACAA 1基因氨基酸序列与绵羊、山羊同源性最高,约为100%,与食蟹猴、狒狒和野猪的同源性均为93.0%;系统进化树结果显示,小尾寒羊与绵羊、山羊位于同一分支,亲缘关系较近,与穿山甲、狒狒的亲缘关系较远;各物种间同源性较高,保守性较强。ACAA1蛋白分子质量约为36.92 ku,分子式为C 1603 H 2638 N 458 O 501 S 18,理论等电点为7.48,半衰期为30 h,消光系数为9 440,稳定系数为40.88,脂溶系数为92.67,亲水性氨基酸残基约占58%,为不稳定的碱性脂溶性亲水蛋白;不存在跨膜结构与信号肽,不是分泌蛋白;主要分布在过氧化物酶体,存在25个磷酸化位点、3个潜在的N-糖基化位点和4个O-糖基化位点。ACAA1蛋白二级结构含有α-螺旋(37.92%)、β-折叠(12.64%)和无规则卷曲(49.44%),三级结构预测结果与其一致。实时荧光定量PCR结果显示,ACAA 1基因在小尾寒羊不同组织中均有表达,其中在肝脏、皮下脂肪、小肠中表达量相对较高。本试验结果为进一步探索小尾寒羊ACAA 1基因生物学功能及筛选与肉质性状相关的候选基因提供依据。 展开更多
关键词 小尾寒羊 ACAA 1基因 克隆 生物信息学分析 组织表达
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基于最大相似度算法的补阳中药归肾经的量化探讨
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作者 姜希伟 邹家丽 +3 位作者 项荣武 于净 高翔 梁建坤 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第18期174-181,共8页
目的:从靶点组织表达角度构建补阳中药归肾经的判别标准,为中药归经的量化研究提供新思路、新方法。方法:选取9味补阳中药作为训练集,2味补阳中药作为验证集,通过TCMSP2. 3,Pub Chem,Uniprot等数据库搜集药材化学成分及其作用靶点,采用... 目的:从靶点组织表达角度构建补阳中药归肾经的判别标准,为中药归经的量化研究提供新思路、新方法。方法:选取9味补阳中药作为训练集,2味补阳中药作为验证集,通过TCMSP2. 3,Pub Chem,Uniprot等数据库搜集药材化学成分及其作用靶点,采用最大相似度算法获得补阳中药核心靶蛋白;利用THPA数据库获得靶蛋白相关组织表达及表达丰度数据;通过训练集数据构建经验回归方程,挖掘药材作用受体的组织分布规律,建立补阳中药归肾经的判别标准模型;通过验证集数据对模型进行检验。结果:构建药材-活性成分-作用蛋白受体-组织表达数据全集库,筛选补阳中药核心靶蛋白39个,训练集药材的组织分布规律具有高度一致性,没有统计学差异(P=0. 999 7),构建补阳中药归肾经的判别标准模型。经验证集数据检验,模型的准确率100%。结论:本研究探索补阳中药归肾经的判别标准新方法,并建立有效的判别标准模型,验证了新方法的可靠性。为中药归经的现代化研究提供了理论基础,对于中医药学的快速发展有着重要意义。 展开更多
关键词 肾经 补阳中药 最大相似度算法 蛋白受体 组织表达
牦牛Bcl-2、Bax基因克隆及其在生殖轴上的表达分析 预览
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作者 夏忆 王琴 +3 位作者 何向东 陈莹 吉格莫体 字向东 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期1881-1889,共9页
试验旨在分析Bcl-2与Bax基因的序列特性,并分析其在母牦牛生殖轴上的表达特点,为探讨其在牦牛繁殖活动中的调控作用奠定基础。试验采集健康母牦牛与母黄牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫组织样品,通过RT-PCR扩增并克隆Bcl-2与Bax基因... 试验旨在分析Bcl-2与Bax基因的序列特性,并分析其在母牦牛生殖轴上的表达特点,为探讨其在牦牛繁殖活动中的调控作用奠定基础。试验采集健康母牦牛与母黄牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫组织样品,通过RT-PCR扩增并克隆Bcl-2与Bax基因,并采用生物信息学软件进行序列分析;利用实时荧光定量PCR法检测Bcl-2与Bax基因在牦牛与黄牛不同组织中的表达差异。结果表明,牦牛Bcl-2编码区全长690 bp,编码229个氨基酸;与黄牛Bcl-2基因核苷酸序列同源性最高,为99.86%,其次是山羊、绵羊,同源性分别为98.41%、97.97%;系统进化树表明,牦牛与黄牛亲缘关系最近。牦牛Bax基因编码区全长579 bp,编码192个氨基酸,与黄牛、藏山羊和金堂黑山羊同源性较高,分别为99.83%、99.48%和99.48%,其次是绵羊、马、人,同源性分别为99.14%、95.34%、94.30%;系统进化树表明,牦牛与黄牛亲缘关系最近。Bcl-2和Bax蛋白不存在信号肽,均为酸性不稳定的疏水蛋白。Bcl-2与Bax基因在黄牛及牦牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管和子宫组织中均有表达,其中牦牛卵巢、子宫中Bcl-2基因表达量分别显著和极显著高于黄牛(P<0.05;P<0.01);牦牛子宫、输卵管中Bax基因表达量显著高于黄牛(P<0.05),牦牛卵巢中Bcl-2/Bax比值极显著高于黄牛(P<0.01),子宫和垂体中显著高于黄牛(P<0.05)。表明Bcl-2与Bax在动物进化中非常保守且在繁殖活动中起重要作用,牦牛卵巢、子宫、输卵管和垂体中的高表达量可能与牦牛处于极端恶劣环境的细胞抗凋亡作用有关。 展开更多
关键词 牦牛 黄牛 BCL-2基因 BAX基因 克隆 组织表达
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威宁绵羊SOCS7和GFAP基因组织表达研究 预览
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作者 张继 易鸣 +6 位作者 程朝友 程均华 付正仙 杨德文 吴雪 邱淦远 刘若余 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期1899-1906,共8页
试验旨在检测细胞因子信号传导抑制蛋白7(suppressor of cytokine signaling 7,SOCS7)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)基因在威宁绵羊不同组织中的表达水平。以6月龄、1周岁和2周岁的威宁绵羊公、母羊为研究... 试验旨在检测细胞因子信号传导抑制蛋白7(suppressor of cytokine signaling 7,SOCS7)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)基因在威宁绵羊不同组织中的表达水平。以6月龄、1周岁和2周岁的威宁绵羊公、母羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR测定威宁绵羊不同性别及不同生长阶段心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及脑6个组织中SOCS7和GFAP基因的相对表达量,从mRNA水平上的探究两个基因之间的表达规律。结果显示,SOCS7基因在威宁绵羊不同组织中均有不同程度的表达,其中脾脏中相对表达量最高,其次是肺脏、肾脏、心脏、肝脏和脑组织,随着威宁绵羊年龄的增大,SOCS7基因在组织中的相对表达量呈现小幅度上升的趋势;GFAP基因在威宁绵羊脑组织中相对表达量最高,其余组织中表达量较低,随着年龄增长总体呈现下降趋势。从性别差异来看,威宁绵羊SOCS7基因相对表达量母羊普遍高于公羊,而GFAP基因则是公羊普遍高于母羊,推测SOCS7基因很有可能负向调控GFAP基因的表达。 展开更多
关键词 威宁绵羊 SOCS7基因 GFAP基因 实时荧光定量PCR 组织表达
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EGFR和DNA-PKcs与肺癌患者预后的关系 预览
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作者 曲媛媛 殷洪涛 +2 位作者 张茵 王瑞芝 鄂明艳 《中国卫生标准管理》 2019年第14期43-45,共3页
目的检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)表达水平与非小细胞肺癌患者预后的关系。方法将2005年1月-2008年6月在我院手... 目的检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)表达水平与非小细胞肺癌患者预后的关系。方法将2005年1月-2008年6月在我院手术的227例非小细胞肺癌患者根据免疫组化法染色结果分为四组:-、+、++、+++,分别比较EGFR和DNA-PKcs不同表达程度的患者之间生存时间的差异,随访至2018年8月。结果EGFR-、+、++、+++表达的患者例数分别为90例(40%)、50例(22%)、45例(20%)、42例(18%),中位生存时间分别为35、37、35、34个月(P>0.05)。DNA-PKcs-、+、++、+++表达的患者例数分别为59例(26%)、18例(8%)、40例(18%)、110例(48%),中位生存时间分别为37、34、32、33个月,阴性表达(-)和高表达(+++)之间差异具有统计学意义(P<0.05)。EGFR和DNA-PKcs共高表达的有27例。GFR和DNA-PKcs共高表达的患者中位生存时间为27个月,非高表达患者的中位生存时间为36个月,差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论EGFR表达对非小细胞肺癌患者的预后无影响,DNA-PKcs阴性表达患者生存时间优于高表达(+++)患者,提示高表达患者的预后不良。 展开更多
关键词 EGFR DNA-PKCS 非小细胞肺癌 生存时间 组织芯片 免疫组化 阳性表达
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版纳微型猪近交系GOT1基因克隆、序列分析及表达分析 预览
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作者 王配 张霞 +5 位作者 霍金龙 霍海龙 王淑燕 潘伟荣 滕晓红 程霞 《云南农业大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2019年第1期29-36,共8页
【目的】细胞质型天冬氨酸氨基转移酶又称谷草转氨酶,由细胞核GOT1基因编码,催化天冬氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸形成草酰乙酸和谷氨酸,在物质代谢调控中起重要作用。本研究以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)为材料... 【目的】细胞质型天冬氨酸氨基转移酶又称谷草转氨酶,由细胞核GOT1基因编码,催化天冬氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸形成草酰乙酸和谷氨酸,在物质代谢调控中起重要作用。本研究以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)为材料,克隆GOT1基因,并对其进行生物信息学及组织mRNA表达分析。【方法】利用RT-PCR技术扩增猪GOT1基因,并进行生物信息学分析,同时应用半定量RT-PCR技术明确其mRNA的组织表达特征。【结果】获得了BMI GOT1基因全长1 484 bp的cDNA序列(GenBank登录号:KU705636.1),包含1 242 bp的开放阅读框。生物信息学分析表明:猪GOT1基因位于14号染色体,包含9个外显子和8个内含子;猪GOT1蛋白无信号肽,无跨膜螺旋,有36个磷酸化位点和1个O连接的糖基化位点,定位于细胞质的概率是94.1%,与水牛、黄牛、黑猩猩、人、食蟹猴、大鼠和小鼠的GOT1蛋白依次有95.6%、95.4%、93.0%、92.7%、92.5%、90.3%和90.1%的同源性;二级结构中以α螺旋为主,无规则卷曲和延伸链含量中等,β转角只在局部出现;三级结构同源建模成功。组织表达分析表明:GOT1 mRNA在检测的15个组织中差异表达,肌肉中表达量最高。【结论】为进一步了解该基因的生理功能及调控机制积累了资料。 展开更多
关键词 细胞质型谷草转氨酶 版纳微型猪近交系 组织表达 生物信息学
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