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特异性PCR方法鉴别鳖甲药材和饮片 被引量:1
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作者 程素倩 袁媛 +3 位作者 刘富艳 蒋超 金艳 赵玉洋 《中国中药杂志》 CSCD 北大核心 2018年第23期4569-4574,共6页
鳖甲为临床常用的动物药材,炮制加工后鳖甲药材及饮片形态特征丢失,难以鉴别。为建立高效稳定的鳖甲DNA鉴别方法,该研究将SDS法与柱纯化相结合,使用通用引物进行PCR扩增和测序,并根据鳖甲及其混伪品序列差异,寻找特异性SNP位点设计了鉴... 鳖甲为临床常用的动物药材,炮制加工后鳖甲药材及饮片形态特征丢失,难以鉴别。为建立高效稳定的鳖甲DNA鉴别方法,该研究将SDS法与柱纯化相结合,使用通用引物进行PCR扩增和测序,并根据鳖甲及其混伪品序列差异,寻找特异性SNP位点设计了鉴别引物,对PCR反应条件进行优化,并进行适用性及准确性考察。当退火温度为62℃,循环次数为35,使用设计的鳖甲特异性鉴别引物Biejia-272.F/R进行PCR扩增,鳖甲药材、饮片及醋鳖甲均扩增获得约300 bp的特异性鉴别条带,混伪品无条带。该方法可作为一种快速准确鉴别鳖甲正伪品的鉴定方法。 展开更多
关键词 鳖甲 醋鳖甲 特异性PCR 分子鉴定
鳖甲抗肝纤维化研究进展 被引量:1
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作者 张晔 吕金朋 +1 位作者 孙佳明 张辉 《吉林中医药》 2018年第6期673-675,共3页
鳖甲始载于《神农本草经》,具有滋阴潜阳、退热除蒸、软坚散结的作用。随着现代药理学研究进展,鳖甲在肝纤维化临床治疗中广泛应用,其抗肝纤维化作用得到了许多临床及实验研究的证实。通过查阅文献进行分析,发现鳖甲中寡肽类化合物是其... 鳖甲始载于《神农本草经》,具有滋阴潜阳、退热除蒸、软坚散结的作用。随着现代药理学研究进展,鳖甲在肝纤维化临床治疗中广泛应用,其抗肝纤维化作用得到了许多临床及实验研究的证实。通过查阅文献进行分析,发现鳖甲中寡肽类化合物是其抗肝纤维化的物质基础,鳖甲能抑制炎症反应、阻断转化生长因子信号转导途径、促进肝星状细胞凋亡、抗氧化损伤、抑制肝星状细胞的活化增殖、调控细胞外基质的产生和降解来治疗肝纤维化。 展开更多
关键词 鳖甲 肝纤维化 炎症反应 转化生长因子
鳖甲HPLC指纹图谱的分析模式探讨 被引量:5
3
作者 肖云芝 万露 +3 位作者 刘朝勇 李晓荣 韩晋 袁海龙 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期32-36,共5页
目的:建立不同产地鳖甲药材的高效液相指纹图谱评价方法。方法:采用HPLC-DAD方法测定了12个产地鳖甲药材样品,通过"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"2004 A进行评价,建立了共有模式,以相关度评价图谱的相似性,对结果进行聚类分析和... 目的:建立不同产地鳖甲药材的高效液相指纹图谱评价方法。方法:采用HPLC-DAD方法测定了12个产地鳖甲药材样品,通过"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"2004 A进行评价,建立了共有模式,以相关度评价图谱的相似性,对结果进行聚类分析和主成分分析。结果:12批不同产地的鳖甲药材有7个共有峰,其高效液相色谱指纹图谱相似度均在0.9以上,不同产地鳖甲药材可分为两类,质量相似性较好;主成分分析结果同聚类分析法分析结果一致,经主成分分析,12批鳖甲药材共提取出3个主成分,其累积贡献率达83.21%。结论:用SPSS软件对鳖甲药材的指纹图谱进行主成分分析及聚类分析,所建立的模式识别方法,操作简便,统计结果具有可靠性,对鳖甲药材化学计量学分类及其质量评价提供有效参考。 展开更多
关键词 鳖甲 高效液相色谱 指纹图谱 聚类分析 主成分分析
鳖甲抗肝纤维化活性多肽部位HPLC指纹图谱
4
作者 林春敏 李成容 +1 位作者 叶晓川 刘焱文 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第21期74-77,共4页
目的:建立鳖甲抗肝纤维化活性多肽部位HPLC指纹图谱,全面完整地反映其内在化学信息,为鳖甲活性多肽部位的质量控制提供依据。方法:采用高效液相色谱法,ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.03%三氟乙酸梯度... 目的:建立鳖甲抗肝纤维化活性多肽部位HPLC指纹图谱,全面完整地反映其内在化学信息,为鳖甲活性多肽部位的质量控制提供依据。方法:采用高效液相色谱法,ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.03%三氟乙酸梯度洗脱,检测波长220 nm,流速1 m L·min-1,柱温25℃。结果:建立了鳖甲抗肝纤维化活性多肽部位的HPLC指纹色谱,获得了13个共有峰;利用中药指纹图谱相似度评价软件进行相似度评价,10批样品的相似度均〉0.9,提示鳖甲活性多肽质量较稳定。结论:该方法准确可靠,精密度、重复性和稳定性良好,能有效控制鳖甲活性多肽部位的质量,为进一步药效研究、制剂研发提供质量保证。 展开更多
关键词 鳖甲 活性多肽 高效液相色谱法 指纹图谱
鳖甲药材指纹图谱与其抗肝纤维化作用的谱效关系研究 被引量:9
5
作者 肖云芝 于超 +4 位作者 刘朝勇 万露 徐平华 韩晋 袁海龙 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第17期2506-2510,共5页
目的研究不同产地鳖甲药材的HPLC指纹图谱与其抗纤维化作用的谱效关系,揭示鳖甲药材抗肝纤维化作用的"药效成分组"。方法 HPLC-DAD法测定了12个产地鳖甲药材样品,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004 A进行评价,建立了共有模式,... 目的研究不同产地鳖甲药材的HPLC指纹图谱与其抗纤维化作用的谱效关系,揭示鳖甲药材抗肝纤维化作用的"药效成分组"。方法 HPLC-DAD法测定了12个产地鳖甲药材样品,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004 A进行评价,建立了共有模式,并进行主成分分析(PCA)。以LX-2肝星状细胞为模型研究其对肝细胞的抑制效果,采用SPSS软件对数据进行相关分析,研究谱效相关性。结果 12个产地鳖甲药材HPLC指纹图谱中共有7个特征共有峰,其中峰2、5与LX-2肝星状细胞抑制效果(A值)的相关性呈现中等程度相关,峰4的相关性最强。由PCA可知,峰4的量对鳖甲质量有着重要的影响。结论 12个产地鳖甲药材对LX-2肝星状细胞均有抑制作用,HPLC指纹图谱与其抗纤维化作用之间有一定的相关性,为进一步控制鳖甲药材内在质量提供参考。 展开更多
关键词 鳖甲 指纹图谱 抗肝纤维化作用 主成分分析 谱效关系 LX-2肝星状细胞
鳖甲活性多肽的提取及膜分离纯化工艺优选 被引量:4
6
作者 李水清 孔菲菲 +2 位作者 张方蕾 叶晓川 刘焱文 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2014年第2期11-14,共4页
目的:优选鳖甲活性多肽的提取工艺及膜分离工艺。方法:以多肽提取量和浸膏得率为指标,通过正交试验考察料液比、提取时间、提取次数对鳖甲多肽提取工艺的影响;以膜渗透通量或膜效能为指标,运用单因素试验优选鳖甲活性多肽的膜分离... 目的:优选鳖甲活性多肽的提取工艺及膜分离工艺。方法:以多肽提取量和浸膏得率为指标,通过正交试验考察料液比、提取时间、提取次数对鳖甲多肽提取工艺的影响;以膜渗透通量或膜效能为指标,运用单因素试验优选鳖甲活性多肽的膜分离工艺。结果:最佳提取工艺为醋鳖甲粉碎过24目筛,加6倍量水提取3次,每次3h;多肽提取量达2.442g,浸膏得率11.71%。膜分离纯化条件为鳖甲多肽质量分数6%,截留相对分子质量20,kD的超滤膜操作压力分别为0.18—0.21,0.8MPa;蛋白质截留率83.67%,相对分子质量〈8000的鳖甲多肽纯度达57.62%。结论:膜分离技术可用于鳖甲活性多肽的制备。 展开更多
关键词 鳖甲 多肽 提取工艺 膜分离工艺 正交试验 渗透通量 膜效能
鳖甲中抑制单胺氧化酶活性肽筛选模型的建立
7
作者 徐士勋 安亚文 +6 位作者 韩秋俊 程亚涛 王艳慧 绪扩 汪林 李强 雷海民 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2013年第22期170-173,共4页
目的:建立单胺氧化酶(MAO)活性筛选模型,以该模型指导鳖甲活性肽的分离,并检验分离单体活性.方法:参照MAO试剂盒方法,以优降宁为阳性药进行MAO活性筛选模型;对鳖甲水提液依次调节乙醇体积分数为20%,40%,60%,80%,90%,得到各醇... 目的:建立单胺氧化酶(MAO)活性筛选模型,以该模型指导鳖甲活性肽的分离,并检验分离单体活性.方法:参照MAO试剂盒方法,以优降宁为阳性药进行MAO活性筛选模型;对鳖甲水提液依次调节乙醇体积分数为20%,40%,60%,80%,90%,得到各醇沉部位,再以该模型筛选各醇沉部位,选取活性最优部分继续分离,然后将分得的单体以该模型检验活性.结果:该MAO活性筛选模型中,阳性药优降宁质量浓度在1.0g·L-1时,抑制率为98.30% ~ 103.05%;各部位质量浓度为1.=g·L-1时,鳖甲水提液部位MAO抑制率为(23.34±9.66)%,20%醇沉部位(28.16±5.78)%,40%醇沉部位(30.69±7.17)%,60%醇沉部位(41.60±8.03)%,80%醇沉部位(64.91±2.94)%,90%醇沉部位(53.34±7.76)%;在80%醇沉部位分得鳖甲七肽(GAGPHGG),质量浓度在0.1~1.6 g·L-1时,鳖甲七肽MAO抑制率为15.30% ~54.84%.结论:发现MAO活性筛选模型优降宁抑制效果显著,提示该模型成功;以该模型成功指导了鳖甲七肽的分离,且鳖甲七肽具有较明显MAO抑制活性. 展开更多
关键词 鳖甲 单胺氧化酶 活性肽
鳖甲水提物W-A-80在模拟胃肠液中消化情况分析 被引量:1
8
作者 韩秋俊 徐士勋 +8 位作者 王鹏龙 王艳慧 程亚涛 周燊 褚福浩 宋霁翔 李国梁 李强 雷海民 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2013年第14期23-27,共5页
目的:研究鳖甲水提物W-A-80在模拟胃、肠环境中消化情况,探讨其体内转化形式。方法:采用水提醇沉法制备鳖甲水提物W-A-80,模拟胃肠液环境,于37℃消化。以寡肽产率为指标,通过双缩脲反应-酶联免疫检测仪法考察胃蛋白酶和胰蛋白酶于不... 目的:研究鳖甲水提物W-A-80在模拟胃、肠环境中消化情况,探讨其体内转化形式。方法:采用水提醇沉法制备鳖甲水提物W-A-80,模拟胃肠液环境,于37℃消化。以寡肽产率为指标,通过双缩脲反应-酶联免疫检测仪法考察胃蛋白酶和胰蛋白酶于不同酶底比、酶解时间的寡肽(截留相对分子质量〈3 500)产率变化;平衡透析法测定模拟胃肠液消化后所得寡肽与体外小鼠肝组织的蛋白结合率。结果:确定酶解条件为人工胃液酶底比1∶10,于37℃酶解3 h,不同质量浓度寡肽与肝组织的蛋白结合率分别为31.63%,19.93%,9.65%;人工肠液酶底比1∶100,于37℃酶解11 h,不同质量浓度寡肽与肝组织的蛋白结合率分别为48.75%,47.43%,22.72%;均明显高于空白对照的7.00%,5.31%,4.60%。结论:鳖甲水提物W-A-80经模拟胃肠液消化有大量寡肽产生,且活性显著强于原液,推测寡肽可能是鳖甲抗肝纤维化的物质基础。 展开更多
关键词 鳖甲 模拟胃液 模拟肠液 寡肽 肝组织蛋白结合率
鳖甲炮制前后肽类含量比较 被引量:5
9
作者 韩秋俊 毕葳 +9 位作者 王伟 李取胜 王鹏龙 徐士勋 王艳慧 绪扩 汪林 程亚涛 李强 雷海民 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2012年第24期86-88,共3页
目的:建立双缩脲反应.酶联免疫检测仪对肽类的快速定量方法,测定鳖甲炮制前后肽类含量差异,探讨鳖甲炮制科学性。方法:应用0.02g·mL^-1酒石酸钠钾50μL,5%氢氧化钠20μL,0.5%硫酸铜50恤L的双缩脲显色剂测定鳖甲炮制前... 目的:建立双缩脲反应.酶联免疫检测仪对肽类的快速定量方法,测定鳖甲炮制前后肽类含量差异,探讨鳖甲炮制科学性。方法:应用0.02g·mL^-1酒石酸钠钾50μL,5%氢氧化钠20μL,0.5%硫酸铜50恤L的双缩脲显色剂测定鳖甲炮制前后肽类含量,检测波长580nm。结果:鳖甲七肽在0.10—5.00g·L^-1与吸光度呈良好的线性关系,醋鳖甲平均总肽含量为6.99%,生鳖甲平均总肽含量为1.04%。结论:醋鳖甲总肽含量明显高于生鳖甲总肽含量,醋制法可提高鳖甲有效成分溶出度。 展开更多
关键词 鳖甲 寡肽 双缩脲反应-酶联免疫检测仪 含量测定
鳖甲肽脂质体药代动力学及肝靶向分析 被引量:1
10
作者 汤晗霄 赵天文 +3 位作者 黄宇 盛云杰 郑杭生 张永生 《中国实验方剂学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第9期68-73,共6页
目的:制备含DiR碘化物荧光染料的长循环脂质体(DiR-SSL),采用SD大鼠和BALB/c裸鼠进行荧光成像的体内靶向性研究,利用空白SSL包封含5-羧基荧光素(5-FAM)的鳖甲肽(HGRFG-5-FAM,HF)制备HGRFG-5-FAM-SSL(HFL),研究HF及HFL分别给药... 目的:制备含DiR碘化物荧光染料的长循环脂质体(DiR-SSL),采用SD大鼠和BALB/c裸鼠进行荧光成像的体内靶向性研究,利用空白SSL包封含5-羧基荧光素(5-FAM)的鳖甲肽(HGRFG-5-FAM,HF)制备HGRFG-5-FAM-SSL(HFL),研究HF及HFL分别给药于大鼠的药代动力学。方法:采用薄膜分散法制备DiR-SSL及HFL,取2组SD大鼠分别尾静脉注射HF及HFL,其HF质量浓度及剂量一致,于不同时间点采血,利用多功能微孔板检测仪分析HF血药浓度,计算药代动力学参数;将DiR-SSL尾静脉注射于BALB/c裸鼠,分别于1,2,5,7,24 h活体成像,读取荧光强度值;取正常SD大鼠尾静脉注射DiR-SSL,24 h后解剖心、肝、脾、肺、肾于荧光成像系统成像并读取荧光强度值,将肝组织冷冻切片进行激光共聚焦扫描。结果:HF注射到SD大鼠体内,其半衰期(T_(1/2))仅0.826 h,而HFL在相同剂量下,T1/2和药时曲线下面积(AUC_(0-∞))分别为HF的16.253,11.899倍;在BALB/c裸鼠活体成像中,荧光主要集中于肝脏位置,随着时间增加荧光强度逐渐减弱;SD大鼠各脏器中的DiR-SSL荧光在肝脏中最强,注射24 h后DiR-SSL仍能在肝脏储留。结论:SSL递药系统能显著延长HF在SD大鼠体内的T_(1/2)。SSL递药系统具有肝靶向作用,提示该系统可作为药物载体进行肝靶向递药。 展开更多
关键词 肝靶向 长循环脂质体 DIR 鳖甲肽 药代动力学 5-羧基荧光素
柴胡总多糖提取工艺优化及其不同炮制品中总多糖的含量比较 被引量:5
11
作者 李小宁 于欢 +4 位作者 龚千锋 龚志勇 彭璐 俞杰 阳强 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第14期27-30,共4页
目的:优化柴胡总多糖的提取工艺,比较不同炮制品中总多糖的含量差异,为该有效部位的开发利用提供参考。方法:采用苯酚-硫酸法测定总多糖含量,检测波长485 nm。通过单因素试验与正交试验优选柴胡总多糖的提取工艺,考察提取温度、料水... 目的:优化柴胡总多糖的提取工艺,比较不同炮制品中总多糖的含量差异,为该有效部位的开发利用提供参考。方法:采用苯酚-硫酸法测定总多糖含量,检测波长485 nm。通过单因素试验与正交试验优选柴胡总多糖的提取工艺,考察提取温度、料水比、提取时间、提取次数对总多糖得率的影响。测定柴胡不同炮制品中总多糖的含量。结果:各因素对提取工艺的影响顺序为提取温度〉提取次数〉料液比〉提取时间。柴胡总多糖的最佳提取工艺条件为加50倍量水在100℃下提取2次,每次2 h。可溶性总多糖提取率最高达19.39%,柴胡生品、清炒柴胡、酒炙柴胡、酒拌柴胡、醋炙柴胡、醋拌柴胡、鳖血炒柴胡中总多糖质量分数9.82%~20.82%。结论:优选的提取工艺合理可靠、重复性好,为柴胡总多糖的研发提供理论依据。 展开更多
关键词 柴胡 鳖血 多糖 正交试验 炮制 苯酚-硫酸法
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