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再循环抗体的研究进展
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作者 温灿 陈远志 罗文新 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期183-194,共12页
单克隆抗体因其与抗原结合具有高度特异性与强亲和力,已成为抗体药物研发的主要类型。但随着天然单克隆抗体的深入研究,它的诸多缺陷也浮出水面,如与抗原结合次数有限、带来非预期的抗体清除效应和抗原累积效应。人们不再局限于天然抗... 单克隆抗体因其与抗原结合具有高度特异性与强亲和力,已成为抗体药物研发的主要类型。但随着天然单克隆抗体的深入研究,它的诸多缺陷也浮出水面,如与抗原结合次数有限、带来非预期的抗体清除效应和抗原累积效应。人们不再局限于天然抗体的筛选,而是想通过改造提升抗体药物的药效。近年来,一类新型再循环抗体的问世,很好地解决了天然单克隆抗体发展的瓶颈。再循环抗体可以在胞外结合抗原,在细胞内与抗原解离,使抗体结合抗原次数最大化,减少抗原介导的抗体清除效应和抗体介导的抗原累积效应,并且再循环抗体可以通过进一步的Fc改造来加强与Fc受体的亲和力。文中综述了再循环抗体的研究进展,包括其特点、改造方法及展望。 展开更多
关键词 单克隆抗体 再循环抗体 抗体改造
轮状病毒VP4^*高聚体的制备及其免疫保护性评价
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作者 李毅坚 罗国兴 +5 位作者 杨晗 贾连智 曾渊君 赵毕妍 李廷栋 葛胜祥 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期281-289,共9页
在前期工作中发现,截短的轮状病毒VP4^*蛋白(aa26–476)在大肠杆菌中能够以可溶形式表达,且在小鼠模型中具有较高的免疫原性和免疫保护性。本研究通过颗粒化进一步提高VP4^*蛋白的免疫保护性。通过37℃水浴加热处理24h使VP4^*蛋白多聚化... 在前期工作中发现,截短的轮状病毒VP4^*蛋白(aa26–476)在大肠杆菌中能够以可溶形式表达,且在小鼠模型中具有较高的免疫原性和免疫保护性。本研究通过颗粒化进一步提高VP4^*蛋白的免疫保护性。通过37℃水浴加热处理24h使VP4^*蛋白多聚化,通过高效液相色谱、透射电镜、分析超离等分析VP4^*蛋白颗粒化程度,通过酶联免疫吸附试验分析颗粒化对VP4^*蛋白与中和抗体反应性的影响;通过差示量热法分析VP4^*高聚体的热稳定性;最后,通过小鼠母传抗体模型研究颗粒化对VP4^*免疫原性和免疫保护性的影响。结果表明,VP4^*蛋白高聚体结构均一,并且相比三聚体,具有更高热稳定性和中和抗体结合活性;在内毒素<20 EU/mg的条件下,与铝佐剂混合,刺激小鼠产生更高滴度的中和抗体;对轮状病毒导致的腹泻具有更高的免疫保护性。综上所述,VP4^*高聚体的研究为轮状病毒基因工程亚单位疫苗的研制提供了更广阔的思路。 展开更多
关键词 轮状病毒 基因工程疫苗 VP4^*高聚体 中和抗体 免疫保护性
新城疫病毒株F48E9对CT26小鼠结肠癌的溶瘤治疗作用 预览
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作者 钟建平 李睿 +3 位作者 王国松 洪俊平 付饶 陈毅歆 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期292-298,319共8页
目的分析新城疫病毒株F48E9对CT26小鼠结肠癌的体内外肿瘤杀伤作用和F48E9静脉注射BLAB/c小鼠的安全性数据,评估新城疫强毒株F48E9用于溶瘤治疗的潜力,为后续基于强毒株F48E9进行基因组改造提供科学依据。方法利用CCK-8试剂盒分析F48E9... 目的分析新城疫病毒株F48E9对CT26小鼠结肠癌的体内外肿瘤杀伤作用和F48E9静脉注射BLAB/c小鼠的安全性数据,评估新城疫强毒株F48E9用于溶瘤治疗的潜力,为后续基于强毒株F48E9进行基因组改造提供科学依据。方法利用CCK-8试剂盒分析F48E9对CT26肿瘤细胞的体外杀伤效果,通过瘤内注射病毒评价F48E9对CT26荷瘤小鼠的溶瘤治疗效果,以及通过尾静脉注射病毒评估F48E9对健康BALB/c小鼠的潜在毒副作用。结果MOI为0.1的F48E9对CT26细胞生长可表现出明显的抑制作用,随着MOI的升高,F48E9对细胞生长的抑制作用明显增强;0.1mL浓度为2×10^7pfu/mL的F48E9对BALB/c小鼠CT26皮下移植瘤的生长有显著抑制作用,治疗组的平均生存期为38.4d,未治疗组的平均生存期为15.2d;免疫组化分析显示F48E9对CT26小鼠移植瘤细胞的增殖有明显抑制作用;F48E9尾静脉注射正常BALB/c小鼠的安全性评估实验显示,该毒株对小鼠无明显副作用。结论新城疫强毒株F48E9对CT26小鼠结直肠癌有较好的溶瘤治疗潜力,可作为候选病毒株通过后续的反向遗传学改造建立更安全有效的溶瘤病毒株,为肿瘤研究与治疗提供新手段。 展开更多
关键词 新城疫病毒(NDV) 结肠癌 溶瘤治疗 安全性评价
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MenAfriVac^■接种推广对我国进一步扩大疫苗接种的启示
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作者 陈思伊 黄小芬 +3 位作者 吴婷 张军 夏宁邵 赵勤俭 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期124-128,共5页
疫苗是人类对抗传染性疾病的有力武器,其对人类疾病的预防模式产生了重要影响,从爱德华詹纳使用牛痘脓包作为免疫原预防天花以来,许多疫苗被研制出来以对抗各种传染性疾病^[1]。据世界卫生组织(world Health Organization,WHO)估计,接... 疫苗是人类对抗传染性疾病的有力武器,其对人类疾病的预防模式产生了重要影响,从爱德华詹纳使用牛痘脓包作为免疫原预防天花以来,许多疫苗被研制出来以对抗各种传染性疾病^[1]。据世界卫生组织(world Health Organization,WHO)估计,接种疫苗每年可挽救全球200万~300万人生命,若疫苗接种率进一步提升,每年将额外有150万人幸免于难^[2]。 展开更多
关键词 A群脑膜炎 疫苗 接种推广 监管科学 MenAfriVac^■
中国罗汉松属叶角质层微形态结构及其分类意义 预览
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作者 孙同兴 董运秋 侯学良 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期169-180,共12页
利用扫描电镜对罗汉松属8种2变种植物叶角质层内外表面进行了细致观察。发现罗汉松属植物叶角质层结构具有许多相似特征,表皮细胞较为规则,长方形或多边形,边缘波状弯曲;气孔器排列成带状,长轴均与叶脉一致,气孔器具较为明显的气孔塞和... 利用扫描电镜对罗汉松属8种2变种植物叶角质层内外表面进行了细致观察。发现罗汉松属植物叶角质层结构具有许多相似特征,表皮细胞较为规则,长方形或多边形,边缘波状弯曲;气孔器排列成带状,长轴均与叶脉一致,气孔器具较为明显的气孔塞和伏罗林环,气孔器保卫细胞极延伸明显,通常具有2~4个副卫细胞、不具极副卫细胞。但罗汉松属叶角质层结构也具有明显的种间差异,镰叶罗汉松和洛杉矶罗汉松同其它种类差异最大,这两种植物叶两面均具气孔器,角质层内表面垂周壁直,角质层凸缘不明显;贺氏罗汉松最为显著的特征是近轴面和远轴面表皮细胞的垂周壁角质层厚且凸缘均极其发达;小叶罗汉松近轴面表皮细胞排列较为规则,多数为方形,长轴与叶脉垂直,垂周壁之间的角质层突起较为显著,延伸到皮下层;兰屿罗汉松近轴面表皮细胞排列较不规则,多边形,细胞的角端比较钝,没有棱角;大理罗汉松气孔带间隔较小,有时两条气孔带挤在一起,使副卫细胞紧连,近轴面表皮细胞较短,方形或长方形,垂周壁之间的角质层较不发达;海南罗汉松角质层气孔带间隔较宽,气孔器形状为阔椭圆形,近轴面表皮细胞均为细长方形;变种短叶罗汉松和狭叶罗汉松与罗汉松也具有明显差异,短叶罗汉松近轴面表皮细胞排列不规则,垂周壁深波状弯曲,凸缘极为明显,但原种罗汉松近轴面表皮细胞排列较为规则,垂周壁浅波状弯曲,凸缘不明显,而狭叶罗汉松近轴面表皮细胞方形或长方形,比罗汉松的表皮细胞短,垂周壁直或略弯曲,角质层极厚。这些角质层微形态特征差异可以作为罗汉松属内种类分类鉴定的依据。 展开更多
关键词 罗汉松属 角质层微形态 分类意义
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白凤菜总黄酮对肝癌HepG2细胞生长、增殖和凋亡的影响 预览
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作者 林燕燕 许新恒 +3 位作者 黄仲庆 林泽燕 罗秀针 石艳 《厦门大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期48-55,共8页
研究了白凤菜(Gynura formosana Kitam.)总黄酮(TFG)对肝癌HepG2细胞的生长、增殖和凋亡的影响.噻唑兰(MTT)实验结果表明TFG对HepG2细胞体外增殖的抑制作用有浓度和时间依赖效应:处理24h后130和260μg/mLTFG实验组的HepG2细胞凋亡率均... 研究了白凤菜(Gynura formosana Kitam.)总黄酮(TFG)对肝癌HepG2细胞的生长、增殖和凋亡的影响.噻唑兰(MTT)实验结果表明TFG对HepG2细胞体外增殖的抑制作用有浓度和时间依赖效应:处理24h后130和260μg/mLTFG实验组的HepG2细胞凋亡率均显著升高,分别达到(47.00±1.31)%和(76.39±1.39)%(p<0.05);24h的半抑制质量浓度(IC50)为190.80μg/mL.实验组HepG2细胞周期阻滞在S期,细胞迁移率随TFG质量浓度的升高而下降,细胞内活性氧(ROS)水平最终显著下降至对照组的6.9%(p<0.05),细胞中Bax表达量略微上调而Bcl-2表达量明显下调.综上,TFG抑制肝癌HepG2细胞增殖和诱导HepG2细胞凋亡的机制可能与下调细胞ROS水平、重构细胞内还原体系、上调促凋亡蛋白Bax以及下调凋亡抑制蛋白Bcl-2表达相关. 展开更多
关键词 白凤菜 总黄酮 细胞增殖 细胞周期 细胞凋亡
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控制肝脏组织发育、再生重塑与大小的关键蛋白质机器
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作者 陈兰芬 邓贤明 +9 位作者 陈正军 程新 黄晶 姜海 周兆才 丁劲 卫立辛 陈军 赵斌 周大旺 《中国基础科学》 2018年第1期17-21,共5页
肝脏损伤、功能衰竭及肝癌等疾病是我国重大健康问题.它们的发生发展与肝脏再生重塑及大小调控异常密切相关。针对肝脏发育、再生及大小控制机理的基础研究对于解决上述重大肝脏疾病的临床需求具有重要意义。前期研究发现Hippo信号通... 肝脏损伤、功能衰竭及肝癌等疾病是我国重大健康问题.它们的发生发展与肝脏再生重塑及大小调控异常密切相关。针对肝脏发育、再生及大小控制机理的基础研究对于解决上述重大肝脏疾病的临床需求具有重要意义。前期研究发现Hippo信号通路在调控细胞增殖及分化、干细胞命运等方面起着关键作用,而Hippo通路的失调可导致肝脏等器官发育和大小异常,严重影响受损组织再生与重塑.或导致肿瘤迅速发生。本项目拟以肝脏为研究对象。聚焦Hippo相关信号网络如何感知器官大小并适时调控细胞生长、分化与死亡以实现器官发育、再生重塑和器官大小控制这一关键科学问题,整合基础、临床、药学领域的先进研究技术,拟通过基因编辑、内胚层干细胞肝向分化、肝细胞移植和肝脏重建、肝脏损伤修复等模型、临床病理分析、蛋白结构解析和靶向药物设计等方法,深入探讨该通路失控导致肝脏发育异常、再生重塑障碍、癌症发生的致病机理,并提出靶向干预新策略。 展开更多
关键词 肝脏发育 再生重塑 大小调控 蛋白质机器
类泛素蛋白及其中文命名
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作者 魏文毅 孙毅 +42 位作者 曹诚 常智杰 陈策实 陈佺 程金科 冯仁田 高大明 胡荣贵 贾立军 姜天霞 金建平 李汇华 李卫 刘翠华 刘萱 马蕾娜 缪时英 饶枫 商瑜 宋质银 万勇 王恒彬 王平 王占新 吴缅 吴乔 谢旗 谢松波 谢志平 徐平 许执恒 杨波 阳成伟 应美丹 张宏冰 张令强 赵永超 周军 朱军 王琳芳 张宏 王琛 邱小波 《科学通报》 CSCD 北大核心 2018年第25期2564-2569,共6页
泛素家族包括泛素及类泛素蛋白,约20种成员蛋白.近年来,泛素家族领域取得了迅猛发展,并已与生物学及医学研究的各个领域相互交叉.泛素家族介导的蛋白质降解和细胞自噬机制的发现分别于2004和2016年获得诺贝尔奖.但是,类泛素蛋白并没有... 泛素家族包括泛素及类泛素蛋白,约20种成员蛋白.近年来,泛素家族领域取得了迅猛发展,并已与生物学及医学研究的各个领域相互交叉.泛素家族介导的蛋白质降解和细胞自噬机制的发现分别于2004和2016年获得诺贝尔奖.但是,类泛素蛋白并没有统一规范的中文译名. 2018年4月9日在苏州召开的《泛素家族介导的蛋白质降解和细胞自噬》专著的编委会上,部分作者讨论了类泛素蛋白的中文命名问题,并在随后的"泛素家族、自噬与疾病"(Ubiquitinfamily,autophagy anddiseases)苏州会议上提出了类泛素蛋白中文翻译草案,此草案在参加该会议的国内学者及海外华人学者间取得了高度共识.冷泉港亚洲"泛素家族、自噬与疾病"苏州会议是由美国冷泉港实验室主办、两年一度、面向全球的英文会议. 展开更多
关键词 蛋白质降解 中文命名 泛素 冷泉港实验室 白及 诺贝尔奖 中文译名 命名问题
HIV-1 CAP2NC蛋白的表达及体外自组装
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作者 白诗梦 张芝晴 +7 位作者 乔佳明 沈鸿霖 黄芳 高双全 李少勇 李少伟 夏宁邵 顾颖 《生物工程学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期586-593,共8页
构建并表达HIV-1 CAP2NC蛋白,探索其体外自组装条件。通过PCR技术扩增HIV-1(NL4-3毒株)CAP2NC基因片段,并将其连接到原核表达载体pTO-T7,获得重组质粒pTO-T7-CAP2NC,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经疏水层析纯化后获得重组蛋白C... 构建并表达HIV-1 CAP2NC蛋白,探索其体外自组装条件。通过PCR技术扩增HIV-1(NL4-3毒株)CAP2NC基因片段,并将其连接到原核表达载体pTO-T7,获得重组质粒pTO-T7-CAP2NC,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经疏水层析纯化后获得重组蛋白CAP2NC。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白CAP2NC可在大肠杆菌可溶高效表达,经纯化后纯度约为95%。ELISA检测表明重组蛋白CAP2NC可被HIV-1衣壳蛋白特异性单克隆抗体识别,具有较好反应活性。重组蛋白透析后在非原性SDS-PAGE中呈现为多种聚体形式。分子筛排阻层析分析CAP2NC蛋白透析后可进行组装,负染电镜进一步观察显示CAP2NC蛋白在RNA存在条件下,可形成空心管状颗粒,其形态结构与HIV-1病毒衣壳体外自组装形成的类似。上述结果表明HIV-1 CAP2NC蛋白具有体外自组装的性质,为进一步在体外研究非成熟病毒样颗粒结构奠定基础。 展开更多
关键词 HIV-1 CAP2NC蛋白 自组装
B族链球菌疫苗研究现状及展望
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作者 殷晓辰 林雅华 +1 位作者 王鑫 赵勤俭 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第11期1274-1278,1282共6页
B族链球菌(group B streptococcus,GBS)主要危害新生儿、孕妇以及免疫力低下人群,能够引发早产、死产,还能引起脓毒症、菌血症和脑膜炎等多种疾病。使用抗生素是预防GBS的主要手段,但随着抗生素耐药性的逐渐增强,急需发展一种安全、... B族链球菌(group B streptococcus,GBS)主要危害新生儿、孕妇以及免疫力低下人群,能够引发早产、死产,还能引起脓毒症、菌血症和脑膜炎等多种疾病。使用抗生素是预防GBS的主要手段,但随着抗生素耐药性的逐渐增强,急需发展一种安全、有效的GBS疫苗,用于预防GBS感染。目前已有部分GBS候选疫苗进入临床试验阶段,同时也有部分疫苗处于临床前研究阶段。本文就这些具有临床使用潜力的GBS疫苗的研究现状进行综述。 展开更多
关键词 B族链球菌 疫苗 临床试验 临床前研究
双膦酸盐类药物用于肿瘤辅助治疗的临床研究进展 被引量:1
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作者 何斌 蔡雅霜 +2 位作者 张志刚 黄小芬 赵勤俭 《中国新药与临床杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期185-192,共8页
双膦酸盐是用于骨骼疾病及钙代谢性疾病治疗的一类药物,主要用于治疗骨质疏松症、佩吉特病、高钙血症等。同时临床研究显示双膦酸盐还可用于多发性骨髓瘤、乳腺癌、肾癌、前列腺癌等疾病的辅助治疗,改善患者的临床结局,尤其是唑来膦酸... 双膦酸盐是用于骨骼疾病及钙代谢性疾病治疗的一类药物,主要用于治疗骨质疏松症、佩吉特病、高钙血症等。同时临床研究显示双膦酸盐还可用于多发性骨髓瘤、乳腺癌、肾癌、前列腺癌等疾病的辅助治疗,改善患者的临床结局,尤其是唑来膦酸盐的抗肿瘤效果更具优势,被广泛应用于多种恶性肿瘤的临床研究。本文就双膦酸盐在肿瘤辅助治疗中的临床研究进展进行综述。 展开更多
关键词 双膦酸盐 肿瘤 肿瘤辅助疗法 临床试验
呼吸道合胞病毒核蛋白检测抗体的筛选与鉴定
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作者 林雪 张伟 +2 位作者 赵敏 郑子峥 夏宁邵 《中华微生物学和免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期161-168,共8页
目的筛选识别呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)核蛋白(N)的单克隆抗体,并对其性质进行鉴定。方法使用大肠杆菌表达系统原核表达重组N蛋白,蛋白质纯化后免疫BALB/c小鼠。通过脾脏免疫、融合获得杂交瘤细胞,结合... 目的筛选识别呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)核蛋白(N)的单克隆抗体,并对其性质进行鉴定。方法使用大肠杆菌表达系统原核表达重组N蛋白,蛋白质纯化后免疫BALB/c小鼠。通过脾脏免疫、融合获得杂交瘤细胞,结合有限稀释法亚克隆细胞株,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对单克隆抗体株进行筛选,并通过蛋白质免疫印迹法(Western blot)、ELISA和间接免疫荧光技术对最终筛选的单克隆抗体进行性质鉴定,根据正交试验的结果挑选捕获能力和检测效果较好的抗体进行诊断试剂的初步调试。结果成功构建N-pTO-T7原核表达载体,并成功表达、纯化得到高纯度重组N蛋白用于小鼠免疫,最终筛选获得24株N蛋白的单克隆抗体,24株抗体均具有较好的ELISA反应性,5A2等8株抗体有较好的Western blot检测特性,11H8等13株抗体可用于间接免疫荧光检测,并获得能够实现在病毒上检测N蛋白的优选配对12F2/11H8-HRP和12F2/15A8-HRP。结论本研究成功筛选出可用于N蛋白特异性检测的单克隆抗体及抗体配对,为RSV感染机制的研究及诊断试剂的研发提供实验资料。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 N蛋白 单克隆抗体
基因编辑技术 被引量:2
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作者 胡小丹 游敏 罗文新 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期267-277,共11页
基因编辑是指通过核酸酶对靶基因进行定点改造,实现特定DNA的定点敲除、敲入以及突变等,最终下调或上调基因的表达,以使细胞获得新表型的一种新型技术。基因编辑技术已被广泛运用于基因结构与功能的研究和多种细胞的基因工程改造,为疾... 基因编辑是指通过核酸酶对靶基因进行定点改造,实现特定DNA的定点敲除、敲入以及突变等,最终下调或上调基因的表达,以使细胞获得新表型的一种新型技术。基因编辑技术已被广泛运用于基因结构与功能的研究和多种细胞的基因工程改造,为疾病模型的建立、动植物新品种的培育及基因治疗等的研究提供新的手段。基因编辑技术主要包括锌指核酸酶技术(ZFN)、转录激活子样效应因子技术(TALEN)和成簇的规律间隔的短回文重复序列/CRISPR相关蛋白(CRISPR/Cas)系统等。本文将对3种基因编辑技术的原理、运用及其最新进展进行综述,以期为相关技术及其运用的研究提供参考。 展开更多
关键词 基因编辑 锌指核酸酶技术 转录激活子样效应因子技术 成簇规律间隔短回文重复系统
基于立即早期蛋白IE62建立水痘-带状疱疹病毒感染性滴度检测方法 预览
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作者 潘德全 王玮 +5 位作者 付文锟 蔡琳俐 叶江辉 朱桦 程通(指导) 夏宁邵 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第12期1843-1848,共6页
目的:基于水痘-带状疱疹病毒(VZV)立即早期蛋白IE62与酶联免疫斑点检测技术(ELISpot)建立一种新型的VZV感染性滴度的快速检测方法。方法:应用生物信息学方法设计并合成VZV-IE62蛋白的多肽抗原,牛血清白蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠,筛选和... 目的:基于水痘-带状疱疹病毒(VZV)立即早期蛋白IE62与酶联免疫斑点检测技术(ELISpot)建立一种新型的VZV感染性滴度的快速检测方法。方法:应用生物信息学方法设计并合成VZV-IE62蛋白的多肽抗原,牛血清白蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠,筛选和制备抗VZV-IE62单克隆抗体,应用Western blot和免疫荧光法等开展抗体性能评价,继而应用酶联免疫斑点技术(ELISpot)结合生物素-亲和素放大法建立新型的VZV感染性滴度检测方法,并与经典空斑计数法进行比较。结果:获得抗VZV-IE62的单克隆抗体1B7,应用于ELISpot方法可特异识别VZV感染后的细胞,以之为基础建立了新型的VZV感染性滴度检测方法。相比经典空斑计数法,该方法可显著缩短检测时间(从5至7d缩短至32h)检测结果具有较好的一致性。结论:本研究建立了一种新型的基于VZV立即早期蛋白IE62与酶联免疫斑点技术的VZV感染性滴度检测方法(VZV-IE62 ELISpot),具有潜在的转化应用前景,可为VZV的防治研究提供支持。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 感染性滴度检测方法 立即早期蛋白62 单克隆抗体 酶联免疫斑点技术
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单域抗体的研究和应用进展
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作者 康晓圳 曹佳莉 +1 位作者 张保惠 袁权 《生物工程学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期1974-1984,共11页
传统IgG抗体分子一般由轻链和重链组成,轻链包含1个可变区(VL)和1个恒定区(CL),重链包含1个可变区(VH)和3个恒定区(CH1,CH2,CH3)。单域抗体(Singledomainantibody,sdAb),是指缺失抗体轻链而只有重链可变区的一类抗体,因其分子量小,也被... 传统IgG抗体分子一般由轻链和重链组成,轻链包含1个可变区(VL)和1个恒定区(CL),重链包含1个可变区(VH)和3个恒定区(CH1,CH2,CH3)。单域抗体(Singledomainantibody,sdAb),是指缺失抗体轻链而只有重链可变区的一类抗体,因其分子量小,也被称为纳米抗体(Nanobody)。20世纪90年代,单域抗体最早在骆驼科动物中被发现,之后在护士鲨、大星鲨和鳐鱼等软骨鱼纲动物中也发现了类似的抗体。单域抗体虽然结构简单,但仍然可以达到与传统抗体相当甚至更高的与特异抗原结合的亲和力。相比于传统抗体,单域抗体具有分子量小、稳定性强、易于重组表达等优点。近年来在生物学基础研究和医学临床应用方面均备受关注并被广泛应用。文中将从单域抗体的结构特征、理化性质、筛选方法及其在生物医学领域的重要应用进展进行综述。 展开更多
关键词 重链抗体 单域抗体 骆驼 纳米抗体
三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统的建立及评价
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作者 魏双萍 范飞 +9 位作者 陈洁 柳欣林 杨与柔 王致萍 宋硕 李智海 魏旻希 王大宁 李少伟 夏宁邵 《中华预防医学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期1039-1044,共6页
目的建立三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统,并评价其在检测HPV九价疫苗免疫血清免疫原性的应用。方法分别选取红色、绿色和蓝色荧光蛋白的质粒N31-MCHREEY、N31-EGFP和N31-mTagBFP构建HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒,利用双抗... 目的建立三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统,并评价其在检测HPV九价疫苗免疫血清免疫原性的应用。方法分别选取红色、绿色和蓝色荧光蛋白的质粒N31-MCHREEY、N31-EGFP和N31-mTagBFP构建HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒,利用双抗夹心法和病毒半数组织培养感染剂量法检测HPV假病毒浓度和感染滴度;利用单色荧光与三色混合荧光HPV16/33/45假病毒,检测HPV九价疫苗免疫小鼠血清的中和滴度,以验证三色混合荧光HPV假病毒系统的准确性;采用单色荧光和三色混合荧光HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒系统检测HPV九价疫苗免疫食蟹猴血清的中和滴度,判断其是否可应用于HPV九价疫苗免疫血清的免疫原性检测。结果含有绿色、红色和蓝色荧光质粒的HPV16型假病毒的浓度为5~6 μg/ml,HPV6/11/18/31/33/45/52/58的三色混合荧光假病毒浓度为1~3 μg/ml。获得了分别含有EGFP、Mcherry和mTagBFP报告基因的9个型别的HPV假病毒,且满足中和检测需要;9个型别单色荧光HPV假病毒的滴度值均在1×104~1×105之间,即它们具有相似的感染滴度。检测HPV九价疫苗免疫的小鼠血清时,单色荧光与三色混合荧光HPV16/33/45假病毒系统所得中和滴度值差异均无统计学意义(P值均〉0.05);检测HPV九价疫苗免疫的食蟹猴血清时,单色荧光与三色混合荧光A、B和C组HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒所得中和滴度值差异均无统计学意义(P值均〉0.05)。结论成功地建立了三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统;验证其与单色荧光HPV假病毒系统具有一致性;证实其可应用于检测HPV九价疫苗免疫血清的免疫原性检测中。 展开更多
关键词 疫苗 中和试验 免疫血清 人乳头瘤病毒 三色荧光假病毒
抑藻菌株 Bacillus sp. hsn03 分离鉴定及其对铜绿微囊藻的抑制效果与特征
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作者 许艳婷 宋瑞雪 +1 位作者 田聪琦 李祎 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2018年第12期2592-2602,共11页
[背景]蓝藻常形成水华,严重破坏水生环境及威胁水生生物。微生物能够专一性地抑制蓝藻的生长,从而可以被用于蓝藻水华的控制。[目的]分离筛选一株对有害水华藻——铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)7806有高效抑藻能力的菌株,对其进... [背景]蓝藻常形成水华,严重破坏水生环境及威胁水生生物。微生物能够专一性地抑制蓝藻的生长,从而可以被用于蓝藻水华的控制。[目的]分离筛选一株对有害水华藻——铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)7806有高效抑藻能力的菌株,对其进行生理生化和分子鉴定,并研究其抑藻效果与特征。[方法]通过API试剂条确定其生理生化特征,对细菌的16SrRNA基因进行测序并构建系统进化树,通过探究细菌菌体、上清、发酵液的抑藻效果确定该菌的抑藻方式,通过测定不同温度、pH、蛋白酶K、有机溶剂萃取和透析条件下的抑藻效果及傅里叶红外光谱来确定胞外抑藻物质的性质。[结果]菌株hsn03与芽孢杆菌属(Bacillus sp.)的Bacillus sonorensis NBRC101234有最高相似性,达99.59%;通过分泌胞外抑藻物质对铜绿微囊藻生长表现出抑制效果,且最佳抑藻添加量为7.0%(体积比);胞外抑藻物质为一类分子量大于500Da且小于1kD,耐高温,耐酸碱,含有叁键和累积双键,非蛋白、多糖类的小分子物质。[结论]抑藻菌株的挖掘与鉴定对于丰富有害藻华藻的抑藻菌质资源有非常大的促进作用,通过对抑藻方式、效果和特征的研究为进一步将抑藻菌应用于铜绿微囊藻的治理奠定基础。 展开更多
关键词 铜绿微囊藻 芽孢杆菌属 抑藻活性物质 抑藻效果与特征
微生物絮凝剂对小球藻细胞氧化应激研究 预览
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作者 李祎 许艳婷 +3 位作者 宋瑞雪 田聪琦 王海磊 郑天凌 《河南师范大学学报:自然科学版》 北大核心 2018年第4期81-88,共8页
小球藻作为能源藻,可以提供产生物柴油,但是小球藻生物质的获取成为能源藻发展的瓶颈.目前研究藻细胞生物质收集的方法很多,但不同收集方法对能源藻细胞的氧化应激研究却很少.分别研究絮凝功能细菌xn-1所产生物絮凝物质和离心法对能源... 小球藻作为能源藻,可以提供产生物柴油,但是小球藻生物质的获取成为能源藻发展的瓶颈.目前研究藻细胞生物质收集的方法很多,但不同收集方法对能源藻细胞的氧化应激研究却很少.分别研究絮凝功能细菌xn-1所产生物絮凝物质和离心法对能源藻——小球藻生物质在收集过程中对藻细胞的氧化应激,以期确定絮凝微生物对小球藻细胞的生物安全性.采用涂布划线法从藻际分离纯化絮凝功能微生物;通过梯度醇沉法获得絮凝物质;分别用絮凝微生物所分泌絮凝物质和离心法收集藻细胞生物质,并对藻细胞内蛋白含量、总糖含量、丙二醛含量(MDA)、过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽(GSH)含量和抗坏血酸(AsA)含量进行测定;以分光光度计测定其吸光度值.经过测定并经过统计学显著性分析,发现离心作用下收集的藻细胞内的MDA,GSH和AsA含量显著高于利用絮凝物质絮凝得到的藻细胞.离心作用相对于絮凝作用造成藻细胞膜发生更高的脂质过氧化,产生大量的活性氧自由基,诱导非酶抗氧化系统响应.因此,离心法收集藻生物质相对于微生物絮凝对藻细胞的伤害更大,絮凝微生物比离心法更适合于收集能源藻生物质. 展开更多
关键词 小球藻 生物质收集 絮凝微生物 离心法 氧化应激
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XCRK基因在水稻与细菌性条斑病菌互作中的功能解析 预览
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作者 张玉霞 崔玉超 +2 位作者 李燕 周丹 陈亮 《厦门大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第2期201-207,共7页
XCRK(Xoc-associated receptor-like kinase)基因是对水稻细菌性条斑病(bacterial leaf streak,BLS)致病菌侵染应答的差异蛋白质组学研究中发现的一个拟抗病基因.生物信息学分析显示该基因位于水稻的1号染色体上,编码一个含有322个氨基... XCRK(Xoc-associated receptor-like kinase)基因是对水稻细菌性条斑病(bacterial leaf streak,BLS)致病菌侵染应答的差异蛋白质组学研究中发现的一个拟抗病基因.生物信息学分析显示该基因位于水稻的1号染色体上,编码一个含有322个氨基酸的蛋白激酶.组织表达分析显示XCRK基因在根、茎、叶、花序等组织中均有表达,且其表达受高盐、H 2O 2和脱落酸(ABA)的诱导.为了探究XCRK基因在水稻BLS中的作用,通过PCR扩增XCRK基因编码区,构建超量表达载体,并转化水稻愈伤组织获得了超量表达XCRK基因的转基因水稻植株;同时构建了RNA干扰(RNAi)表达载体,并获得了抑制表达XCRK基因的转基因水稻植株.对T1代转基因植株进行了BLS抗性分析,结果显示:超量表达XCRK基因明显增强了转基因水稻对BLS致病菌的抗性;相反地,抑制表达XCRK基因的转基因水稻对BLS致病菌的敏感性则略有增强.综上结果表明XCRK基因正调控水稻对BLS的抗性,这为进一步研究该基因的作用机制提供了理论依据. 展开更多
关键词 细菌性条斑病 超量表达载体 RNAi表达载体 转基因水稻
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大黄鱼肝脏免疫保护蛋白的鉴定 预览
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作者 吴志鹏 王三英 章跃陵 《海洋科学》 CSCD 北大核心 2018年第3期23-30,共8页
本研究以大黄鱼(Larimichthys crocea)肝脏为研究对象,采用比较蛋白质组学技术分析大黄鱼免疫保护后蛋白表达水平的变化。结果发现,对照组和免疫保护组中共有20个表达水平差异显著的蛋白点,经MALDI-TOF-MS分析,获得18个差异蛋白点肽质... 本研究以大黄鱼(Larimichthys crocea)肝脏为研究对象,采用比较蛋白质组学技术分析大黄鱼免疫保护后蛋白表达水平的变化。结果发现,对照组和免疫保护组中共有20个表达水平差异显著的蛋白点,经MALDI-TOF-MS分析,获得18个差异蛋白点肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprint,PMF),通过数据库查询,与免疫型受体、新型抗原受体等蛋白具有高度同源性。在此基础之上,进一步选取4个蛋白差异点(1、10、14和18号)进行Westen blot验证。结果表明,该4个蛋白差异点可以与所制备的抗体发生特异性的结合,且变化趋势与蛋白质组学分析结果一致。由此推测,免疫型受体等18个蛋白应该与大黄鱼免疫保护密切相关,所获研究结果为揭示大黄鱼免疫保护机理奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 大黄鱼(Larimichthys crocea) 肝脏 比较蛋白质组学 免疫保护 免疫型受体
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