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外泌体源miRNA在白血病发病机制中的作用 预览
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作者 张娟娟 李瑞玮 +1 位作者 贺继刚 撒亚莲 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第17期2776-2781,共6页
背景:外泌体是穿梭在细胞间的物质传递与信息交流载体,是活细胞分泌到胞外的一种膜包被的纳米级囊泡。外泌体携载有亲本细胞来源的核酸(DNA、m RNA、microRNA等)、蛋白质、脂质等生物大分子,经体液流动远距离调控靶细胞的功能。白血病... 背景:外泌体是穿梭在细胞间的物质传递与信息交流载体,是活细胞分泌到胞外的一种膜包被的纳米级囊泡。外泌体携载有亲本细胞来源的核酸(DNA、m RNA、microRNA等)、蛋白质、脂质等生物大分子,经体液流动远距离调控靶细胞的功能。白血病是一类造血系统的恶性肿瘤,大部分患者难以治愈。已有研究表明,外泌体源miRNA受脂质保护不易被RNase水解,介导白血病细胞的浸润、转移等恶性生物学行为。目的:对外泌体源miRNA在白血病中的作用进行综述,为探索白血病的分子发病机制以及挖掘诊治靶点提供重要信息。方法:以'外泌体、白血病、miRNAs'为中文检索词,以'Exosome,Leukemia,miRNAs'为英文检索词,通过计算机检索PubMed数据库与万方医学网;检索时限:2003年11月至2018年5月,最终纳入48篇文献进行结果分析。结果与结论:外泌体源miRNA通过驯化造血微环境,使白血病细胞的存活、增殖和迁移浸润等恶性生物学行为得到加强。通过干预外泌体源miRNA的产生和释放,阻断受体细胞摄取外泌体源miRNA以及干涉其调控的靶基因等可能会拓展白血病的治疗理念。通过深入探讨外泌体源miRNA在白血病中的作用,为挖掘诊治靶点提供重要信息。 展开更多
关键词 白血病 外泌体 MIRNA 造血微环境 靶基因 生物标记物 国家自然科学基金
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过表达GATA-4的小鼠骨髓间充质干细胞改善小鼠心肌梗死后的心功能 预览
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作者 王梓豪 贺继刚 +4 位作者 谢巧丽 李贝贝 韩金秀 严丹 周靓 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第9期1229-1233,共5页
目的探讨过表达GATA-4的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对小鼠心肌梗死后心功能的影响。方法通过慢病毒载体携带GATA-4感染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4的小鼠BMSCs。将过表达GATA-4-BMSCs,空载体-BMSCs(NC-BMSCs)及BMSCs用于低氧培养诱导... 目的探讨过表达GATA-4的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对小鼠心肌梗死后心功能的影响。方法通过慢病毒载体携带GATA-4感染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4的小鼠BMSCs。将过表达GATA-4-BMSCs,空载体-BMSCs(NC-BMSCs)及BMSCs用于低氧培养诱导细胞凋亡。48h后,用流式细胞计量术检测细胞凋亡率;用Westernblot检测caspase-3、caspase-9和β-actin及细胞色素C的表达。给心肌梗死模型小鼠尾静脉注射上述细胞,用心脏彩超检测48h心功能;用TUNEL技术检测心肌梗死局部凋亡细胞数量。结果过表达GATA-4-BMSCs组与BMSCs组、NC-BMSCs组比较具有较强的抗凋亡能力(P<0.05)。GATA-4-BMSCs组的caspase-8和cytochromeC表达量最低(P<0.05)。过表达GATA-4-BMSCs对射血分数及左室短轴缩短率改善幅度最大(P<0.05)。48h后,过表达GATA-4-BMSCs组心肌梗死局部凋亡细胞数量减少(P<0.05)。结论过表达GATA-4-BMSCs可以通过增强BMSCs抗凋亡,有效改善小鼠心肌梗死后的心功能。 展开更多
关键词 GATA-4 小鼠骨髓间充质干细胞 心肌梗死
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花姜酮通过抑制NF-κB蛋白表达缓解重症急性胰腺炎大鼠肝损伤
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作者 韩斌 熊达 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第16期1774-1776,共3页
目的观察花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用及对核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法将72只Wistar大鼠随机分为模型组、实验组及假手术组,每组24只。模型组及实验组于胰胆管逆行注射5%牛黄胆酸钠诱导构建重症急性胰腺炎... 目的观察花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用及对核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法将72只Wistar大鼠随机分为模型组、实验组及假手术组,每组24只。模型组及实验组于胰胆管逆行注射5%牛黄胆酸钠诱导构建重症急性胰腺炎大鼠模型,假手术组则注射等量0.9%NaCl。实验组大鼠分别于建模后6,12h时股静脉穿刺给予花姜酮溶液10mg·kg-1,模型组及假手术组则给予等量0.9%NaCl。用试剂盒检测大鼠血清肝功能指标水平,用免疫组化法检测肝组织NF-κB蛋白表达。结果建模后12h时假手术组、模型组及实验组血清天门冬氨酸转氨酶(AST)水平分别为(21.36±1.51),(463.39±101.31),(339.06±98.70)U·L-1;丙氨酸转氨酶(ALT)水平分别为(27.82±1.61),(199.81±61.23),(152.08±59.23)U·L-1;肝组织NF-κB蛋白免疫组化染色评分分别为(2.13±0.64),(10.04±0.71),(4.01±0.61)分。模型组分别与假手术组和实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论花姜酮可通过抑制重症急性胰腺炎大鼠肝组织NF-κB蛋白表达发挥肝脏保护作用。 展开更多
关键词 重症急性胰腺炎 花姜酮 肝损伤 核因子-κB蛋白
感染性心内膜炎患者手术死亡相关风险因素研究
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作者 贺继刚 李永武 +2 位作者 桂龙升 严丹 赵玮 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期12-15,共4页
目的探讨感染性心内膜炎(infecfine endocarditis,IE)手术死亡风险因素。方法选取2008年1月至2018年1月云南省第一人民医院收治的IE患者80例,根据手术结果分为手术成功组(n=60)和术后死亡组(n=20)o采用回顾性研究方法,收集两组患者的一... 目的探讨感染性心内膜炎(infecfine endocarditis,IE)手术死亡风险因素。方法选取2008年1月至2018年1月云南省第一人民医院收治的IE患者80例,根据手术结果分为手术成功组(n=60)和术后死亡组(n=20)o采用回顾性研究方法,收集两组患者的一般资料(包括性别、年龄,有无外周血管疾病,是否吸烟,是否行胸部手术,有无腹痛、胸痛、恶心及低血压)、实验室检查结果及术中停止循环时间。结果最终入选80例IE患者,其中手术成功组60例(75%),术后死亡组20例(25%)。两组年龄[手术成功组(46.2±0.3)岁,术后死亡组(51.3±1.9)岁,P=0.013]、胸痛发生率(手术成功组18.3%,术后死亡组90.0%,P=0.000)、腹痛发生率(手术成功组8.3%,术后死亡组55.0%,P=0.000)、低血压发生率(手术成功组3.3%,术后死亡组75.0%,P=0.000)及血小板计数(PLT)发生率(手术成功组76.7%于60×10^9/L﹤PLT≤150×10^9/L,术后死亡组75.0%于43×10^9/L≤PLT≤59×10^7L,P=0.000)、术中停止循环时间(手术成功组85%60 min矣停止循环时间名120 min,术后死亡组85%120 min<停止循环时间专250 min,P=0.000)比较差异有统计学意义(P<0.05);而性别、吸烟率及外周血管疾病、恶心/呕吐发生率两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。单因素Logistic回归分析结果表明,年龄(B=-0.0441,P=0.0021)、胸痛(B=-0.0321,P=0.0000)、腹痛(B=-0.0125,P=0.0311)、低血压(B=-0.2818,P=0.0312)、PLT(B=-0.1631,P=0.0025)、停止循环时间(B=-0.2513,P=0.0000)与死亡有独立的关联。结论感染性心内膜炎患者的年龄>60岁,术前出现胸痛、腹痛和低血压,术前PLT越低,术中停止循环时间延长,均能增加手术死亡风险。 展开更多
关键词 感染性心内膜炎(IE) 外科手术 死亡 危险因素
外泌体对过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化能力促进作用的研究 预览
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作者 贺继刚 韩金秀 +3 位作者 李贝贝 李宏远 严丹 任靖宇 《中国全科医学》 北大核心 2018年第14期1694-1698,共5页
目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过外泌体促进BMSCs向心肌细胞分化的能力。方法 2016年1—6月选取健康4周龄SPF级C57BL/6小鼠10只,通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4的BMSCs,并加入基... 目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过外泌体促进BMSCs向心肌细胞分化的能力。方法 2016年1—6月选取健康4周龄SPF级C57BL/6小鼠10只,通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4的BMSCs,并加入基因开启剂多西环素(DOX)。采用Exo Quick-TC提取分泌的外泌体。将GATA-4-BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养(A组)、空载体-BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养(B组)、BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养(C组)、BMSCs单独培养(D组)及小鼠心肌细胞单独培养(E组)72 h,采用荧光染色定性检测和反转录聚合酶链式反应(qPCR)定量检测肌钙蛋白T(cTnT)、α肌动蛋白(α-actin)、Connexin 43、肌间线蛋白(Desmin)的表达。结果免疫荧光定性检测结果显示,A组GATA-4-BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养72 h可见细胞核被DAPI染为蓝色,表达出绿色的cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin;B、C、D组可见细胞核被DAPI染为蓝色,没有表达出绿色的cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin;E组可见细胞核被DAPI染为蓝色,表达出绿色的cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin。qPCR法检测结果显示,5组cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin表达水平比较,差异均有统计学意义(P〈0.05);其中E组cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin表达水平较A组升高;A组和E组cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin表达水平较B组、C组和D组升高(P〈0.05)。结论过表达GATA-4的BMSCs分泌的外泌体可以有效促进BMSCs向心肌细胞分化。 展开更多
关键词 间质干细胞 GATA4转录因子 肌细胞 心脏 细胞分化
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过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞通过分泌外泌体增强其抗凋亡能力的研究 预览 被引量:1
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作者 贺继刚 李贝贝 +4 位作者 韩金秀 李洪荣 撒亚莲 严丹 杨晓华 《中国全科医学》 北大核心 2018年第24期2961-2966,共6页
目的 探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)是否通过分泌外泌体(Exosome)增强其细胞抗凋亡能力,进而提高心肌梗死后心功能。方法 2017年1—12月选取健康4周龄SPF级C57BL/6小鼠45只,通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs... 目的 探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)是否通过分泌外泌体(Exosome)增强其细胞抗凋亡能力,进而提高心肌梗死后心功能。方法 2017年1—12月选取健康4周龄SPF级C57BL/6小鼠45只,通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs构建过表达GATA-4小鼠BMSCs并加入基因开启剂强力霉素(DOX),而后采用ExoQuick-TC提取BMSCs分泌的Exosome,并检测Exosome纯度、电镜下观察其形态。体外实验:与过表达GATA-4 BMSCs分泌的Exosome共同培养的心肌细胞为A组(体外),与空载体BMSCs分泌的Exosome共同培养的心肌细胞为B组(体外),与BMSCs分泌的Exosome共同培养的心肌细胞为C组(体外),低氧(1%)无血清条件下培养的心肌细胞为D组(体外),正常条件下单独培养的心肌细胞为E组(体外),各组均培养48 h,后采用流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡率,采用Western blotting法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C表达水平。体内实验:选取12只小鼠建立心机梗死模型,造模成功48 h后经尾静脉注射80 000μg的Exosome,其中A组(体内)注射过表达GATA-4 BMSCs分泌的Exosome,B组(体内)注射空载体BMSCs分泌的Exosome,C组(体内)注射BMSCs分泌的Exosome,另取3只心肌梗死未处理小鼠作为D组(体内),3只正常小鼠作为E组(体内)。于注射Exosome后48 h采用心脏超声仪(PHILIPS EPIQ 7C)评估各组小鼠心功能。完成心脏彩超后采用原位免疫组化法评估心肌梗死小鼠心脏凋亡细胞数量。结果 Exosome表达量为0.272 5,Exosome纯度为5.25×108个,电镜可见Exosome大小40~100 nm。A组(体外)细胞凋亡率低于B组(体外)、C组(体外)、D组(体外),但高于E组(体外)(P<0.05)。A组(体外)Caspase 8、细胞色素C表达水平低于B组(体外)、C组(体外)、D组(体外)及E组(体外)(P<0.05)。A组(体内)小鼠射血分数(EF)、环比收缩(FS)前后差值高于B组(体内)、C组(体内)、D组(体内)及E组(体内)(P<0.05)。A组(体内)小鼠心肌细 展开更多
关键词 心肌梗死 干细胞 外泌体
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过表达IDO的骨髓间充质干细胞分泌外泌体下调树突状细胞免疫促进分子表达和上调Treg细胞数量 预览
7
作者 谢巧丽 李贝贝 +3 位作者 撒亚莲 韩金秀 严丹 贺继刚 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期416-421,共6页
目的探讨过表达吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxy genase,IDO)大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchy mal stem cells,BMSCs))分泌外泌体(exosome,ES)的免疫抑制调节作用。方法构建过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞提取分... 目的探讨过表达吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxy genase,IDO)大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchy mal stem cells,BMSCs))分泌外泌体(exosome,ES)的免疫抑制调节作用。方法构建过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞提取分泌的外泌体做为实验组,将空载体大鼠骨髓间充质干细胞、大鼠骨髓间充质干细胞分泌的外泌体做为对照组,将实验组及对照组分泌的外泌体分别与树突状细胞(DC细胞)、T细胞体外共培养48h后采用流式细胞检测DC细胞表面免疫调节分子表达及T细胞亚群分子标志物表达,同时采用RT-PCR检测DC细胞中IDO表达量。结果过表达IDO的BMSCs分泌的外泌体与DC细胞共培养使DC细胞CD40、CD86、CD80、MHCII、CD45RA+CD45RB、OX62等免疫促进分子表达率降低,而CD274表达率升高,同时DC细胞中IDO表达量增多;而过表达IDO的BMSCs分泌的外泌体与T细胞共培养组使T细胞亚群中的Treg细胞数量增加,CD4阳性T细胞变化无规律性,但CD8阳性T细胞减少。结论过表达IDO-BMSCs分泌的外泌体可通过抑制DC活性和上调Treg细胞数量,产生免疫抑制作用。 展开更多
关键词 吲哚胺2 3双加氧酶 骨髓间充质干细胞 外泌体
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氨甲环酸不同给药方式对浅低温体外循环手术患者血液保护作用的临床研究
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作者 熊达 刘志良 +2 位作者 李洪荣 任文俊 代国林 《中国临床药理学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第15期1831-1834,共4页
目的研究体外循环(CPB)心脏手术中氨甲环酸经不同方式给药,其血液保护作用的不同。方法将于我院择期进行浅低温体外循环心脏手术患者90例随机分为A,B,C组,每组30例,各组均给予氨甲环酸30 mg·kg~(-1)。A组在体外循环预充液中加... 目的研究体外循环(CPB)心脏手术中氨甲环酸经不同方式给药,其血液保护作用的不同。方法将于我院择期进行浅低温体外循环心脏手术患者90例随机分为A,B,C组,每组30例,各组均给予氨甲环酸30 mg·kg~(-1)。A组在体外循环预充液中加入氨甲环酸,B组在切皮前由中心静脉注射氨甲环酸,C组在切皮前由中心静脉持续泵入氨甲环酸3 h。检测记录患者术前(T_0)、手术结束时(T_1)、术后6(T_2)、术后12(T_3)、术后24(T_4)、术后48 h(T_5)各时间点血小板(PLT)、血红蛋白(HGB)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、国际标准化比值(INR)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(D-dimer);记录术后6,12,24,48 h的心包纵隔引流液总量。统计患者术后主要并发症的发生率,并定期随访患者至术后90 d,记录各种原因造成的死亡病例。结果手术结束时,C组较A组和B组PLT、HGB、FIB下降更多,差异有统计学意义(P〈0.05),术后12 h,A,B,C组术后引流量分别为(391.00±242.87),(395.50±241.85),(585.50±241.86)m L,C组较A、B组引流量更多,差异有统计学意义(P〈0.05),而A与B组间差异无统计学意义(P〉0.05)。各组间术后90 d内手术并发症发生率及死亡率差异无统计学意义(P〉0.05)。结论同等剂量氨甲环酸用中心静脉注射和CPB预充两种给药方式血液保护作用均优于持续中心静脉泵入,中心静脉注射氨甲环酸和CPB预充氨甲环酸的血液保护作用差异无统计学意义。 展开更多
关键词 氨甲环酸 体外循环 凝血功能障碍 出血量
过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞修复心肌损伤的效果研究 预览 被引量:1
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作者 贺继刚 韩金秀 +3 位作者 李贝贝 李宏远 李洪荣 严丹 《中国全科医学》 北大核心 2018年第2期167-172,共6页
目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)修复心肌损伤的机制。方法于2015年3月—2016年12月,选取60只健康4周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠,分离BMSCs,采用流式细胞检测CD29、CD44、CD11b、干细胞抗原1(SCA-1)表达率。通过慢病... 目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)修复心肌损伤的机制。方法于2015年3月—2016年12月,选取60只健康4周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠,分离BMSCs,采用流式细胞检测CD29、CD44、CD11b、干细胞抗原1(SCA-1)表达率。通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4-BMSCs,并加入基因开启剂多西环素(DOX),采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测转染72 h后过表达GATA-4-BMSCs中GATA-4 m RNA表达水平,并以未转染为阴性对照组。建立小鼠心肌梗死模型,经尾静脉注射BMSCs(n=3)、空载体-BMSCs(n=3)、过表达GATA-4-BMSCs(n=3)500μl,并将心肌梗死未处理组(n=3)及正常小鼠(n=3)同时给予喂食含有DOX的液体作为对照1组及对照2组。通过心脏彩超检测给予干预措施72 h后心功能改善情况。选取正常小鼠正常喂养(n=3)作为对照3组。采用小动物活体成像检测心脏区域荧光强度,番茄凝集素评估心肌梗死局部心肌血管数量,免疫组化检测心肌梗死局部C-kit阳性细胞数量。结果小鼠BMSCs CD29表达率为98.0%,CD44表达率为100.0%,CD11b表达率为0.1%,SCA-1表达率为99.5%。过表达GATA-4-BMSCs组GATA-4 m RNA表达水平为(78.17±1.32),高于阴性对照组的(0.57±0.34)(t=2.576,P〈0.05)。各组小鼠射血分数(EF)、环比收缩(FS)变化值比较,差异均有统计学意义(P〈0.05);其中过表达GATA-4-BMSCs组EF、FS改善幅度高于对照1组、对照2组、BMSCs组和空载体-BMSCs组(P〈0.05)。各组小鼠心脏区域荧光强度、心肌血管数量、C-kit阳性细胞数量比较,差异均有统计学意义(P〈0.05);其中过表达GATA-4-BMSCs组心脏区域荧光强度、C-kit阳性细胞数量多于对照1组、对照2组、对照3组、BMSCs组和空载体-BMSCs组(P〈0.05),心肌血管数量多于BMSCs组和空载体-BMSCs组。结论过表达GATA-4-BMSCs可以通过增强"归巢"效应、促� 展开更多
关键词 心肌梗死 GATA4转录因子 骨髓间充质干细胞
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过表达GATA-4骨髓间充质干细胞以外泌体修复心肌损伤的相关microRNA 预览
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作者 贺继刚 韩金秀 +3 位作者 严丹 李贝贝 撒亚莲 谢巧丽 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第21期3292-3298,共7页
背景:GATA-4是与心脏发育特异相关的锌指样转录因子,前期实验发现过表达GATA-4的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分泌的外泌体(exosome)与BMSCs共培养时可以促使BMSCs表达出更多的心肌特异性抗原。... 背景:GATA-4是与心脏发育特异相关的锌指样转录因子,前期实验发现过表达GATA-4的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分泌的外泌体(exosome)与BMSCs共培养时可以促使BMSCs表达出更多的心肌特异性抗原。当其与心肌细胞在低氧环境下培养可以抑制心肌细胞的凋亡。目的:探讨过表达GATA-4的BMSCs分泌exosome修复心肌损伤的相关microRNA,从分子水平对其生物学效应进行探讨。方法:①通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4小鼠BMSCs,并加入基因开启剂强力霉素,然后采用ExoQuick-TC法提取分泌的exosome;②实验设5组:GATA-4- BMSCs-exosome+BMSCs共培养组、空载体-BMSCs-exosome+BMSCs共培养组、BMSCs-exosome+ BMSCs共培养组、BMSCs单独培养组、心肌细胞单独培养组。培养24 h采用Q-PCR定量检测心肌特异性抗原cTnT、α-actin、connexin 43、Desmin的表达;③实验设5组:GATA-4-BMSCs-exosome+心肌细胞共培养组、空载体-BMSCs-exosome+心肌细胞共培养组、BMSCs-exosome+心肌细胞共培养组、心肌细胞单独培养组,在低氧(体积分数为1%)无血清培养条件下培养24 h诱导细胞凋亡。以正常条件下单独培养的心肌细胞作为阴性对照组,采用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率;④采用Agilent microRNA芯片检测过表达GATA-4小鼠BMSCs分泌exosome内有关细胞分化及抗凋亡的microRNA。 结果与结论:①Q-PCR和流式细胞技术检测结果显示:过表达GATA-4-BMSCs分泌的exosome可以有效促进BMSCs向心肌细胞转化且具有极强的抗凋亡能力;②Agilent microRNA 芯片检测结果显示:涉及细胞分化的关键microRNA:mmu-miR-199a-3p(microRNA为上调);mmu-miR-1894-5p(microRNA为下调)。涉及细胞抗凋亡的关键microRNA:mmu-miR-199a-3p、mmu-miR-20a-5p、mmu-miR-330-3p,这3个基因均为上调。其中mmu-miR-199a-3p即涉及细� 展开更多
关键词 小鼠骨髓间充质干细胞 GATA-4 外泌体 MICRORNA 心肌细胞 干细胞 国家自然科学基金 骨髓 间质干细胞 GATA4转录因子 微RNAS 组织工程
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过表达IDO骨髓间充质干细胞通过外排体促进移植心脏存活的分子机制研究
11
作者 贺继刚 韩金秀 +4 位作者 李贝贝 李宏远 撒亚莲 严丹 李洪荣 《临床心血管病杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期301-306,共6页
目的:探讨过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过分泌外排体促进移植心脏存活的分子基础。方法:通过慢病毒载体GV308携带IDO转染构建过表达IDO大鼠BMSCs,并加入基因开启剂强力霉素(DOX),按照分泌外排体的类型分为3组:过表达I... 目的:探讨过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过分泌外排体促进移植心脏存活的分子基础。方法:通过慢病毒载体GV308携带IDO转染构建过表达IDO大鼠BMSCs,并加入基因开启剂强力霉素(DOX),按照分泌外排体的类型分为3组:过表达IDO-BMSCs-exosome组(过表达IDO组)、空载体-BMSCs-exosome组(空载体组)、BMSCs-exosome组(BMSCs组);然后采用SBI公司的ExoQuick-TC提取3组分泌的外排体,同时建立大鼠腹腔异位移植心脏模型;经尾静脉给予相应细胞分泌的外排体,利用彩色超声心动图检测注射3组外排体后2d移植心脏的心功能变化。另将注射吗替麦考(吗替麦考组)及建模未处理(未处理组)的大鼠作为对照。进而采用小RNA测序技术检测过表达IDO组大鼠BMSCs外排体中与免疫相关的microRAN表达。结果:心脏彩色超声结果显示:过表达IDO-BMSCs分泌的外排体可以有效改善异位移植心脏存活。而根据KEGG分析可见前20位上调microRNA中涉及免疫的有10个,其中miR-540-3p的差异倍数(FC)值上升幅度最大。前20位下调microRNA中涉及免疫的有3个,其中miR-338-5p的FC值下降幅度最大。结论:通过采用小RNA(sRNA)测序技术检测过表达IDO组大鼠BMSC分泌外排体内与免疫相关的microRNA,最终确认上调重点microRNA为miR-540-3p,下调重点microRNA为miR-338-5p。 展开更多
关键词 IDO 外排体 microRNA 骨髓间充质干细胞
外泌体在白血病细胞增殖中的作用 预览
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作者 李瑞玮 张娟娟 +2 位作者 杨同华 贺继刚 撒亚莲 《中国老年学杂志》 北大核心 2017年第19期4955-4956,共2页
外泌体又被称为胞外体,是活细胞分泌在体液中的一种纳米级的、膜包被小泡,直径约为3-120 nm,表面富含胆固醇、神经鞘磷脂、神经酰胺等脂类物质,携带亲本细胞来源的蛋白质、mRNA、microRNA、DNA等分子信息,是细胞间信息交流与的物质传递... 外泌体又被称为胞外体,是活细胞分泌在体液中的一种纳米级的、膜包被小泡,直径约为3-120 nm,表面富含胆固醇、神经鞘磷脂、神经酰胺等脂类物质,携带亲本细胞来源的蛋白质、mRNA、microRNA、DNA等分子信息,是细胞间信息交流与的物质传递的载体。外泌体来源于活细胞胞质内、晚期内吞体的膜性囊泡,其融合为多囊体后与细胞质膜融合释放到细胞外。外泌体广泛存在于血液、唾液、尿液、脑脊液以及胸水、腹水等体液中, 展开更多
关键词 白血病 增殖 血管形成 骨髓微环境 外泌体
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白血病细胞源外泌体的作用研究进展 预览 被引量:1
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作者 张娟娟 李瑞玮 +2 位作者 贺继刚 欧阳红梅 撒亚莲 《中国病理生理杂志》 CSCD 北大核心 2017年第12期2287-2292,共6页
白血病(leukemia)是一类造血干/祖细胞恶性克隆性疾病。外泌体是活细胞分泌到胞外的一种纳米级的微囊泡,是细胞间对话的信息和物质载体~([1])。外泌体携带亲本细胞来源的蛋白质、核酸(mRNA、microRNA和DNA等)及脂质等生物信息分子... 白血病(leukemia)是一类造血干/祖细胞恶性克隆性疾病。外泌体是活细胞分泌到胞外的一种纳米级的微囊泡,是细胞间对话的信息和物质载体~([1])。外泌体携带亲本细胞来源的蛋白质、核酸(mRNA、microRNA和DNA等)及脂质等生物信息分子,可近距离和/或经体液流动远距离、特异性调控靶细胞的生理和病理活动~([2-3])。靶细胞摄取外泌体的途径主要有网格蛋白介导的内吞途径、 展开更多
关键词 白血病细胞 外泌体 生物学功能 分子机制
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急性Stanford A型主动脉夹层动脉瘤手术死亡风险因素研究 预览 被引量:2
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作者 贺继刚 李洪荣 +3 位作者 李永武 严丹 王平 桂龙升 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2017年第10期1196-1199,共4页
目的 探讨急性Stanford A型主动脉夹层动脉瘤手术死亡风险因素.方法 选取2009年10月—2016年1月云南省第一人民医院收治的急性Stanford A型主动脉夹层动脉瘤患者167例,根据手术结果分为手术成功组(n=131)和术后死亡组(n=36).采用回... 目的 探讨急性Stanford A型主动脉夹层动脉瘤手术死亡风险因素.方法 选取2009年10月—2016年1月云南省第一人民医院收治的急性Stanford A型主动脉夹层动脉瘤患者167例,根据手术结果分为手术成功组(n=131)和术后死亡组(n=36).采用回顾性研究方法,收集两组患者的一般资料 〔包括性别、年龄、是否吸烟、是否行经皮冠状动脉介入术(PCI)、是否行胸部手术及有无慢性阻塞性肺疾病(COPD)、外周血管疾病、胸痛、恶心/呕吐、腹痛、低血压〕、实验室检查指标(包括血红蛋白、血小板)及术中停循环时间、弓部处理方式.结果 两组性别、吸烟率、PCI率及外周血管疾病、恶心/呕吐发生率间差异无统计学意义(P>0.05),而年龄、胸部手术率及COPD、胸痛、腹痛、低血压发生率间差异有统计学意义(P<0.05).两组血红蛋白水平间差异无统计学意义(P>0.05),而血小板计数及其分布间差异有统计学意义(P<0.05).两组术中停循环时间分布及弓部处理方式间差异均有统计学意义(P<0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,年龄、胸部手术、胸痛、腹痛、低血压、血小板计数、术中停循环时间、术中弓部处理方式是急性Stanford A型主动脉夹层动脉瘤手术死亡的风险因素(P<0.05).结论 患者的年龄越大,既往行胸部手术,术前出现胸痛、腹痛和低血压,术前血小板计数偏低,术中停循环时间延长及弓部采用三分支吻合方式增加了急性S t a n f o r d A型主动脉夹层动脉瘤手术死亡风险. 展开更多
关键词 主动脉 动脉瘤 夹层 外科手术 死亡 危险因素
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改良“孙氏”手术治疗Stanford A型主动脉夹层动脉瘤探讨
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作者 贺继刚 李洪荣 +3 位作者 桂龙升 严丹 王平 蒋立虹 《南京医科大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2017年第3期344-345,372共3页
目的:利用传统"孙氏"及改良"孙氏"手术治疗Stanford A型主动脉夹层动脉瘤,并进行比较。方法:2010年4月—2015年10月,采用传统"孙氏"治疗Stanford A型主动脉夹层动脉瘤患者27例,改良"孙氏"手术治疗Stanford A型主动脉夹层动脉... 目的:利用传统"孙氏"及改良"孙氏"手术治疗Stanford A型主动脉夹层动脉瘤,并进行比较。方法:2010年4月—2015年10月,采用传统"孙氏"治疗Stanford A型主动脉夹层动脉瘤患者27例,改良"孙氏"手术治疗Stanford A型主动脉夹层动脉瘤患者32例。改良"孙氏"手术组患者均行右侧腋动脉插管,其中10例患者同时行右股动脉插管。所有患者均行左锁骨下动脉左颈总动脉端侧吻合,体温降至25℃停循环。结果:改良"孙氏"手术组的手术时间、体外循环时间、深低温停循环时间、术后出血量、术后入住ICU时间、出院时间,均较传统"孙氏"手术组明显减少。结论:改良"孙氏"手术治疗Stanford A型主动脉夹层动脉瘤效果确切,简化了术式,值得进一步推广研究。 展开更多
关键词 STANFORD A型主动脉夹层动脉瘤 孙氏手术 外科手术
过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞改善异位移植心脏存活 预览 被引量:5
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作者 贺继刚 李贝贝 +2 位作者 韩金秀 李宏远 严丹 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期1447-1452,共6页
目的:探讨过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)改善大鼠腹腔异位移植心脏的存活机制。方法:通过慢病毒载体GV308携带IDO基因转染大鼠骨髓间充质干细胞构建过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞。建立大鼠腹腔异位移植心脏模型,经尾静脉... 目的:探讨过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)改善大鼠腹腔异位移植心脏的存活机制。方法:通过慢病毒载体GV308携带IDO基因转染大鼠骨髓间充质干细胞构建过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞。建立大鼠腹腔异位移植心脏模型,经尾静脉给予相应细胞处理:(1)利用超声心动图检测移植心脏心功能变化。(2)采用小动物活体成像系统评估移植心脏局部荧光强度。(3)再取各组受体大鼠的脾脏,采用流式细胞技术检测CD40、CD86、CD80、MHCⅡ、CD274、CD45RA、CD45RA+CD45RB、Treg细胞的表达情况。(4)取各组移植心脏,采用HE染色评估炎性细胞浸润情况。(5)利用液相芯片检测各组血清IL-1ɑ、IL-4、IL-1β、IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-18、TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3因子的变化情况。结果:(1)给予相应细胞处理,可见过表达IDO-BMSCs处理后2 d移植心脏的EF、FS较其余各组有提高。(2)采用小动物活体评估可见过表达IDO-BMSCs组移植心脏局部荧光强度最强。(3)给予干预措施后2 d可见过表达IDO-BMSCs组脾脏细胞CD40、CD86、CD80、MHCⅡ、CD45RA、CD45RA+CD45RB表达降低,而CD274、Treg细胞的表达增高。(4)采用液相芯片检测各组提取血清可见在2 d时,过表达IDOBMSCs组血清中IL-1α、IL-4、IL-1β、IL-2、IFN-γ、IL-18是降低的;IL-10、TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3表达量是升高的。HE染色证实过表达IDO-BMSCs组炎性细胞浸润少于其他组。结论:过表达IDO的BMSCs可以通过有效调节免疫DC、T细胞及细胞因子,从多个免疫层面改善移植心脏存活。 展开更多
关键词 IDO 大鼠骨髓间充质干细胞 免疫抑制
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过表达GATA-4骨髓间充质干细胞通过外排体修复心肌损伤的机制
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作者 贺继刚 韩金秀 +4 位作者 李贝贝 李宏远 李洪荣 撒亚莲 严丹 《临床心血管病杂志》 CSCD 北大核心 2017年第12期1223-1228,共6页
目的:探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过分泌外排体(exosome)修复心肌损伤的机制。方法:构建过表达GATA-4的小鼠BMSCs并提取其分泌的exosome。而后将GATA-4-BMSCs-exosome与BMSCs共同培养,空载体-BMSCs-exosome与B... 目的:探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过分泌外排体(exosome)修复心肌损伤的机制。方法:构建过表达GATA-4的小鼠BMSCs并提取其分泌的exosome。而后将GATA-4-BMSCs-exosome与BMSCs共同培养,空载体-BMSCs-exosome与BMSCs共同培养,BMSCs-exosome与BMSCs共同培养、BMSCs单独培养及小鼠心肌细胞单独培养48h,采用Q-PCR定量检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)、α肌动蛋白(α-actin)、连接蛋白43(connexin 43)、结蛋白(Desmin)心肌特异性抗原表达量。再将过表达GATA-4BMSCs分泌的exosome与心肌细胞共培养,空载体-BMSCs分泌的exosome与心肌细胞共培养,BMSCs分泌的exosome与心肌细胞共培养及心肌细胞单独用于低氧培养无血清培养诱导细胞凋亡作为阳性对照培养48h诱导细胞凋亡。采用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率。进一步采用TMT标记定量蛋白质组学分析过表达GATA-4小鼠BMSCs分泌exosome内有关细胞分化及抗凋亡的蛋白。结果:Q-PCR显示:过表达GATA-4-BMSCs分泌的exosome可以有效促进BMSCs向心肌细胞转化并具有极强的抗凋亡能力。蛋白质谱提示有8个蛋白有关细胞分化。有6个蛋白有关细胞调亡。其中Slit homolog 2protein及Connective tissue growth factor蛋白既涉及细胞凋亡又涉及细胞分化。结论:过表达GATA-4-BMSCs分泌的exosome可以促进BMSCs向心肌细胞分化并具有抗凋亡能力。Slit homolog 2protein及Connective tissue growth factor蛋白既涉及细胞凋亡又涉及细胞分化。 展开更多
关键词 GATA-4 EXOSOME 蛋白 小鼠骨髓间充质干细胞
过表达吲哚胺2,3双加氧酶大鼠骨髓间充质干细胞通过外排体抑制免疫排异反应机制的研究
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作者 贺继刚 韩金秀 +3 位作者 李贝贝 撒亚莲 李宏远 严丹 《临床心血管病杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期1095-1101,共7页
目的:探讨过表达吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过分泌外排体(exosome)抑制免疫排异反应机制研究。方法:通过慢病毒载体GV308携带IDO转染干细胞构建过表达IDOBMSCs体系并加入基因开启剂强力霉素(DOX)... 目的:探讨过表达吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过分泌外排体(exosome)抑制免疫排异反应机制研究。方法:通过慢病毒载体GV308携带IDO转染干细胞构建过表达IDOBMSCs体系并加入基因开启剂强力霉素(DOX)后采用SBI公司的ExoQuick-TC提取分泌的exosome。同时建立大鼠腹腔异位移植心脏模型,经尾静脉给予相应细胞分泌的exosome,利用超声心动图检测经注射过表达IDOBMSCs exosome(过表达IDO-BMSCs exosome组,A组)、空载体-BMSCs exosome(空载体-BMSCs exosome组,B组)、BMSCs exosome(BMSCs exosome组,C组)48h后移植心脏心功能变化,将移植未处理组、给予吗替麦考组作为对照。完成心脏彩超后取A组、B组、C组大鼠注射48h后的脾脏,采用流式细胞技术检测其CD40、CD86、CD80、MHCII、CD274、CD45RA、CD45RA+CD45RB、Treg细胞的表达情况,将移植未处理组、给予吗替麦考组及正常大鼠(正常组)脾脏细胞作为对照。进一步采用TMT标记定量蛋白质组学分析A组有关调节免疫排异的蛋白。结果:A组的LVEF、FS较其他各组有提高;采用流式细胞技术证实其CD40、CD86、CD80、MHCII、CD45RA、CD45RA+CD45RB表达降低,而CD274、Treg细胞的表达增高。蛋白质谱示:Four and a half LIM domains 1蛋白为调节免疫排异反应的关键蛋白。结论:采用TMT标记过表达IDO-BMSCs分泌exosome内蛋白,Four and a half LIM domains 1蛋白为调节免疫排异反应的关键蛋白。 展开更多
关键词 大鼠骨髓间充质干细胞 吲哚胺2 3双加氧酶 外泌体 Four and a half LIM DOMAINS 1蛋白
过表达GATA-4骨髓间充质干细胞通过外泌体修复心肌损伤的探讨 被引量:1
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作者 贺继刚 严丹 +3 位作者 李贝贝 李宏远 李洪荣 韩金秀 《临床心血管病杂志》 CSCD 北大核心 2017年第9期896-901,共6页
目的:探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)通过分泌外排体(exosome)修复心肌损伤的机制。方法:通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSC构建过表达GATA-4小鼠BMSC并加入基因开启剂——强力霉素(DOX),然后采用SBI公司... 目的:探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)通过分泌外排体(exosome)修复心肌损伤的机制。方法:通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSC构建过表达GATA-4小鼠BMSC并加入基因开启剂——强力霉素(DOX),然后采用SBI公司的ExoQuick-TC提取分泌的exosome。通过电镜检测exosome的形态。经尾静脉注射采用Dir预染的过表达GATA-4-BMSCs分泌的exosome(过表达GATA-4组)、空载体-BMSCs分泌的exosome(空载体组)、BMSCs细胞分泌的exosome(BMSCs组),将不给予任何处理的心肌梗死(心梗)模型小鼠及正常喂养的小鼠分别设为未处理组和对照组。采用心脏彩超检测给予干预措施96h的心功能改善情况。进而采用小动物活体成像检测心梗局部Dir荧光强度。番茄凝集素评估心梗局部血管生成及采用免疫组化检测心梗局部C-kit阳性细胞的数量。结果:过表达GATA-4组较其他组可以更好地改善心梗后的心功能,射血分数及环比收缩改善幅度最大。过表达GATA-4组较其他组在96h时心脏局部可见更高荧光强度。番茄凝集素实验可见:过表达GATA-4组较其他组在给予干预措施后96h,可以表达出更多的血管。C-kit免疫组织化学检测可见:过表达GATA-4组较其他组在给予干预措施后96h,心梗局部C-kit细胞数量较其他组多。结论:过表达GATA-4的BMSCs可以通过分泌的exosome增强"归巢"效应、促进心梗局部血管增生、有效动员C-kit阳性细胞修复心肌损伤。 展开更多
关键词 GATA-4 外排体 小鼠骨髓间充质干细胞 心肌梗死
慢病毒载体及基因开启技术构建过表达GATA-4骨髓间充质干细胞 被引量:3
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作者 贺继刚 李洪荣 +3 位作者 桂龙升 李永武 严丹 王雪娟 《临床心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期384-387,共4页
目的:用慢病毒载体及基因开启构建过表达GATAG-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)。方法:将已构建成功的GATA-4基因插入慢病毒包装质粒GV308中,构建GV308-GATA-4重组慢病毒包装质粒。将构建成功的GV308-GATA-4重组慢病毒包装质粒转染入... 目的:用慢病毒载体及基因开启构建过表达GATAG-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)。方法:将已构建成功的GATA-4基因插入慢病毒包装质粒GV308中,构建GV308-GATA-4重组慢病毒包装质粒。将构建成功的GV308-GATA-4重组慢病毒包装质粒转染入小鼠BMSCs,并加入基因开启剂强力霉素(DOX)。转染成功后利用RT-PCR及Wstern blot法检测转染24、48、72hGATA-4基因量的表达及转录因子GATA-4的表达。结果:RT-PCR及Western blot实验均提示,随着转染时间的延长,GATA-4在小鼠BMSCs内的表达量是增加的。结论:利用慢病毒载体及基因开启技术构建过表达GATA-4小鼠BMSCs成功。 展开更多
关键词 GATA-4 重组慢病毒 骨髓间充质干细胞
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