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海参提取物TBL-12抑制激素非依赖性前列腺癌细胞的增殖和转移
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作者 袁磊 周凯 +5 位作者 苏畅 黄旭斌 何恺舒 张甜 徐霖 曹开源 《热带医学杂志》 CAS 2019年第3期261-265,256共6页
目的探讨TBL-12在体外对激素非依赖性前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭功能的影响及其可能的机制。方法采用不同浓度(30、60、90μg/mL)的TBL-12处理PC-3和DU145前列腺癌细胞,分别用Cell Counting Kit-8法(CCK-8法)、划痕实验、Transwell... 目的探讨TBL-12在体外对激素非依赖性前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭功能的影响及其可能的机制。方法采用不同浓度(30、60、90μg/mL)的TBL-12处理PC-3和DU145前列腺癌细胞,分别用Cell Counting Kit-8法(CCK-8法)、划痕实验、Transwell侵袭实验检测TBL-12对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,通过明胶酶谱检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的酶活性。结果与对照组相比,TBL-12能显著抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,并呈剂量依赖性(P<0.05)。30μg/mL TBL-12能显著抑制前列腺癌细胞增殖和集落形成以及肿瘤转移(P<0.05)。90μg/mL的TBL-12处理后,PC-3细胞的集落形成率降至(8±3)%,迁移率由(53±11)%降为(12±4)%,侵袭细胞数由每个视野(1 085±101)个细胞减少到(29±18)个;而DU145细胞的集落形成率降至(5±2)%,细胞迁移率由(54±6)%降为(9±1)%,侵袭细胞数由每个视野(516±38)个减少到(10±9)个。明胶酶谱检测发现TBL-12可降低MMP-2、MMP-9的酶活性(P<0.05),90μg/mL的TBL-12处理后,PC-3细胞中MMP-9的酶活性降至(36±5)%,MMP-2降为(43±8)%;DU145细胞中MMP-9的酶活性降至(30±10)%,MMP-2降为(40±6)%。结论 TBL-12能显著抑制激素非依赖性前列腺癌细胞在体外的增殖、迁移和侵袭能力,具有潜在的治疗前列腺癌的临床应用价值。 展开更多
关键词 海参提取物 前列腺癌 细胞增殖 肿瘤迁移 肿瘤侵袭
海参提取物TBL-12对胃癌HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响
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作者 周凯 徐霖 +3 位作者 袁磊 罗虹娇 张甜 曹开源 《热带医学杂志》 CAS 2018年第3期302-306,F0004共6页
目的探讨海参提取物TBL-12在体外对人胃癌HGC.27细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡功能的影响。方法用不同浓度TBL.12(0、15、30、45、60、75μg/mL)处理胃癌细胞后,分别用CellCountingKit-8法(CCK-8法)、划痕实验、侵袭实验、流式双... 目的探讨海参提取物TBL-12在体外对人胃癌HGC.27细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡功能的影响。方法用不同浓度TBL.12(0、15、30、45、60、75μg/mL)处理胃癌细胞后,分别用CellCountingKit-8法(CCK-8法)、划痕实验、侵袭实验、流式双染法检测TBL-12对胃癌HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。结果CCK-8实验表明,TBL.12能显著抑制胃癌HGC-27细胞增殖(P〈0.05);划痕和侵袭实验表明,与对照组比较,TBL.12能够明显抑制胃癌HGC-27细胞的迁移和侵袭能力(P〈0.05);细胞周期分析实验表明,TBL-12(30、45、60、75μg/mL)可诱导胃癌HGC-27细胞凋亡,凋亡率从2.42%分别提升到4.10%、4.55%、5.24%、7.22%(P〈O.05)。结论TBL.12在体外能够显著抑制胃癌HGC-27细胞体外的增殖、迁移和侵袭能力,并且能诱导细胞凋亡,具有体外抗肿瘤效应,具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 海参提取物 人胃癌细胞 肿瘤迁移 肿瘤侵袭 细胞凋亡
阻断T细胞Tim3/Galectin9通路介导抗结核菌感染免疫保护
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作者 杨宜 杨芳 +2 位作者 陈玲铭 张志祎 曾谷城 《热带医学杂志》 CAS 2018年第6期708-711,F0002共5页
目的通过阻断小鼠体内T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim3)/Galectin9通路,研究Tim3/Galectin9通路在结核菌感染中的调控作用。方法利用Tim3和Galectin9功能性单抗阻断Tim3/Galectin9通路,1.0×10^6CFUH37Rv经腹腔注射感染C57BL/6... 目的通过阻断小鼠体内T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim3)/Galectin9通路,研究Tim3/Galectin9通路在结核菌感染中的调控作用。方法利用Tim3和Galectin9功能性单抗阻断Tim3/Galectin9通路,1.0×10^6CFUH37Rv经腹腔注射感染C57BL/6雌性小鼠,感染4周后观察肺部大体情况和肺组织病理改变;流式细胞术检测小鼠外周血中Th1细胞干扰素-γ(IFN-γ)等细胞因子的表达情况;采用平板计数法计算脾脏和肺脏组织荷菌数CFUs。结果小鼠感染后,经Tim3、Galectin9功能性单抗阻断Tim3/Galectin9通路的小鼠肺部肉芽肿病变明显减轻,脾脏和肺脏的荷菌量均较Ig G control对照组低,流式细胞术结果显示CD4+T细胞的IFN-γ表达量相比Ig Gcontrol感染对照组增多,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论结核分枝杆菌感染中,通过功能性单抗阻断Tim3/Galectin9通路可缓解结核病理状态,有效提高机体免疫水平,抑制结核的发生发展。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 Tim3/Galectin9通路 IFN-Γ
不同等位基因E7/HLA-DR四聚体结合的结核患者CD4+T细胞CDR3区序列分析 被引量:2
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作者 甘一川 王聪 +4 位作者 方毅敏 姚亚男 涂晓欣 申雁鸣 赖小敏 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期91-96,共6页
目的 探讨机体抗结核免疫过程中CD4+T细胞TCR与多肽/MHC之间的识别和结合规律.方法 从9例结核患者胸水中用等位基因不同的结核多肽E7/HLA-DR四聚体磁珠分选出E7结合阳性CD4+T细胞,提取其RNA逆转录成cDNA作为模板扩增TCRα链和β链CDR... 目的 探讨机体抗结核免疫过程中CD4+T细胞TCR与多肽/MHC之间的识别和结合规律.方法 从9例结核患者胸水中用等位基因不同的结核多肽E7/HLA-DR四聚体磁珠分选出E7结合阳性CD4+T细胞,提取其RNA逆转录成cDNA作为模板扩增TCRα链和β链CDR3区核酸片段,并比较其长度和序列特征.结果 等位基因不同的E7/HLA-DR四聚体能够识别同一患者CDR3区序列相同或结构功能相似的CD4+T细胞克隆.结论 结核患者体内CD4+T细胞识别和结合抗原多肽时有一定的HLA-DR限制性,但是主要以多肽特异性为主,这为进一步探讨机体抗结核免疫中CD4+T细胞和MHC之间的抗原提呈机制提供了数据. 展开更多
关键词 结核 E7 HLA-DR四聚体 CDR3区 CD4+T细胞 E7 CDR3
结核特异性多肽E6、E7和C14对单核-巨噬细胞亚型极化的影响 预览 被引量:1
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作者 申东梅 方毅敏 +3 位作者 申雁鸣 刘国标 姚亚男 赖小敏 《中国医药生物技术》 2016年第3期216-223,共8页
目的运用流式细胞术检测单核-巨噬细胞极化亚型M1(CD14~+CD16~+)及M2(CD14~+CD163~+),探讨结核特异性多肽对单核-巨噬细胞极化分型的影响。方法以3种结核特异性多肽E6、E7和C14作为刺激物,刺激人急性白血病单核细胞株(THP-1细... 目的运用流式细胞术检测单核-巨噬细胞极化亚型M1(CD14~+CD16~+)及M2(CD14~+CD163~+),探讨结核特异性多肽对单核-巨噬细胞极化分型的影响。方法以3种结核特异性多肽E6、E7和C14作为刺激物,刺激人急性白血病单核细胞株(THP-1细胞)、结核病患者胸水单个核细胞及外周血单个核细胞(PBMC),用流式细胞术检测刺激物不同时间点对单核-巨噬细胞极化表面标记表达的影响。结果结核特异性多肽E6刺激THP-1 24+0 h、24+24 h、24+48 h、24+72 h后,CD16/CD163阳性率分别为16.85%/13.78%、19.59%/15.68%、18.14%/14.19%、13.61%/11.47%。E7刺激效果与E6相似,C14对THP-1的CD16/CD163表达影响不如前两种多肽强。结核特异性多肽E6刺激结核患者胸水或血标本单核细胞19 h后,CD14+CD16+阳性率(1#患者:1.66%,2#患者:4.37%)与CD14~+CD163~+阳性率(1#患者:1.76%,2#患者:2.82%)差异不大,但CD14~+CD16~+CD86~+阳性率(1#患者:2.20%,2#患者:6.16%)大于CD14~+CD163~+CD206~+阳性率(1#患者:1.37%,2#患者:0.92%)。E7刺激效果与E6相似,C14对结核患者胸水或血标本单核细胞CD14/CD16/CD163表达影响不如前两种多肽强。结论 3种结核特异性多肽特别是E6、E7体外刺激单核细胞株THP-1、结核患者胸水或血标本单核细胞主要向M1型单核-巨噬细胞极化。 展开更多
关键词 肽类 白血病 单核细胞 急性 单核-巨噬细胞系统 极化分型
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前列腺癌细胞转移相关基因的筛选
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作者 马建宏 曹开源 +6 位作者 徐霖 钟慧玲 张素粉 罗虹娇 庹玖玲 张甜 刘建中 《热带医学杂志》 CAS 2015年第11期1455-1459,共5页
目的通过对si RNA-PSMA-LNCa P、PC-3和LNCa P前列腺癌细胞株进行肿瘤转移基因芯片分析,筛选出与前列腺癌细胞转移相关的基因,并对芯片结果进行验证。方法利用肿瘤转移基因芯片技术,对si RNA-PSMALNCa P细胞株、PC-3细胞株和LNCa P前列... 目的通过对si RNA-PSMA-LNCa P、PC-3和LNCa P前列腺癌细胞株进行肿瘤转移基因芯片分析,筛选出与前列腺癌细胞转移相关的基因,并对芯片结果进行验证。方法利用肿瘤转移基因芯片技术,对si RNA-PSMALNCa P细胞株、PC-3细胞株和LNCa P前列腺癌细胞株进行肿瘤转移相关基因表达差异分析,从中筛选出可能调控前列腺癌细胞转移的基因,并利用real-time PCR的方法在前列腺特异膜抗原(PSMA)阳性/阴性的前列腺癌细胞株和临床样品中对筛选得到的基因进行进一步验证。结果从肿瘤转移基因芯片结果筛选得到了3种在PSMA表达抑制或不表达情况下显著上调的基因:MMP3、CDH6和MTSS1;3种基因的表达在PSMA阳性细胞株和PSMA阴性细胞株中与芯片结果一致;利用临床组织对肿瘤转移基因芯片结果验证,结果显示3种前列腺癌细胞转移相关基因的表达水平与前列腺癌临床分级和PSMA的表达呈负相关。结论发现了3种可能参与调控前列腺癌细胞转移的基因:MMP3、CDH6和MTSS1。它们的表达水平与前列腺癌临床分级、PSMA的表达呈负相关,可能参与了由PSMA介导的前列腺癌细胞的转移。 展开更多
关键词 前列腺癌 前列腺特异膜抗原 肿瘤细胞转移 肿瘤转移基因芯片
2012-2013年广州地区呼吸道合胞病毒感染的流行特征分析 被引量:8
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作者 钟慧玲 徐霖 +3 位作者 张素粉 罗虹娇 曾谷城 曹开源 《热带医学杂志》 CAS 2015年第3期292-295,306共5页
目的分析2012-2013年广州地区急性呼吸道感染人群中呼吸道合胞病毒(RSV)感染的流行状况和流行特点,为RSV感染的治疗和预防提供参考。方法收集2012年1月至2013年12月广州地区11家哨点医院发热同时伴有呼吸道感染症状病人的鼻咽拭子标本... 目的分析2012-2013年广州地区急性呼吸道感染人群中呼吸道合胞病毒(RSV)感染的流行状况和流行特点,为RSV感染的治疗和预防提供参考。方法收集2012年1月至2013年12月广州地区11家哨点医院发热同时伴有呼吸道感染症状病人的鼻咽拭子标本3 943份,采用巢式PCR的方法检测RSV的核酸,同时结合患者的临床基本信息,分析RSV的感染情况和人群、时间分布特点,对RSV阳性的标本进一步进行流感病毒(IFV)等7种常见呼吸道病毒的检测以了解其多重感染情况。结果共收集3 943份鼻咽拭子,1 374份来自门急诊病例,2 569份来自住院病例,男性2 446份,女性1 497份,年龄范围从0~98岁。共检出RSV阳性标本419份,检出率为10.63%,其中住院病例检出率(15.30%)高于门急诊病例(1.89%),男性检出率(11.28%)高于女性检出率(9.55%),差异均有统计学意义(P〈0.05)。所有人群中,婴幼儿(0~3岁)的检出率最高,为20.18%,占所有阳性病例的81.86%,随着年龄的增长RSV感染有下降趋势,中老年人的检出率有所升高。RSV感染的高峰期在1-4月,不同月份RSV的检出率差异有统计学意义(χ^2=3 068.914,P〈0.05)。阳性病例中100例病例混合感染了至少一种其他呼吸道病毒,占RSV总阳性病例的23.87%,85例为双重感染(85%),15例为三重感染(15%),流感病毒是最常见的混合感染病毒。结论 2012-2013年广州地区RSV感染以婴幼儿为主;住院病例感染率高于门急诊病例;高峰为1-4月,最常见的混合感染病毒是IFV。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 急性呼吸道感染 流行病学
中国汉族人群apoB VNTR等位基因的多态性分析及其分型标准物的克隆制备 预览
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作者 骆晓枫 洪莹芬 +6 位作者 何江 单翼龙 黎扬斯 林建勋 谢金卫 周俊宜 周俊梅 《医学研究杂志》 2015年第1期83-87,共5页
目的 对中国汉族人群的apoB VNTR等位基因进行分布频率、序列结构等多态性分析,并通过分子克隆技术制备apoB VNTR等位基因分型标准物.方法 通过PCR扩增并结合电泳、测序等方法分析人群apoB VNTR等位基因的多态性,并将该人群中得到的所... 目的 对中国汉族人群的apoB VNTR等位基因进行分布频率、序列结构等多态性分析,并通过分子克隆技术制备apoB VNTR等位基因分型标准物.方法 通过PCR扩增并结合电泳、测序等方法分析人群apoB VNTR等位基因的多态性,并将该人群中得到的所有类型等位基因片段插入pUC重组质粒,经转染、扩大培养、扩增及再鉴定后,制备出apoB VNTR等位基因分型标准物.结果 所检测人群中共检测出16种apoB VNTR等位基因,发现核心序列存在变异体,并成功制备出分型标准物.结论 对apoB VNTR的多态性分析应结合等位基因的分布频率与核心序列的结构,所制备的apoB VNTR等位基因分型标准物使apoB VNTR电泳法分型更加准确. 展开更多
关键词 APOB VNTR遗传多态性 等位基因分型标准物
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两株人H7N9禽流感病毒的全基因组测序及分子特征分析 预览 被引量:13
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作者 郭晓兰 司露露 +5 位作者 管大伟 王颖 于玉凤 方丹云 武婕 江丽芳 《中山大学学报:医学科学版》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期167-175,共9页
【目的】对两株从轻症病例和重症死亡病例中分离的人H7N9禽流感病毒进行全基因组测序,研究其来源、基因组特征以及相互间的分子差异,旨在了解毒株的遗传进化特征与其致病性及其所致疾病临床类型的关系,为进一步阐明H7N9禽流感病毒的致... 【目的】对两株从轻症病例和重症死亡病例中分离的人H7N9禽流感病毒进行全基因组测序,研究其来源、基因组特征以及相互间的分子差异,旨在了解毒株的遗传进化特征与其致病性及其所致疾病临床类型的关系,为进一步阐明H7N9禽流感病毒的致病机制提供科学依据。【方法】选取两株从轻症病例和重症死亡病例中分离的H7N9禽流感病毒进行全基因组序列测定;运用生物信息学软件比较分析两株病毒的遗传进化关系、基因组特征、受体结合位点、宿主特异性位点及致病相关位点等重要分子特征;从禽流感共享数据(GISAID)下载2013年至2014年10月轻症和重症病例的病毒分离株序列,分析致病相关关键位点差异,并分析这些变异与其致病性及所致疾病临床类型的关系。【结果】这两株H7N9禽流感病毒的HA、NA和M基因来源于2013年华东地区流行的H7N9禽流感病毒,NP、NS、PA、PB1和PB2基因来源于2013年在广东地区禽类中流行的H9N2禽流感病毒;H7N9禽流感病毒PA蛋白L336M和PB1蛋白I368V的突变率随流行时间的延长而逐渐上升,并存在地区差异;两株病毒各基因核苷酸同源性达到99.2%以上,氨基酸同源性在99.5%以上,但各基因节段存在个别氨基酸的差异,其中HA受体结合位点存在一个关键氨基酸的差异(226L和226 Q),宿主特异性位点存在两个关键氨基酸的差异(PB2-591L和PB2-591Q,PB2-627E和PB2-627K),毒力位点存在两个关键氨基酸差异(PA-353R和PA-353K,PB2-627E和PB2-627K);M2均发生了S31N突变;潜在糖基化位点均相对保守;2013年至2014年10月报道的重症病例病毒分离株PB2蛋白E627K突变率高于轻症病例分离株。【结论】两株来自不同临床类型的H7N9禽流感病毒是一种新的重组病毒,是由华东地区流行的人H7N9禽流感病毒和在广东地区禽类中流行的H9N2禽流感病毒基因重组而来;H7N9禽流感病毒的某些致病相关 展开更多
关键词 H7N9禽流感病毒 测序 进化特征 分子特征 致病性 临床类型
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结核感染中PD-1调节CD8~+T细胞免疫应答的研究 被引量:5
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作者 毛冬婷 罗燕芬 +1 位作者 曹开源 曾谷城 《热带医学杂志》 CAS 2015年第5期587-591,共5页
目的了解结核感染中程序性死亡因子-1(PD-1)分子对CD8+T细胞的调节机制。方法分离四组病人(活动性肺结核病人、结核潜伏感染病人、健康控制对照、原发性支气管癌病人)的外周血单个核细胞(PBMCs),应用流式细胞术检测CD3、CD8、PD-... 目的了解结核感染中程序性死亡因子-1(PD-1)分子对CD8+T细胞的调节机制。方法分离四组病人(活动性肺结核病人、结核潜伏感染病人、健康控制对照、原发性支气管癌病人)的外周血单个核细胞(PBMCs),应用流式细胞术检测CD3、CD8、PD-1、IFN-γ及磷酸化Stat3、Stat5、P38、Erk1/2分子的表达,通过四组病人表面分子、胞内分子及核内分子的表达,了解PD-1在CD8+T细胞中的调节作用。结果活动性肺结核病人(Active TB)组在经或未经结核分枝杆菌(Mtb)抗原肽刺激下PD-1+CD8+T细胞所占PBMCs比例都高于其他三组。Active TB中经或未经Mtb抗原肽刺激的PD-1+IFN-γ+CD8+T细胞多于PD-1-IFN-γ+CD8+T细胞。用PD-1的si RNA来沉默Active TB病人PD-1的表达,si RNA-PD-1组产生的IFN-γ远远少于Medium组和si RNA-Ctrl组。PD-1+CD8+T细胞表达磷酸化Stat3、Stat5、P38和Erk1/2的量高于PD-1-CD8+T细胞。结论结核分枝杆菌感染中PD-1分子能诱导CD8+T细胞产生更多的IFN-γ且表现出更强的细胞内活化信号。 展开更多
关键词 程序性死亡因子-1 CD8 活动性肺结核病人 IFN-Γ
表达结核特异性Vγ9Vδ2 TCR双链单体的果蝇 S2恒定细胞系的构建和鉴定 被引量:2
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作者 涂晓欣 张洁 +3 位作者 孟繁荣 方毅敏 杨芳芳 赖小敏 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期23-26,共4页
目的:转染及筛选鉴定能够稳定表达和分泌Vγ9Vδ2 T细胞受体(TCR)双链单体的果蝇S2恒定细胞系。方法利用氯化钙转染法将TCR γ9-FB-pMT/V5-His B质粒、TCR δ2-JB-pMT/V5-His A质粒、pMT/Bip-BirA质粒和pCoHygro潮霉素质粒转染进S... 目的:转染及筛选鉴定能够稳定表达和分泌Vγ9Vδ2 T细胞受体(TCR)双链单体的果蝇S2恒定细胞系。方法利用氯化钙转染法将TCR γ9-FB-pMT/V5-His B质粒、TCR δ2-JB-pMT/V5-His A质粒、pMT/Bip-BirA质粒和pCoHygro潮霉素质粒转染进S2细胞中,用潮霉素B筛选恒定细胞系后表达生物素化的结核特异性Vγ9Vδ2 TCR双链单体,并加以鉴定。结果斑点印迹试验、SDS-PAGE和Western blot表明细胞培养上清中有Vγ9Vδ2 TCR单体,且已被成功生物素化。结论成功筛选出能稳定分泌表达Vγ9Vδ2 TCR的果蝇S2恒定细胞系,为研究γδ T细胞的免疫识别提供实验资料。 展开更多
关键词 γδT细胞受体 双链单体 S2细胞
乳腺癌淋巴结微转移患者克隆性T细胞TCRα链CDR3谱型分析 预览 被引量:1
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作者 张建波 吕晓东 +4 位作者 宋魏 于庆凯 刘明阁 胡骏 房百俊 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1109-1113,共5页
目的分析乳腺癌微转移淋巴结T细胞克隆性增生及TCRα链谱型偏移情况,了解抗肿瘤T细胞克隆的分子特征。方法利用RT-PCR扩增10例乳腺癌微转移淋巴结T细胞32个TCR可变区(AV)亚家族的基因,基因扫描检测T细胞克隆性及TCR AV亚家族取用情况,... 目的分析乳腺癌微转移淋巴结T细胞克隆性增生及TCRα链谱型偏移情况,了解抗肿瘤T细胞克隆的分子特征。方法利用RT-PCR扩增10例乳腺癌微转移淋巴结T细胞32个TCR可变区(AV)亚家族的基因,基因扫描检测T细胞克隆性及TCR AV亚家族取用情况,对单克隆家族行PCR扩增TCRα链全长序列,构建重组质粒后测序,分析互补决定区(CDR3)序列。结果乳腺癌淋巴结微转移患者T细胞呈单、寡克隆、寡克隆趋势和多克隆增生,不同患者表达1~4个TCR AV亚家族。克隆性T细胞的CDR3氨基酸序列不同,但是病例4和病例8含有相同的CDR3氨基酸基序:AM和DDKII。结论乳腺癌TCR AV基因表达具有多样性特点,TCR AV家族的取用可能与乳腺癌肿瘤抗原的多样性和不同个体的免疫应答反应有关。相同CDR3氨基酸基序的发现可能对乳腺癌的T细胞介导免疫治疗提供帮助。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 T细胞受体 互补决定区(CDR) 基因扫描
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乳癌患者转移淋巴结中T细胞受体β链互补决定区3谱型分析 预览 被引量:1
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作者 张建波 吕晓东 +6 位作者 宋巍 孙淼淼 于庆凯 冯稳 刘明阁 胡骏 房百俊 《郑州大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2015年第4期481-484,共4页
目的::分析乳癌患者转移淋巴结标本中 T 细胞受体(TCR)β链互补决定区3(CDR3)的谱型偏移及氨基酸序列特点。方法:选取5例乳癌患者转移淋巴结和2例乳腺反应性增生患者的淋巴结标本,应用 RT-PCR 扩增 T细胞24个 TCR β链可变区(B... 目的::分析乳癌患者转移淋巴结标本中 T 细胞受体(TCR)β链互补决定区3(CDR3)的谱型偏移及氨基酸序列特点。方法:选取5例乳癌患者转移淋巴结和2例乳腺反应性增生患者的淋巴结标本,应用 RT-PCR 扩增 T细胞24个 TCR β链可变区(BV)亚家族,经基因扫描确定 T 细胞克隆性,对提示单、寡克隆性增生的 TCR BV 亚家族的 PCR 产物进行测序。结果:乳腺反应性增生患者淋巴结中 T 细胞均为多克隆性增生。乳癌患者转移淋巴结中T 细胞呈单、寡克隆及多克隆性增生,克隆性增生 T 细胞中存在2~5个 BV 亚家族的谱型偏移;CDR3氨基酸序列分析证实单、寡克隆性增生 T 细胞的 CDR3氨基酸序列呈现多样性的特点。结论:乳癌患者 TCR BV 亚家族取用存在谱型偏移,不同 T 细胞克隆的 CDR3氨基酸序列不同。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 T细胞受体 互补决定区3
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2010-2012年广州地区人冠状病毒及其亚型分布 被引量:2
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作者 庹玖玲 徐霖 +5 位作者 关琳琳 罗燕芬 钟慧玲 汪杨 郑芸 曹开源 《热带医学杂志》 CAS 2014年第1期19-22,45共5页
目的了解2010—2012年广州地区发热呼吸道感染病人的冠状病毒(HCoV)流行状况和特点,为进一步了解人冠状病毒的流行规律及防控奠定基础。方法收集广州市2010—2012年5家哨点医院共3376例符合要求的发热同时伴随有呼吸道感染症状病人... 目的了解2010—2012年广州地区发热呼吸道感染病人的冠状病毒(HCoV)流行状况和特点,为进一步了解人冠状病毒的流行规律及防控奠定基础。方法收集广州市2010—2012年5家哨点医院共3376例符合要求的发热同时伴随有呼吸道感染症状病人的咽拭子标本及相关临床信息,采用Real—timePCR方法检测冠状病毒的核酸并对其进行主要型别鉴定,从人群分布、月份分布及各型别发病率等方面进行分析。结果3376例发热伴有呼吸道感染症状的病例中,55例为冠状病毒阳性标本,检出率为1.63%。亚型0C43、229E和NL63阳性的标本分别为23、13和19例,阳性率分别为0.68%、0.39%和0.56%,其中SARS、HUKl及EMC亚型未检出。冠状病毒流行高峰为1月(5.33%),不同月份之间发病率比较差异有统计学意义(xz=38.197,P〈0.01);阳性率最高年龄组为60。93岁,检出率为2.6%。亚型OC43发病高峰为12—1月,与其他月份比较差异有统计学意义(xL30.054,P〈0.01),检出率最高的年龄组为60~93岁(1.3%);229E月分布较为分散,各月份间差异无统计学意义(x:=15.651,P〉0.05),在各年龄组的分布呈不集中趋势;NL63流行高峰为6-9月,与其他月份比较差异有统计学意义(x2=5.801,P〈0.05),检出率最高的年龄组为7~17岁(1.03%)。结论广州市2010—2012年冠状病毒流行高峰为1月份。老年组检出率最高;亚型中OC43阳性率最高,NL63次之,229E亚型阳性率最低;0C43流行高峰为冬季,老年组检出率较高;229E流行高峰及感染人群较为分散;NL63流行高峰为夏季,儿童青少年组检出率最高。 展开更多
关键词 发热 呼吸道感染 人冠状病毒 流行病学
基于DENV-prM/E基因构建DENV-VLP及其免疫学特性 预览
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作者 方丹云 刘岩 +3 位作者 喻治准 罗雅艳 江丽芳 周俊梅 《中山大学学报:医学科学版》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期494-499,共6页
[目的]构建和表达登革病毒4型病毒样颗粒,初步研究其免疫学特性.[方法]用RT-PCR法扩增DENV4-prM/E基因,构建重组质粒pGAPZ-sprM/E-D4,转化X33酵母菌株,SDS-PAGE、Western Blot鉴定目的蛋白表达.切片电镜检测病毒样颗粒,蔗糖密度梯度离... [目的]构建和表达登革病毒4型病毒样颗粒,初步研究其免疫学特性.[方法]用RT-PCR法扩增DENV4-prM/E基因,构建重组质粒pGAPZ-sprM/E-D4,转化X33酵母菌株,SDS-PAGE、Western Blot鉴定目的蛋白表达.切片电镜检测病毒样颗粒,蔗糖密度梯度离心纯化.免疫三组Balb/C小鼠,每组15只.采用间接ELISA检测抗原特异性抗体,间接免疫荧光法检测免疫血清与天然病毒粒子的结合,流式细胞术分析小鼠脾淋巴细胞表型,酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测脾分泌IFN-γ、TNF-α和IL-10的细胞.[结果]重组质粒在酵母中以病毒样颗粒形式表达,为直径20~ 30hm的球形颗粒,VLP免疫组刺激小鼠产生抗体与灭活病毒组相似,流式及ELISPOT结果提示DENV4-VLP与灭活病毒组相似,用登革病毒抗原刺激后,分泌IFN-γ,TNF-α的细胞数目明显增加,各组分泌IL-10细胞数目的整体水平均不高.[结论]应用毕赤酵母表达系统成功表达获得了DENV4-VLP,具有良好的免疫原性,可诱导Balb/C小鼠产生有效的体液免疫应答,并能诱导Th1型免疫应答而诱导Th2型免疫应答较弱. 展开更多
关键词 登革病毒 病毒样颗粒 免疫应答
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高通量测序筛选结核分枝杆菌耐药株差异基因 被引量:1
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作者 李劭源 张国良 +4 位作者 文玉欣 毛冬婷 曹开源 陈心春 曾谷城 《热带医学杂志》 CAS 2014年第5期547-550,共4页
目的比较结核分枝杆菌中敏感株、多耐药株、广泛耐药株三者间基因表达的差异。为进一步针对耐药菌株的研究提供方向。方法从深圳市第三人民医院收集敏感株、多耐药株、广泛耐药株各1株,提取菌株RNA,然后构建eDNA文库,使用Genome Anal... 目的比较结核分枝杆菌中敏感株、多耐药株、广泛耐药株三者间基因表达的差异。为进一步针对耐药菌株的研究提供方向。方法从深圳市第三人民医院收集敏感株、多耐药株、广泛耐药株各1株,提取菌株RNA,然后构建eDNA文库,使用Genome Analyzer IIx高通量测序仪进行全基因组测序,经过筛选比对后得到测序结果,再比较3个菌株间的基因表达差异。结果高通量测序后共得到基因3968个。将耐药株与敏感株的基因进行比较,选取表达差异高于10倍的基因,筛选得到多耐药株差异基因16个、广泛耐药株差异基因10个。这些表达差异基因大部分与毒素一抗毒素系统、PE/PPE家族蛋白、金属转运蛋白相关。还在多耐药株中发现了一系列高表达的前噬菌体基因及噬菌体整合相关的基因。结论通过高通量测序筛选得到一系列耐药株差异表达基因,为未来对耐药菌株的研究提供依据。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耐药株 高通量测序
乳腺癌患者TCR BV、BJ限制性取用及序列分析
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作者 张建波 吕晓东 +2 位作者 于庆凯 宋永平 胡骏 《肿瘤研究与临床》 CAS 2014年第9期605-607,共3页
目的 分析乳腺癌TCR BV、BJ亚家族限制性取用及序列分析.方法 选取乳腺癌转移淋巴结,提取RNA后反转录,多重PCR扩增TCR β全长序列,构建重组质粒并测序,利用网上TCR资源分析序列.结果 2例患者共获得5个TCR β链全长序列.BV亚家族分别限... 目的 分析乳腺癌TCR BV、BJ亚家族限制性取用及序列分析.方法 选取乳腺癌转移淋巴结,提取RNA后反转录,多重PCR扩增TCR β全长序列,构建重组质粒并测序,利用网上TCR资源分析序列.结果 2例患者共获得5个TCR β链全长序列.BV亚家族分别限制性取用BV 2、BV 14、BV29S1,BJ亚家族分别限制性取用BJ1S1、BJ2S2、BJ2S3、BJ2S5.序列分析增生T细胞克隆CDR3区有不同的氨基酸序列.结论 乳腺癌患者TCR BV、BJ亚家族具有限制性取用,不同T细胞克隆的CDR3序列不同. 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 多重聚合酶链反应 互补决定区
乳腺癌浸润淋巴结αT细胞受体谱型偏移分析 被引量:2
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作者 张建波 于庆凯 +3 位作者 宋永平 吕晓东 胡骏 董涛 《医药论坛杂志》 2014年第4期9-11,共3页
目的应用多重PCR方法扩增TCRα链全长序列,分析乳腺癌浸润淋巴结αT细胞受体谱型偏移。方法选取乳腺癌转移淋巴结,提取RNA后逆转录,多重PCR扩增TCRα链全长序列,构建重组质粒并澳4序,利用网上TCR资源分析序列。结果2例患者各扩增出... 目的应用多重PCR方法扩增TCRα链全长序列,分析乳腺癌浸润淋巴结αT细胞受体谱型偏移。方法选取乳腺癌转移淋巴结,提取RNA后逆转录,多重PCR扩增TCRα链全长序列,构建重组质粒并澳4序,利用网上TCR资源分析序列。结果2例患者各扩增出3个α链序列。乳腺癌TCRα限制性取用AV1、AV12亚家族。CDR3区序列分析增生T细胞克隆具有不同的氨基酸序列。结论乳腺癌浸润淋巴结扩增的TCR家族存在限制性取用,克隆性增生T细胞CDR3序列不同。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 T细胞受体 多重PCR
外周T细胞淋巴瘤非特指型TCRβ V/J取用及CDR3谱型分析 被引量:1
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作者 张建波 宋永平 +2 位作者 于庆凯 吕晓东 胡骏 《白血病.淋巴瘤》 CAS 2014年第8期465-467,共3页
目的 分析外周T细胞淋巴瘤非特指型TCR β V/J亚家族限制性取用及CDR3谱型.方法 提取4例外周T细胞淋巴瘤非特指型患者病变淋巴结总RNA后进行反转录,多重聚合酶链反应(PCR)扩增TCRβ全长序列,构建重组质粒并测序,利用网上TCR资源分析序... 目的 分析外周T细胞淋巴瘤非特指型TCR β V/J亚家族限制性取用及CDR3谱型.方法 提取4例外周T细胞淋巴瘤非特指型患者病变淋巴结总RNA后进行反转录,多重聚合酶链反应(PCR)扩增TCRβ全长序列,构建重组质粒并测序,利用网上TCR资源分析序列.结果4例患者共获得9个TCR β链全长序列.克隆性增生T细胞V、J亚家族分别限制性取用BV2、BV4S2、BV14、BV29S1和BJ1S4、BJ2S3、BJ2S5、BJ2S7,并具有不同的CDR3区氨基酸序列.结论外周T细胞淋巴瘤非特指型TCRV β、VJ亚家族具有限制性取用,不同T细胞克隆的CDR3序列不同. 展开更多
关键词 T细胞淋巴瘤 多重PCR 互补决定区
广州市及周边地区2011年手足口病病原学与分子流行病学调查 被引量:8
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作者 关琳琳 张定梅 +4 位作者 徐霖 汪杨 罗燕芬 郑芸 曹开源 《热带医学杂志》 CAS 2013年第4期419-423,共5页
目的对广州市及周边地区手足口病(HFMD)的流行病学和病原学特征进行分析。方法收集2011年广州市及其周边地区手足口病病例968份,采用荧光定量RT—PCR方法对采集的标本进行肠道病毒(EV)核酸检测,将其分为肠道病71型(EV71)、萨克... 目的对广州市及周边地区手足口病(HFMD)的流行病学和病原学特征进行分析。方法收集2011年广州市及其周边地区手足口病病例968份,采用荧光定量RT—PCR方法对采集的标本进行肠道病毒(EV)核酸检测,将其分为肠道病71型(EV71)、萨克奇病毒A组16型(CAl6)、非EV71、CAl6阳性肠道病毒(N)三类,分离部分EV71毒株并进行全基因测序和分析。并用生物信息学软件进行病毒基因特征分析.经在线比对后进行Ev型别鉴定。结果分析显示2011年广州市及周边地区HFMD的高发年龄段为年龄小于4岁的儿童,1.2岁婴幼儿发病率最高;5-7月为发病高峰期;EV71和CAl6为HFMD的主要病原:但有24.79%的病例由其他肠道病毒(EV)型别引起。基于全基因序列构建种系发生进化树显示,所分离的6株EV71毒株与c4亚型毒株具有最近的亲缘性和最高的同源性。结论2011年EV71和CAl6为广州市及周边地区流行的主要病原,EV71病毒株分离株属于c4型,且遗传性较稳定,但存在部分其他型别Ev引起HFMD。 展开更多
关键词 手足口病 人肠道病毒EV71型 流行病学 病原学
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