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大头鳕TNFSF6基因的结构分析及其在发育早期和病毒暴发时的表达水平 预览
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作者 刘瑞婷 蒋洁兰 +5 位作者 毛明光 姜志强 布尔特 矫志伟 陈明康 孙谦 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期523-531,共9页
为揭示大头鳕TNFSF6基因的基本结构与功能及其在大头鳕发育和神经坏死病毒(Pacific cod nervous necrosis virus, PCNNV)暴发时的响应机制,本研究通过基因克隆获得TNFSF6 cDNA开放阅读框序列,并对序列进行生物信息学分析,运用相对荧光定... 为揭示大头鳕TNFSF6基因的基本结构与功能及其在大头鳕发育和神经坏死病毒(Pacific cod nervous necrosis virus, PCNNV)暴发时的响应机制,本研究通过基因克隆获得TNFSF6 cDNA开放阅读框序列,并对序列进行生物信息学分析,运用相对荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对TNFSF6在不同组织、孵化后不同日龄仔鱼和PCNNV感染前后仔稚鱼中的表达水平进行检测。结果显示,大头鳕TNFSF6 cDNA长1 388 bp,5′UTR占315bp,3′UTR占500 bp,ORF全长573 bp,编码190个氨基酸。qRT-PCR结果显示,TNFSF6在各组织均有表达,但在脾脏和鳃组织中的表达量较高;大头鳕孵化后15、20、37和40 dTNFSF6基因的转录水平分别是其在5 d转录水平的0.28、0.15、0.12和0.13倍。在24 d和46 d PCNNV暴发时,病鱼TNFSF6基因的转录水平高于对照组;在77 d PCNNV暴发时,病鱼TNFSF6转录水平则显著低于对照组。研究表明,TNFSF6基因在大头鳕发育早期和仔鱼暴发PCNNV时发挥了重要的作用。 展开更多
关键词 大头鳕 肿瘤坏死因子 TNFSF6 发育 神经坏死病毒
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石斑鱼病毒性神经坏死病的病原分离和鉴定 预览
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作者 林楠 吴斌 +4 位作者 李苗苗 王巧煌 林国清 樊海平 林克冰 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2019年第4期474-479,共6页
对福建省漳州市某水产养殖场发生的疑似病毒性神经坏死病的病鱼进行病原分离和鉴定.从出现疑似病毒性神经坏死病症状的石斑鱼苗上取眼部、脑部组织进行研磨,将匀浆液接种到条纹月鳢细胞系(SSN)细胞株SSN-1及其克隆细胞株E-11,两株细胞... 对福建省漳州市某水产养殖场发生的疑似病毒性神经坏死病的病鱼进行病原分离和鉴定.从出现疑似病毒性神经坏死病症状的石斑鱼苗上取眼部、脑部组织进行研磨,将匀浆液接种到条纹月鳢细胞系(SSN)细胞株SSN-1及其克隆细胞株E-11,两株细胞均出现明显的细胞病变,细胞肿胀变圆,呈空泡化并脱落,E-11细胞较SSN-1细胞更早出现细胞病变,且病变更明显.将病鱼眼部、脑部组织的研磨液、细胞培养上清进行RT-PCR检测,均检测出病毒性神经坏死病病毒(VNNV)的特异性条带,目的片段大小为427bp,序列比对结果提示该病原为赤点石斑鱼神经坏死病毒(RGNNV).电镜观察结果显示,细胞培养上清中存在直径约30nm的病毒颗粒,细胞质内大量病毒颗粒聚集成团,细胞器受损,细胞结构被破坏.将分离得到的VNNV进行温度、酸碱度敏感性试验,结果显示:50℃下处理30min后该病毒滴度明显下降,60℃处理30min后病毒失活;在pH为3、11的条件下病毒滴度均明显下降. 展开更多
关键词 石斑鱼 病毒性神经坏死病 分离 鉴定
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海南石斑鱼苗病毒性神经坏死病的初步诊断 预览
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作者 郭德权 费小雯 +4 位作者 李亚军 肖洒 朱为菊 郑佩华 邓晓东 《海南大学学报:自然科学版》 CAS 2019年第3期233-238,共6页
为了探究2019年1月份海南省乐东县某养殖场所培育的珍珠龙胆石斑鱼鱼苗发生大规模死亡的病因,本研究对发病情况进行了调查、临床诊断和实验室诊断.研究结果显示:该病并未在主要发病季节发生,但出现了典型的病毒性神经坏死病(viral nervo... 为了探究2019年1月份海南省乐东县某养殖场所培育的珍珠龙胆石斑鱼鱼苗发生大规模死亡的病因,本研究对发病情况进行了调查、临床诊断和实验室诊断.研究结果显示:该病并未在主要发病季节发生,但出现了典型的病毒性神经坏死病(viral nervous necrosis,VNN)症状,其症状为食欲降低、行为异常、转圈、鱼体发黑、体况差等,累计死亡率达62%.本研究针对患病鱼体进行了寄生虫学检查,结果为阴性;组织病理学结果显示:患病鱼的视网膜和脑组织空泡化严重;应用世界动物卫生组织(OIE)推荐的VNN特异性检测引物,运用RT-PCR检测方法,扩增出病毒性神经坏死病毒(nervous necrosis virus,NNV)特异性的421bp基因片段;运用虹彩病毒科蛙病毒(Ranavirus)、细胞肿大病毒(Megalocytivirus)检测引物,采用PCR方法排除了混合感染,并初步诊断该病为病毒性神经坏死病,此外,针对石斑鱼养殖后期的病害防御提出了合理的措施。 展开更多
关键词 珍珠龙胆石斑鱼 病毒性神经坏死 寄生虫学检查 组织病理学检查 RT-PCR
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鲈鱼病毒性神经坏死病的诊断与防治 预览
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作者 陈晖 方成俊 +3 位作者 肖颖 徐淑菲 郭书林 黄印尧 《中国动物检疫》 CAS 2019年第1期92-95,共4页
福建省漳浦县某海水养鱼场饲养的10万尾鲈鱼苗(Lateolabrax japonicus)发生以自转、狂游、侧游等运动失调及大批死亡为特征的疾病。病死鱼眼睛发亮、微肿,部分鱼体表有新鲜的破溃伤口,死亡率高达65%。寄生虫、细菌学检查均为阴性。应用... 福建省漳浦县某海水养鱼场饲养的10万尾鲈鱼苗(Lateolabrax japonicus)发生以自转、狂游、侧游等运动失调及大批死亡为特征的疾病。病死鱼眼睛发亮、微肿,部分鱼体表有新鲜的破溃伤口,死亡率高达65%。寄生虫、细菌学检查均为阴性。应用世界动物卫生组织(OIE)推荐的检测引物,采用RT-PCR检测方法扩增出神经坏死病毒特异性的421bp基因片段,依此诊断为病毒性神经坏死病(Viral nerve necrosis,VNN)。采取及时捞取病死鱼,去除网箱沉渣粪便,中草药吊袋消毒,减食和氯苯尼考、黄芪多糖、益生菌拌料等防治措施,收到很好的防治效果。 展开更多
关键词 鲈鱼 神经坏死病毒病 寄生虫学检查 细菌学检查 RT-PCR 防治
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一起石斑鱼苗病毒性神经坏死病的诊断 预览
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作者 陈晖 肖颖 +2 位作者 方成俊 张东斌 余晓薇 《中国动物检疫》 CAS 2018年第1期104-106,共3页
2017年6—7月,福建省东山县某石斑鱼养殖场多批20-60日龄杂交石斑鱼苗发病,临床表现为游泳行为改变,致盲、打转,鱼体发黑,不食,继而死亡,死亡率高达90%以上。多次应用抗生素治疗无效,寄生虫、细菌学检查为阴性。应用世界动物卫生组织(... 2017年6—7月,福建省东山县某石斑鱼养殖场多批20-60日龄杂交石斑鱼苗发病,临床表现为游泳行为改变,致盲、打转,鱼体发黑,不食,继而死亡,死亡率高达90%以上。多次应用抗生素治疗无效,寄生虫、细菌学检查为阴性。应用世界动物卫生组织(OIE)推荐的检测引物,采用RT-PCR检测方法扩增出神经坏死病毒(NNV)特异性的421 bp基因片段,以此诊断为病毒性神经坏死病(VNN)。 展开更多
关键词 杂交石斑鱼苗 病毒性神经坏死病 寄生虫学检查 细菌学检查 RT-PCR
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病毒性神经坏死病病毒核酸检测用标准物质的制备 预览
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作者 段燕喻 陈茹 +4 位作者 吴晓薇 朱道中 林志雄 田纯见 刘志玲 《中国动物检疫》 CAS 2018年第2期102-107,共6页
利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质。设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至pGEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA。初步定量稀释至... 利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质。设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至pGEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA。初步定量稀释至约108 copies/μL,均匀性检验结果显示样品间差异〈5%;稳定性检验表明,室温(20~25℃)保存7 d、冷藏(2~8℃)保存1个月和冷冻(-20℃)保存6个月的含量均无明显变化。采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法,对转录的RNA片段进行定值,并根据委托单位的定值结果进行不确定度估算。核酸标准物质定值为(8.452±0.068)×108 copies/μL,可用作NNV核酸检测的标准质控品。 展开更多
关键词 病毒性神经坏死病 实时定量RT-PCR 标准物质
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海水养殖鱼类病毒性神经坏死病防控技术研究进展 预览 被引量:1
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作者 黄文 陈偿 +7 位作者 赵哲 李璐璐 罗鹏 王艳红 任春华 胡超群 王冬梅 詹钟仁 《渔业研究》 2016年第5期419-426,共8页
神经坏死病毒(Nervous necrosis virus,NNV)是一种能导致海水鱼脑、中枢神经及视网膜等神经系统坏死的病毒,该病毒引发的鱼类病毒性神经坏死病主要发生在稚鱼和幼鱼期,较强的致病力及高致死率给海水鱼养殖业带来了沉重的打击,成为海... 神经坏死病毒(Nervous necrosis virus,NNV)是一种能导致海水鱼脑、中枢神经及视网膜等神经系统坏死的病毒,该病毒引发的鱼类病毒性神经坏死病主要发生在稚鱼和幼鱼期,较强的致病力及高致死率给海水鱼养殖业带来了沉重的打击,成为海水鱼类养殖产业可持续发展最重要的限制因素之一。文章主要综述了NNV的基本特征、诊断技术、病毒传播、疫苗免疫学等研究进展,介绍了NNV的防控技术及策略,为海水养殖鱼类NNV的防控工作提供参考。 展开更多
关键词 海水鱼类 病毒性神经坏死病 综述 乙型野田村病毒 病害防控
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Diagnosis of nervous necrosis virus in orange-spotted grouper, Epinephelus coioides, by a rapid and convenient RT-PCR method 预览 被引量:1
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作者 MU Yinnan LIN Kebing +1 位作者 CHEN Xinhua AO Jingqun 《海洋学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2013年第10期88-92,共5页
病毒的紧张的坏死(VNN ) 在海洋的鱼引起高死亡,特别在 grouper,全球并且在中国。因为没有有效疫苗或药处理 VNN,早察觉和预防是重要的堵住它的爆发。在这研究,反向的抄写聚合酶链反应(RT-PCR ) 为 VNN 病原体的快速、方便、敏感的... 病毒的紧张的坏死(VNN ) 在海洋的鱼引起高死亡,特别在 grouper,全球并且在中国。因为没有有效疫苗或药处理 VNN,早察觉和预防是重要的堵住它的爆发。在这研究,反向的抄写聚合酶链反应(RT-PCR ) 为 VNN 病原体的快速、方便、敏感的察觉被开发,紧张的坏死病毒(NNV ) ,在 grouper。整个过程从 RNA 抽取在 3.5 h 以内被完成到 PCR 产品可视化。这个方法的察觉限制是 NNV RNA 标准的 200 个拷贝,它对应于病毒粒子的 200 个拷贝。这个 RT-PCR 方法对 NNV 察觉没有特定对另外的鱼跨反应病毒的疾病病原体例如传染胰腺的坏死病毒( IPNV ),传染造血的坏死病毒( IHNV ),鲤鱼病毒( SVCV )的春天 viraemia ,流行于家畜的造血的坏死病毒( EHNV ),并且大黄 croaker iridovirus ( LYCIV )。与这个方法,看到橘子的 grouper (Epinephelus coioides ) 从育种站与或没有在福建省的 VNN 流行病的发生的油炸食品被检测。结果都显示出那或当从没有 VNN 的二个育种站的40%油炸食品或25%流行病也作为 NNV 被检测时,从有流行病的发生的二个育种站的93%油炸食品作为积极被诊断积极,显示这个 RT-PCR 方法能被用于快速, NNV 感染的敏感察觉并且在 VNN 流行警戒适用。 展开更多
关键词 RT-PCR法 神经坏死病毒 斜带石斑鱼 诊断方法 传染性造血器官坏死 传染性胰腺坏死 病毒检测 RNA提取
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鱼类诺达病毒及其所导致的疾病 预览 被引量:4
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作者 黄剑南 郭志勋 +1 位作者 冯娟 林蠡 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期 831-836,共6页
随着世界海水鱼类养殖业的迅速发展,病毒性疾病的暴发流行也愈发严重。由鱼类诺达病毒(piscine nodavirus)引起的病毒性神经坏死症(viral nervous necrosis,VNN),又称空泡性脑视网膜炎(vacuolatingencephalopathy and retinopa... 随着世界海水鱼类养殖业的迅速发展,病毒性疾病的暴发流行也愈发严重。由鱼类诺达病毒(piscine nodavirus)引起的病毒性神经坏死症(viral nervous necrosis,VNN),又称空泡性脑视网膜炎(vacuolatingencephalopathy and retinopathy,VER),是一种世界范围内流行的海水鱼类病毒病,主要发生在海水鱼类种苗生产阶段,鱼苗死亡率高达90%以上,给海水鱼类养殖业的发展带来严重的危害。 展开更多
关键词 诺达病毒 鱼类诺达病毒 病毒性神经坏死症
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石斑鱼神经坏死病毒RNA干扰的转染条件优化与效果分析 预览 被引量:1
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作者 黄桂菊 喻达辉 +4 位作者 柳明 潘俐玲 王晓宁 曾令兵 龙华 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期 93-98,共6页
克隆了石斑鱼神经坏死病毒(Nervous necrosis virus,NNV)的衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)基因序列并构建了绿色荧光蛋白(EGFP)基因与MCP基因的融合真核表达载体pEGFP-MCP,设计了3对针对MCP基因序列的小片段干扰性RNA(Small... 克隆了石斑鱼神经坏死病毒(Nervous necrosis virus,NNV)的衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)基因序列并构建了绿色荧光蛋白(EGFP)基因与MCP基因的融合真核表达载体pEGFP-MCP,设计了3对针对MCP基因序列的小片段干扰性RNA(Small interfering RNA,siRNA)序列(NNV-001、NNV-002、NNV-003),开展了转染方法、转染剂量与转染效果的研究,用脂质体转染法将pEGFP-MCP和不同剂量的siRNA共转染导入黑头呆鱼肌肉(FHM)细胞.结果表明,用无血清培养基转染、4-6 h后换液的转染方法,比不换液、只将转染混合物代替同体积培养基的转染方法效率高;当质粒的转染量为50、70、100和150 ng时,100 ng的转染量为最合适;在pEGFP-MCP与siRNA共转染组,3对siRNA序列都有干扰效果,均能干扰绿色荧光蛋白的表达,其中NNV-002效果最好.当siRNA终浓度为200 nmol/L时,显示出了较好的沉默效果. 展开更多
关键词 石斑鱼 神经坏死病毒 衣壳蛋白基因 RNA干扰
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鱼类病毒性神经坏死病毒的分离和部分特性研究 预览 被引量:5
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作者 蒋方军 高隆英 +1 位作者 何俊强 江育林 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期 409-413,共5页
收集福建某渔场的患病石斑鱼苗制备组织切片,同时将患病石斑鱼苗组织匀浆后接种到条纹月醴细胞系(striped snakehead,SSN-1),对发生细胞病变(cytopathic effects,CPE)的SSN-1细胞进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、纯化负染,并... 收集福建某渔场的患病石斑鱼苗制备组织切片,同时将患病石斑鱼苗组织匀浆后接种到条纹月醴细胞系(striped snakehead,SSN-1),对发生细胞病变(cytopathic effects,CPE)的SSN-1细胞进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、纯化负染,并制备细胞超薄切片,借助SSN-1细胞系从患病石斑鱼苗中分离病毒性神经坏死病毒(viral nervous necrosis virus,VNNV)。试验结果表明:在病鱼脑和视网膜中可见大量的空泡,接种SSN-1后2~3 d出现CPE,PCR检测可扩增出VNNV特异性带,提示这是VNNV病毒。负染及SSN-1细胞超薄切片的电镜观察显示,该病毒为直径25~30 nm的二十面体病毒粒子,在胞质中呈不完全晶体状排列,同时细胞质中有大量空泡,进一步说明分离株为VNNV。对该分离株进行细胞敏感性试验、脂溶剂敏感试验(氯仿处理)、热敏感试验(55℃30 min)、酸碱敏感试验(pH值为3和pH值为11各1 h),试验结果表明:石斑鱼吻端细胞、鲤上皮瘤细胞、肥头鲤细胞在28℃、25℃、20℃时对该病毒都不敏感;该病毒对氯仿不敏感,对热和酸碱都比较敏感。研究结果表明,用SSN-1细胞系可以从患病鱼中分离VNNV。 展开更多
关键词 病毒性神经坏死病毒 分离 病毒特性
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鱼类病毒性神经坏死病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其特性 预览 被引量:7
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作者 罗卫 田飞焱 +6 位作者 刘荭 陈焕春 李惠芳 刘宗晓 王侃 蔡伊娜 吕建强 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期 651-656,共6页
利用RT-PCR技术获得病毒性神经坏死病毒0603株的衣壳蛋白基因,将其插入到杆状病毒Bac-To-Bac表达系统的pFastBacⅠ质粒中,构建了pFastBac-cp质粒。转化DH10Bac大肠杆菌后获得重组穿梭载体Bacmid-cp,脂质体介导将其转染Sf9细胞产生有... 利用RT-PCR技术获得病毒性神经坏死病毒0603株的衣壳蛋白基因,将其插入到杆状病毒Bac-To-Bac表达系统的pFastBacⅠ质粒中,构建了pFastBac-cp质粒。转化DH10Bac大肠杆菌后获得重组穿梭载体Bacmid-cp,脂质体介导将其转染Sf9细胞产生有感染性的重组杆状病毒AcNPV-cp。利用AcNPV-cp感染Sf9细胞后,SDS-PAGE分析可见大小约为37ku的特异性蛋白带,Western-blotting分析发现,其可以与病毒性神经坏死病毒阳性血清反应出现特异性的杂交带。试验结果表明,AcNPV-cp在Sf9细胞中成功地表达了病毒性神经坏死病毒的衣壳蛋白,其具有良好的免疫学活性。负染电镜观察发现,CP蛋白可自行装配成病毒样颗粒,其大小形态类似于病毒性神经坏死病毒。制备超薄切片后电镜观察发现,CP蛋白自行装配成的病毒样颗粒呈晶格状排列在细胞质中。为研制有效防控鱼类病毒性神经坏死病的新型颗粒性疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 病毒性神经坏死病毒 衣壳蛋白 病毒样颗粒
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鱼类病毒性神经坏死病研究进展 预览
13
作者 陈信忠 龚艳清 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第C00期 141-146,共6页
综述了鱼类病毒性神经坏死病的病原种类、危害性、防治方法以及神经坏死病毒的结构和理化特性等方面的研究进展。
关键词 鱼类 病毒性神经坏死病 进展 危害性
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赤点石斑鱼病毒性神经坏死症的组织病理和电镜观察 预览 被引量:6
14
作者 林蠡 黄剑南 +4 位作者 翁少萍 王云新 刘付永忠 张海发 何建国 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期 519-523,共5页
用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测患病赤点石斑鱼苗,呈Beta诺达病毒阳性.光学显微镜下观察到病鱼的脑、视网膜、脊髓有空泡.在脑部,空泡主要分布在端脑、间脑和小脑.受感染的细胞明显收缩、致密变化和嗜碱性.包涵体常为圆形,大小不... 用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测患病赤点石斑鱼苗,呈Beta诺达病毒阳性.光学显微镜下观察到病鱼的脑、视网膜、脊髓有空泡.在脑部,空泡主要分布在端脑、间脑和小脑.受感染的细胞明显收缩、致密变化和嗜碱性.包涵体常为圆形,大小不一.透射电镜下,在感染细胞的细胞质可观察到含有病毒粒子的致密体.病毒粒子呈等面体,无外膜,直径为25~28 nm,随机分布在细胞质或在致密体内排列成晶格状.致密体大小不一.偶尔观察到较大致密体的外膜已破裂,病毒粒子被释放到细胞质. 展开更多
关键词 赤点石斑鱼 Beta诺达病毒 病毒性神经坏死症
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鱼病毒性神经坏死病病毒(VNNV)不同基因型鉴别方法的建立及在VNN检疫和监测中的应用 预览 被引量:11
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作者 刘荭 史秀杰 +3 位作者 高隆英 何俊强 江育林 陈焕春 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期 695-702,共8页
从GenBank中查找出乙型野田村病毒组中海水鱼类各病毒的序列,并用Sequencher多重序列比较软件将其分到条纹鲹神经坏死病毒(striped jack nervous necrosis virus,SJNNV)组、条纹星鲽神经坏死病毒(barfinflounder nervous necrosis virus... 从GenBank中查找出乙型野田村病毒组中海水鱼类各病毒的序列,并用Sequencher多重序列比较软件将其分到条纹鲹神经坏死病毒(striped jack nervous necrosis virus,SJNNV)组、条纹星鲽神经坏死病毒(barfinflounder nervous necrosis virus,BFNNV)组、红点石斑鱼神经坏死病毒(redspotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV)组和虎斑东方鲀神经坏死病毒(tiger puffer nervous necrosis virus,TPNNV)组4个基因型的组别中.用DNAsis序列比较软件比较同一基因型各基因序列之间的同源性,均在85%以上;不同基因型之间序列的同源性,均在66%以下.结合Premier引物设计软件和Sequencher序列多重比较软件,设计了4对引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)来鉴别这4个不同的基因型.对从深圳口岸进境的产地为台湾的海水鱼苗和广东、福建两省养殖的主要海水鱼类进行检疫和监测,结果在进境的海水鱼苗中检出有RGNNV基因型的VNNV,在福建和广东省养殖的石斑鱼成鱼和鱼苗的病鱼体内均检测到RGNNV基因型的VNNV,对上述扩增产物基因序列进行比较,相似性均在96.5%以上,推导出的氨基酸序列与玛拉巴石斑鱼神经坏死病毒(MNNV)序列相似性均为100%. 展开更多
关键词 病毒性神经坏死病病毒 基因型 鉴别
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