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RhoA/Rho激酶信号通路在TGF—β1诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化中的作用 被引量:3
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作者 胡永亮 刘真 +3 位作者 焦大凯 马恬 王常勇 贾赤宇 《中华整形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期 376-380,共5页
目的 观察TGF—β1对人皮肤成纤维细胞表型转化的作用是否受到RhoA/Rho激酶信号通路的影响,以探究该通路是否参与了人皮肤成纤维细胞的表型转化。方法原代培养人皮肤成纤维细胞,将第4代细胞用TGF—β1(10ng/ml)刺激后,分不同作... 目的 观察TGF—β1对人皮肤成纤维细胞表型转化的作用是否受到RhoA/Rho激酶信号通路的影响,以探究该通路是否参与了人皮肤成纤维细胞的表型转化。方法原代培养人皮肤成纤维细胞,将第4代细胞用TGF—β1(10ng/ml)刺激后,分不同作用时间(0、3、6、24h)提取细胞内总蛋白。BCA法测定总蛋白浓度,Western—blot检测a—SMA的表达水平;并用相同的方法检测不同浓度TGF—β1(0、2、10、50ng/ml)刺激人皮肤成纤维细胞后,a-平滑肌肌动蛋白(d—smoothmuscleactin,a—SMA)的表达水平。用RhoA/Rho激酶信号通路阻断剂Y-27632处理后,再用TGF—β1刺激,作为实验组,将未作处理的正常细胞作为空白对照组,Y-27632(10μmol/L)组作为阴性对照组,只用TGF-β(10ng/ml)刺激组作为阳性对照组,分别检测a-SMA的表达差异。使用ANOVA对蛋白表达量进行统计学分析,P〈0.05为差异有统计学意义。结果10ng/mlTGF-β按不同作用时间刺激人皮肤成纤维细胞后,a—SMA的表达量分别为:0h为1.0,3h为1.9±0.2、6h为2.1±0.1,24h为3.1±0.1。24h较其他3个时间点a-SMA表达量明显上升(n=4,P〈0.05)。不同浓度TGF—β1刺激人皮肤成纤维细胞后,a—SMA的表达量分别为:0ng/ml为1.0,2ng/ml为1.4±0.2,10ng/ml为3.2±0.1,50ng/ml为3.1±0.2。10ng/ml表达量明显高于0ng/ml和2ng/ml(n=4,P〈0.05),较50ng/ml差异无统计学意义(n=4,P〉0.05)。用Y-27632(10μmol/L)处理后,再用TGF—β1刺激,细胞的表型转化明显受到抑制,实验组a—SMA的表达量(1.2±0.2)较阳性对照组(2.9±0.1)明显降低(n=5,P〈0.05),与空白对照组(1.0)和阴性对照组(1.1±0.1)相比差异均无统计学意义(n=5,P〉0.05)。结论RhoA/Rho激酶信号通路参与了TGF—B。诱导的人皮肤成纤维细胞表型转 展开更多
关键词 成纤维细胞 RhoA/Rho激酶信号通路 转化生长因子Β1 A-平滑肌肌动蛋白
温敏性壳聚糖水凝胶对脂肪来源干细胞生物学性能影响的实验研究 预览
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作者 杨俊杰 刘志强 +2 位作者 袁振良 胡舜英 陈韵岱 《军医进修学院学报》 CAS 2011年第10期1059-1061,1072共4页
目的检测温敏性壳聚糖水凝胶对脂肪来源干细胞(ADSCs)的生物学性能影响。方法提取大鼠ADSCs和制备温敏性壳聚糖水凝胶,体外检测在温敏性壳聚糖水凝胶携带下的ADSCs细胞活力、增殖情况、多向分化潜能等生物学性能。结果与正常培养条件... 目的检测温敏性壳聚糖水凝胶对脂肪来源干细胞(ADSCs)的生物学性能影响。方法提取大鼠ADSCs和制备温敏性壳聚糖水凝胶,体外检测在温敏性壳聚糖水凝胶携带下的ADSCs细胞活力、增殖情况、多向分化潜能等生物学性能。结果与正常培养条件下ADSCs相比,温敏性壳聚糖水凝胶携带下的ADSCs细胞活力良好、增殖能力正常,并仍能保持多向分化潜能。结论温敏性壳聚糖水凝胶材料具有良好的细胞相容性,有望作为可注射性心肌组织工程研究中良好的可注射性支架材料。 展开更多
关键词 脂肪来源干细胞 壳聚糖水凝胶 生物学性能
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寒冷刺激诱导大鼠棕色脂肪组织中的心脏干细胞增多 被引量:2
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作者 杨俊杰 刘志强 +2 位作者 王海滨 刘剑锋 陈韵岱 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2011年第5期 382-385,共4页
目的:检测寒冷刺激下大鼠肩胛部棕色脂肪组织中的心脏干细胞。方法:将大鼠随机分为2组,每组6只。实验组在寒冷环境下(4℃)饲养,对照组在常温条件(24℃)饲养。4周后分离肩胛部棕色脂肪比较两组脂肪组织活性。运用联合酶消化法提... 目的:检测寒冷刺激下大鼠肩胛部棕色脂肪组织中的心脏干细胞。方法:将大鼠随机分为2组,每组6只。实验组在寒冷环境下(4℃)饲养,对照组在常温条件(24℃)饲养。4周后分离肩胛部棕色脂肪比较两组脂肪组织活性。运用联合酶消化法提取并体外培养棕色脂肪来源细胞,使用流式方法检测相应细胞表面标记物的表达情况,体外培养4周后运用免疫荧光等技术检测心肌特异性抗原的表达,并比较不同细胞接种密度下自发心肌分化的效果。结果:饲养4周后,实验组较对照组大鼠肩胛部棕色脂肪中解偶联蛋白-1(UCP-1)表达增加,棕色脂肪来源细胞的CD133,CD29和CD29/CD133表达增加,差异均有统计学意义(P〈0.01)。体外培养4周,细胞表达一5~H]L特异性标志物。在不同的细胞接种密度下,实验组提取自发分化心肌细胞的效率最高可达(27.3±2.8)%,逆转录多聚酶链反应(RT—PCR)进一步证实心肌细胞相关基因表达阳性。相比之下,对照组提取的棕色脂肪来源细胞自发分化心肌样细胞的效率均较正常心肌组织微弱。结论:寒冷刺激下棕色脂肪中存在更多的心脏干细胞,提示温度对心脏干细胞体内定位或增殖具有一定作用。 展开更多
关键词 棕色脂肪 心脏干细胞 寒冷刺激
多聚鸟氨酸海藻酸钡微囊物理性能和生物相容性研究 预览 被引量:4
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作者 王健 邱丽媛 +4 位作者 张文君 段翠密 郝彤 林秋霞 王常勇 《中国康复理论与实践》 CSCD 2010年第6期 522-524,F0003,共4页
目的验证多聚鸟氨酸(PLO)与海藻酸钡(BPA)微囊结合制备的多聚鸟氨酸BPA(B-PLO-A)微囊是否能够提高传统BPA微囊的物理性能和生物相容性。方法用静电微囊发生仪制备多聚鸟氨酸海藻酸钡(B-PLO-A)微囊和多聚赖氨酸海藻酸钡(B-PLL-... 目的验证多聚鸟氨酸(PLO)与海藻酸钡(BPA)微囊结合制备的多聚鸟氨酸BPA(B-PLO-A)微囊是否能够提高传统BPA微囊的物理性能和生物相容性。方法用静电微囊发生仪制备多聚鸟氨酸海藻酸钡(B-PLO-A)微囊和多聚赖氨酸海藻酸钡(B-PLL-A)微囊,通过对微囊在低渗环境中的形态变化和体外培养后直径变化的观察,以及对微囊在机械振荡后破损率的计算来评价微囊的物理性能;然后将两种微囊移植入大鼠腹腔,观察两者的完整性和生物相容性。结果 B-PLO-A微囊较B-PLL-A微囊在低渗环境下更稳定坚固;体外培养14d时B-PLO-A微囊较B-PLL-A微囊直径增加的程度更小;机械振荡96h后,B-PLO-A微囊的完整率为(99.3±1.0)%,B-PLL-A微囊为(96.2±1.5)%;腹腔移植2、4和8周后,从大鼠腹腔内取出的B-PLO-A微囊与B-PLL-A微囊结构均较为完整,呈圆形,表面光滑,光镜观察无明显结缔组织包裹,移植8周后B-PLO-A微囊完整率为(97.3±2.1)%,B-PLL-A微囊完整率为(95.4±2.4)%。结论 B-PLO-A微囊的物理性能比B-PLL-A微囊有所提高,同时保持良好的生物相容性。 展开更多
关键词 多聚鸟氨酸海藻酸钡微囊 多聚赖氨酸海藻酸钡微囊 物理性能 生物相容性
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肝组织工程的研究进展与展望 预览 被引量:2
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作者 胡泉 李颖 +1 位作者 周瑾 王常勇 《生物医学工程研究》 2009年第1期 79-82,共4页
我国是世界上急性肝衰竭和终末性肝病发病人数最多的国家。目前,这两种疾病治疗的唯一有效手段是进行肝移植。但肝脏供体紧缺制约了移植手术的发展。组织工程学是解决肝脏生物制造最有效的方法,但是肝组织工程的发展依然需要克服一系... 我国是世界上急性肝衰竭和终末性肝病发病人数最多的国家。目前,这两种疾病治疗的唯一有效手段是进行肝移植。但肝脏供体紧缺制约了移植手术的发展。组织工程学是解决肝脏生物制造最有效的方法,但是肝组织工程的发展依然需要克服一系列技术挑战,包括种子细胞种类、来源;支架材料性能和结构的要求;组织、器官体外培养和构建等方面等难题。我们相信随着科学技术的不断发展,在不久的将来,通过组织工程方法必将成功构造一个具有各种生理功能的可移植的肝脏。 展开更多
关键词 组织工程 肝衰竭 肝脏移植 支架材料 生物反应器 生物人工肝
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细胞密度对组织工程化三维支气管模型体外再造影响的研究 预览 被引量:1
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作者 张文君 郝彤 +7 位作者 章烨 林秋霞 王滟濛 段翠密 王海滨 周瑾 刘志强 王常勇 《生物医学工程研究》 2009年第4期,共5页
研究种子细胞接种密度对体外构建组织工程化三维支气管模型的影响,并筛选出适宜体外构建支气管模型的细胞密度。以人支气管上皮细胞系和人胎肺成纤维细胞系为种子细胞,胶原凝胶复合Matrigel为支架材料,将两种细胞按照6×104/ml、6&#... 研究种子细胞接种密度对体外构建组织工程化三维支气管模型的影响,并筛选出适宜体外构建支气管模型的细胞密度。以人支气管上皮细胞系和人胎肺成纤维细胞系为种子细胞,胶原凝胶复合Matrigel为支架材料,将两种细胞按照6×104/ml、6×105/ml、6×106/ml和6×107/ml四个接种密度共培养,应用静态拉伸系统体外构建组织工程化三维支气管模型。通过宏观观察、相差显微镜观察和组织学检测的方法对模型中种子细胞的生长情况进行鉴定。结果表明:6×104/ml细胞密度未见到组织片层形成,其余三个细胞密度可以看到收缩良好的组织片层,并具有一定韧性;相差显微镜下观察6×105/ml和6×106/ml细胞密度的组织片层可以形成网状结构,6×107/ml细胞密度的组织片层结构疏松;HE染色证实6×105/ml和6×106/ml细胞密度的组织片层中有三维网状结构形成,免疫组织化学染色广谱CK和Vimentin均呈阳性,前者的细胞活性较后者更好,而6×107/ml细胞密度组织片层基本丧失细胞活性。体外构建组织工程化三维支气管模型其种子细胞密度在6×105/ml至6×106/ml之间较为适宜。 展开更多
关键词 细胞密度 组织工程 三维支气管模型 体外再造 静态拉伸
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组织工程心肌研究中心肌肌钙蛋白T及细胞间隙连接蛋白43免疫组化检测结果的观察与分析 预览
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作者 段翠密 李颖 +4 位作者 王海滨 周瑾 刘志强 江红 王常勇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期587-590,共4页
目的建立组织工程心肌研究中系统观察免疫组化检测结果的程序与方法。方法取新生大鼠心脏制作石蜡组织切片;用0.25%胰酶消化法分离原代新生大鼠心肌细胞,一部分进行细胞爬片培养,一部分与液态胶原混合构建组织工程心肌并施加力学拉伸刺... 目的建立组织工程心肌研究中系统观察免疫组化检测结果的程序与方法。方法取新生大鼠心脏制作石蜡组织切片;用0.25%胰酶消化法分离原代新生大鼠心肌细胞,一部分进行细胞爬片培养,一部分与液态胶原混合构建组织工程心肌并施加力学拉伸刺激,制作组织工程心肌石蜡组织切片。对三者分别进行心肌肌钙蛋白T(cTnT)及细胞间隙连接蛋白43(Cx43)抗体的免疫组化染色。比较观察天然心肌组织、体外培养心肌细胞及组织工程心肌组织免疫组化的检测结果,对其形态结构的变化进行综合分析。分别选取5个不同视野对细胞总数和cTnT阳性细胞进行计数,计算百分比。在细胞和再造心肌组织培养过程中观察自发收缩的细胞区域与cTnT着色区域的关系。结果天然心肌和组织工程心肌切片分别反映了天然在体心肌和体外构建心肌的细胞形态和组织结构特征;心肌细胞爬片显示了体外心肌细胞与非心肌细胞的形态,以及随体外培养时间的延长其形态和数量比例的改变。细胞在体外培养时间越长,成纤维细胞比例越高。尽早将分离的原代新生大鼠心肌细胞与液态胶原混合体外再造心肌组织进行三维拉伸培养有助于抑制其中的成纤维细胞的增殖速度。将分离细胞爬片培养4h后可相继观察到能自发收缩的细胞,其收缩区域与染色片中cTnT的着色区域基本相符;再造的组织工程心肌的收缩自拉伸后48h开始,逐渐从单个细胞到肌束再到整条再造心肌,频率逐渐加快,从1~2/min到5~10/min。结论建立了观察与分析组织工程心肌免疫组化结果的程序和方法,为优化实验设计与条件提供了客观参数,也为构建其他组织的形态学观察与分析方法提供了有利借鉴。 展开更多
关键词 组织工程 心肌 肌钙蛋白T 连接蛋白43
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壳聚糖水凝胶的研制及其与C2C12细胞粘附、支持作用的实验研究 预览 被引量:6
8
作者 徐斌 段翠密 +2 位作者 郝彤 吕双红 王常勇 《生物医学工程研究》 2008年第2期 121-124,共4页
研制可注射的壳聚糖水凝胶材料,并对该材料的理化特性进行检测,同时检验其是否能粘附并支持C2C12细胞生长。对不同温度下的壳聚糖溶液进行pH值的测定,并以壳聚糖溶液和β-甘油磷酸钠溶液为原料,制备温敏性壳聚糖水凝胶,对该材料的粘度... 研制可注射的壳聚糖水凝胶材料,并对该材料的理化特性进行检测,同时检验其是否能粘附并支持C2C12细胞生长。对不同温度下的壳聚糖溶液进行pH值的测定,并以壳聚糖溶液和β-甘油磷酸钠溶液为原料,制备温敏性壳聚糖水凝胶,对该材料的粘度及37℃成胶时间进行测定,显微镜下观察水凝胶材料的结构,通过C2C12细胞在其表面上的粘附与生长情况,判定该材料是否具有良好的细胞相容性。结果表明:该材料具有温度敏感性,即室温下为液态,37℃变为固态。当壳聚糖溶液浓度为2%时,加入45%β-甘油磷酸钠溶液后的成胶作用时间最短,约为15min。C2C12细胞在壳聚糖水凝胶材料上的粘附与生长情况良好。壳聚糖水凝胶可作为可注射性组织工程化心肌的支架材料,用于携带有效细胞进行缺血性心脏病的治疗。 展开更多
关键词 壳聚糖水凝胶 温敏性 C2C12细胞 可注射性 支架材料
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发育生物学在肾脏组织工程中的应用 预览 被引量:2
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作者 高群(综述) 吕双红(综述) 王常勇(审校) 《生物医学工程研究》 2008年第2期 129-132,共4页
肾脏发育生物学的研究成果对采用组织工程技术体外再造肾脏组织具有重要的理论指导意义和推动作用。在以往肾脏发育生物学研究中,取得的有关肾脏发育过程中小管分枝发生、间充质细胞-上皮细胞转换以及胚胎期后肾成分体外培养试验的研究... 肾脏发育生物学的研究成果对采用组织工程技术体外再造肾脏组织具有重要的理论指导意义和推动作用。在以往肾脏发育生物学研究中,取得的有关肾脏发育过程中小管分枝发生、间充质细胞-上皮细胞转换以及胚胎期后肾成分体外培养试验的研究成果,为进一步开展工程化肾脏组织体外构建研究奠定了良好基础,提供了新思路和新方法。本研究对肾脏发育生物学研究、肾脏组织工程研究以及发育生物学在工程化肾脏组织构建中的初步应用进行简要综述。 展开更多
关键词 发育生物学 组织工程 肾脏 输尿管芽 后肾间充质 胚胎
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兔子宫内膜中标记滞留细胞的初步鉴定 预览 被引量:2
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作者 王海滨 段翠密 +5 位作者 王常勇 章烨 李德雪 郝彤 王滟濛 吕双红 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期 608-610,F0002,共4页
目的:利用鉴定标记滞留细胞(LRC)的方法分析兔子宫内膜中可能存在的成体干细胞及其分布。方法:首先用促性腺激素处理兔,将子宫内膜调整到增殖期,并采用免疫组织化学方法鉴定增殖期子宫内膜中雌激素受体、孕激素受体、增殖细胞核抗原... 目的:利用鉴定标记滞留细胞(LRC)的方法分析兔子宫内膜中可能存在的成体干细胞及其分布。方法:首先用促性腺激素处理兔,将子宫内膜调整到增殖期,并采用免疫组织化学方法鉴定增殖期子宫内膜中雌激素受体、孕激素受体、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,以评价子宫内膜的增殖期状态。BrdU标记后追踪8周,以鉴定LRC细胞的存在与分布。结果:增殖期子宫内膜较促性腺激素处理前明显增厚,子宫内膜中雌激素受体、孕激素受体与PCNA的表达明显升高。8周追踪后,子宫内膜中有(2.1±2.4)%的细胞核为BrdU阳性,即LRC细胞。这些LRC细胞主要存在于腔上皮组织中。结论:在成年兔子宫内膜中有LRC存在,子宫内膜成体干细胞可能存在于这些LRC中。 展开更多
关键词 促性腺激素 子宫内膜 标记滞留细胞 成体干细胞
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用MDCK细胞为种子细胞体外构建组织工程化肾小管片层的实验研究 预览 被引量:1
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作者 高群 刘宇娜 +6 位作者 吴杰 段翠密 王常勇 章烨 王滟濠 李德雪 吕双红 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期 664-668,共5页
目的以MDCK细胞为种子细胞、胶原凝胶复合Matrigel为支架材料,采用组织工程技术体外构建组织工程化肾小管片层,观察不同浓度Matrigel以及静态拉伸作用对MDCK细胞在三维支架中极性重建并形成小管样结构的影响。方法将培养的MDCK细胞与添... 目的以MDCK细胞为种子细胞、胶原凝胶复合Matrigel为支架材料,采用组织工程技术体外构建组织工程化肾小管片层,观察不同浓度Matrigel以及静态拉伸作用对MDCK细胞在三维支架中极性重建并形成小管样结构的影响。方法将培养的MDCK细胞与添加不同浓度Matrigel的液态Ⅰ型胶原混合,在12孔板内铸模形成MDCK细胞-胶原片层。通过相差显微镜、HE染色、免疫荧光染色等方法对细胞的生长情况及形成的三维肾小管结构进行比较和鉴定。在此实验的基础上,对片层施加静态拉伸力,观察静态拉伸作用对细胞生长、小管样结构形成的影响。结果随培养时间的延长,各实验组片层内的MDCK细胞逐渐增殖、黏附、聚集。单纯以胶原为支架材料的片层内MDCK形成囊腔状结构;添加Matrigel的胶原片层内MDCK细胞可形成管腔样结构,且低浓度Matrigel的胶原片层内细胞存活率高。静态拉伸作用能够刺激细胞的生长、管腔样结构的形成。结论本研究应用组织工程技术,以MDCK细胞为种子细胞、添加Matrigel的液态Ⅰ型胶原为支架材料,培养过程中施加静态拉伸力,体外成功构建出组织工程化肾小管胶原组织片层,肾脏小管上皮细胞可在该支架材料中完成极性重建的自组装过程。 展开更多
关键词 MDCK细胞 胶原 组织工程 细胞极性 静态拉伸
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兔子宫内膜片层体外构建的实验研究 预览
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作者 段翠密 王海滨 +5 位作者 吕双红 章烨 李德雪 郝彤 王滟漾 王常勇 《生物医学工程研究》 2008年第1期 1-4,共4页
探索以扩增培养的子宫内膜细胞为种子细胞、以液态胶原为支架材料,构建组织工程化子宫内膜片层的可行性。体外分离并规模化扩增子宫内膜上皮细胞与基质细胞,以Ⅰ型液态鼠尾胶原为支架,按自然子宫内膜的结构在体外重建具有两层结构的组... 探索以扩增培养的子宫内膜细胞为种子细胞、以液态胶原为支架材料,构建组织工程化子宫内膜片层的可行性。体外分离并规模化扩增子宫内膜上皮细胞与基质细胞,以Ⅰ型液态鼠尾胶原为支架,按自然子宫内膜的结构在体外重建具有两层结构的组织工程化子宫内膜,体外培养14天时进行H.E.染色与免疫组化鉴定。H.E.染色与免疫组化染色结果表明:再造子宫内膜片层在胶原材料中能够较好地维持双层结构,上皮层呈CK18阳性,在某些部位还能够形成极化的柱状上皮。利用体外扩增培养的子宫内膜上皮细胞与基质细胞构建的组织工程化子宫内膜片层具有子宫内膜组织的双层结构与极化上皮特征。 展开更多
关键词 细胞培养 细胞增殖 子宫内膜 胶原 组织工程
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抗坏血酸体外诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化 预览 被引量:4
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作者 何文俊 王晶波 +3 位作者 王常勇 段翠密 李晶 吕双红 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期 392-396,共5页
目的:探讨抗坏血酸作为诱导剂对小鼠胚胎干细胞(mESC)分化为心肌细胞的影响,建立一种体外诱导mESC分化为心肌细胞的实验方法。方法:采用直接悬浮培养法使mESC形成拟胚体(EBs),用含不同浓度抗坏血酸的分化培养基对其进行诱导分... 目的:探讨抗坏血酸作为诱导剂对小鼠胚胎干细胞(mESC)分化为心肌细胞的影响,建立一种体外诱导mESC分化为心肌细胞的实验方法。方法:采用直接悬浮培养法使mESC形成拟胚体(EBs),用含不同浓度抗坏血酸的分化培养基对其进行诱导分化,摸索最佳的诱导分化条件。结果:抗坏血酸诱导mESC分化为心肌细胞的最佳浓度为0.1mg/ml,约为70%的EBs出现跳动的心肌合胞体,显著高于不添加任何诱导剂的对照组。抗坏血酸诱导产生的心肌细胞表达多种心肌蛋白,具有心肌细胞的结构特征。结论:抗坏血酸能够促进mESC向心肌细胞分化,应用抗坏血酸体外诱导mESC向心肌细胞分化是一种较为理想的体外诱导方法。 展开更多
关键词 抗坏血酸 胚胎 干细胞 心肌细胞 细胞分化
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子宫内膜体外构建及其应用研究进展 预览 被引量:2
14
作者 王和平 王常勇 江红 《生殖医学杂志》 CAS 2007年第1期 60-63,共4页
体外构建子宫内膜是利用组织工程学原理,在体外构建结构、形态与功能上与体内子宫内膜相似的三维模拟体。种子细胞分离培养、生物支架材料的合理选择及体外构建方法的优化是体外构建子宫内膜的重要因素。构建的子宫内膜在病理研究、三... 体外构建子宫内膜是利用组织工程学原理,在体外构建结构、形态与功能上与体内子宫内膜相似的三维模拟体。种子细胞分离培养、生物支架材料的合理选择及体外构建方法的优化是体外构建子宫内膜的重要因素。构建的子宫内膜在病理研究、三维培养体系、胚胎发育学及移植等方面具有重要的研究意义。只有更进一步模拟自然子宫的结构,优化构建技术路线和培养条件,才可以再造出真正意义上的组织工程化子宫。 展开更多
关键词 组织工程 子宫内膜 细胞培养 支架材料
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壳聚糖水凝胶局部注射对心梗的治疗作用研究 预览 被引量:6
15
作者 徐斌 卢文宁 +2 位作者 郝彤 吕双红 王常勇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期 493-495,共3页
目的观察心梗部位局部注射壳聚糖水凝胶的促血管生成及心肌保护作用。方法将19只Wistar大鼠随机分为壳聚糖水凝胶注射组、单纯心肌梗死模型组、PBS注射组。结扎大鼠冠状动脉致心肌梗死30min后,心肌缺血处注射壳聚糖水凝胶。术后1、2、4... 目的观察心梗部位局部注射壳聚糖水凝胶的促血管生成及心肌保护作用。方法将19只Wistar大鼠随机分为壳聚糖水凝胶注射组、单纯心肌梗死模型组、PBS注射组。结扎大鼠冠状动脉致心肌梗死30min后,心肌缺血处注射壳聚糖水凝胶。术后1、2、4周,分别处死动物进行组织学、免疫组织化学检查。结果壳聚糖水凝胶注射1、2周后有明显存留,4周后已降解吸收,无明显残留,但注射后明显提高了心梗部位的心室壁厚度,梗死部位的血管密度明显增加,存活的心肌数量增多,结缔组织增生程度减轻。结论心梗部位注射壳聚糖水凝胶可明显促进血管增生,有利于梗死部位心肌细胞的存活,适宜作为可注射性组织工程化心肌的支架材料。 展开更多
关键词 壳聚糖水凝胶 心肌梗塞 局部注射 治疗
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采用温敏性壳聚糖水凝胶体外构建组织工程化软骨的实验研究 预览 被引量:13
16
作者 郝彤 刘暾 +1 位作者 吕双红 王常勇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期 500-502,共3页
目的验证自行制备的温敏性壳聚糖水凝胶作为软骨细胞支架材料构建组织工程化软骨的可行性。方法以壳聚糖、β-甘油磷酸钠和羟乙基纤维素为原料,制备温敏性壳聚糖水凝胶,通过SD大鼠肌内注射植入,进行组织相容性检测。在此基础上,将其与... 目的验证自行制备的温敏性壳聚糖水凝胶作为软骨细胞支架材料构建组织工程化软骨的可行性。方法以壳聚糖、β-甘油磷酸钠和羟乙基纤维素为原料,制备温敏性壳聚糖水凝胶,通过SD大鼠肌内注射植入,进行组织相容性检测。在此基础上,将其与软骨细胞复合构建组织工程化软骨,观察软骨细胞在壳聚糖水凝胶中的存活情况,并于体外培养3周后,作相关组织形态学检测。结果制备的壳聚糖水凝胶具有温度敏感性,即室温时为液态,37℃时10~15min可发生交联反应成为固态凝胶。SD大鼠肌内注射不同时间点组织相容性检测表明,该材料具有良好的组织相容性,植入体内2、4周时有少量炎性细胞浸润,6周时材料降解明显,8周时已经基本降解。采用该材料构建的组织工程化软骨体外培养3周后取材,通过组织学检查,HE染色可观察到软骨陷窝样结构,甲苯胺蓝染色、番红O染色及免疫组化染色结果显示软骨细胞具有分泌细胞外基质的功能。结论本研究自行制备的温敏性壳聚糖水凝胶材料具有良好的组织相容性,将其与软骨细胞复合后,可以在体外再造组织工程化软骨,是一种有广泛应用前景的软骨组织工程支架材料。 展开更多
关键词 组织工程 软骨 温度敏感 壳聚糖 水凝胶 支架材料
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体外构建组织工程化心肌片层的实验研究 预览 被引量:1
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作者 王静 王常勇 +2 位作者 何文俊 段翠密 吕双红 《生物医学工程研究》 2007年第2期 107-110,共4页
探索以液态胶原作为支架材料,体外构建组织工程化心肌片层的可行性。用含0.04%EDTA的0.25%胰酶分离新生大鼠原代心肌细胞,然后与Ⅰ型胶原、Matrigel和2×DMEM混合,注入方形模具内,制备心肌细胞一胶原复合体,体外培育1周后... 探索以液态胶原作为支架材料,体外构建组织工程化心肌片层的可行性。用含0.04%EDTA的0.25%胰酶分离新生大鼠原代心肌细胞,然后与Ⅰ型胶原、Matrigel和2×DMEM混合,注入方形模具内,制备心肌细胞一胶原复合体,体外培育1周后,施加外力,拉伸刺激条件下继续培养1周。通过光学显微镜下观察、H.E.染色、激光共聚焦和透射电镜观察等对构建的组织工程化心肌片层进行评价。结果表明:心肌片层在培养的第2天出现自发性的跳动,随时间的延长,跳动的区域逐渐增多,并于外力拉伸后的第4天形成一致跳动。激光共聚焦研究结果表明:在构建的工程化心肌组织中,肌原纤维显示排列有序,多数沿拉伸方向伸展,其形态类似于心肌组织。电镜观察显示:拉伸的心肌片层中的心肌细胞含有较多的肌原纤维,肌小节结构和Z带清晰可见。采用新生大鼠心肌细胞与液态Ⅰ型胶原复合方式,可在体外再造出片层状心肌组织,构建的组织工程化心肌片层具有与心肌组织类似的结构和特性。 展开更多
关键词 心肌细胞 Ⅰ型胶原 心肌片层 组织工程 工程化心肌组织 外力拉伸
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壳聚糖-hVEGF165基因微粒的制备及体外转染的实验研究 预览 被引量:5
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作者 王荣祺 张军 +7 位作者 王常勇 易甫 李保罗 江红 郭希民 董宝军 段翠密 董灵芝 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期 14-18,24,共6页
采用复凝聚法制备壳聚糖-hVEGF165基因微粒,观察微粒形态,测定微粒的粒径、基因包封率和载药量,以Lipofectamine^TM2000转染试剂作为阳性对照,检测微粒对心肌细胞的转染活性及对心肌细胞存活率的影响。结果表明:微粒形态多呈球形... 采用复凝聚法制备壳聚糖-hVEGF165基因微粒,观察微粒形态,测定微粒的粒径、基因包封率和载药量,以Lipofectamine^TM2000转染试剂作为阳性对照,检测微粒对心肌细胞的转染活性及对心肌细胞存活率的影响。结果表明:微粒形态多呈球形,粒径小,基因包封率和载药量均较高,转染活性略低于脂质体,但微粒对心肌细胞的毒性明显低于脂质体。 展开更多
关键词 壳聚糖 微粒 血管内皮生长因子 基因转染 心肌细胞
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雌激素与孕激素在兔子宫内膜上皮细胞体外增殖中的作用 预览 被引量:3
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作者 段翠密 王海滨 +6 位作者 江红 王常勇 宋宇轩 王和平 郭希民 李晶 项婷婷 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期 582-584,共3页
目的 探讨雌激素E2和孕激素P4不同水平对家兔子宫内膜上皮细胞体外增殖的影响。方法 离心法获取家兔子宫内膜上皮细胞;用上皮角蛋白抗体的免疫荧光细胞染色对细胞进行鉴定,用流式细胞仪检测上皮细胞的纯度。设不同雌激素和孕激素水平... 目的 探讨雌激素E2和孕激素P4不同水平对家兔子宫内膜上皮细胞体外增殖的影响。方法 离心法获取家兔子宫内膜上皮细胞;用上皮角蛋白抗体的免疫荧光细胞染色对细胞进行鉴定,用流式细胞仪检测上皮细胞的纯度。设不同雌激素和孕激素水平组合添加于培养液,利用MTT法间接测定上皮细胞的体外增殖能力。结果 利用离心法可获得高纯度的子宫内膜上皮细胞(96%);雌激素(100nmol/L)和少量孕激素(10nmol/L)对上皮细胞增殖有促进作用。免疫荧光细胞检测结果表明,经激素刺激的子宫内膜上皮细胞对上皮角蛋白抗体反应呈阳性。结论 性腺激素对体外培养的子宫内膜上皮细胞有促进增殖的作用,而且不会使其分化为其他类型细胞。 展开更多
关键词 子宫内膜 雌激素 孕激素 细胞增殖
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Dextran不连续密度梯度离心法纯化大鼠胰岛 预览 被引量:5
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作者 马海霞 江红 +5 位作者 高秀峰 段翠密 郭希民 董宝军 董灵芝 王常勇 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第4期 212-214,F0006,共4页
目的评价Dextran不连续密度梯度离心法纯化大鼠胰岛的效果.方法采用V型胶原酶分离出大鼠胰岛,并应用Dextran不连续密度梯度离心法纯化胰岛.在体视镜下计数双硫腙染色的胰岛并测量染色胰岛的直径.放免法测定胰岛素含量.AO-PI双染色确定... 目的评价Dextran不连续密度梯度离心法纯化大鼠胰岛的效果.方法采用V型胶原酶分离出大鼠胰岛,并应用Dextran不连续密度梯度离心法纯化胰岛.在体视镜下计数双硫腙染色的胰岛并测量染色胰岛的直径.放免法测定胰岛素含量.AO-PI双染色确定胰岛的活力.结果平均每只成年Wistar大鼠的胰腺可分离950±24个胰岛,经Dextran纯化后平均每只成年Wistar大鼠的胰腺可获得784±10个胰岛,纯度可达到90%以上.结论采用Dextran不连续密度梯度纯化得到的Wistar大鼠胰岛结构完整、功能良好. 展开更多
关键词 胰岛 分离和纯化 糖尿病
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