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甘蓝型油菜SNARE蛋白SYP122叶片瞬时表达体系的建立 预览
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作者 许静 单亚楠 +3 位作者 何豆 陈淞渝 庄炜 王爱荣 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2019年第4期459-465,共7页
通过生物信息学鉴定了油菜中的突触融合蛋白BnSYP122,其由一个N端syntaxin结构域、一个典型的SNARE基序及一个C端跨膜结构域组成,并且N端结构域包含被称为Ha、Hb、Hc基序的3个α-螺旋束.进一步利用Gateway技术成功将目的蛋白构建于植物... 通过生物信息学鉴定了油菜中的突触融合蛋白BnSYP122,其由一个N端syntaxin结构域、一个典型的SNARE基序及一个C端跨膜结构域组成,并且N端结构域包含被称为Ha、Hb、Hc基序的3个α-螺旋束.进一步利用Gateway技术成功将目的蛋白构建于植物表达载体pEarleyGate104上,与带有绿色荧光蛋白的pEGAD分别转化农杆菌GV3101菌株,采用农杆菌介导的真空渗透法在油菜叶片中进行瞬时表达.经激光共聚焦显微镜观察和Westernblot检测表明,农杆菌介导的真空渗透法能够在油菜叶片中成功表达目的蛋白,同时验证了BnSYP122定位在细胞膜上. 展开更多
关键词 油菜 瞬时表达 真空渗透法 BnSYP122 绿色荧光蛋白
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从江香猪源Ⅰ、Ⅱ型干扰素生菜中融合表达及其生物活性
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作者 田浪 温贵兰 +4 位作者 张升波 杨佰启 李昌红 陈广 张喜懿 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1261-1268,共8页
干扰素(interfern,IFN)是在特定的诱生剂作用下,由细胞产生的一种具有高度生物活性的糖蛋白,具有广谱抗病毒活性。从江香猪源Ι型干扰素α2和Ⅱ型干扰素γ于生菜中融合表达及生物活性研究未见报道。本研究应用生菜植物表达系统,将从江... 干扰素(interfern,IFN)是在特定的诱生剂作用下,由细胞产生的一种具有高度生物活性的糖蛋白,具有广谱抗病毒活性。从江香猪源Ι型干扰素α2和Ⅱ型干扰素γ于生菜中融合表达及生物活性研究未见报道。本研究应用生菜植物表达系统,将从江香猪源干扰素植物表达载体PBI121-IFNα2、PBI121-IFNα2γ、PBI121-IFNγ、PBI121-Vec转入根癌农杆菌LBA4404中,用真空渗透法将携带干扰素质粒的根癌农杆菌感染生菜叶片;用β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,GUS)染色和酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测从江香猪源干扰素在生菜叶片中的表达;用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,Q-PCR)技术分析从江香猪源干扰素蛋白活性。结果显示:GUS染色和ELISA检测证明从江香猪源IFNα2、IFNα2γ、IFNγ在生菜中实现了表达;Q-PCR检测显示:在Marc-145细胞上从江香猪源干扰素蛋白对PRRSV的复制有明显抑制作用,在PK15细胞上从江香猪源干扰素蛋白对干扰素γ诱导蛋白30(interferon-gamma-inducible protein 30,IFI30)、2′-5′寡聚腺苷酸合成酶(2′-5′oligoadenylate synthetase,OAS)、抗黏液病毒蛋白(myxovirus resistance,MX)基因的mRNA水平的上调有一定的促进作用。本研究成功实现从江香猪源IFNα2、IFNα2γ、IFNγ在生菜中进行表达且表达蛋白具有生物学活性,为从江香猪源Ι型和Ⅱ型干扰素新复合型药物植物蛋白的开发利用提供参考依据。 展开更多
关键词 从江香猪源干扰素 生菜 瞬时表达 生物活性
RNA Silencing-Mediated Control of <i>Odontoglossum ringspot virus</i>(ORSV) Infection 预览
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作者 Xian Zhang Yihua Hu +3 位作者 Zhijuan Chen Pengcheng Zhang Hongmei Li Nongnong Shi 《美国植物学期刊(英文)》 2019年第1期147-161,共15页
Odontoglossum ringspot virus (ORSV) infects perennial orchids (Phalaenopsis amabilis) and causes a widespread viral disease. RNA-silencing of viral genes is a promising and effective way of controlling viral infection... Odontoglossum ringspot virus (ORSV) infects perennial orchids (Phalaenopsis amabilis) and causes a widespread viral disease. RNA-silencing of viral genes is a promising and effective way of controlling viral infection in plants. An inverted repeat (IR) fragment of the ORSV coat protein gene, cp, was inserted into the pXGY1 vector to generate the silencing construct, pXGY1-ORSV, which was introduced into Nicotiana benthamiana via Agrobacterium-mediated infiltration. A total of 15 homozygous pXGY1-ORSV transgenic N. benthamiana T1 plants were obtained from five transgenic lines, and ORSV cp gene multiplication was reduced by at least 75% - 95% in 12 T2 plants, demonstrating their increased resistance to ORSV. An infectious ORSV clone, pCAMBIA2300-ORSV, was generated to facilitate rigorous analyses of plant viral resistance. Semi-quantitative RT-PCR (sqRT-PCR) and northern-blot analyses revealed that levels of ORSV multiplication and ORSV coat protein were significantly reduced in pXGY1-ORSV transgenic N. benthamiana. Western-blot from pXGY1-ORSV inoculated leaves of ORSV infected P. amabilis also revealed the significant decrease and even degradation of ORSV-CP protein. Disease symptoms were not observed in transgenic plants. These results indicate a high level of ORSV-resistance in pXGY1-ORSV transgenic N. benthamiana. 展开更多
关键词 ORSV RNA SILENCING Agroinfiltration TRANSIENT Expression TRANSGENIC Plant Molecular Analysis
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一种人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的瞬时表达及性质分析 预览
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作者 宋宪铭 安晨 +3 位作者 张超 熊颖 张祺 陈继军 《微生物学免疫学进展》 2019年第2期17-21,共5页
目的瞬时表达人源重组抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对抗体性质进行分析。方法PCR法扩增抗体轻、重链可变区并分别构建真核表达质粒;瞬时转染HEK293EBNA1细胞;抗体经亲和纯化后,CE-SDS法分析纯化后抗体单体比例,用快速荧光灶抑制试验(RFFIT... 目的瞬时表达人源重组抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对抗体性质进行分析。方法PCR法扩增抗体轻、重链可变区并分别构建真核表达质粒;瞬时转染HEK293EBNA1细胞;抗体经亲和纯化后,CE-SDS法分析纯化后抗体单体比例,用快速荧光灶抑制试验(RFFIT)分析抗体体外抗狂犬病病毒中和活性,ELISA分析抗体与3aG、CTN、PV及CVS株的结合。结果提取瞬时表达质粒的A260/280nm比值在2.0~2.1之间纯化后抗体非还原CE-SDS单体纯度为74.4%;还原CE-SDS抗体轻、重链峰合计占比超过95%;抗体RFFIT体外中和活性为293.37IU/mL,比活达628.21IU/mg,抗体与3aG、CTN、PV及CVS株交叉反应均为阳性。结论该株抗体具有较高体外抗狂犬病病毒中和活性,与主要疫苗株均有较强结合。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 单克隆抗体 快速荧光灶抑制试验(RFFIT) 瞬时表达
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细胞饼瞬时表达体系的优化 预览
5
作者 韩娟 缪国鹏 +2 位作者 张科贵 汪承润 王顺昌 《安阳工学院学报》 2019年第2期32-36,共5页
细胞饼瞬时转化技术具有重要的应用前景,然而其转化效率的优化研究尚未见报道。通过农杆菌介导法,系统地比较不同农杆菌浓度,抗氧化剂以及表面活性剂的添加对细胞饼瞬时转化效率的影响。研究结果表明:1)侵染用农杆菌的浓度在较高水平(OD... 细胞饼瞬时转化技术具有重要的应用前景,然而其转化效率的优化研究尚未见报道。通过农杆菌介导法,系统地比较不同农杆菌浓度,抗氧化剂以及表面活性剂的添加对细胞饼瞬时转化效率的影响。研究结果表明:1)侵染用农杆菌的浓度在较高水平(OD=1.0)时更有利于转化效率的提升;2)两种抗氧化剂中,辛硫酸效果较半胱氨酸为好。但两者均表现为低浓度对转化效率具有促进作用,而高浓度则表现为抑制作用;3)测试的两种表面活性剂,TritonX-100以及SilwetL-77对转化效率均具有显著提升作用,而SilwetL-77的作用则更为突出;4)在优化条件下,人白介素10的含量较对照高出3.66倍。本研究的结果可进一步提升细胞饼瞬时转化技术的应用前景,为后续这一技术的应用奠定了一定的理论基础。 展开更多
关键词 细胞饼 瞬时转化 参数优化
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从江香猪源干扰素γ植物表达载体构建及在生菜中瞬时表达 预览
6
作者 田浪 温贵兰 +5 位作者 张升波 杨佰启 李昌红 徐丽 陈广 张喜懿 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2019年第7期96-100,共5页
为构建从江香猪源干扰素γ(IFNγ)植物表达载体,通过农杆菌真空渗透法在新鲜生菜中实现瞬时表达。参考GenBank登录的猪IFNγ基因序列设计1对特异性IFNγ引物,采用RT-PCR方法从贵州从江香猪源肝脏组织扩增IFNγ基因序列,将其克隆至植物... 为构建从江香猪源干扰素γ(IFNγ)植物表达载体,通过农杆菌真空渗透法在新鲜生菜中实现瞬时表达。参考GenBank登录的猪IFNγ基因序列设计1对特异性IFNγ引物,采用RT-PCR方法从贵州从江香猪源肝脏组织扩增IFNγ基因序列,将其克隆至植物表达载体PBI121,转化根癌农杆菌LBA4404,筛选阳性菌株提取质粒,对重组质粒进行PCR扩增、双酶切及测序鉴定;携带重组质粒根癌农杆菌真空渗透法感染生菜,GUS染色检测感染的生菜叶片,ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ蛋白,分析重组质粒在生菜中表达效果;采用细胞病变抑制实验检测生菜中从江香猪源IFNγ蛋白抗病毒活性。结果表明:本研究成功地从贵州从江香猪源肝脏组织扩增获得IFNγ基因序列并构建了从江香猪源IFNγ植物表达载体PBI121-IFNγ;GUS染色感染的生菜叶片可见蓝色物质;ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ蛋白含量为169.397、170.657、170.37 pg/mL;生菜中表达从江香猪源IFNγ经4^-6稀释在Marc145细胞上仍能够抑制100 TCID50的PRRSV的致细胞病变作用。本实验成功构建从江香猪源IFNγ植物表达载体PBI121-IFNγ,生菜中瞬时表达蛋白具有免疫反应性和抗病毒活性,为从江香猪源IFNγ药用植物蛋白的研究开发提供参考依据。 展开更多
关键词 从江香猪源干扰素γ 植物表达载体 生菜 瞬时表达 抗病毒活性
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人源化AGR2单抗在不同宿主细胞中表达的比较 预览
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作者 谢秋玲 汤杰 +2 位作者 黄嘉慧 卢加 刘晨雪璇 《华南理工大学学报:自然科学版》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第6期142-148,共7页
Anterior gradient-2(AGR2)基因是一种与肿瘤生长、转移、浸润及耐药性密切相关的基因,以AGR2为靶点的人源化单克隆抗体rhAGR2-mAb有望成为一种新型的抗肿瘤药物.本研究为了进行该抗体的成药性评价,通过瞬时转染的方法分别用HEK293F细胞... Anterior gradient-2(AGR2)基因是一种与肿瘤生长、转移、浸润及耐药性密切相关的基因,以AGR2为靶点的人源化单克隆抗体rhAGR2-mAb有望成为一种新型的抗肿瘤药物.本研究为了进行该抗体的成药性评价,通过瞬时转染的方法分别用HEK293F细胞与CHO细胞这两种最常用的表达系统表达rhAGR2-mAb,获得了纯度为95%的抗体蛋白,同时比较了不同宿主细胞生产的蛋白在分子量、等电点、糖型等方面的差异,发现在分子量、等电点和糖基化的糖型种类方面,两种宿主细胞表达的rhAGR2-mAb并无明显差异,但两者表达的产物在糖型比例上有较大不同,这也导致了两种表达系统所表达的蛋白与抗原AGR2的亲和力略有不同,为rhAGR2-mAb将来选择合适的蛋白瞬时表达系统和稳定生产系统提供依据. 展开更多
关键词 人源化 AGR2单克隆抗体 瞬时基因表达 CHO细胞 HEK细胞
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基于CRISPR基因编辑系统抗番木瓜曲叶病毒的植物转化载体的构建 预览
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作者 龙欢 赵辉 +6 位作者 王绪朋 贾瑞宗 贺萍萍 孔华 郭运玲 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2019年第10期2022-2028,共7页
双生科病毒具有毁灭性强、寄主多样、分布地域广等特点,一直是困扰世界农作物生产的一大难题。用物理和化学方法防治该类病毒不仅花费成本高,见效低,而且还可能对环境造成负面影响,因此用分子手段培育抗病品种才是有效途径之一。本研究... 双生科病毒具有毁灭性强、寄主多样、分布地域广等特点,一直是困扰世界农作物生产的一大难题。用物理和化学方法防治该类病毒不仅花费成本高,见效低,而且还可能对环境造成负面影响,因此用分子手段培育抗病品种才是有效途径之一。本研究结合最新的CRISPR/Cas9基因编辑技术和Golden Gate克隆技术,设计并构建了抗番木瓜曲叶病毒基因编辑串联多切点表达载体。表达载体转入农杆菌AGL1后经注射本氏烟草叶片进行瞬时表达,48 h后通过激光共聚焦显微镜能观察到有绿色荧光的出现,定位的位置为细胞核与细胞质膜。本研究为番木瓜抗曲叶病毒研究提供理论基础。 展开更多
关键词 基因编辑 曲叶病毒 番木瓜 瞬时表达
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从江香猪源干扰素α2、β在生菜中的瞬时表达及其对PRRSV复制抑制作用的研究 预览
9
作者 田浪 温贵兰 +8 位作者 张升波 杨佰启 李昌红 徐丽 陈广 张喜懿 龚新勇 陈彦希 文明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期744-749,共6页
为在生菜中瞬时表达从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β和IFN-β,检测其抗猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)的活性,本实验采用从江香猪源干扰素特异引物分别从pUCm-CJpoIFN-α2、pUCm-CJpoIFN-α2β、pUCm-CJpoIFN-β质粒中扩增IFN-α2、IFN-α2β... 为在生菜中瞬时表达从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β和IFN-β,检测其抗猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)的活性,本实验采用从江香猪源干扰素特异引物分别从pUCm-CJpoIFN-α2、pUCm-CJpoIFN-α2β、pUCm-CJpoIFN-β质粒中扩增IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β基因序列,分别克隆至植物表达载体pBI121中,构建含不同干扰素的重组质粒。将各质粒分别转化根癌农杆菌LBA4404,采用真空渗透法将携带重组质粒的根癌农杆菌感染生菜,经用GUS染色和ELISA方法检测从江香猪源干扰素在生菜叶片中的表达;用qPCR方法和细胞病变抑制试验检测生菜中表达的从江香猪源干扰素蛋白抗PRRSV的活性。结果显示:本实验构建了含从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β的植物表达载体PBI121-IFN-α2、PBI121-IFN-α2β、PBI121-IFN-β;GUS染色和ELISA检测结果显示从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β在生菜中实现了瞬时表达;qPCR检测结果显示生菜中瞬时表达的从江香猪源干扰素蛋白在Marc145细胞中对PRRSV的复制有明显抑制作用;生菜中表达的从江香猪源IFN-α2、IFN-β、IFN-α2β分别经47、49、47稀释在Marc145细胞中仍然能够抑制100 TCID50 PRRSV的致细胞病变作用。本实验实现从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β在生菜中的瞬时表达且表达蛋白具有较强抑制PRRSV的复制作用,本研究为从江香猪源干扰素抗PRRSV新复合型药物蛋白的开发利用提供参考依据。 展开更多
关键词 从江香猪源干扰素 生菜 瞬时表达 猪繁殖与呼吸综合征病毒
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猫爪草酰基-Δ9脱氢酶基因植物表达载体的构建及瞬时表达 预览
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作者 岳敏 宋亚楠 +5 位作者 安茜 赵熙宁 薛金爱 季春丽 崔红利 李润植 《山西农业科学》 2019年第5期738-741,747共5页
猫爪草种子能高水平积累棕榈油酸(C16∶1Δ9)和顺式-11-十八碳烯酸(C18∶1Δ11)等具有食品、医药和工业应用价值的ω-7脂肪酸(ω-7FA)。酰基-Δ9脱氢酶(acyl-Δ9 desaturase,Δ9D)底物特异性决定着植物细胞合成单烯脂肪酸的种类。为检... 猫爪草种子能高水平积累棕榈油酸(C16∶1Δ9)和顺式-11-十八碳烯酸(C18∶1Δ11)等具有食品、医药和工业应用价值的ω-7脂肪酸(ω-7FA)。酰基-Δ9脱氢酶(acyl-Δ9 desaturase,Δ9D)底物特异性决定着植物细胞合成单烯脂肪酸的种类。为检测来自猫爪草的酰基-ACP-Δ9脱氢酶(MucACP-Δ9D)是否可异源表达用于在其他植物合成ω-7FA,文章构建了MucACP-Δ9D基因植物表达载体,并通过农杆菌介导在本氏烟草叶组织瞬时表达。用气相色谱(GC)检测烟叶脂肪酸成分,结果显示,野生型及空载体对照的ω-7FA总含量仅为0.4%;然而,MucACP-Δ9D瞬时表达的烟叶组织ω-7FA总含量提高到14.2%,其中,C16∶1Δ9和C18∶1Δ11含量分别达8.8%和5.4%。研究表明,MucACP-Δ9D可在异源组织催化棕榈油酸合成,可进一步用于其他油料作物的油脂遗传改良,以富集ω-7FA。 展开更多
关键词 酰基-Δ9脱氢酶 表达载体 本氏烟草 瞬时表达
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水葫芦EcGS1b基因启动子的克隆及表达分析
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作者 卢晓丹 傅明辉 钟燕珊 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期2692-2698,共7页
利用染色体步移技术从水葫芦基因组DNA中扩增得到谷氨酰胺合成酶EcGS1b基因5’端上游约1.7 kb的一段序列,经PlantCARE序列分析表明,该序列中除了包括TATA-box和CAAT-box等基本元件外,还含有TATC-box、HSE、LTR和多种光反应相关的元件,... 利用染色体步移技术从水葫芦基因组DNA中扩增得到谷氨酰胺合成酶EcGS1b基因5’端上游约1.7 kb的一段序列,经PlantCARE序列分析表明,该序列中除了包括TATA-box和CAAT-box等基本元件外,还含有TATC-box、HSE、LTR和多种光反应相关的元件,初步推测其为EcGS1b基因启动子,命名为pEcGS1b。进一步通过PCR扩增了4个5’缺失的pEcGS1b片段,命名为p1200、p900、p600、p400。以pBI121为基础,构建了4个以GUS为报告基因的植物表达载体,命名为p1200::GUS、p900::GUS、p600::GUS、p400::GUS。利用农杆菌介导的叶盘法将4个植物表达载体转化烟草叶片,进行瞬时表达。结果表明4个缺失片段均具有启动功能,但弱于组成型表达的花椰菜花叶病毒(CaMV) 35S启动子,其中p1200的启动活性最强。 展开更多
关键词 水葫芦(Eichhornia crassipes) EcGS1b基因 启动子 GUS 瞬时表达
阳春砂萜类合酶AvTPS1启动子的克隆及其活性分析
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作者 王虹 李萌 +3 位作者 马东明 叶鹏 詹若挺 杨锦芬 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期2181-2187,共7页
目的获得药用植物阳春砂Amomum villousm的萜类合酶基因AvTPS1的启动子并进行活性分析。方法从阳春砂叶片基因组DNA(gDNA)中克隆获得AvTPS1基因,再通过FPNI-PCR的方法从阳春砂叶片gDNA中克隆AvTPS1的启动子并进行序列分析,构建由该启动... 目的获得药用植物阳春砂Amomum villousm的萜类合酶基因AvTPS1的启动子并进行活性分析。方法从阳春砂叶片基因组DNA(gDNA)中克隆获得AvTPS1基因,再通过FPNI-PCR的方法从阳春砂叶片gDNA中克隆AvTPS1的启动子并进行序列分析,构建由该启动子驱动β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)的重组表达载体pCAM-AvTPS1p,利用农杆菌介导法注射侵染烟草Nicotiana benthamiana叶片进行瞬时表达来验证AvTPS1启动子的活性。结果获得AvTPS1的gDNA序列长度为2444bp,经过序列比对发现AvTPS1含有7个外显子和6个内含子;通过FPNI-PCR成功获得568bp的AvTPS1启动子序列,其含有10种顺式作用元件,包括保守元件TATA-box和CAAT-box,以及可被转录因子MYC结合的G-box等;通过GUS染色发现AvTPS1启动子启动了GUS基因的表达,使转基因烟草叶片呈现蓝色。结论 AvTPS1启动子被成功克隆,且通过实验验证其具有启动基因表达的功能,为进一步研究AvTPS1在萜类合成途径的功能及其受转录因子调节的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 AvTPS1 启动子 阳春砂 瞬时表达 FPNI-PCR
枇杷悬浮细胞AS基因的瞬时表达载体构建与亚细胞定位
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作者 李惠华 曾碧玉 +2 位作者 王伟 常强 苏明华 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1923-1932,共10页
枇杷(Eriobotrya japonica)细胞悬浮培养可以产生丰富的五环三萜类化合物。香树素合成酶(amyrine synthase,AS)是三萜合成途径中的关键酶,决定主要代谢和次生代谢的分支点。枇杷AS基因的功能未见报道。本研究以AS基因过表达质粒(pDONR20... 枇杷(Eriobotrya japonica)细胞悬浮培养可以产生丰富的五环三萜类化合物。香树素合成酶(amyrine synthase,AS)是三萜合成途径中的关键酶,决定主要代谢和次生代谢的分支点。枇杷AS基因的功能未见报道。本研究以AS基因过表达质粒(pDONR207-AS)为模板,经PCR扩增获得AS基因的正向开放阅读框,经酶切及与载体的连接,成功构建表达载体pBWA(V)HS-AS-GFP-Tnos。以枇杷悬浮细胞(AS分离的同源系统)为受体材料,在农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV3101的介导下进行瞬时表达,通过共转化的GFP在激光共聚焦显微镜下成像,分析AS蛋白的亚细胞定位;采用气相色谱-质谱联合分析AS催化产物。研究结果显示,AS在枇杷悬浮细胞中定位于内质网;枇杷悬浮细胞中AS的催化产物含α-香树素和β-香树素,AS属于多功能酶。本研究可为明确五环三萜类化合物合成途径以及枇杷悬浮细胞的转基因应用提供参考依据。 展开更多
关键词 香树素合成酶(AS) 枇杷 悬浮细胞 瞬时表达 亚细胞定位
甘薯IbSSI基因启动子序列的克隆及瞬时表达分析
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作者 王雁楠 杨育峰 +6 位作者 杨国红 张莉 陈献功 徐心志 刘庆昌 翟红 何绍贞 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第20期6604-6610,共7页
植物可溶性淀粉合成酶(soluble starch synthase, SS)在植物支链淀粉的合成中起着关键作用,其主要负责支链的延伸。前期我们从甘薯中克隆到IbSSI基因并对其进行了表达分析及功能验证,发现该基因在甘薯中的表达受到外源蔗糖的诱导以及昼... 植物可溶性淀粉合成酶(soluble starch synthase, SS)在植物支链淀粉的合成中起着关键作用,其主要负责支链的延伸。前期我们从甘薯中克隆到IbSSI基因并对其进行了表达分析及功能验证,发现该基因在甘薯中的表达受到外源蔗糖的诱导以及昼夜节律的调控。本研究在此基础上利用染色体步移法克隆到IbSSI基因1 811 bp的启动子序列。PlantCARE在线分析表明IbSSI启动子序列富含TATA-box和CAAT-box两个基本元件,还含有与昼夜节律、光照、蔗糖、逆境响应及组织特异表达等相关的顺式作用元件。将IbSSI基因全长启动子及其6个启动子5’端缺失片段分别替换植物表达载体pBI121的CaMV 35S启动子并在本生烟草(Nicotiana benthamiana)叶片中进行瞬时表达。GUS染色结果表明不同长度片段的启动子驱动β-葡萄糖醛酸酶基因(GUS)表达的能力有所差异,其中-200 bp~-369 bp区段以及-1 015 bp~-1 304 bp区段可能存在着增强转录的重要顺式作用元件。本研究揭示了IbSSI基因受外源蔗糖诱导表达及昼夜节律调控的原因,并为进一步阐明IbSSI基因在甘薯淀粉生物合成中的作用提供了科学依据。 展开更多
关键词 甘薯(Ipomoea BATATAS (L.) Lam.) IbSSI基因 启动子 顺式作用元件 瞬时表达
含高密度光伏电源的受端电网暂态电压有理分式拟合分析
15
作者 赖全怡 陈民权 +2 位作者 李尚远 康卓然 甘德强 《中国电机工程学报》 EI CSCD 北大核心 2019年第11期3186-3194,共9页
高密度的光伏发电系统从源荷端接入大型交直流混联电网,大幅度改变电网暂态响应特性,对电网的控制与运行提出了新的要求。该文提出利用有理分式拟合算法研究高密度分布式光伏电源接入对受端电网暂态电压的影响。首先,通过隐式梯形积分、... 高密度的光伏发电系统从源荷端接入大型交直流混联电网,大幅度改变电网暂态响应特性,对电网的控制与运行提出了新的要求。该文提出利用有理分式拟合算法研究高密度分布式光伏电源接入对受端电网暂态电压的影响。首先,通过隐式梯形积分、Cramer法则等证明将有理分式拟合引入电网暂态分析的适用性。之后,建立含高密度分布式光伏电源的受端电网场景,对故障期间和恢复阶段的光伏出口电压值与逆变器控制参数间的关系进行有理分式拟合,验证方法的有效性。 展开更多
关键词 分布式光伏电源 暂态电压 受端电网 解析表达式 有理分式拟合
淋巴细胞活化基因-3蛋白表达与生物信息学分析
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作者 吴鹏 尹欣悦 陈创夫 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第17期16-19,182共5页
为了研究淋巴细胞活化基因-3蛋白的生物学特性,试验采用PCR方法扩增淋巴细胞活化基因-3胞外区序列,构建重组质粒,将重组质粒转染至HEK293感受态细胞中表达目的蛋白,并对目的蛋白进行SDS-PAGE及Western-blot检测,通过ProtParam软件分析... 为了研究淋巴细胞活化基因-3蛋白的生物学特性,试验采用PCR方法扩增淋巴细胞活化基因-3胞外区序列,构建重组质粒,将重组质粒转染至HEK293感受态细胞中表达目的蛋白,并对目的蛋白进行SDS-PAGE及Western-blot检测,通过ProtParam软件分析淋巴细胞活化基因-3蛋白性质,通过SWISS-MODEL软件预测蛋白质结构。结果表明:PCR法成功扩增出目的条带,大小约为1 430 bp,1. 0%琼脂糖凝胶电泳显示酶切成功;经10%SDS-PAGE凝胶电泳分析,在68 ku处出现目的条带,目的蛋白成功表达;纯化后的蛋白质经Western-blot检测证明具有特异性;目的蛋白具有22种可能的折叠形态,理论等电点pI值为9. 08,蛋白质结构不稳定,亲水性较差。说明试验成功表达了淋巴细胞活化基因-3蛋白。 展开更多
关键词 淋巴细胞活化基因-3蛋白 瞬时转染 HEK293细胞 蛋白表达 蛋白结构
甜瓜CmERHV-3基因cDNA的克隆及功能初步分析
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作者 刘畅 灵芝 +2 位作者 张鸿 郝金凤 哈斯阿古拉 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第4期1079-1084,共6页
为了研究甜瓜ERF(ethylene-responsive factor)亚家族基因在果实成熟过程中的功能,本研究以甜瓜(Cucumis melo L.)品种河套蜜瓜为材料,克隆得到甜瓜ERF亚家组成员之-CmERFIV-3(MEL03C021306)基因cDNA,其开放阅读框(oRF)长为7... 为了研究甜瓜ERF(ethylene-responsive factor)亚家族基因在果实成熟过程中的功能,本研究以甜瓜(Cucumis melo L.)品种河套蜜瓜为材料,克隆得到甜瓜ERF亚家组成员之-CmERFIV-3(MEL03C021306)基因cDNA,其开放阅读框(oRF)长为702bp,编码233个氨基酸。分别构建了CmERFIV-3基因的超表达载体pPZPIV-3和RNAi载体pARTIV-3,采用农杆菌介导的瞬时表达技术将含有重组质粒的农杆菌菌液注射到成熟期甜瓜果实中。结果显示,注射超表达载体的部位与对照相比,23.3%样品出现提前变黄的表型,而注射RNAi载体的部位与对照相比,20%样品出现持绿的表型。实时荧光定量PCR结果表明,注射超表达载体部位的目的基因的表达量是对照的2.37倍,而注射RNAi载体部位的目的基因的表达量是对照的0.24倍。这些结果初步表明CmERFIV-3基因参与甜瓜果实成熟过程。 展开更多
关键词 甜瓜 ERF基因 转录因子 果实 瞬时表达
嗜热内切葡聚糖酶(E1)植物亚细胞定位表达载体的构建及验证 预览
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作者 李齐东 高璐 +5 位作者 蒋建雄 武艳芳 李霞 王永丽 刘瑶瑶 孙建中 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1247-1253,共7页
嗜热纤维素降解酶在植物中的表达对促进纤维素降解,提高生物质资源化利用具有重要作用。本研究采用来源于解纤维素热酸菌(Acidothermus cellulolytics)的嗜热内切葡聚糖酶基因(E1),基因序列优化后,构建了5种带有不同亚细胞定位信号肽的... 嗜热纤维素降解酶在植物中的表达对促进纤维素降解,提高生物质资源化利用具有重要作用。本研究采用来源于解纤维素热酸菌(Acidothermus cellulolytics)的嗜热内切葡聚糖酶基因(E1),基因序列优化后,构建了5种带有不同亚细胞定位信号肽的目的基因植物表达载体,分别将嗜热内切葡聚糖酶(E1)定位到细胞质、质外体、内质网、叶绿体和线粒体等亚细胞结构中。通过农杆菌介导的瞬时表达技术,利用洋葱表皮和烟草叶片进行定位表达研究,观察到在信号肽的引导下,基因表达产物在相应的亚细胞结构中正确定位。本研究为进一步探索E1不同定位表达在秸秆高效转化和资源化利用中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 嗜热内切葡聚糖酶 亚细胞定位 瞬时表达
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EV71抗原双元植物表达载体构建及生菜瞬时表达 被引量:2
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作者 罗雯 艾佐佐 +1 位作者 刘艳梅 刘旺喜 《生物技术》 2018年第1期18-23,29共7页
[目的]构建EV71 P1和3CD基因的双元植物表达载体,通过农杆菌注射渗透法实现在生菜叶片中的瞬时共表达。[方法]根据Gen Bank序列,设计合成EV71 C4亚型P1和3CD基因,分步克隆入植物表达载体p CAMBIA2301,并转化农杆菌LBA4404。农杆菌注射... [目的]构建EV71 P1和3CD基因的双元植物表达载体,通过农杆菌注射渗透法实现在生菜叶片中的瞬时共表达。[方法]根据Gen Bank序列,设计合成EV71 C4亚型P1和3CD基因,分步克隆入植物表达载体p CAMBIA2301,并转化农杆菌LBA4404。农杆菌注射渗透法对意大利生菜叶片进行遗传转化,固相酶联斑点实验和免疫印迹实验检测感染叶片总蛋白提取物,分析外源基因表达效果。[结果]限制酶切验证获得共表达植物表达载体p CAMBIA2301-P1-3CD。感染叶片的外源基因表达产物中具有抗VP1抗体结合活性的蛋白,其分子量约39 k Da。[结论]成功构建EV71 3CD和P1基因双元植物表达载体,其在意大利生菜叶片中的表达产物具有免疫反应性。为利用植物生物反应器生产抗EV71口服疫苗提供了理论和实验依据。 展开更多
关键词 肠道病毒71型 植物双元表达载体 生菜 瞬时表达
番茄Rubisco小亚基叶绿体转运肽的克隆及其功能验证
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作者 胥华伟 侯典云 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第4期1570-1575,共6页
转运肽对于大多数蛋白转运到叶绿体是必需的。虽然利用生物信息学分析可预测蛋白的定位信息及转运肽的序列信息,但转运肽的转运效果仍需要进一步的验证。本研究基于Gen Bank所报道的番茄Rubisco小亚基叶绿体转运肽(TCTP)的信息,利用... 转运肽对于大多数蛋白转运到叶绿体是必需的。虽然利用生物信息学分析可预测蛋白的定位信息及转运肽的序列信息,但转运肽的转运效果仍需要进一步的验证。本研究基于Gen Bank所报道的番茄Rubisco小亚基叶绿体转运肽(TCTP)的信息,利用特异引物从番茄DNA中扩增获得一段约170bp的片段,克隆到pMD@18-T simple载体,测序表明获得番茄Rubisco小亚基的转运肽。为了进一步验证其功能,将其连接到瞬时表达载体P322-d1-eGFP,构建瞬时表达载体TCTP-eGFP-d1,利用PEG介导法将重组瞬时表达载体转入水稻原生质体,激光共聚焦显微镜分析表明,该转运肽可以顺利将eGFP定位到叶绿体,该研究有助于TCTP的进一步应用。 展开更多
关键词 番茄 RUBISCO小亚基 转运肽 水稻原生质体 瞬时表达
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