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基于DNA条形码的桑黄真菌分子鉴定 预览
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作者 徐鑫 边勇 +5 位作者 陈哲 孙悦 刘子璐 胡渤洋 武扬 张国庆 《北京农学院学报》 2019年第1期20-27,共8页
DNA条形码(DNA barcoding)技术是一种利用生物基因组内短遗传标签进行分类鉴定的方法.桑黄自古以来是一种名贵中药材,而市售桑黄主要依托简单的形态鉴定造成混淆众多.近年来大量研究表明,桑黄类真菌种类至少有7个种,并且其药效也不尽相... DNA条形码(DNA barcoding)技术是一种利用生物基因组内短遗传标签进行分类鉴定的方法.桑黄自古以来是一种名贵中药材,而市售桑黄主要依托简单的形态鉴定造成混淆众多.近年来大量研究表明,桑黄类真菌种类至少有7个种,并且其药效也不尽相同.【目的】为更准确、高效对桑黄类真菌进行鉴定,本研究以采集自西藏、吉林和浙江的3种桑黄子实体为材料,筛选最佳DNA条形码与相应PCR条件.【方法】利用组织分离获得3种桑黄纯培养菌株,分别编号为1713、1714和HS菌株.利用ITS、NL、rpb1、rpb2和ef1-α等7组DNA条形码分别对3种桑黄进行PCR扩增、测序、比对和发育树分析,并结合形态学特征,确定其最适DNA条形码和分类学地位.【结果】结果表明,ITS和NL条形码对3种桑黄均能够获得单一目的条带;rpb1Y、rpb2B和rpb2Y条形码特异性低,扩增后获得多个条带;而rpb1B和ef1-α条形码均无法获得条带.通过多序列比对,结合形态分析,确定1713菌株为桑黄纤孔菌(Inonotus sanghuang),而1714和HS菌株均为鲍姆纤孔菌(Inonotus baumii).【结论】本研究确定ITS和NL为桑黄分子鉴定的最佳DNA条形码,其PCR最适退火温度范围分别为58~59℃和49~50℃,为桑黄真菌快速鉴定提供参考依据. 展开更多
关键词 桑黄 分子鉴定 DNA条形码 NL ITS
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都市型高等农业院校细胞生物学实验教学改革的实践与探索 预览 被引量:1
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作者 黄体冉 刘玉芬 陈青 《高校实验室工作研究》 2016年第1期17-19,共3页
北京农学院生物科学与工程学院结合都市型高等农业院校的办学定位和办学特色,明确了细胞生物学实验教学特色。通过合理确定实验教学学时比重、调整优化实验内容、优化实验教学过程以及完善成绩评定体系等措施,显著的提高了实验教学的质... 北京农学院生物科学与工程学院结合都市型高等农业院校的办学定位和办学特色,明确了细胞生物学实验教学特色。通过合理确定实验教学学时比重、调整优化实验内容、优化实验教学过程以及完善成绩评定体系等措施,显著的提高了实验教学的质量和效果,有效地培养了学生的科研素质和创新思维。 展开更多
关键词 都市型高等农业院校 细胞生物学实验 实验教学改革 实践与探索
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苏云金芽孢杆菌Vip3Aa10毒素结合肽的筛选及活性测定 预览 被引量:2
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作者 丁照鑫 王涵祎 +3 位作者 曹利娟 郝艳同 申晓鸿 刘京国 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第18期3627-3634,共8页
【目的】Vip3A是由苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在对数生长期产生并分泌到胞外的对鳞翅目昆虫有较广杀虫谱的毒素,其在敏感昆虫中肠上的结合受体尚未得到鉴定。利用噬菌体展示技术,论文试图从肽库中筛选到能与Vip3A毒素特... 【目的】Vip3A是由苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在对数生长期产生并分泌到胞外的对鳞翅目昆虫有较广杀虫谱的毒素,其在敏感昆虫中肠上的结合受体尚未得到鉴定。利用噬菌体展示技术,论文试图从肽库中筛选到能与Vip3A毒素特异性结合的多肽,为研究Vip3A毒素的杀虫模式提供线索。【方法】将构建的p ET28a-Vip3Aa10表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,用亲和纯化的方法制备Vip3Aa10,并用胰蛋白酶活化和离子交换层析进一步纯化。以活化的Vip3Aa10毒素为诱饵,经“吸附-洗脱-扩繁”4轮条件逐渐严格的淘选,从噬菌体随机肽库中筛选能特异性地与活化的Vip3Aa10结合的噬菌体。以筛选到的噬菌体基因组DNA为模板,经PCR扩增和测序,获得插入到噬菌体上的外源基因的序列,并推导出相应多肽的氨基酸序列。将化学合成的多肽与活化的Vip3Aa10一起与甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)刷状缘膜囊泡共育后,用免疫印迹方法检测多肽对活化的Vip3Aa10与BBMV结合的影响。将合成的多肽与活化的Vip3Aa10一起涂布在饲料表面,晾干后,每孔放1只1龄的甜菜夜蛾幼虫。6 d后统计昆虫死亡情况。【结果】在25℃条件下用IPTG诱导含p ET28a-Vip3Aa10质粒的大肠杆菌BL21(DE3)可以表达出可溶性的Vip3Aa10蛋白。经亲和纯化、胰蛋白酶活化以及离子交换层析后,可得到较纯的活化的Vip3Aa10。以活化的Vip3Aa10为诱饵,经过4轮条件逐渐严格的淘选,从十二肽库中筛选出9条多肽,其中3条多肽的丰度较高,分别命名为P12-1、P12-2和P12-3,从七肽库中筛选出5条多肽,其中1条多肽的丰度较高,命名为P7-1。结合试验和杀虫活性测定试验结果表明,P12-2和P7-1多肽能不同程度地抑制Vip3Aa10与甜菜夜蛾刷状缘膜囊泡的结合,以及抑制Vip3Aa10的杀虫活性。【结论】用噬菌体展示技术筛选的多肽P7-1能显著性地抑制V 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 营养期杀虫蛋白 结合肽 筛选 活性分析
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双孢蘑菇培养料理化指标及酶活与其产量相关的多重分析 预览
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作者 蔡盼盼 张文强 +3 位作者 张昊琳 王清辉 张国庆 陈青君 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第7期231-237,共7页
为探究双孢蘑菇二次发酵培养料各项理化参数和酶活与产量的关系以及各参数对产量形成所起的作用,为制作和评价高产的二次发酵培养料提供科学依据,该研究以10批不同原料做堆肥,采用二次发酵技术进行隧道式发酵,按照工厂化栽培工艺进行出... 为探究双孢蘑菇二次发酵培养料各项理化参数和酶活与产量的关系以及各参数对产量形成所起的作用,为制作和评价高产的二次发酵培养料提供科学依据,该研究以10批不同原料做堆肥,采用二次发酵技术进行隧道式发酵,按照工厂化栽培工艺进行出菇管理。取每批二次发酵结束后的培养料,测定含水率、pH值、EC值、碳质量分数、氮质量分数、碳氮比等理化性质和纤维素、半纤维素质量分数以及木聚糖酶、羧甲基纤维素酶(CMC)、α-纤维二糖水解酶、木糖苷酶、α-阿拉伯呋喃糖苷酶酶活等13个指标并进行主成分分析、聚类分析。统计每批双孢蘑菇产量并利用多元回归分析各指标与产量的关系。结果表明半纤维素酶、纤维素酶、pH值、EC值、氮质量分数、碳水化合物相关指标是二次发酵培养料指标的主成分因子。主成分分析在二次发酵培养料的13个指标中提取出4个主成分,分为碳水化合物因子,主要的纤维素降解酶类,EC值和氮质量分数,主要的半纤维素降解酶类,贡献率分别为31.176%、18.45%、18.34%、16.08%,前4个主成分累积贡献率达84.04%,代表原始因子的大部分信息,结果客观可信。聚类分析将13个指标聚为4类,分别为碳水化合物变化因子,EC值和氮质量分数,半纤维素降解酶类,pH值。多元回归分析建立的CMC酶活、木聚糖酶酶活和纤维素质量分数与单位面积产量的关系公式拟合度较好,显著性较高。木聚糖酶、CMC酶活与双孢蘑菇产量存在正线性关系,纤维素含量与双孢蘑菇产量存在负线性关系,此方程可以预测发酵培养料种植双孢蘑菇可能的产量。3种方法综合分析表明,双孢蘑菇产量受培养物料中各理化指标及酶活共同影响,其中木聚糖酶、CMC酶活性与双孢蘑菇产量关系更为密切,呈正相关。 展开更多
关键词 发酵 基质 物理性质 化学性质 酶活性 双孢蘑菇 产量
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日光温室葡萄架下灰树花种植可行性研究 预览
5
作者 王晓 尹玉婷 +1 位作者 陈青君 张国庆 《中国农学通报》 2018年第3期104-111,共8页
为提高日光温室空间和地面的利用率,探讨日光温室葡萄架下种植灰树花(Grifola frondosa)的可行性。3月初,在日光温室葡萄架下每隔10天种植灰树花,以温湿度实时记录仪、干燥称重法、凯氏定氮法等方法对4个播期的环境参数、灰树花理化... 为提高日光温室空间和地面的利用率,探讨日光温室葡萄架下种植灰树花(Grifola frondosa)的可行性。3月初,在日光温室葡萄架下每隔10天种植灰树花,以温湿度实时记录仪、干燥称重法、凯氏定氮法等方法对4个播期的环境参数、灰树花理化性状及产量进行研究。结果表明,3—6月葡萄叶幕层的日均温度在15-28℃,湿度在32%-84%。距栽培床面上20 cm处温度在13-28℃,湿度维持在55%-95%;距栽培床面下10 cm处温度在15-26℃。葡萄与灰树花对温湿度要求范围可以于春夏季节在温室内达成一致,葡萄生长的变温范围较好地满足了灰树花结实的温度要求。灰树花菌棒覆土后,菌棒基质含水量在50%-57%,pH值偏酸性,EC值在原基形成后升高,碳氮比逐渐下降至出菇结束的(36-38):1。基质中纤维素酶、木聚糖酶活性在原基形成期最高,漆酶活性在子实体生长期最高,淀粉酶活性在菌丝生长前期最高,子实体生长过程中降低,成熟后上升。日光温室葡萄架下3月初播种灰树花,生物学效率可达40%,与仿野生栽培模式的生物学效率相近。 展开更多
关键词 灰树花 葡萄 温室 理化性质 胞外酶活性
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利用杂草培养料栽培双孢蘑菇的可行性
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作者 高晓静 张昊琳 +3 位作者 桑羽希 蔡盼盼 张国庆 陈青君 《应用与环境生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1275-1282,共8页
充分利用当地杂草资源生产双孢蘑菇对于降低生产成本和环境保护具有重要意义. 在密云库区杂草多样性调查和配方工艺调整的基础上,对3个批次库区杂草的双孢蘑菇(Agaricus bisporus)生产进行全程监测,包括堆肥期和出菇期的培养料理化性质... 充分利用当地杂草资源生产双孢蘑菇对于降低生产成本和环境保护具有重要意义. 在密云库区杂草多样性调查和配方工艺调整的基础上,对3个批次库区杂草的双孢蘑菇(Agaricus bisporus)生产进行全程监测,包括堆肥期和出菇期的培养料理化性质、物质变化、相关降解酶活性和培养料发酵过程中细菌菌群变化,统计产量等. 结果显示,库区杂草种类繁多,株高茎粗,茎杆坚硬紧实,打捆后的杂草饱和吸水量为76.78%. 堆肥期培养料的含水量、含碳量和碳氮比逐渐下降,出菇期变化不大;培养料的含氮量在培养料一次发酵结束(PI)均有下降的现象,二次发酵结束(PII)含氮量升高. 培养料二次发酵过程中纤维素和半纤维素的利用率均介于40%-60%之间;木质素利用率介于20%-30%. 在双孢蘑菇菌丝生长和出菇过程中木质素的利用率为16%-21%. 培养料纤维素和半纤维素的含量变化与相关降解酶变化情况相一致. 堆肥期样品Illumina测序得到432 595条有效序列,序列平均长度为441 bp;分类分析表明,堆肥时期优势菌群为拟杆菌门(Bacteroidetes)的普氏菌属(Prevotella),厚壁菌门(Firmicutes)的芽孢杆菌属(Bacillus),栖热菌门(Deinococcus-Thermus)的Thermus属、Truepera属、Caldicoprobacter属(一种木聚糖降解菌),放线菌门(Actinobacteria)的热多孢菌属(Thermopolyspora),变形菌门(Proteobacteria)的假黄单胞菌属(Pseudoxanthomonas). 3个批次产量在17.1-19.7 kg/m^2范围. 本研究表明库区杂草取代麦草进行双孢蘑菇工厂化生产是可行的,结果可为其合理利用和工艺改进提供理论依据. 展开更多
关键词 培养料 木质纤维素 木质纤维素降解酶 细菌菌群
野生白桦茸的分离鉴定及其生物学特性
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作者 韩鹏 边勇 +4 位作者 陈青君 张国庆 张宇轩 李兵 徐鑫 《应用与环境生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期576-582,共7页
以采集自俄罗斯的野生白桦茸菌核为原料,经组织分离获得纯培养菌株(编号F1501),进一步进行分类鉴定、最适生长条件、液体发酵产多糖及其抗氧化活性与人工驯化研究.依据内转录间隔区ITS鉴定,确定F1501菌株属于锈革菌科纤孔菌属(Inono... 以采集自俄罗斯的野生白桦茸菌核为原料,经组织分离获得纯培养菌株(编号F1501),进一步进行分类鉴定、最适生长条件、液体发酵产多糖及其抗氧化活性与人工驯化研究.依据内转录间隔区ITS鉴定,确定F1501菌株属于锈革菌科纤孔菌属(Inonotus)真菌,其与桦褐孔菌(Inonotus obliquus)的相似性为99%;结合菌核、菌丝形态学特征,确定F1501菌株为桦褐孔菌.最适培养条件研究实验表明,F1501菌株的最适碳源、氮源、C/N、生长因子、温度、pH值分别为麦芽糖、牛肉浸膏、10/1、VB2、28℃、8.0;以马铃薯葡萄糖(PD)培养基、10%接种量、28℃、150 r/min培养10 d,发酵液中多糖含量为476.32 mg/L,总抗氧化活性为0.19 mmol/L(Trolox),对羟自由基(·OH)清除率为72.7%.以棉籽壳为主要栽培基质进行人工驯化试验,可以形成类子实体结构.本研究获得野生桦褐孔菌菌株,其生物学特性研究结果可为野生桦褐孔菌的人工驯化和开发利用提供理论依据. 展开更多
关键词 桦褐孔菌 菌株鉴定 培养条件 发酵液 抗氧化
不同配方培养料生产双孢蘑菇过程中主要木质纤维素降解酶及物料组分的变化 被引量:1
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作者 秦改娟 王晓 +1 位作者 陈青君 张国庆 《应用与环境生物学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期1035-1041,共7页
为探讨双孢蘑菇生产过程木质纤维素的利用情况,以麦草秸秆、玉米秸秆和杂草秸秆为主料的3种不同配方的培养料为研究材料,分别测定各配方培养料不同时期主要胞外木质纤维素降解酶活性和木质纤维素组分(纤维素、半纤维素和木质素)的... 为探讨双孢蘑菇生产过程木质纤维素的利用情况,以麦草秸秆、玉米秸秆和杂草秸秆为主料的3种不同配方的培养料为研究材料,分别测定各配方培养料不同时期主要胞外木质纤维素降解酶活性和木质纤维素组分(纤维素、半纤维素和木质素)的相对含量,并统计各配方产量. 结果显示,麦草配方(FWS)的纤维素酶总活性和木聚糖酶活性不断升高,出菇期达到稳定;玉米秸秆配方和杂草配方堆肥期的纤维素酶总活性保持在1 U/g左右,发菌期大幅升高,出菇期先稳定后下降,木聚糖酶活性始终保持在7.97-23.85 U/g之间;3个配方的漆酶活性在堆肥期未检测到,发菌期升至最高,出菇期快速降低. 3个配方堆肥期纤维素和半纤维素的相对含量明显下降,木质素相对含量则几乎不变. 发菌及出菇期木质素与半纤维素的相对含量较纤维素的下降明显. 3个配方双孢蘑菇的产量关系为麦草配方(30.00 kg/m2)>玉米秸秆配方(17.21 kg/m2)>杂草配方(16.67 kg/m2). 本研究表明堆肥期主要为堆肥微生物及物理化学作用降解纤维素和半纤维素,发菌期则主要是双孢蘑菇菌丝利用木质素;从播种至三潮菇清床,双孢蘑菇菌丝主要利用木质素和半纤维素;本研究中麦草配方是栽培双孢蘑菇的最佳培养料,而玉米秸秆配方和杂草配方有待进一步优化. (图2 表3 参33) 展开更多
关键词 双孢蘑菇 秸秆 堆肥 胞外酶活 木质纤维素
一种野生多孔菌的分离、鉴定、培养条件及抗氧化活性 被引量:7
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作者 王寿南 陈青君 +3 位作者 张国庆 李兵 李伟聪 赵天健 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期82-88,共7页
多孔菌是一类子实体呈孔状且质地为革质至木质的大型担子菌,其中一部分具有较高的药用价值.对一株野生多孔菌子实体进行分离纯化获得纯培养BJ菌株,并对其分类、最适培养条件和液体发酵产物抗氧化活性进行分析.采用形态学和ITS分类学鉴... 多孔菌是一类子实体呈孔状且质地为革质至木质的大型担子菌,其中一部分具有较高的药用价值.对一株野生多孔菌子实体进行分离纯化获得纯培养BJ菌株,并对其分类、最适培养条件和液体发酵产物抗氧化活性进行分析.采用形态学和ITS分类学鉴定菌株的分类学地位;通过测定菌株在不同碳源、氮源等培养基中的生长状况,研究菌丝最适培养条件;使用2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法测定菌株发酵液总抗氧化活性;使用总超氧化物歧化酶(T-SOD)法、1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基(DPPH)法测定菌株发酵液菌体的总超氧化物歧化酶活力和自由基清除能力.结果显示:经鉴定BJ菌株为石榴嗜蓝孢孔菌(Fomitiporia punicata).菌丝体最适培养碳源为葡萄糖、麦芽糖和淀粉,最适氮源为酵母浸粉,最适C/N比为10/1,最适温度为28℃,最适pH为7.0.发酵液总抗氧化活性为0.517 mmol/L(维生素E),菌体的总超氧化物歧化酶活力为770.37 U/g,DPPH自由基清除力的IC_(50)为2.14 mg/mL.本研究从野外获取了一株高抗氧化活性的药用多孔菌资源,可为野生药用真菌的开发利用提供理论依据. 展开更多
关键词 多孔菌 鉴定 培养条件 抗氧化
旱稻与小豆间作对小豆铁营养的影响探析 预览
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作者 周秭旭 李奕松 《南方农业》 2017年第11期85-86,88共3页
铁在地壳中含量很高,但植物对铁的吸收与利用率很低,植物缺铁现象十分普遍,导致作物产量与品质严重下降,从而影响人们的营养健康.研究表明,间作是改善作物缺铁的一种有效途径,既可节省空间又对环境不产生污染.基于此,综述间作及间作种... 铁在地壳中含量很高,但植物对铁的吸收与利用率很低,植物缺铁现象十分普遍,导致作物产量与品质严重下降,从而影响人们的营养健康.研究表明,间作是改善作物缺铁的一种有效途径,既可节省空间又对环境不产生污染.基于此,综述间作及间作种间优势研究进展,并总结小豆与旱稻作物间作,并对未来进一步研究提出展望. 展开更多
关键词 间作 小豆 旱稻 铁营养
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Cry1Ac毒素突变体的构建、表达及杀虫活性测定 预览 被引量:1
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作者 袁晓曼 丁照鑫 +1 位作者 张淑臣 刘京国 《中国农学通报》 2017年第36期139-144,共6页
为了构建对敏感和类钙粘蛋白突变的抗性昆虫都具有高杀虫活性的毒素,将Cry1Ac毒素结构域I中α1和α2之间插入一个α胰凝乳蛋白酶作用位点,并分析突变体毒素在苏云金芽孢杆菌中形成伴孢晶体、目标蛋白的表达情况,以及鉴定突变体毒素的杀... 为了构建对敏感和类钙粘蛋白突变的抗性昆虫都具有高杀虫活性的毒素,将Cry1Ac毒素结构域I中α1和α2之间插入一个α胰凝乳蛋白酶作用位点,并分析突变体毒素在苏云金芽孢杆菌中形成伴孢晶体、目标蛋白的表达情况,以及鉴定突变体毒素的杀虫活性。结果发现:4个突变体蛋白都能在苏云金芽孢杆菌中表达产生约130 k Da的目标蛋白,但不能形成有规则的伴孢晶体。这可能是由于突变体蛋白在Bt生长的平稳期达到最高,在衰亡期开始被降解造成的。4个突变体中,Cry1Acm4在培养48 h时产量最高,而且其对甜菜夜蛾杀虫活性比野生型高1.6倍,但是其产量只有野生型毒素产量的十分之一。尽管由于Cry1Acm4的表达量较低而使其实际应用的价值不大,但这种构建突变体的方法对研究高毒力的Cry1Ac毒素提供一种新的思路。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 Cry1Ac毒素 突变体 杀虫活性
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餐饮废水发酵生产微生物菌肥及其应用的研究 被引量:1
12
作者 胡滢滢 王璐 +2 位作者 薛飞燕 吕鹤书 马兰青 《环境工程》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期10-14,共5页
以学校食堂餐饮废水为原料,通过发酵培养获得粘红酵母和地衣芽孢杆菌菌液,按照不同比例混合菌液制备微生物液体菌肥,在盆栽小油菜种植中检测其应用效果。利用餐饮废水发酵所得粘红酵母和地衣芽孢杆菌菌液pH为5.5~7.5,未检出杂菌且有效... 以学校食堂餐饮废水为原料,通过发酵培养获得粘红酵母和地衣芽孢杆菌菌液,按照不同比例混合菌液制备微生物液体菌肥,在盆栽小油菜种植中检测其应用效果。利用餐饮废水发酵所得粘红酵母和地衣芽孢杆菌菌液pH为5.5~7.5,未检出杂菌且有效活菌数高于80亿/m L,N、P、K总养分大于4.6%,以体积比为4∶1混合施用于盆栽小油菜,其鲜重、叶绿素含量和过氧化氢酶活性与对照组相比分别提高了33.4%、34.1%和8.2%。 展开更多
关键词 餐饮废水 微生物菌肥 粘红酵母 地衣芽孢杆菌 小油菜
不同配方双孢蘑菇栽培期培养料理化性状和细菌群落分析 预览
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作者 张昊琳 郭亚萍 +2 位作者 秦改娟 张国庆 陈青君 《中国农学通报》 2016年第25期52-58,共7页
为了对北京地区的秸秆资源进行循环利用,将其应用于双孢蘑菇栽培领域作为生产资源。在传统双孢蘑菇麦草配方的基础上,分别添加玉米秸、菇渣代替部分麦草,以干燥称重法、凯氏定氮法、灼烧重量法等对3个不同配方双孢蘑菇栽培期培养料的理... 为了对北京地区的秸秆资源进行循环利用,将其应用于双孢蘑菇栽培领域作为生产资源。在传统双孢蘑菇麦草配方的基础上,分别添加玉米秸、菇渣代替部分麦草,以干燥称重法、凯氏定氮法、灼烧重量法等对3个不同配方双孢蘑菇栽培期培养料的理化性状进行分析,以DGGE技术分析细菌群落特征。添加玉米秸、菇渣后,培养料的含水量、含碳量有所提高;培养料的含氮量越高其产量也越高,产量高低依次为传统麦草配方〉玉米秸配方〉菇渣配方。不同配方栽培时期共有的优势菌有高温单孢菌属(Thermomonospora sp.)、芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、微小杆菌属(Microvirga sp.);一个不可培养细菌在原基形成时占有绝对优势,可能与原基形成有关;全麦草配方的细菌群落演替最慢。传统麦草配方具有良好的理化性状和稳定的细菌群落,玉米秸、菇渣代替部分麦草的配方仍需进一步优化。 展开更多
关键词 双孢蘑菇 栽培期 理化性状 细菌群落
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秸秆与菇渣堆肥用于双孢蘑菇栽培的理化性状和细菌群落分析 预览 被引量:7
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作者 秦改娟 郭亚萍 +1 位作者 张国庆 陈青君 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第S2期285-291,共7页
该研究以双孢蘑菇(Agaricus bisporus)传统麦草配方作为对照,分别用玉米秸秆和杏鲍菇菇渣替换部分麦草设计2个新配方,通过理化性状、细菌群落动态及产量分析,评价玉米秸秆或杏鲍菇菇渣用于工厂化双孢菇生产的可行性。分别在建堆、一次... 该研究以双孢蘑菇(Agaricus bisporus)传统麦草配方作为对照,分别用玉米秸秆和杏鲍菇菇渣替换部分麦草设计2个新配方,通过理化性状、细菌群落动态及产量分析,评价玉米秸秆或杏鲍菇菇渣用于工厂化双孢菇生产的可行性。分别在建堆、一次发酵结束、二次发酵结束3个时期采集堆肥样品,提取总DNA,以大肠杆菌(Escherichia coli)16S r DNA V3区通用引物,进行PCR‐DGGE扩增和序列分析,同时分析培养料理化性状,并测定双孢蘑菇产量。研究结果:玉米秸秆配方基质颗粒比较粗大,含氮量较低,二次发酵结束时与麦草配方具有较多的共有优势菌群,两者的细菌多样性指数变化规律也基本一致。菇渣配方基质颗粒比较细碎,含氮量较高,其堆肥3个时期的优势细菌种类、多样性指数变化趋势与麦草配方明显不同。传统麦草配方具有良好的理化性状和稳定的细菌群落,玉米秸秆、杏鲍菇菇渣代替部分麦草的配方仍需进一步优化。 展开更多
关键词 堆肥 细菌 秸秆 菇渣 理化性状 PCR-DGGE 双孢蘑菇
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烟草Nt4CL与虎杖PcSTS基因的融合表达与功能分析 预览 被引量:1
15
作者 刘文彬 郭辉力 +3 位作者 刘欢 黄丽娜 张奋强 马兰青 《生物技术进展》 2016年第2期91-97,共7页
4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate-Co A ligase,4CL)和芪合酶(stilbene synthase,STS)是白藜芦醇苯丙氨酸代谢合成的最后两个关键酶。运用悬挂PCR(overlap PCR)的方法将烟草4CL基因(Nt4CL)和虎杖STS基因(Pc PKS5)用3个中性氨... 4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate-Co A ligase,4CL)和芪合酶(stilbene synthase,STS)是白藜芦醇苯丙氨酸代谢合成的最后两个关键酶。运用悬挂PCR(overlap PCR)的方法将烟草4CL基因(Nt4CL)和虎杖STS基因(Pc PKS5)用3个中性氨基酸链连接,得到融合基因Nt4CL-Pc PKS5,将其插入原核表达载体中,构建p ET30a-Nt4CL-Pc PKS5重组质粒,表达Nt4CL-Pc PKS5融合蛋白。经Ni2+纯化和PD-10柱脱盐后,得到可溶性纯化蛋白。体外酶促反应结果表明该融合酶具有4CL和STS的双重活性,其催化产物为白藜芦醇。酶促反应最适条件为:p H 6.5,反应温度为45℃。研究结果获得了有效催化白藜芦醇生物合成的双功能融合酶,为进一步利用融合酶基因转化工程菌株实现白藜芦醇工业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 白藜芦醇 融合基因 原核表达 酶促反应
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缺铁胁迫对小豆幼苗生理特性的影响 预览 被引量:2
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作者 王金龙 王薇薇 +3 位作者 万平 杨凯 赵波 李奕松 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期141-147,共7页
为了探讨小豆铁高效的生理指标,研究缺铁胁迫对小豆(Vigna angularisi)幼苗主要生理特性的影响。选取4个小豆材料(13MY001、13MY007、FMY020及JN6)幼苗,采用溶液培养方法,设置Fe(Ⅱ)-EDTA浓度为0 mol/L、4×10^-5 mol/L两组处... 为了探讨小豆铁高效的生理指标,研究缺铁胁迫对小豆(Vigna angularisi)幼苗主要生理特性的影响。选取4个小豆材料(13MY001、13MY007、FMY020及JN6)幼苗,采用溶液培养方法,设置Fe(Ⅱ)-EDTA浓度为0 mol/L、4×10^-5 mol/L两组处理,分别于处理后7、14、21 d对其相关指标进行测定分析。结果表明,缺铁胁迫降低了小豆幼苗叶片的叶绿素含量及光合速率,增加了小豆幼苗根系呼吸速率及Fe^3+还原酶活性,并且在+Fe和-Fe处理间差异达显著水平(P〈0.05);不同小豆品种(品系)间的上述指标均存在显著差异。综合分析得出,小豆的幼苗叶片的叶绿素含量、光合速率及根系Fe^3+还原酶活性、根系呼吸速率可作为筛选、培育铁高效小豆品种的生理指标。 展开更多
关键词 缺铁胁迫 小豆 生理特性 铁含量
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一株野生桑黄的分离鉴定与生物学特性 被引量:9
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作者 王寿南 陈青君 +3 位作者 张国庆 韩鹏 张宇轩 李兵 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期667-674,共8页
桑黄是我国传统名贵的药用真菌,在分类学上是锈革孔菌科(Hymenochaetaceae)几种药用真菌的总称.从北京延庆区四海镇黑汉岭采集到一株桑黄子实体,经分离纯化获得纯培养(编号SS).进一步开展其分类鉴定、最适培养条件和液体发酵产物活... 桑黄是我国传统名贵的药用真菌,在分类学上是锈革孔菌科(Hymenochaetaceae)几种药用真菌的总称.从北京延庆区四海镇黑汉岭采集到一株桑黄子实体,经分离纯化获得纯培养(编号SS).进一步开展其分类鉴定、最适培养条件和液体发酵产物活性研究.根据ITS鉴定,确定SS菌株属于锈革孔菌科针层孔菌属(Phellinus),与苹果木层孔菌(Phellinus tuberculosus)的相似性为95%;结合子实体、菌丝特征和寄主植物类型,确定SS菌株为苹果木层孔菌.SS菌株菌丝体最适培养条件研究表明,其最适碳源为葡萄糖,最适氮源为黄豆粉,最适C/N比为20/1,最适生长因子为维生素C,最适温度为28℃,最适pH为7.0.以马铃薯葡萄糖液体(PD)培养基、10%接种量、28℃、150 r/min培养7 d,发酵液中多糖含量为176.71 mg/L,黄酮含量为0.11 mg/L,抗氧化活性为7.82 mol/L(FeSO4),未检测到多酚的存在.本研究从野外获取新的桑黄药用资源,其生物学特性结果可为野生药用真菌的人工驯化和开发利用提供理论依据. 展开更多
关键词 桑黄 鉴定 培养条件 发酵液 抗氧化
SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量的改良和优化 预览 被引量:1
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作者 黄体冉 张国庆 +2 位作者 王文平 张静 王聪 《高校实验室工作研究》 2016年第3期63-66,共4页
为了能够提高实验效率和资源利用率,生物化学实验教学团队分别从分离胶和浓缩胶的配制、凝胶的染脱色等方面不断探索,对SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量进行了改良和优化。在试剂改良方面,利用二硫苏糖醇代替毒性较大的... 为了能够提高实验效率和资源利用率,生物化学实验教学团队分别从分离胶和浓缩胶的配制、凝胶的染脱色等方面不断探索,对SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量进行了改良和优化。在试剂改良方面,利用二硫苏糖醇代替毒性较大的β-巯基乙醇,适当减少TMED在分离胶和浓缩胶中的含量,增加APS的含量;在步骤优化方面,省去了凝胶染色固定,建立了微波中火加热30s-震荡染色5min-蒸馏水洗掉染色液-电磁炉蒸馏水煮10-15min的快速染色-脱色方法。 展开更多
关键词 SDS-PAGE 蛋白质相对分子质量 染脱色 改良和优化
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油松林地点柄乳牛肝菌菌塘细菌群落动态
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作者 张举龙 陈青君 +2 位作者 秦岭 王珊珊 张国庆 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期974-980,共7页
为了解北京山区油松(Pinus tabuliformis)林地点柄乳牛肝菌(Suillus granulatus)出菇期间菌塘内的细菌群落变化规律,收集出菇期前后(5-11月)的菌塘土样,通过聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)方法进行评估与分析.利用... 为了解北京山区油松(Pinus tabuliformis)林地点柄乳牛肝菌(Suillus granulatus)出菇期间菌塘内的细菌群落变化规律,收集出菇期前后(5-11月)的菌塘土样,通过聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)方法进行评估与分析.利用土壤总DNA提取试剂盒提取不同时期总DNA,以细菌通用引物338F和518R进行PCR扩增和DGGE,进一步对细菌群落的DGGE指纹图谱分析后进行切胶回收和测序.结果显示在点柄乳牛肝菌出菇期间,菌塘中细菌群落较为丰富,群落多样性指数维持在较高水准,并且菌塘中的细菌群落呈现出季节性变化.菌塘细菌分属于5个门(酸杆菌门、放线菌门、拟杆菌门、厚壁菌门和变形菌门)22个属(酸杆菌属、氨基酸杆菌属等).菌塘中变形菌门和酸杆菌门菌群的相对丰度较高,为优势菌群,其中α-变形菌纲为菌塘中最丰富的菌群.γ-变形菌纲菌群的相对丰度变化与点柄乳牛肝菌子实体发生周期一致.酸杆菌门菌群的相对丰度在点柄乳牛肝菌出菇前期(7月)明显增大.这些发现为点柄乳牛肝菌野生资源保育与人工驯化等后续研究提供了理论和实验依据. 展开更多
关键词 点柄乳牛肝菌 16S RDNA PCR-DGGE 细菌群落 出菇期
双孢蘑菇堆肥过程中细菌群落结构分析 预览
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作者 郭亚萍 张国庆 +1 位作者 陈青君 杨凯 《农业科学与技术:英文版》 CAS 2015年第8期1778-1784,共7页
分别以玉米秸、牛粪和稻草、牛粪为主要原料,设计两种双孢蘑菇(Agaricus bisporus)堆肥配方并进行堆肥发酵,研究二者堆肥过程中细菌群落多样性。在建堆、一次发酵结束和二次发酵结束3个时期分别采集堆肥样品,提取总DNA,以大肠杆菌16S ... 分别以玉米秸、牛粪和稻草、牛粪为主要原料,设计两种双孢蘑菇(Agaricus bisporus)堆肥配方并进行堆肥发酵,研究二者堆肥过程中细菌群落多样性。在建堆、一次发酵结束和二次发酵结束3个时期分别采集堆肥样品,提取总DNA,以大肠杆菌16S r DNA序列设计通用引物,进行PCR-DGGE扩增和序列分析。结果获得56条特异条带16S r DNA基因信息(Gen Bank登录号为KF630598-KF630653),分属于细菌的7个门、42个属。两种配方堆肥过程中主要类群属于变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinobacteria),主要的优势种属包括Bacillus属、Paenibacillus属、Thermomonospora属、Thermasporomyces属、Pseudomonas属和Cellvibrio属。多样性指数分析显示,在堆肥过程中,稻草配方微生物多样性变化呈连续上升趋势,而玉米秸配方堆肥微生物多样性呈先升高、再降低的趋势。主成分分析(PCA)显示,玉米秸配方一次发酵结束的样品与二次发酵结束的样品聚为一类,说明玉米秸配方堆肥比预期提前腐熟。本研究表明,稻草配方微生物多样性高,所需腐熟时间长;玉米秸配方微生物多样性略低,但所需腐熟时间大大缩短。 展开更多
关键词 双孢蘑菇 堆肥 细菌群落结构 PCR-DGGE
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