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比较细胞松弛素A与B在胞质分裂阻断法微核试验中的应用 预览
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作者 文海若 任璐 +1 位作者 罗飞亚 汪祺 《中国医药生物技术》 2019年第2期115-120,共6页
目的比较细胞松弛素 A(Cyto A)及细胞松弛素 B(Cyto B)对微核试验常用细胞系——中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)毒性及对体外微核试验结果的影响。方法在荧光显微镜下观察由微丝组成的应力纤维结构,并使用 CHL 开展胞质分裂阻断法微核试验,... 目的比较细胞松弛素 A(Cyto A)及细胞松弛素 B(Cyto B)对微核试验常用细胞系——中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)毒性及对体外微核试验结果的影响。方法在荧光显微镜下观察由微丝组成的应力纤维结构,并使用 CHL 开展胞质分裂阻断法微核试验,比较两者对多核细胞率及含微核双核细胞率的影响。结果不同浓度的 Cyto A 和 Cyto B 与细胞作用 24 h后,与对照组(26%± 7%)比较均可诱导多核细胞形成率的显著升高(Cyto A 及 Cyto B 3.0 μg/ml 浓度组分别为58%± 12%和 72%± 9%,P < 0.001),且 Cyto A 在 3.0 μg/ml浓度条件下诱导的平均多核细胞率与 1.5 μg/ml 浓度组比较有所降低。Cyto A 处理组在 MMC 浓度分别为 0、0.1 和0.3 μg/ml 时的微核率分别为 0.25%± 0.16%、1.98%±0.59%和 3.80%± 0.90%;而 Cyto B 处理组在相同 MMC浓度时的微核率分别为 0.32%± 0.16%、2.50%± 0.61%和5.05%± 1.09%。结论虽然 Cyto B 的多核细胞造模效果略优于 Cyto A,两者均可有效用于胞质分裂阻断法微核研究。研究结果将为相关领域研究者提供可借鉴的实际经验。 展开更多
关键词 细胞松弛素类 微核试验 肌动蛋白类 胞质分裂阻断法
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化学合成缩宫素生物活性测定法的替代研究
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作者 张媛 李震 +6 位作者 谭德讲 吴彦霖 唐黎明 陆益红 于德志 林兰 高华 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期558-564,共7页
目的:针对我国大陆市场市售缩宫素,对其效价测定方法进行大鼠子宫法与替代性高效液相色谱法的研究。方法:参考国外药典与文献建立缩宫素HPLC测定方法,并依据《中华人民共和国药典》(ChP) 2015年版四部"9101药品质量标准分析方法验... 目的:针对我国大陆市场市售缩宫素,对其效价测定方法进行大鼠子宫法与替代性高效液相色谱法的研究。方法:参考国外药典与文献建立缩宫素HPLC测定方法,并依据《中华人民共和国药典》(ChP) 2015年版四部"9101药品质量标准分析方法验证指导原则"进行验证。使用HPLC法和大鼠子宫法对缩宫素产品进行效价测定,采用Bland-Altman、t-检验、等效性检验等方法进行统计分析,以评估2种方法是否可以替代。此外,使用大鼠子宫法对缩宫素的总杂质进行测定,以评估其是否具有子宫收缩的生物活性。结果:所建缩宫素效价HPLC测定法经验证,精密度和准确度符合要求,专属性好,灵敏度高。2种方法测定结果经Bland-Altman、t-检验、等效性检验等方法分析,大鼠子宫法与HPLC法具有等效性。参考USP40-NF35中"通则1010"比较两者的精密度和准确度,结果表明:分别以固相合成及液相合成来源的缩宫素作为受试对象,在准确度符合要求的前提下,HPLC法的精密度均优于大鼠子宫法,且缩宫素总杂质无收缩子宫的生物活性。结论:建议新版《中华人民共和国药典》针对化学合成来源的缩宫素(包括固相合成及液相合成)使用HPLC法对大鼠子宫法进行方法替代,而原有的大鼠子宫法作为活性鉴别使用。 展开更多
关键词 缩宫素 效价 大鼠子宫法 高效液相色谱法
重组C因子法检测细菌内毒素的方法适用性研究 预览
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作者 裴宇盛 蔡彤 +10 位作者 陈晨 高华 魏霞 刘洋 王婷婷 祝清芬 陆益红 朴晋华 刘琦 张蕻 李松梅 《中国药业》 CAS 2019年第7期19-22,共4页
目的考察重组C因子法的品种适用性,以加快该方法的推广。方法选取有代表性的6个典型品种,每个品种3个批次,进行重组C因子法干扰试验,并经过国内4个实验室进行复核验证。以回收率为评价指标,以2015年版《中国药典》为评价标准,总结4个实... 目的考察重组C因子法的品种适用性,以加快该方法的推广。方法选取有代表性的6个典型品种,每个品种3个批次,进行重组C因子法干扰试验,并经过国内4个实验室进行复核验证。以回收率为评价指标,以2015年版《中国药典》为评价标准,总结4个实验室应用该方法产生的问题和解决策略。结果6个品种18个批次在验证实验室和3个复核实验室的回收率结果均在《中国药典》要求的50%~200%范围内,符合干扰试验要求;该方法应用中的常见问题和解决策略共有7项21条。结论重组C因子法在国内4个实验室对6个典型品种具有较好的品种适用性。 展开更多
关键词 细菌内毒素检查法 中国药典 重组C因子法 鲎试剂 品种适用性
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TRPV1通道作为高血压防治新靶点研究进展 预览
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作者 文海若 霍桂桃 +1 位作者 张颖丽 汪祺 《中国药事》 CAS 2019年第3期317-322,共6页
起初发现于大脑和各类感觉神经元中的瞬时受体电位香草酸亚型1(Transient Receptor Potential Vanilloid Subtype 1, TRPV1)是主要的镇痛药物开发靶点之一。近年来,大量生理及病理学研究发现其在血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和血管周... 起初发现于大脑和各类感觉神经元中的瞬时受体电位香草酸亚型1(Transient Receptor Potential Vanilloid Subtype 1, TRPV1)是主要的镇痛药物开发靶点之一。近年来,大量生理及病理学研究发现其在血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和血管周神经细胞中呈高水平表达并参与了多种血管功能调节。因此,TRPV1在调控血管功能中发挥的作用已引起重视,以TRPV1或其作用通路为靶点开发抗高血压药物具有潜在的临床应用价值。现就近年来TRPV1通道与抗高血压机制有关的研究进展,和以其为靶点进行药物开发时的关注点作一综述,供相关药物研发者参考。 展开更多
关键词 瞬时受体电位香草酸亚型1 高血压 血管平滑肌 神经递质 药物靶点
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液相色谱-串联质谱法测定百日咳和百白破疫苗中百日咳杆菌气管细胞毒素 预览
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作者 龙珍 卫辰 +6 位作者 郭志谋 马霄 李月琪 姚劲挺 冀峰 李长坤 黄涛宏 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期155-161,共7页
百日咳杆菌气管细胞毒素(TCT)是一种引起百日咳及百日咳相关疫苗不良反应的毒性糖肽。尽管各国药典均规定了百日咳疫苗产品中TCT的含量限度,但均没有推荐TCT的含量测定方法。该研究发展了一种液相色谱-串联质谱法用于TCT的含量测定。实... 百日咳杆菌气管细胞毒素(TCT)是一种引起百日咳及百日咳相关疫苗不良反应的毒性糖肽。尽管各国药典均规定了百日咳疫苗产品中TCT的含量限度,但均没有推荐TCT的含量测定方法。该研究发展了一种液相色谱-串联质谱法用于TCT的含量测定。实验优化了包括色谱柱类型和流动相组成在内的TCT色谱条件。虽然TCT在反相色谱模式和亲水作用色谱(HILIC)模式下均具有较好的保留,但HILIC模式与蛋白质沉淀的前处理方法兼容性更好,因此采用HILIC模式分离TCT。优化所得的方法具有较宽的线性范围(5.76~369 ng/L ),良好的重复性(峰面积的相对标准偏差不大于3.9%),各种基质中均有较好的回收率(96.4%~102.5%),且定量限是药典要求的TCT最高限量的1/1279 。将本方法用于共纯化百日咳疫苗、组分百日咳疫苗、共纯化无细胞百白破疫苗和组分无细胞百白破疫苗中TCT的检测,所有产品均未检出TCT,表明被检样品具有较好的工艺条件可避免TCT在产品中的残留。 展开更多
关键词 液相色谱 质谱 百日咳杆菌气管细胞毒素 百白破疫苗 百日咳疫苗
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抗菌药物敏感性体外检测系统质量控制标准 预览
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作者 郭世富(编译) 《国外医药:抗生素分册》 CAS 2019年第1期42-46,共5页
药物敏感试验通过在体外检测,判断抗菌药物对病原体有无抑制或杀灭作用。本文讨论目前抗菌药物敏感性体外检测方法及系统,美国临床实验室标准化委员会(CLSI)及国际标准化组织(ISO)相关质量控制标准及美MFDA质量控制指南,以期为加强我国... 药物敏感试验通过在体外检测,判断抗菌药物对病原体有无抑制或杀灭作用。本文讨论目前抗菌药物敏感性体外检测方法及系统,美国临床实验室标准化委员会(CLSI)及国际标准化组织(ISO)相关质量控制标准及美MFDA质量控制指南,以期为加强我国药敏试验相关体外诊断产品的质量控制和标准体系建设提供借鉴。 展开更多
关键词 抗菌药物 敏感性 体外检测系统 质量控制
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高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中非法添加的米诺地尔
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作者 牛水蛟 于海英 +3 位作者 李启艳 王小兵 李俊婕 吴景 《理化检验:化学分册》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期193-196,共4页
采用高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中非法添加的米诺地尔的含量。样品以饱和氯化钠溶液盐析破乳,用乙腈超声提取20 min,离心后,取上清液过0.22μm滤膜。以ACQUITY UPLCBEH C18色谱柱为固定相,以不同体积比的0.2%(体积分数,下同)... 采用高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中非法添加的米诺地尔的含量。样品以饱和氯化钠溶液盐析破乳,用乙腈超声提取20 min,离心后,取上清液过0.22μm滤膜。以ACQUITY UPLCBEH C18色谱柱为固定相,以不同体积比的0.2%(体积分数,下同)乙酸溶液和0.2%乙酸甲醇溶液的混合液为流动相进行梯度洗脱,串联质谱分析中采用电喷雾正离子源和多反应监测模式,采用同位素内标法定量。米诺地尔的线性范围为5~500μg·L-1,检出限(3S/N)为1ng·g-1。以空白样品为基体进行加标回收试验,所得回收率为108%~114%,回收量的相对标准偏差(n=6)为1.2%~2.8%。 展开更多
关键词 高效液相色谱-串联质谱法 同位素内标法 米诺地尔 化妆品
美国保健食品监管及标准现状
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作者 王慧 尹译 +2 位作者 朱炯 祝壮飞 李启艳 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第1期19-24,共6页
美国保健食品又称为膳食补充剂,是指以维生素、矿物质、氨基酸、草药(或其他草本植物)或以上成分经浓缩、配方、提取或混合形成的产品,主要由美国食品和药物管理局(Food and Drug Administration, FDA)负责监管。美国保健食品与我国的... 美国保健食品又称为膳食补充剂,是指以维生素、矿物质、氨基酸、草药(或其他草本植物)或以上成分经浓缩、配方、提取或混合形成的产品,主要由美国食品和药物管理局(Food and Drug Administration, FDA)负责监管。美国保健食品与我国的保健食品在产品类别、原料及形态等方面具有一定的相似性,因此美国保健食品目前的监管和标准现状对于我国保健食品有相当的借鉴意义。本文以美国保健食品(膳食补充剂)相关监管法规、产品标准作为研究对象,重点分析了美国保健食品在范畴、产品、原料、功能声称、标签、生产经营等方面的规定。同时介绍和分析美国膳食补充剂药典(dietary supplement compendium, DSC)的主要内容,为完善我国保健食品的监管体系、理顺监管职责、提升标准水平提供了技术依据。 展开更多
关键词 保健食品 法规 标准 膳食补充剂药典
气相色谱法测定化妆品中的乙二醇和二甘醇
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作者 李莉 李硕 +2 位作者 李祥胜 黑真真 曹进 《香料香精化妆品》 CAS 2019年第1期42-46,共5页
为建立化妆品中乙二醇和二甘醇的气相色谱分析方法,采用DB-624色谱柱(30m×0.53mm×3μm),样品经甲醇超声提取后,用火焰离子化检测器(FID)检测,进样口温度250℃,检测器温度280℃,采用分流进样,分流比5︰1,进样量1μL,程序升温... 为建立化妆品中乙二醇和二甘醇的气相色谱分析方法,采用DB-624色谱柱(30m×0.53mm×3μm),样品经甲醇超声提取后,用火焰离子化检测器(FID)检测,进样口温度250℃,检测器温度280℃,采用分流进样,分流比5︰1,进样量1μL,程序升温方式分离,外标法测定乙二醇和二甘醇的含量。结果发现,乙二醇和二甘醇在10~200mg/L范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9992和0.9999。平均回收率分别为93.0%~101.2%和92.8%~101.3%,相对标准偏差(RSD)分别为0.60%~2.32%和0.86%~3.27%。该方法准确、可靠,可用于化妆品中乙二醇和二甘醇的检测。 展开更多
关键词 化妆品 二甘醇 乙二醇 气相色谱法
高效液相色谱-串联质谱法测定功能饮料中肌醇的含量
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作者 黄传峰 张会亮 +5 位作者 房子舒 孙晶 林思静 王海燕 曹进 丁宏 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第4期1064-1070,共7页
目的建立液相色谱-串联质谱法测定功能饮料中肌醇的含量。方法功能饮料振荡混匀后取样0.2mL,用50%的乙腈水稀释500倍,过0.22μm的微孔滤膜后直接进样,经BEH Amide色谱柱(2.1mm×100 mm, 1.7μm)洗脱,流动相为乙腈-水,柱温为30℃,流... 目的建立液相色谱-串联质谱法测定功能饮料中肌醇的含量。方法功能饮料振荡混匀后取样0.2mL,用50%的乙腈水稀释500倍,过0.22μm的微孔滤膜后直接进样,经BEH Amide色谱柱(2.1mm×100 mm, 1.7μm)洗脱,流动相为乙腈-水,柱温为30℃,流速为0.3 mL/min,用串联四极杆质谱采用多反应监测模式进行测定,外标曲线法定量。结果肌醇在0.05~2.0μg/mL范围内线性关系良好,线性相关系数r为0.9999,检出限和定量限分别为0.65 mg/L和2.15 mg/L;加标浓度为0.025、0.125和0.25 mg/mL的平均回收率分别为103.5%、100.0%和101.8%,批内精密度分别为3.3%、1.1%和1.5%,批间精密度分别为3.3%、2.0%和1.9%。结论该方法前处理简单、快速、准确、灵敏,可以满足实际检测分析的需要。 展开更多
关键词 肌醇 功能饮料 高效液相色谱-串联质谱法
重组C因子法检测福沙匹坦二葡甲胺中细菌内毒素的方法学研究
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作者 裴宇盛 蔡彤 +2 位作者 陈晨 高华 祝清芬 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期1-4,共4页
目的 建立福沙匹坦二葡甲胺的细菌内毒素检测方法。方法 使用凝胶法、动态显色法、重组C因子法对福沙匹坦二葡甲胺进行方法学研究。结果 凝胶法在检测浓度范围内结果均为阳性结果,不符合凝胶法进行干扰实验的前提。动态显色法中,出现了... 目的 建立福沙匹坦二葡甲胺的细菌内毒素检测方法。方法 使用凝胶法、动态显色法、重组C因子法对福沙匹坦二葡甲胺进行方法学研究。结果 凝胶法在检测浓度范围内结果均为阳性结果,不符合凝胶法进行干扰实验的前提。动态显色法中,出现了不同稀释倍数回收率符合药典规定的情况下,内毒素检测结果差异极大(结果差异>200倍),使用了抗增液仍存在该问题。重组C因子法中,当样品浓度<0.0625mg·mL-1即不存在干扰作用并且不存在上述问题,结果符合规定。结论 福沙匹坦二葡甲胺无法使用经典的凝胶法和动态显色法进行内毒素检测。重组C因子法经过方法学研究,可以用于福沙匹坦二葡甲胺的内毒素质量控制。 展开更多
关键词 细菌内毒素检查 福沙匹坦二葡甲胺 重组C因子法 鲎试剂 干扰实验
冬虫夏草人工繁育品与野生冬虫夏草DNA条形码比较研究
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作者 过立农 刘杰 +5 位作者 袁航 昝珂 郑健 马双成 钱正明 李文佳 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期147-155,共9页
目的:从分子生物学的角度比较分析冬虫夏草人工繁育品和野生冬虫夏草的核糖体DNA内部转录间隔区(ITS)和细胞色素C氧化酶亚基1(COⅠ)条形码序列,并验证冬虫夏草人工繁育品与野生冬虫夏草虫和菌的来源是否符合《中华人民共和国药典》规定... 目的:从分子生物学的角度比较分析冬虫夏草人工繁育品和野生冬虫夏草的核糖体DNA内部转录间隔区(ITS)和细胞色素C氧化酶亚基1(COⅠ)条形码序列,并验证冬虫夏草人工繁育品与野生冬虫夏草虫和菌的来源是否符合《中华人民共和国药典》规定。方法:通过聚合酶链式反应(PCR)对冬虫夏草人工繁育品和野生冬虫夏草的ITS和COⅠ序列进行扩增,利用邻接法比较冬虫夏草人工繁育品与野生冬虫夏草的亲缘关系;通过与GenBank数据库进行Blast比对,确定冬虫夏草虫与菌的科属。结果:冬虫夏草人工繁育品与野生冬虫夏草ITS和COⅠ序列的电泳结果均显示为明亮单一条带,且条带大小介于500 bp和750 bp之间;COⅠ序列的系统树结果中冬虫夏草人工繁育品和野生冬虫夏草除野生冬虫夏草-18、野生冬虫夏草-20这2个样品均各自聚为一支,且支持率为99%,呈现良好的单系性,ITS序列的系统树结果中冬虫夏草人工繁育品和野生冬虫夏草混聚在一起,没有明确的分支;冬虫夏草人工繁育品的COⅠ序列经GenBank数据库比对结果均为小金蝠蛾(Hepialus xiaojinensis),为蝙蝠蛾科Hepialidae sp.昆虫,野生冬虫夏草的COⅠ序列经GenBank数据库比对结果均为蝙蝠蛾科Hepialidae sp.昆虫,其中野生冬虫夏草-8为人支蝠蛾(Thitarodes renzhiensis),野生冬虫夏草-12为贡嘎蝠蛾(Thitarodes gonggaensis),冬虫夏草人工繁育品及野生冬虫夏草的ITS序列与GenBank数据库比对后,相似度达99%以上,比对结果显示20批冬虫夏草人工繁育品和26批野生冬虫夏草的虫菌均为冬虫夏草菌(Ophiocordyceps sinensis)。Ophiocordyceps sinensis和Cordyceps sinensis为同物异名。结论:20批冬虫夏草人工繁育品的虫体及虫菌来源与26批野生冬虫夏草的虫体及虫菌来源均符合《中华人民共和国药典》2015年版中的描述:冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.寄生在蝙� 展开更多
关键词 野生冬虫夏草 冬虫夏草人工繁育品 内部转录间隔区(ITS) 细胞色素C氧化酶亚基1(CO Ⅰ) 聚合酶链式反应(PCR) DNA条形码
季节性流感裂解疫苗在高抗体水平人群中的免疫原性
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作者 高菁霞 赵玉良 +3 位作者 刘金凤 刘淑珍 廖国阳 陈洪波 《中国疫苗和免疫》 北大核心 2019年第1期68-71,共4页
目的分析三价季节性流感裂解疫苗(SIV)在高抗体水平人群中的免疫原性。方法招募3-80岁健康人群1 200名,随机分为试验组和对照组分别接种本研究SIV和对照SIV,采集免疫前和免疫后28d血清,检测流感凝集抑制(HI)抗体,分析免疫前高抗体水平(... 目的分析三价季节性流感裂解疫苗(SIV)在高抗体水平人群中的免疫原性。方法招募3-80岁健康人群1 200名,随机分为试验组和对照组分别接种本研究SIV和对照SIV,采集免疫前和免疫后28d血清,检测流感凝集抑制(HI)抗体,分析免疫前高抗体水平(抗体滴度≥1:10)人群免疫后抗体阳转率和几何平均滴度(GMT)增长幅度。结果试验组SIV免疫后H1N1、H3N2和B型流感HI抗体阳转率分别为78.3%(274/350)、74.1%(389/525)、69.8%(377/540);对照组分别为77.4%(254/328)、70.3%(374/532)、68.6%(376/548)。试验组免疫后与免疫前三个型别HI抗体GMT比值分别为10.4、8.8、5.9;对照组分别为9.7、6.5、5.8。结论 SIV在高抗体水平人群中具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 季节性流感裂解疫苗 免疫原性
车前子及其混淆品的微观特征荧光鉴别研究 预览
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作者 罗晋萍 宁红婷 +4 位作者 郭景文 康帅 张南平 连超杰 马双成 《中国药房》 CAS 北大核心 2019年第5期665-671,共7页
目的:建立车前子及其混淆品的微观特征荧光鉴别方法,为中药饮片的市场监管及检验提供技术支持。方法:应用荧光体式显微镜分别在可见光和紫外光下观察,从整体表面特征、种脐特征和切面特征3个方面对车前子[车前(Platago asiatica L.)、... 目的:建立车前子及其混淆品的微观特征荧光鉴别方法,为中药饮片的市场监管及检验提供技术支持。方法:应用荧光体式显微镜分别在可见光和紫外光下观察,从整体表面特征、种脐特征和切面特征3个方面对车前子[车前(Platago asiatica L.)、平车前(Platago depressa Willd.)的种子]及其混淆品大车前(Platago major L.)的种子、荆芥(Schizonepeta tenuifolia Briq.)的果实、党参[Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.]的种子、地肤[Kochia scoparia(L.)Schrad.]的种子(去皮)、北柴胡(Bupleurum chinenseDC.)的果实进行比较研究和鉴别。结果:在可见光下观察,正品车前子表面纹理为波状条纹或细皱纹,混淆品分别为波状条纹、纵棱或纹理不明显;正品车前子种脐位于腹面中央,混淆品除大车前子外其余位于一端;正品车前子切面可见明显的胚直生其中,混淆品除大车前子外其余胚细小或呈环形。在紫外光下观察,正品车前子表面波状条纹明显,呈橙色与浅蓝绿色相间的荧光,平车前表面为网格状皱纹,呈灰蓝色与灰棕色相间的荧光;正品车前子种脐荧光强烈,混淆品中除荆芥果外其余荧光微弱;正品车前子与混淆品切面在荧光颜色、胚大小及分布位置上均有明显差异。结论:荧光体式显微技术可有效、准确地鉴别车前子药材的真伪。 展开更多
关键词 荧光体式显微技术 车前子 混淆品 微观特征 整体表面特征 种脐特征 切面特征
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康柏西普质量标准优化和提高
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作者 张峰 于传飞 +6 位作者 王文波 武刚 贺庆 刘爱兵 宋晓婕 柯潇 王兰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期1-12,共12页
目的:为在更高水平上控制康柏西普质量,进一步确保产品的安全性和有效性,对其生物学活性、非还原SDS-PAGE纯度、唾液酸含量、糖基化项目的检测方法和不溶性微粒的质量标准进行提高。方法:建立和验证康柏西普3个质量控制方法,包括康柏西... 目的:为在更高水平上控制康柏西普质量,进一步确保产品的安全性和有效性,对其生物学活性、非还原SDS-PAGE纯度、唾液酸含量、糖基化项目的检测方法和不溶性微粒的质量标准进行提高。方法:建立和验证康柏西普3个质量控制方法,包括康柏西普生物学活性的荧光素酶报告基因分析(reporter gene assay,RGA)方法、唾液酸含量的反相高效液相色谱(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定方法和糖谱的离子交换高效液相色谱(ion exchange-high performance liquid chromatography,IEX-HPLC)测定方法,并对非还原十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)纯度测定方法的凝胶浓度和上样量进行优化,按照2015年版《中华人民共和国药典》通则0903,采用光阻法测定不溶性微粒。结果:生物学活性测定中,RGA法在准确度、精密度和中间精密度等方面均优于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖抑制法,且能够更好地反映康柏西普生物学活性的变化;非还原SDS-PAGE纯度检测中,4%~15%梯度胶较10%固定浓度凝胶对主带和杂带的分离度高,3μg上样量时,能够更准确地测定康柏西普纯度;间苯二酚法测定唾液酸含量中,N-糖的非唾液酸单糖亦可与间苯二酚反应,产物在580 nm处有光吸收,从而影响检测结果,本研究建立的RP-HPLC法通过4,5-亚甲二氧基-1,2-邻苯二胺盐酸盐(4,5-methylenedioxy-1,2-phenylenediamine dihydrochloride,DMB)标记排除该影响,检测结果更准确;建立的IEX-HPLC糖谱测定方法可以有效控制影响康柏西普关键质量属性的N-糖基化类型;康柏西普成品的不溶性微粒检测结果能够满足USP<789>要求。结论:所建立/优化的质控方法和提高的质量标准可在更高水平上对康柏西普质量进行控制。 展开更多
关键词 康柏西普 唾液酸 糖谱 不溶性微粒 报告基因分析 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰氨电泳
抗PD-L1单抗的质量控制研究
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作者 郭莎 王开芹 +6 位作者 武刚 李萌 崔永霏 俞小娟 张荣建 于传飞 王兰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期13-22,共10页
目的:研究建立抗程序性死亡受体配体1(programmed cell death protein ligand 1,PD-L1)单抗的质量控制方法。方法:利用成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,iCIEF)、肽图对抗PD-L1单抗进行... 目的:研究建立抗程序性死亡受体配体1(programmed cell death protein ligand 1,PD-L1)单抗的质量控制方法。方法:利用成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,iCIEF)、肽图对抗PD-L1单抗进行鉴别;利用还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)、分子排阻高效液相色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、离子交换高效液相色谱(ion exchange-high performance liquid chromatography,IEC-HPLC)对抗PD-L1单抗的纯度进行控制;利用细胞结合抑制法和转基因细胞法测定抗PD-L1单抗的活性;利用光阻法和液流成像分析法对不溶性微粒进行检测和分析。结果:抗PD-L1单抗的iCIEF检测结果具有特征性主峰,肽图检测具有相应特征峰,起到很好的鉴别作用。还原CE-SDS的轻链与重链峰面积之和的百分比为(98.37±0.21)%,非还原CE-SDS主峰峰面积百分比为(96.33±0.15)%;SEC-HPLC单体的峰面积百分比为(99.43±0.02)%;IEC-HPLC酸性区峰面积百分比、主峰峰面积百分比、碱性区峰面积百分比分别为(13.63±0.40)%、(80.00±0.36)%、(6.37±0.15)%。细胞结合抑制法与转基因细胞法的活性检测均呈现剂量反应曲线,反映抗PD-L1单抗剂量依赖性地阻断程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1,PD-1)与PD-L1的结合及后续的生物学效应。光阻法检测≥10μm及≥25μm的不溶性微粒数分别为(1.33±0.58)粒·mL^-1和(0.00±0.00)粒·mL^-1;液流成像分析法检测2~10μm、≥10μm及≥25μm的微粒数分别为(1 243.67±242)粒·mL^-1、(45.67±16.07)粒·mL^-1和(10.00±5.00)粒·mL^-1,其中,蛋白聚体占87.45%,非蛋白聚体占12.55%。结论:研究建立了抗PD-L1单抗的多种质控方法,为国内抗PD-L1单抗的质量检测提供了参考依据。 展开更多
关键词 抗程序性死亡受体配体1单抗 转基因细胞法 生物学活性 鉴别 纯度测定
重组抗CD38单克隆抗体的质量研究
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作者 付志浩 陈伟 +4 位作者 李萌 武刚 崔永霏 孙亮 王兰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期23-29,共7页
目的:针对抗白细胞分化抗原38(cluster of differentiation 38,CD38)单抗的关键质量属性建立质控方法。方法:采用肽图法进行鉴别;采用还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS... 目的:针对抗白细胞分化抗原38(cluster of differentiation 38,CD38)单抗的关键质量属性建立质控方法。方法:采用肽图法进行鉴别;采用还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)和尺寸排阻色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)进行纯度控制;采用成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,iCIEF)测定电荷异质性;采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定结合活性;采用补体依赖的细胞毒作用(complement dependent cytotoxicity,CDC)和抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)的方法测定生物学活性。其他各项指标均应符合2015年版《中华人民共和国药典》以及其他相关要求。结果:肽图检测具有特征图谱,起到很好的鉴别作用。还原CE-SDS的轻链与重链峰面积之和百分比为(97.87±0.72)%,非还原CE-SDS主峰峰面积百分比为(97.70±0.35)%;SEC-HPLC单体的峰面积百分比为(99.15±0.01)%,高分子量物质的峰面积百分比为(0.47±0.002)%,低分子量物质的峰面积百分比为(0.37±0.01)%。iCIEF分析的主要亚型的峰面积百分比为(63.54±0.37)%,酸性亚型的峰面积百分比为(23.07±0.50)%,碱性亚型的峰面积百分比为(13.38±0.12)%。结合活性的半最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC50)值为(7.35±0.06)ng·mL^-1。CDC活性EC50值为(270.67±12.42)ng·mL^-1,ADCC活性EC50值为(8.71±1.04)ng·mL^-1。结论:针对抗CD38单抗的质量属性,研究建立质控方法并进行质量研究,确保产品的安全、有效和质量可控,对抗CD38单抗的质量控制具有借鉴意义。 展开更多
关键词 抗CD38单抗 单链跨膜糖蛋白 肽图鉴别 纯度测定 生物学活性
英夫利西单抗质量控制中的趋势分析
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作者 刘春雨 于传飞 +5 位作者 武刚 李萌 付志浩 俞小娟 崔永霏 王兰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期30-38,共9页
目的:对英夫利西单抗的质量控制项目进行趋势分析。方法:利用WEHI164-13var细胞株作为靶细胞,通过细胞增殖抑制作用,使用CellTiter 96AQueous检测试剂进行英夫利西单抗的生物学活性检测,以英夫利西单抗参比品计算供试品相对百分效价;采... 目的:对英夫利西单抗的质量控制项目进行趋势分析。方法:利用WEHI164-13var细胞株作为靶细胞,通过细胞增殖抑制作用,使用CellTiter 96AQueous检测试剂进行英夫利西单抗的生物学活性检测,以英夫利西单抗参比品计算供试品相对百分效价;采用分子排阻色谱方法,按面积归一化法计算单体峰面积百分比进行抗体纯度检测;采用紫外分光光度法进行蛋白质含量检测;采用电位法进行pH检测;对中国食品药品检定研究院(NIFDC)和企业质控实验室多批次英夫利西单抗的上述检测结果,分别建立警戒限(均值±2SD)和行动限(均值±3SD),绘制趋势分析图,对结果进行连续性趋势分析;并对生物学活性的检测结果进行周期性趋势分析。结果:英夫利西单抗供试品和参比品在生物学活性中均存在量效关系,符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D,在半对数坐标纸上呈S型曲线分布。对2008-2017年某企业65批英夫利西单抗的生物学活性检测结果显示,生物学活性相对百分效价均值NIFDC与企业分别为(98.000±9.384)%和(103.046±4.421)%;蛋白质含量均值分别为(96.431±3.000)mg·瓶^-1和(99.692±1.185)mg·瓶^-1;分子排阻色谱单体峰面积均值分别为(99.771±0.177)%和(99.543±0.179)%;pH均值分别为7.272±0.111和7.309±0.038。对上述结果进行连续性和周期性趋势分析,总体趋势较平稳。结论:通过对英夫利西单抗的部分关键质量属性(CQA)进行趋势分析,结果反映了该制品的变化情况,对评价英夫利西单抗的批间一致性和生产工艺稳定性提供了参考,也为其他单抗质控中的趋势分析提供重要指导。 展开更多
关键词 英夫利西 单抗 质量控制 生物学活性 蛋白质含量 分子排阻色谱 PH 趋势分析
电化学发光免疫分析法在评价治疗性单抗与FcγRⅠ结合活性中的应用
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作者 徐刚领 郭莎 +3 位作者 张峰 于传飞 王文波 王兰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期39-44,共6页
目的:建立电化学发光免疫分析(electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)测定贝伐珠单抗与免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(FcγRⅠ)结合活性的方法,并评价贝伐珠单抗生物类似药(similar biotherapeutic products,SBP)候选物和其原研药(refer... 目的:建立电化学发光免疫分析(electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)测定贝伐珠单抗与免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(FcγRⅠ)结合活性的方法,并评价贝伐珠单抗生物类似药(similar biotherapeutic products,SBP)候选物和其原研药(reference biotherapeutic product,RBP)与FcγRⅠ结合活性的相似性。方法:先使用封闭液对链霉亲和素(streptavidin,SA)预包被的96孔MSD板进行封闭,再将生物素(biotin)标记的FcγRⅠ与之结合,之后加入不同稀释倍数的贝伐珠单抗,最后加入SULFO-TAG(Ru(bpy)32+)标记的羊抗人检测抗体上机读数。按照试验设计分别对FcγRⅠ浓度、单抗样品初始浓度、倍比稀释倍数、检测抗体浓度等试验参数进行优化,并对优化后方法的准确性和精密性进行初步验证,还将建立的方法用于评价贝伐珠单抗SBP候选药和RBP与FcγRⅠ结合活性的相似性。结果:采用优化后的方法检测,贝伐珠单抗与FcγRⅠ的结合呈现良好的剂量效应曲线,R2>0.99。该方法具有较好的准确性和精密性,靶值为50%~150%样品的回收率在95.2%~103.7%之间;RSD均小于10%。贝伐珠单抗SBP候选药与FcγRⅠ的相对结合活性均在为RBP相对结合活性均值±3SD之间。结论:电化学发光免疫分析法能够用于评价抗体与FcγRⅠ的结合活性,并可应用于对SBP候选药和RBP与FcγRⅠ结合活性的相似性分析。该方法的灵敏度和准确性较好,为评价抗体与FcγRⅠ的结合提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 单克隆抗体 贝伐珠单抗 免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(FcγRⅠ) 电化学发光免疫分析(ECLI) 结合活性
均相时间分辨荧光法测定抗PD-1/PD-L1单抗药物活性
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作者 孙亮 李萌 +1 位作者 于传飞 王兰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期45-50,共6页
目的:探索并建立一种均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF)检测方法,用于快速、灵敏、稳定检测单克隆抗体的活性。方法:将检测试剂、待检样品加入96半孔板,室温振荡孵育3 h后在酶标仪上读取荧光信号值,用软... 目的:探索并建立一种均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF)检测方法,用于快速、灵敏、稳定检测单克隆抗体的活性。方法:将检测试剂、待检样品加入96半孔板,室温振荡孵育3 h后在酶标仪上读取荧光信号值,用软件对信号值进行四参数曲线拟和,根据四参数方程计算单抗的相对活性;同时对该方法进行验证。结果:本文构建的检测方法呈典型的反S型剂量效应曲线,且反应缓冲液中添加0.4 mol·L^-1氟化钾可提高荧光响应值。对该方法进行验证,专属性强,只与抗PD-1/PD-L1单抗发生反应;2名不同分析人员重复检测6次,相对效价范围为85%~117%,总RSD为13%;准确性良好,不同浓度供试品溶液回收率均在80%~120%范围内;理论相对活性与实际测得相对活性线性良好,相关系数在0.99以上,斜率接近1.0,符合方法验证要求。结论:通过对HTRF检测条件的摸索及验证,建立了一种新型测定单抗活性的方法,且该方法快速简便,可用于单抗的前期筛选或后期活性检测。 展开更多
关键词 均相时间分辨荧光 单克隆抗体药物 活性 程序性死亡因子 程序性死亡因子受体 氟化钾
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