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整合模式在生物化学与分子生物学教学中的应用 预览
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作者 陶正贤 陈园园 +5 位作者 王学军 林海燕 张伟 杨芬 袁庆新 袁栎 《基础医学教育》 2018年第9期728-731,共4页
生物化学与分子生物学在分子水平研究生命现象,而精准医学的提出引导生物医学更加倚重分子水平的发展。在大力发展精准医学的背景下,如何在生物化学与分子生物学和临床间建立有效的联系是医学专业生物化学与分子生物学教学中所面临的问... 生物化学与分子生物学在分子水平研究生命现象,而精准医学的提出引导生物医学更加倚重分子水平的发展。在大力发展精准医学的背景下,如何在生物化学与分子生物学和临床间建立有效的联系是医学专业生物化学与分子生物学教学中所面临的问题。文章尝试通过整合教学内容、建立相应的考核机制、组建基础与临床相结合的教学团队,在教学中以生物化学与分子生物学为起点,通过从分子、细胞、组织器官到整体水平的整合将生物化学与分子生物学和临床相结合,使学生尽早适应精准医学模式,切实提高教学效果和教学质量。 展开更多
关键词 生物化学与分子生物学 课程整合 教学改革
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HCVF蛋白和负性共刺激分子2B4与慢性HCV感染的关联研究
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作者 石丽萍 李森森 +8 位作者 肖雯 裴家平 季晓伟 蒋龙凤 王长军 邓小昭 张琪 韩一芳 张锦海 《中华疾病控制杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期613-616,644共5页
目的 探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)F蛋白的产生与负性共刺激分子2B4在慢性HCV感染中的关联性。方法 收集慢性HCV患者(chronic hepatitis patient,CHP)的血液样本,检测F抗体(F antibody,F-Ab)的阳性率并依据结果分成(... 目的 探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)F蛋白的产生与负性共刺激分子2B4在慢性HCV感染中的关联性。方法 收集慢性HCV患者(chronic hepatitis patient,CHP)的血液样本,检测F抗体(F antibody,F-Ab)的阳性率并依据结果分成(HCV-F(+)组、HCV-F(-)组)两组,收集健康者的血液样本作为对照组;分离并培养外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),收集各孔细胞,酶联免疫吸附试验检测2B4抗体阻断前后白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)、干扰素γ(interferon γ,IFN-γ)的表达水平。结果 2B4抗体阻断前,HCV患者PBMCs中IFN-γ和IL-4分泌水平均较健康组高(均有P〈0.05),且HCV-F(-)组分泌IFN-γ水平高于HCV-F(+)组(F=1.908,P=0.020),而IL-4分泌水平低于HCV-F(+)组(F=1.342,P=0.009)。2B4抗体阻断后,健康组中IFN-γ和IL-4水平较阻断前均无统计学意义(均有P〉0.05),CHPIFN-γ分泌水平较阻断前升高(F=1.214,P=0.003),且HCV-F(-)组升高程度高于HCV-F(+)组(F=1.434,P=0.009);而IL-4分泌水平较阻断前明显降低(F=1.505,P=0.015),且HCV-F(-)组降低程度低于HCV-F(+)组(F=1.444,P=0.032)。结论在慢性HCV感染中,F蛋白的信号调控机制与负性共刺激分子2B4具有相关性。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒F蛋白 负性共刺激分子2B4 丙型肝炎病毒感染
敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因稳定HeLa细胞株的构建
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作者 孙瑜 陈红霞 +6 位作者 齐永 李素芹 沈万鹏 饶继先 李佳萌 李晓玲 李越希 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第11期1197-1200,1206共5页
目的构建SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法分别设计并合成SOSSB1、SOSSB2和SOSSC亚基的两对靶向基因特定外显子的A、B两个单导向核酸(single guide RNA,sgRNA)及其互补链,与含BbsⅠ黏性末端的PX462载体连接,构建... 目的构建SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法分别设计并合成SOSSB1、SOSSB2和SOSSC亚基的两对靶向基因特定外显子的A、B两个单导向核酸(single guide RNA,sgRNA)及其互补链,与含BbsⅠ黏性末端的PX462载体连接,构建重组质粒。重组质粒经酶切和测序鉴定正确后,分别转染至HeLa细胞,用2μg/mL的嘌呤霉素培养筛选出稳定HeLa细胞。采用Western blot法对敲除效果进行鉴定。结果 A、B sgRNA均成功插入至PX462载体,重组质粒经酶切和测序鉴定,证明构建正确。Western blot结果表明,筛选出的SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除稳定HeLa细胞株分别不表达SOSSB1、SOSSB2、SOSSC蛋白。结论成功构建了SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。 展开更多
关键词 SOSS基因 基因敲除 HELA细胞株 CRISPR/Cas9n双切口酶
在新教学模式下医学生物化学考核方式的改革与探索 预览 被引量:4
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作者 王宁 陈园园 +2 位作者 李仲 袁栎 王倩 《教育教学论坛》 2018年第14期153-154,共2页
生物化学是医学生必修的一门专业基础课。在“传统教学-网络教学-PBL”的新教学模式下,我们对现有生物化学理论课程的考核方式进行改革,从而提高生物化学教学效果,加深学生对生物化学知识的理解与掌握,培养学生发现、分析并解决医... 生物化学是医学生必修的一门专业基础课。在“传统教学-网络教学-PBL”的新教学模式下,我们对现有生物化学理论课程的考核方式进行改革,从而提高生物化学教学效果,加深学生对生物化学知识的理解与掌握,培养学生发现、分析并解决医学问题的能力。本文主要探讨了生物化学传统考核方式的缺点,以及采取的一系列具体改革举措。 展开更多
关键词 医学生物化学 基础医学 新教学模式 考核方式
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混合式教学在护理学专业生物化学教学中的应用 预览
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作者 杨芬 陈园园 袁栎 《基础医学教育》 2018年第10期831-833,共3页
南京医科大学护理学专业培养阶段的课程设置淡化文理科界限,采取文理科学生合招合班教学的模式,增加了生物化学教学的难度。因此,在教学方式上进行了改革,采用多样化的教学手段并重,即混合式教学。主要包括:多媒体教学、网络辅助教学、... 南京医科大学护理学专业培养阶段的课程设置淡化文理科界限,采取文理科学生合招合班教学的模式,增加了生物化学教学的难度。因此,在教学方式上进行了改革,采用多样化的教学手段并重,即混合式教学。主要包括:多媒体教学、网络辅助教学、错导式教学、启发式教学、讨论式教学等综合应用,取得了理想的教学效果。 展开更多
关键词 生物化学 混合式教学 教学改革 护理专业
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临床医学(“5+3”一体化)人才培养体系的构建与思考 预览
6
作者 刘向华 袁栎 +2 位作者 刘志军 蒋丽 张怀平 《基础医学教育》 2017年第5期400-402,共3页
临床医学“5+3”人才培养改革旨在培养研究生和住院医师“双重身份”的全面创新型临床医学人才。南京医科大学从培养体系的目标、方案、模式、课程设计及教学改革等方面探索构建了临床医学“5+3”一体化人才体系,并对该培养体系进行... 临床医学“5+3”人才培养改革旨在培养研究生和住院医师“双重身份”的全面创新型临床医学人才。南京医科大学从培养体系的目标、方案、模式、课程设计及教学改革等方面探索构建了临床医学“5+3”一体化人才体系,并对该培养体系进行初步思考和展望,以期提高教学质量。 展开更多
关键词 研究生教育 临床医学 人才培养体系
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CBL在生物化学与分子生物学教学中的作用探讨 预览 被引量:10
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作者 刘向华 袁栎 +2 位作者 刘志军 蒋丽 张怀平 《基础医学教育》 2017年第6期420-422,共3页
在生物化学与分子生物学课程中采用案例教学法(CBL),编写与课程知识点关联的临床案例,设置CBL教学模式,评价师生教学效果,激发医学生学习兴趣和自主能动性,以适应培养具有临床思维能力的医学人才的要求。同时,合理运用CBL教学法,将促... 在生物化学与分子生物学课程中采用案例教学法(CBL),编写与课程知识点关联的临床案例,设置CBL教学模式,评价师生教学效果,激发医学生学习兴趣和自主能动性,以适应培养具有临床思维能力的医学人才的要求。同时,合理运用CBL教学法,将促进生物化学与分子生物学教学模式的改革,有效提高医学院校的教学质量和教学效率。 展开更多
关键词 生物化学与分子生物学 CBL教学法 教学改革
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微课应用于医学分子生物学实验的思考 预览 被引量:1
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作者 刘向华 袁栎 +2 位作者 刘志军 范秉洁 周正嫦 《基础医学教育》 2017年第7期546-548,共3页
医学分子生物学实验课程是临床医学专业教学计划中重要的基础课程,是一门实践性和应用性很强的学科。因课程内容抽象晦涩,操作流程繁杂难懂,在传统平铺直叙的课堂讲授形式下,教学效果往往不佳。微课教学灵活机动,内容短小精悍,视频及动... 医学分子生物学实验课程是临床医学专业教学计划中重要的基础课程,是一门实践性和应用性很强的学科。因课程内容抽象晦涩,操作流程繁杂难懂,在传统平铺直叙的课堂讲授形式下,教学效果往往不佳。微课教学灵活机动,内容短小精悍,视频及动画等多元化授课方式,可呈现微观世界的动态变化。因此,通过现代教育信息技术制作分子生物学实验微课,引导学生自主化学习已成为教学模式改革的重要方向之一。 展开更多
关键词 分子生物学实验 微课 传统教学 教学改革
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HCV治疗中PD-1/PD-L1信号免疫调控作用的研究概况 被引量:3
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作者 肖雯 裴家平 +5 位作者 季晓伟 石丽萍 邓小昭 蒋龙凤 张锦海 王长军 《中华疾病控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期200-205,共6页
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染以其高慢性化、高肝纤维化和高肝细胞癌发生率,已经成为一个全球性的公共卫生问题。本综述拟概述HCV感染和治疗、PD-1(programmed cell death 1 gene,PD-1)高表达与免疫应答在HCV感染中的... 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染以其高慢性化、高肝纤维化和高肝细胞癌发生率,已经成为一个全球性的公共卫生问题。本综述拟概述HCV感染和治疗、PD-1(programmed cell death 1 gene,PD-1)高表达与免疫应答在HCV感染中的关联。在抗-HCV治疗中,提高免疫细胞调控能力是决定治疗效果的关键因素之一。慢性HCV感染中,有功能障碍的HCV特异性CD8~+ T细胞上PD-1表达水平升高,阻断PD-1/PD-L1(programmed death-ligand 1,PD-L1)信号后,T细胞调控功能部分恢复;PD-1/PD-L1信号的增强,不仅抑制细胞毒性T细胞的功能,还影响CD8~+ T细胞的分化。临床上,阻断PD-1/PD-L1信号通路后,抗-HCV免疫应答水平增强。因此,加强对HCV感染诱导PD-1高表达的机制和HCV特异性T细胞功能障碍发生的机制研究,将有助于促进慢性HCV感染的预防性和治疗性疫苗的研发,并最终改善HCV治疗的效果。 展开更多
关键词 肝炎抗体 丙型 免疫 信号传导
HCVF蛋白和APC基因甲基化与慢性HCV感染的相关研究
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作者 季晓伟 肖雯 +9 位作者 裴家平 石丽萍 蒋龙凤 王长军 邓小昭 张琪 韩一芳 张锦海 朱丹燕 徐孝东 《中华疾病控制杂志》 CSCD 北大核心 2017年第4期327-331,共5页
目的探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)F蛋白与多发性腺瘤样息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)基因甲基化在慢性HCV感染中的关系。方法收集慢性HCV患者(chronic hepatitis patient,CHP)的血样,检测F抗体(F antibody... 目的探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)F蛋白与多发性腺瘤样息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)基因甲基化在慢性HCV感染中的关系。方法收集慢性HCV患者(chronic hepatitis patient,CHP)的血样,检测F抗体(F antibody,F-Ab)的阳性率并且分成两组(F-Ab(+)CHP组、F-Ab(-)CHP组),收集健康者的血样作为对照组;分离外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),分别用HCV Core/F蛋白刺激,72 h后,分别提取DNA,用二代测序检测APC基因的甲基化水平,分析各组APC基因甲基化程度的差异。结果APC基因甲基化程度在F-Ab(+)CHP组、F-Ab(-)CHP组及健康对照组三组间差异有统计学意义(F=185.185,P〈0.001),F-Ab(+)CHP组APC基因甲基化程度高于F-Ab(-)CHP组,健康对照组最低(均有P〈0.05);三组样本PBMC分别经Core/F蛋白体外刺激后,APC基因甲基化程度各组总体比较差异均有统计学意义(均有P〈0.05),Core蛋白与F蛋白共刺激组细胞APC基因甲基化程度高于F蛋白刺激组,Core蛋白刺激组为最低。结论在慢性HCV感染患者中,HCV F蛋白的产生能够影响APC基因甲基化程度。 展开更多
关键词 基因 APC 甲基化 肝炎病毒属
长链非编码RNA SPRY4-IT1对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响及机制 预览 被引量:1
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作者 茅佩瑶 孙明 +4 位作者 沈冬 苏筠 林青凤 茅卫东 刘志利 《现代肿瘤医学》 CAS 2017年第7期1006-1010,共5页
目的:探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞系中的表达水平,以及SPRY4-IT1对NSCLC细胞增殖和侵袭功能的影响及分子机制。方法:用实时定量PCR技术检测SPRY4-IT1在NSCLC组织及细... 目的:探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞系中的表达水平,以及SPRY4-IT1对NSCLC细胞增殖和侵袭功能的影响及分子机制。方法:用实时定量PCR技术检测SPRY4-IT1在NSCLC组织及细胞系中的表达水平。将p CDNA-SPRY4-IT1转染SPC-A1和A549细胞,过表达SPRY4-IT1,用MTT法和克隆形成实验检测SPRY4-IT1对SPC-A1和A549细胞增殖和克隆形成能力的影响。Transwell实验评价SPRY4-IT1对细胞迁移、侵袭能力的影响。q PCR和Western blot检测过表达SPRY4-IT1对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物上皮性钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平的影响。结果:SPRY4-IT1的表达在NSCLC组织和细胞系中出现显著下调(P〈0.01)。过表达SPRY4-IT1能降低SPC-A1细胞和A549细胞的增殖和侵袭能力。过表达SPRY4-IT1显著上调E-cadherin的水平、抑制Vimentin的表达,从而影响肿瘤细胞EMT过程。结论:长链非编码RNA SPRY4-IT1表达下调可能通过调控EMT机制促进NSCLC细胞的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 长链非编码RNA SPRY4-IT1 细胞增殖 侵袭
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AXL表达在前列腺癌细胞多西他赛耐药中的作用研究
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作者 林建中 朱佳庚 +3 位作者 吴宏飞 李久明 德伟 王增军 《中华男科学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第4期302-308,共7页
目的:观察AXL表达在前列腺癌PC-3和DU145细胞多西他赛化疗耐药中的作用及可能机制。方法:应用Western印迹测定多西他赛刺激PC-3和DU145后AXL蛋白表达,通过多西他赛浓度递增间断刺激PC-3和DU145细胞,建立耐药细胞PC-3-DR和DU145-DR,应... 目的:观察AXL表达在前列腺癌PC-3和DU145细胞多西他赛化疗耐药中的作用及可能机制。方法:应用Western印迹测定多西他赛刺激PC-3和DU145后AXL蛋白表达,通过多西他赛浓度递增间断刺激PC-3和DU145细胞,建立耐药细胞PC-3-DR和DU145-DR,应用Western印迹测定PC-3和DU145细胞耐药前后AXL,AXL磷酸化蛋白激酶(p-AXL)及配体蛋白生长阻滞特异性因子-6(Gas6)蛋白表达。用脂质体Lipofectamine 2000将经过筛选证实有效的AXL-shRNA序列和阴性NCshRNA序列转染PC-3和DU145细胞,应用CCK8和流式细胞仪检测转染前后加入多西他赛后的细胞增殖和凋亡情况。应用MTT和流式细胞仪检测加入AXL抑制剂MP470和多西他赛单独及联合应用的细胞增殖率、凋亡率和细胞周期分布。Western印迹检测AXL抑制剂R428,多西他赛单独或联合处理耐药细胞后ABCB1的表达情况。结果:多西他赛刺激PC-3和DU145细胞后,AXL表达上升(P〈0.05);与PC-3和DU145细胞相比,PC-3-DR和DU145-DR中AXL,p-AXL蛋白表达明显上升,Gas6蛋白表达明显下降(P均〈0.05)。AXL转染PC-3和DU145后的细胞经多西他赛处理48 h,细胞增殖率分别为(51.03±3.16)%和(57.39±2.37)%,明显高于未转染细胞(36.41±4.28)%和(45.5±3.93)%(P〈0.05),转染后细胞凋亡率分别为(42.37±3.43)%和(39.54±2.39)%,明显低于未转染细胞(65.48±3.16)%和(54.98±2.84)%(P〈0.05)。MP470可明显抑制细胞增殖和促进耐药细胞凋亡,MP470与多西他赛联合应用后的耐药细胞增殖抑制率和凋亡率明显高于单独应用,联合应用后G2/M期细胞百分数亦明显高于单独应用(P均〈0.05)。R428可明显降低耐药细胞的ABCB1表达,与多西他赛联用后,ABCB1的蛋白表达水平明显低于单独用药组(P均〈0.05)。结论:AXL表达上调可促进前列腺癌PC-3和DU145细胞耐药,AXL抑制可增加细胞对多西他赛的敏感性,这一作用可能与G2/M期细胞凋 展开更多
关键词 前列腺癌 多西他赛 耐药 细胞周期 增殖 凋亡
利用CRISPR/Cas9技术构建22q-Enh3增强子元件敲除型A549稳定细胞系
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作者 俞大伟 杨音 +3 位作者 邵立培 孙鸾 杨楠 孙玉洁 《医学分子生物学杂志》 CAS 2017年第2期63-67,共5页
目的 增强子元件敲除细胞系是探索增强子功能的理想细胞模型,为了探索位于22q12.2肺癌易感染色质区的增强子元件22q-Enh3的生物学功能,建立敲除22q-Enh3增强子元件的纯合细胞系.方法 利用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced ... 目的 增强子元件敲除细胞系是探索增强子功能的理想细胞模型,为了探索位于22q12.2肺癌易感染色质区的增强子元件22q-Enh3的生物学功能,建立敲除22q-Enh3增强子元件的纯合细胞系.方法 利用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/crispr-associated 9)基因敲除技术在非小细胞肺癌A549细胞系中敲除22q-Enh3增强子,并运用流式细胞术、细胞培养以及PCR技术筛选和鉴定敲除型克隆.结果 我们最终获得了3个敲除增强子元件22q-Enh3的纯合子细胞克隆.结论 本研究为进一步研究22q-Enh3增强子元件的生物学功能提供了细胞模型,并为应用CRISPR/Cas9基因敲除技术建立其他增强子元件敲除型纯合子细胞模型积累了宝贵经验. 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 肺癌 基因敲除 增强子元件
本科生导师制培养医学生科研能力的实践 预览 被引量:3
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作者 孙鹏 林海燕 《基础医学教育》 2017年第12期996-998,共3页
如何发挥本科生导师制对于提高医学院校本科生科研素养的重要作用一直受到广泛关注,南京医科大学在临床医学"5+3"专业低年级本科生中正式实施一年以来获得较好效果。在实施过程中,通过设计合适课题让低年级学生能够较好参与科研;协... 如何发挥本科生导师制对于提高医学院校本科生科研素养的重要作用一直受到广泛关注,南京医科大学在临床医学"5+3"专业低年级本科生中正式实施一年以来获得较好效果。在实施过程中,通过设计合适课题让低年级学生能够较好参与科研;协调科研工作与学生课业任务之间的冲突;因人而异设计课题,让学生保持对科研的兴趣,从而更好地联系科研工作与基础医学课程学习之间的关系。通过上述方式,进一步提高本科生导师制在培养本科生科研能力中的作用。 展开更多
关键词 本科生导师制 本科生科研 教学改革
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HLA-DPA1/B1基因多态性与丙型肝炎病毒易感性和感染转归的关联研究 被引量:2
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作者 裴家平 季晓伟 +8 位作者 蒋龙凤 邓小昭 徐孝东 肖雯 丁伟良 张锦海 王长军 朱丹燕 李丙军 《中华疾病控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期112-115,120共5页
目的探讨江苏地区有偿献血高危人群白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-DP A1/B1基因多态性与丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染转归的关联性。方法采用病例-对照(慢性丙型肝炎患者258人,自限清除者170人,健康对照者... 目的探讨江苏地区有偿献血高危人群白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-DP A1/B1基因多态性与丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染转归的关联性。方法采用病例-对照(慢性丙型肝炎患者258人,自限清除者170人,健康对照者320人)研究,通过聚合酶链反应序列为基础的基因分型(polymerase chain reaction-sequence based genotyping,PCR-SBT)技术对3组人群HLA-DPA1/B1等位基因进行分析,并比较各等位基因频率。结果 HCV感染组的HLA-DPA1*0103与HLA-DPB1*0201等位基因频率高于健康对照组(40.7%vs32.2%,P=0.003)(22.0%vs 12.5%,P〈0.001)。HCV持续感染组的HLA-DPA1*0201与HLA-DPB1*1401等位基因频率低于自限清除组(7.9%vs 13.8%,P=0.018)(0.0%vs 2.1%,P=0.015)。HLA-DPA1/B1单倍型分析发现,HCV感染组的DPB1*0501-DPA1*0103和DPB1*0201-DPA1*0103单倍型频率高于健康对照组(P〈0.001)。而HCV感染组单倍型DPB1*0202-DPA1*0202的频率低于健康对照组(P〈0.001)。HCV持续感染组的单倍型DPB1*0202-DPA1*0202的基因频率高于HCV自限清除组(P=0.004)。HCV持续感染组DPB1*0402-DPA1*0103单倍型频率又低于HCV自限清除组(P=0.008)。结论在江苏地区有偿献血高危人群中,HCV感染转归与HLA-DPA1/B1基因多态性之间存在一定关联性。 展开更多
关键词 肝炎病毒属 HLA抗原 基因频率
埃可病毒6型表面特异性抗原VP1的原核表达及其多克隆抗体的制备
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作者 李素梅 齐永 +7 位作者 潘英 李素芹 李佳萌 徐亭亭 陈晨 王新国 徐艺菲 李越希 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第4期393-398,共6页
目的原核表达埃可病毒6型表面特异性蛋白VP1,并制备其多克隆抗体。方法筛选VP1蛋白氨基酸序列中抗原性强的片段,优化基因序列,分别构建重组表达质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1。将经双酶切及测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(... 目的原核表达埃可病毒6型表面特异性蛋白VP1,并制备其多克隆抗体。方法筛选VP1蛋白氨基酸序列中抗原性强的片段,优化基因序列,分别构建重组表达质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1。将经双酶切及测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行15%SDS-PAGE鉴定。将融合蛋白VP1-GST及VP1-His分别用Glutathione resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化。以纯化后的VP1-His融合蛋白作为免疫原免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,以VP1-GST融合蛋白为检测抗原,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性。结果经双酶切及测序鉴定证明,重组质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1构建正确。VP1-GST和VP1-His融合蛋白的相对分子质量分别为38 000和19 000,两种融合蛋白分别以可溶性蛋白和包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的60%和30%,纯化后的纯度均〉90%。兔抗VP1血清效价为1∶320 000,可与融合蛋白VP1-GST和VP1-His发生特异性结合。结论成功原核表达了融合蛋白VP1-His和VP1-GST,且VP1-His具有良好的免疫原性,其制备的多克隆抗体的特异性较好,为埃可病毒快速检测技术的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 埃可病毒6型 VP1蛋白 原核细胞 基因表达 多克隆抗体
浅谈医学生物化学实验教学的改革与探索 预览 被引量:3
17
作者 王宁 陈园园 +3 位作者 李仲 袁栎 德伟 王倩 《教育教学论坛》 2016年第28期272-273,共2页
生物化学是医学生必修的一门专业基础课。实验课的开设旨在提高学生的动手能力,增强学生对知识的理解。我们将虚拟实验教学、在线教学(e-learning)融入到生化实验教学中,成为传统教学模式的重要补充。本文主要阐述了实验教学改革中... 生物化学是医学生必修的一门专业基础课。实验课的开设旨在提高学生的动手能力,增强学生对知识的理解。我们将虚拟实验教学、在线教学(e-learning)融入到生化实验教学中,成为传统教学模式的重要补充。本文主要阐述了实验教学改革中不同教学方法的优点及不足。 展开更多
关键词 医学生物化学 实验教学 虚拟实验教学 E-LEARNING平台
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生物化学教学中培养本科生科研素质的策略 预览 被引量:1
18
作者 杨芬 袁栎 《基础医学教育》 2016年第9期699-701,共3页
现代医疗体系对医生的要求越来越高,医生不仅要具备精湛的医术,还要具备较高的科研创新能力。因此,医学生培养阶段的科研素质教育显得尤为重要。生物化学是生命科学领域重要的前沿学科之一,生物化学教学在本科生的科研素质培养上具有不... 现代医疗体系对医生的要求越来越高,医生不仅要具备精湛的医术,还要具备较高的科研创新能力。因此,医学生培养阶段的科研素质教育显得尤为重要。生物化学是生命科学领域重要的前沿学科之一,生物化学教学在本科生的科研素质培养上具有不可推卸的责任,文章将从理论教学、实验教学和PBL教学三个方面探讨生物化学教学中对本科生科研素质的培养策略。 展开更多
关键词 生物化学 科研素质 医学教育
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RIG-I上调抑制胰腺β细胞增殖机制研究
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作者 潘漪 高丽丽 +2 位作者 王鼎玉 陈婷婷 郭军 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期564-568,582共6页
目的 :探讨维甲酸诱导基因I(retinoic acid inducible gene-I,RIG-I)在小鼠胰岛β细胞株NIT-1生长中的作用及其相关分子机制。方法:应用不同浓度(1、5、10、20、50和100μmol/L)的RIG-I特异性激动剂维甲酸(retinoic acid,RA)分... 目的 :探讨维甲酸诱导基因I(retinoic acid inducible gene-I,RIG-I)在小鼠胰岛β细胞株NIT-1生长中的作用及其相关分子机制。方法:应用不同浓度(1、5、10、20、50和100μmol/L)的RIG-I特异性激动剂维甲酸(retinoic acid,RA)分别刺激NIT-1细胞6、12、24 h,上调RIG-I。MTT法检测细胞生长活力;real-time PCR测定RIG-I的m RNA水平;免疫印迹法检测RIG-I和细胞周期蛋白P27蛋白水平;Ed U和流式细胞术检测β细胞的增殖和分裂周期。结果:维甲酸处理能刺激NIT-1细胞RIG-I蛋白水平增加(P〈0.05),能剂量依赖地抑制NIT-1细胞生长活力(P〈0.05),且诱导NIT-1细胞G1期阻滞和周期抑制蛋白P27蛋白水平增加(P〈0.05)。结论:RIG-I的功能增强能诱导小鼠胰岛β细胞P27蛋白水平上调,一定条件下抑制β细胞增殖和诱导细胞周期G1期阻滞,从而导致机体胰岛β细胞整体功能的失代偿,可能是2型糖尿病发生发展的重要诱因。 展开更多
关键词 维甲酸 维甲酸诱导基因I 胰腺Β细胞 P27 细胞周期
基于E-learning平台的医学生物化学教学探索 预览 被引量:6
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作者 王倩 李仲 +4 位作者 陈园园 袁栎 德伟 韩晓 王宁 《基础医学教育》 2016年第5期405-408,共4页
E-lectronic Learning(E-learning)是指在线学习或网络化学习,即在教育领域建立互联网平台,通过网络或者其他数字化媒介进行教与学的一种全新的教学方式。利用其独特的教学平台,E-learning现已经成为课堂教学的一个重要的支撑。生物... E-lectronic Learning(E-learning)是指在线学习或网络化学习,即在教育领域建立互联网平台,通过网络或者其他数字化媒介进行教与学的一种全新的教学方式。利用其独特的教学平台,E-learning现已经成为课堂教学的一个重要的支撑。生物化学是医学专业学生非常重要的一门必修课,为提高学生的学习兴趣,培养学生自主学习的能力,文章阐述了将E-learning融入生物化学教学的可行性和必要性,着重探讨了该课程E-learning平台的构建以及E-learning在生物化学教学中的优势和存在的问题。 展开更多
关键词 医学生物化学 教学改革 E-LEARNING 网络教学
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