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线粒体自噬与癌症关系的研究进展 预览
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作者 李旭卉 吴习习 +2 位作者 张凯 罗海霞 李敏 《动物医学进展》 北大核心 2017年第9期109-114,共6页
线粒体自噬是选择性自噬的一种,线粒体通过自噬途径被选择性清除。线粒体自噬对于细胞内环境稳定来说十分关键,细胞利用线粒体自噬机制消除功能障碍的线粒体或减少线粒体数量等来适应应激,维持胞内内环境的稳定。因此,对于线粒体自噬的... 线粒体自噬是选择性自噬的一种,线粒体通过自噬途径被选择性清除。线粒体自噬对于细胞内环境稳定来说十分关键,细胞利用线粒体自噬机制消除功能障碍的线粒体或减少线粒体数量等来适应应激,维持胞内内环境的稳定。因此,对于线粒体自噬的分子机制以及生理作用的研究具有重要的生物学意义。细胞可通过多种分子机制介导线粒体自噬,如PINK1/Parkin、Nix和FUNDC1途径。线粒体自噬调控机制的失调或障碍与人类多种疾病的发病密切相关,有研究发现在多种癌症中存在着不同水平的线粒体自噬,包括直肠癌、肺癌、乳腺癌等,从而也反映了线粒体自噬与癌症的密切关系。论文介绍了线粒体自噬作用和过程的最新研究进展,并着重总结自噬与癌症的关系。 展开更多
关键词 线粒体自噬 PINK1 癌症
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透明颤菌血红蛋白与耐低氧抗生素生产菌株构建
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作者 赵亚兰 徐春燕 +1 位作者 马悦 苏建宇 《生命科学研究》 CAS CSCD 2015年第4期347-352,共6页
透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)是由透明颤菌属细菌产生的氧结合蛋白。通过引入透明颤菌血红蛋白基因(vgb)从降低需氧角度定向改造抗生素生产菌是近年来研究的热点。vgb在宿主菌中的异源表达能有效提高宿主菌在低... 透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)是由透明颤菌属细菌产生的氧结合蛋白。通过引入透明颤菌血红蛋白基因(vgb)从降低需氧角度定向改造抗生素生产菌是近年来研究的热点。vgb在宿主菌中的异源表达能有效提高宿主菌在低氧环境下的代谢效率,促进代谢产物积累,基于这一特性,采用基因工程育种策略构建具有低氧耐受性的生产菌种,将有效降低抗生素生产成本。简述了近年来VHb的研究进展,重点总结了耐低氧抗生素生产菌株构建的研究及其应用现状,并对其在抗生素工业生产中的应用前景进行展望。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 耐低氧菌株 菌株构建 抗生素 微生物发酵
固氮斯氏假单胞菌固氮调节基因ntrB的功能研究^① 预览
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作者 高淼^② 陈明^③ +7 位作者 何升 窦岳坦 侯胜强 平淑珍 张维 陆伟 王玉炯^③ 林敏 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期 211-215,共5页
利用三亲接合的方法将含有ntrB基因部分序列的自杀载体导入固氮斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501中,获得了mrB基因的非极性突变株(AdnB)。RT-PCR实验证明,AdnB菌株中与ntrB连锁的下游基因ntrC能正常转录;ntrB基因的非极... 利用三亲接合的方法将含有ntrB基因部分序列的自杀载体导入固氮斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501中,获得了mrB基因的非极性突变株(AdnB)。RT-PCR实验证明,AdnB菌株中与ntrB连锁的下游基因ntrC能正常转录;ntrB基因的非极性突变导致细胞完全丧失固氯能力,但其突变株能在含NH4^+的基本培养基K中正常生长;在以硝酸盐为唯一氯源时,AdnB比野生型A1501的细胞生长延迟约14~18h,认为ntrB基因与硝酸盐的氮代谢有关。功能互补实验结果表明,AdnB的功能互补菌株能完全恢复细胞的固氮作用和对硝酸盐的利用。 展开更多
关键词 斯氏假单胞菌A1501 ntrB非极性突变株 功能互补
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受体相互作用蛋白1(RIP1)对BCG诱导小鼠巨噬细胞凋亡的调控作用 预览
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作者 方舒 张嘉美 +4 位作者 杨易 韩璐 马臣杰 吴晓玲 邓光存 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期645-653,共9页
旨在通过构建受体相互作用蛋白1(RIP1)腺病毒干扰载体,研究其对BCG诱导的RAW264.7细胞凋亡相关指标的影响,以探讨其在BCG诱导RAW264.7凋亡过程中的调控作用。笔者构建RIP1腺病毒干扰载体,并转染感染BCG的小鼠RAW264.7细胞系,利用流式细... 旨在通过构建受体相互作用蛋白1(RIP1)腺病毒干扰载体,研究其对BCG诱导的RAW264.7细胞凋亡相关指标的影响,以探讨其在BCG诱导RAW264.7凋亡过程中的调控作用。笔者构建RIP1腺病毒干扰载体,并转染感染BCG的小鼠RAW264.7细胞系,利用流式细胞仪检测各处理细胞凋亡率、细胞线粒体膜电位、细胞活性氧水平及细胞周期等指标,并用Westernblot检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果显示:BCG感染显著上调了RIP1的蛋白表达水平并提高了小鼠巨噬细胞RAW264.7的凋亡率,当RIP1被干扰后,BCG感染后的RAW264.7细胞凋亡率和活性氧水平显著降低,而促凋亡蛋白Bax表达量显著下调,线粒体膜电位和抑凋亡蛋白表达量上调。同时,BCG感染后细胞周期滞留于G1期。BCG感染可有效上调RIP1表达量并诱导RAW264.7细胞凋亡。RIP1通过下调BCG感染后RAW264.7细胞的线粒体膜电位,上调活性氧含量并提高凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值,使细胞周期阻滞于G1期从而参与诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 RIP1 巨噬细胞RAW264.7 BCG 细胞凋亡
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过表达SOX2对BCG诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞中TLR4/TBK-1/IRF3信号炎性反应的影响
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作者 袁超 刘蕾 +5 位作者 牛小芸 黑志平 周彦兵 刘晓明 徐金瑞 杨易 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期581-586,共6页
目的探讨SOX2对肺泡Ⅱ型上皮细胞感染结核分枝杆菌后炎性反应的调控作用。方法利用过表达SOX2慢病毒感染肺泡上皮A549细胞系,嘌呤霉素筛选建立稳定过表达SOX2的A549细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测过表达SOX2细胞系的功能,Wester... 目的探讨SOX2对肺泡Ⅱ型上皮细胞感染结核分枝杆菌后炎性反应的调控作用。方法利用过表达SOX2慢病毒感染肺泡上皮A549细胞系,嘌呤霉素筛选建立稳定过表达SOX2的A549细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测过表达SOX2细胞系的功能,Western blot和ELISA方法检测SOX2在肺泡Ⅱ型上皮细胞感染结核分枝杆菌后炎性相关蛋白及炎性因子的表达。结果成功构建过表达SOX2稳转细胞系,细胞中SOX2基因和蛋白均高表达(P<0.01)。用Western blot检测TLR4信号通路相关蛋白表达情况,过表达SOX2组与对照组(NC)相比较,TLR4、TRAF3、TBK-1和IRF-3蛋白表达均上调且差异极显著(P<0.01)。BCG刺激下,TLR4/TBK-1/IRF3相关蛋白均高表达,过表达SOX2减弱了BCG诱导的TLR4/TBK-1/IRF3相关蛋白的高表达,炎症因子IL-6和TNF-α亦表现出相同趋势。结论过表达SOX2能够减弱BCG诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞炎症反应。 展开更多
关键词 过表达SOX2 卡介苗 TLR4/TBK-1/IRF3 炎性反应
3种氟喹诺酮类药物联合苦豆子碱对牛源致病性粪肠球菌耐药突变选择窗的影响
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作者 罗惠霞 杨天梅 +1 位作者 冯峰 周学章 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期497-500,共4页
目的研究苦豆子碱与3种氟喹诺酮类药物(环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星)联用对粪肠球菌耐药突变选择窗(MSW)的影响。方法采用二倍稀释法测定环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星对粪肠球菌标准株ATCCA29212、牛源分离株的最小抑菌浓度(MIC... 目的研究苦豆子碱与3种氟喹诺酮类药物(环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星)联用对粪肠球菌耐药突变选择窗(MSW)的影响。方法采用二倍稀释法测定环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星对粪肠球菌标准株ATCCA29212、牛源分离株的最小抑菌浓度(MIC);采用平板诱导法,用环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星筛选粪肠球菌标准株及牛源分离株的第一步耐药突变体,用环丙沙星筛选得到第二步耐药突变体;采用二倍稀释法检测环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星对耐药突变体的MIC、最小防突变浓度(MPC),计算突变选择指数(SI)并确定MSW,观察苦豆子碱和3种氟喹诺酮类药物联用对粪肠球菌MSW的影响。结果3种氟喹诺酮类药物对2株分离的粪肠球菌的MIC均〉 1. 6μg·mL(-1),MPC均〉 20μg·mL(-1),SI为3. 4~13. 7;与原菌株比较,经不同氟喹诺酮类药物筛选的粪肠球菌的MIC升高了3~7倍,MPC升高了2~7倍;苦豆子碱和3种氟喹诺酮类药物联用(4MIC+2MIC)可使抗菌药物对粪肠球菌的MSW缩小2~4倍。结论连续使用同一类型的抗菌药物能快速、加宽粪肠球菌的MSW,从而诱导耐药菌的产生;苦豆子碱和3种氟喹诺酮类药物联用有利于杀灭致病性粪肠球菌,防止耐药菌出现。 展开更多
关键词 粪肠球菌 氟喹诺酮类药物 环丙沙星 恩诺沙星 氧氟沙星 苦豆子碱 耐药突变选择窗 突变选择指数 耐药突变体 细菌耐药性 防突变浓度
磷酸甘油激酶GD介导Caspase信号通路调控宿主细胞炎性反应的研究
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作者 林雪 薛頔 王玉炯 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期963-968,共6页
目的研究磷酸甘油激酶(Glycerol-3-Phosphate Kinases D,GD)代谢产物MROS/EROS堆积对呼吸道Caspase调控的影响,探索Glps介导MROS和宿主细胞线粒体内源EROS诱导宿主细胞炎性反应的作用机制。方法构建GD蛋白原核表达载体pET-32a-GD,并... 目的研究磷酸甘油激酶(Glycerol-3-Phosphate Kinases D,GD)代谢产物MROS/EROS堆积对呼吸道Caspase调控的影响,探索Glps介导MROS和宿主细胞线粒体内源EROS诱导宿主细胞炎性反应的作用机制。方法构建GD蛋白原核表达载体pET-32a-GD,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物后通过GE AKTA Pure蛋白质层析纯化系统纯化重组蛋白;通过细胞毒性试验和细胞线粒体Caspase信号通路相关试验,研究GD代谢产物MROS在上皮细胞中堆积后刺激细胞发生的一系列细胞炎性反应。结果实验成功构建GD蛋白表达载体,经过SDS-PAGE和Western blot验证后确定GD蛋白正确表达,进一步大量表达GD蛋白用于体外实验;在GD蛋白感染支气管上皮细胞后,实验表明,随着感染时间的延长,GD蛋白能够显著抑制支气管上皮细胞的增殖能力,感染24h时,细胞增殖能力较对照组有显著下降(P〈0.05),同时,转录水平和蛋白水平检测证明GD蛋白感染支气管上皮细胞24h后能刺激细胞促炎因子过量表达,TNF-α,ILs,NF-κB和IRF-3的表达与对照组相比显著上调(P〈0.05)进而激活Caspase信号通路中Caspase3的活化,导致胞内ROS的大量积累,引起细胞组织结构损伤。结论 GD蛋白通过抑制支气管上皮细胞增殖能力,刺激胞内促炎因子的过量表达,介导胞内ROS的过表达和调控Caspase信号通路导致呼吸系统损伤。这将为进一步研究绵羊支原体肺炎致病机制及宿主免疫应答调控提供理论基础。 展开更多
关键词 GD 绵羊肺炎支原体 ROS Caspaes信号通路
过量表达马铃薯ataxin-3可增加泛素积累并反向调控本氏烟生长
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作者 殷倩 乔丽媛 +3 位作者 王佩云 伍涵宇 拓宁 姚新灵 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第10期4493-4500,共8页
动物细胞中ataxin-3与泛素特异结合,通过去泛素化阻止蛋白质水解;基因组注释预测ataxin-3同源物存在于植物中,但到目前为止尚未见植物ataxin-3基因功能的研究报道;本研究克隆了马铃薯(Solanum tuberosum) ataxin-3编码基因StAX c DNA... 动物细胞中ataxin-3与泛素特异结合,通过去泛素化阻止蛋白质水解;基因组注释预测ataxin-3同源物存在于植物中,但到目前为止尚未见植物ataxin-3基因功能的研究报道;本研究克隆了马铃薯(Solanum tuberosum) ataxin-3编码基因StAX c DNA,转化StAX于本氏烟(Nicotiana benthamiana)基因组,筛选获得StAX过量表达株系stax-9;测定结果显示,stax-9叶片ataxin-3、UBI 3和CDC48 mRNA积累显著增加,stax-9叶片ataxin-3、寡聚泛素和总蛋白积累分别比WT株系增加了138%、81%和38%,而赤霉素含量仅是WT的1/6;研究结果表明,ataxin-3本氏烟体内过量表达,显著增强了泛素转录和翻译,增加了总蛋白积累,减少了赤霉素积累,导致半矮化表型;结论认为植物ataxin-3通过正向调控泛素和蛋白积累,反向调控生长;本研究为植物ataxin-3功能的进一步理解提供依据。 展开更多
关键词 桑花叶萎缩类病毒 锤头型核酶 发夹型核酶 聚类分析
酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶1对BCG诱导巨噬细胞自噬的调控作用 被引量:1
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作者 周彦兵 杨易 +3 位作者 吕翠萍 张海雯 徐金瑞 王玉炯 《免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期575-580,共6页
目的 探讨酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶1(Acyl-CoA:cholesterol acyltransferase 1,ACAT1)对卡介苗(BCG)感染巨噬细胞后胞内胆固醇水平及细胞自噬的调控作用。方法 BCG感染RAW264.7巨噬细胞不同时间后,采用qRT-PCR法检测ATAC1基因m... 目的 探讨酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶1(Acyl-CoA:cholesterol acyltransferase 1,ACAT1)对卡介苗(BCG)感染巨噬细胞后胞内胆固醇水平及细胞自噬的调控作用。方法 BCG感染RAW264.7巨噬细胞不同时间后,采用qRT-PCR法检测ATAC1基因mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法检测ATAC1及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1的表达水平,胆固醇定量检测试剂盒检测胞内胆固醇及胆固醇酯的变化,油红O染色法检测细胞内脂滴的含量,以感染0 h的细胞为对照组。结果 在BCG感染巨噬细胞后,与对照组相比,ACAT1基因mRNA的表达在感染后2、6、12 h逐渐下降,12 h达到最低,差异极显著(P〈0.01);ACAT1蛋白的表达量随感染时间先降后升,在感染后12 h表达量最低,感染2 h、24 h与对照组相比差异显著(P〈0.05),感染6 h、12 h与对照组相比差异极显著(P〈0.01);胞内游离胆固醇含量在感染后2、6、12 h逐渐升高,与对照组相比差异极显著(P〈0.01);胆固醇酯含量逐渐下降,至12 h最低,6、12、24 h与对照组相比差异极显著(P〈0.01);胞内脂滴的数量随感染时间先降后升,且感染后12 h胞内脂滴数量最少。结论 结核分枝杆菌感染巨噬细胞后,ACAT1表达下调,使胞内胆固醇酯合成量下降,胆固醇积累,激活细胞自噬。 展开更多
关键词 ACAT1 BCG 细胞自噬 胆固醇
Wnt5a对人肺腺癌A549细胞凋亡的调控作用及其机制 预览
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作者 杨易 包康达 +4 位作者 周彦兵 袁超 李勇 刘晓明 徐金瑞 《吉林大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第2期229-234,共6页
目的:探讨Wnt5a对人肺腺癌A549细胞株凋亡的调控作用,并阐明其机制。方法:选择人肺腺癌A549细胞,采用Wnt5a处理的A549细胞作为处理组,以C培养液处理的A549细胞作为对照组,采用TUNEL染色法检测Wnt5a诱导的A549细胞凋亡小体,Annexi... 目的:探讨Wnt5a对人肺腺癌A549细胞株凋亡的调控作用,并阐明其机制。方法:选择人肺腺癌A549细胞,采用Wnt5a处理的A549细胞作为处理组,以C培养液处理的A549细胞作为对照组,采用TUNEL染色法检测Wnt5a诱导的A549细胞凋亡小体,AnnexinⅤ-FITC/PI双标法检测2组A549细胞凋亡率,采用DCFH-DA荧光探针法检测2组A549细胞活性氧(ROS)水平,采用JC-1染色法检测2组A549细胞线粒体跨膜电位水平,蛋白免疫印迹法检测2组A549细胞中凋亡相关蛋白表达水平。结果:与对照组比较,处理组A549细胞在处理12、24和48 h后细胞凋亡率明显升高(P<0.01),ROS水平升高(P<0.05),线粒体膜电位水平下降(P<0.05),促凋亡蛋白BAX的表达量上调,AIF蛋白表达量下调。结论:Wnt5a对人肺腺癌细胞凋亡具有调控作用,其通过线粒体凋亡途径发挥诱导细胞凋亡作用。 展开更多
关键词 WNT5A 人肺腺癌A549细胞 细胞凋亡 活性氧 线粒体膜
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腹泻羔羊与健康羔羊肠道微生物群落分析 预览 被引量:2
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作者 罗海霞 杨易 谢秀兰 《动物医学进展》 北大核心 2017年第12期86-90,共5页
羔羊腹泻与其肠道菌群的种类及比例密切关系。为了探索肠道菌群结构在腹泻病程的变化,采集同样饲养条件下20份1月龄-3月龄滩寒杂交羊粪便样本,通过Miseq测序技术并结合多变量统计学方法检测细菌16SrRNA基因V4-V5区的多样性,通过数据分析... 羔羊腹泻与其肠道菌群的种类及比例密切关系。为了探索肠道菌群结构在腹泻病程的变化,采集同样饲养条件下20份1月龄-3月龄滩寒杂交羊粪便样本,通过Miseq测序技术并结合多变量统计学方法检测细菌16SrRNA基因V4-V5区的多样性,通过数据分析,比较了腹泻羊粪便与正常羊粪便中微生物的类别及数量。从门的水平分析,腹泻羔羊肠道中变形菌门显著高于健康羔羊。发现拟杆菌门、蓝细菌门、黏胶球形菌门和无壁细菌门在腹泻羔羊中的含量显著低于健康羔羊。从科水平分析2个样本优势菌具有显著差异,其中腹泻羔羊肠道放线菌乳杆菌科显著高于健康羔羊,而瘤胃球菌科显著低于健康羔羊。非优势菌也存在显著差异,如拟杆菌科、柔膜菌科和理研菌科。比较了滩寒杂交羊健康羔羊及腹泻羔羊肠道微生物的差异,发现其微生物丰度及优势微生物都具有显著的差异,因此,腹泻羔羊中的肠道微生物差异可能是羔羊腹泻的重要因素之一,研究结果为羔羊腹泻的研究及治疗提供了理论依据。 展开更多
关键词 滩寒杂交羊 羔羊 肠道微生物 腹泻
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胶质射脉革菌漆酶的复合诱导及其脱色性能 被引量:1
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作者 徐春燕 高迎荣 +1 位作者 王晓瑜 韩玉亭 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期196-200,195共6页
[目的]研究复合诱导对胶质射脉革菌BBEL0901产漆酶的影响及其粗酶液对染料的脱色性能。[方法]采用分光光度法测定漆酶活性及其染料脱色性能。[结果]甘草渣和Cu2+对BBEL0901产漆酶均有促进作用,于发酵的第6 d向含甘草渣的低氮培养基中添... [目的]研究复合诱导对胶质射脉革菌BBEL0901产漆酶的影响及其粗酶液对染料的脱色性能。[方法]采用分光光度法测定漆酶活性及其染料脱色性能。[结果]甘草渣和Cu2+对BBEL0901产漆酶均有促进作用,于发酵的第6 d向含甘草渣的低氮培养基中添加Cu2+(0.5 mmol/L)对漆酶的协同诱导作用最显著,活性达325.1 U/m L,分别为Cu2+单独诱导、甘草渣单独诱导和未诱导的4倍、14.4倍和19.8倍。粗酶液对不同结构的染料均有较强的脱色能力,对三苯甲烷类染料的脱色效果最好,脱色率达80%以上。[结论]甘草渣与Cu2+对BBEL0901漆酶具有协同诱导作用,酶活最高可达325.1 U/m L,产业化潜力大,所得粗酶液在染料脱色方面具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 胶质射脉革菌 漆酶 CU2+ 甘草渣 染料脱色
一株弗氏链霉菌噬菌体的分离及其分子特性研究 预览 被引量:1
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作者 白宇 徐春燕 苏建宇 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期168-172,共5页
鉴定一株从泰乐菌素异常发酵液中分离出的烈性噬菌体SF1并研究其分子特性。采用双层平板法分离纯化弗氏链霉菌的噬菌体SF1,通过负染法电镜观察噬菌体SF1的大小和形态;测定噬菌体SF1对氯仿和异丙醇的敏感性分析其包膜结构;通过SDS-PAGE... 鉴定一株从泰乐菌素异常发酵液中分离出的烈性噬菌体SF1并研究其分子特性。采用双层平板法分离纯化弗氏链霉菌的噬菌体SF1,通过负染法电镜观察噬菌体SF1的大小和形态;测定噬菌体SF1对氯仿和异丙醇的敏感性分析其包膜结构;通过SDS-PAGE分析噬菌体的结构蛋白;提取噬菌体基因组DNA进行限制性片段长度多样性分析。噬菌体SF1的噬菌斑直径约11-15 mm,边缘整齐透明,为烈性噬菌体;SF1为长尾型,头部为多面体,直径约24-30 nm,尾长约52-64 nm,尾宽约为3-5 nm;对氯仿和异丙醇不敏感,无包膜;基因组为双链DNA,大小约为35 kb;至少含有14种相对分子量为14.8-59.5 kD的结构蛋白。 展开更多
关键词 弗氏链霉菌 噬菌体 泰乐菌素
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产肠毒素大肠杆菌亚单位疫苗3STa~M(G)-K99和3STa~M(S)-K99的纯化及其免疫学性质的研究(英文) 被引量:2
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作者 郭乐 刘昆梅 +6 位作者 李敏 赵辉 徐广贤 段相国 韩学波 杨华 王玉炯 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期18-24,共7页
产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是一种导致新生犊牛和仔猪腹泻的主要病原体之一。ETEC的毒力因子主要有黏附素(CFs)、不耐热性肠毒素(LT)和耐热性肠毒素(ST)三种。在前期研究中,利用PCR和酶切连接技术成功构建了两种ETEC亚单位疫苗3STaM(G)-K9... 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是一种导致新生犊牛和仔猪腹泻的主要病原体之一。ETEC的毒力因子主要有黏附素(CFs)、不耐热性肠毒素(LT)和耐热性肠毒素(ST)三种。在前期研究中,利用PCR和酶切连接技术成功构建了两种ETEC亚单位疫苗3STaM(G)-K99和3STaM(S)-K99,且在大肠杆菌中获得高效表达。本研究利用阴离子交换层析纯化融合蛋白3STaM(G)-K99 and3STaM(S)-K99,辅以弗氏佐剂免疫新西兰大白兔,通过Elisa分析其免疫学性质,并利用肠毒素中和实验在昆明系乳鼠中评价其激发抗STa中和抗体的能力。实验结果表明:亚单位疫苗3STaM(G)-K99 and 3STaM(S)-K99能够激发相对较高水平、可针对天然STa、ETEC和融合蛋白STa-K99的特异性抗体。其次,亚单位疫苗中STa突变体(STaM)组分的肠毒素活性显著降低,且其所激发的特异性抗体属于中和抗体,能有效抑制天然STa的肠毒素活性。亚单位疫苗3STaM(G)-K99 and3STaM(S)-K99为研制预防ETEC感染性腹泻的多价基因工程疫苗提供了基本素材和理论指导。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 黏附素 不耐热性肠毒素 耐热性肠毒素 中和抗体
猪肺炎支原体的免疫原蛋白及疫苗的研究进展 预览 被引量:2
15
作者 崔娟娟 郝秀静 +2 位作者 张斯民 侯玉婷 李敏 《家畜生态学报》 北大核心 2013年第3期82-87,共6页
猪肺炎支原体是引起猪支原体肺炎的主要病原,严重危害着养猪业的发展。本文综合国内外猪肺炎支原体主要免疫原及疫苗的研究进展,从而为猪肺炎支原体致病机理的进一步研究及该病的防治提供新思路。
关键词 猪肺炎支原体 免疫原蛋白 疫苗
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宁夏地区162株大肠杆菌临床分离株对四环素类药物的耐药性分析 预览 被引量:3
16
作者 张立平 张忠 +2 位作者 曾瑾 包少文 邓光存 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第23期3580-3583,共4页
目的 分析宁夏地区大肠杆菌临床分离株对四环素类药物的耐药性,为指导临床合理用药提供理论依据.方法 采用PCR技术和药敏试验对宁夏地区临床分离的162株大肠杆菌进行四环素类药物耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE和tetG的分子检测... 目的 分析宁夏地区大肠杆菌临床分离株对四环素类药物的耐药性,为指导临床合理用药提供理论依据.方法 采用PCR技术和药敏试验对宁夏地区临床分离的162株大肠杆菌进行四环素类药物耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE和tetG的分子检测和耐药性研究.结果 基因检测结果表明,在162株大肠杆菌临床分离株中,110株检测出了耐药基因,阳性率为67.9%.其中tetA基因的阳性率为40.1%,tetB基因的阳性率为29.6%.药敏试验结果表明,120株对四环素类药物耐药,耐药率为74.1%,耐药菌株中有15株未检测到tetA和tetB耐药基因.药敏试验结果与基因检测结果的符合率为87.5%;对四环素类药物耐药的87.5%大肠杆菌均携带tetA和tetB基因,其中7.5%的耐药菌株携带2种耐药基因.结论 宁夏地区大肠杆菌临床分离株对四环素类药物具有较高的耐药性,应予以足够重视. 展开更多
关键词 大肠杆菌 四环素类药物 耐药性 耐药基因
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泰乐菌素高产菌株选育研究进展 预览 被引量:3
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作者 黄蔚 徐春燕 +2 位作者 牛春 张萍 苏建宇 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期34-39,共6页
泰乐菌素是一类十六元大环内酯类禽畜专用抗生素,因其抗茵谱广及对动物生长的促进作用而被国内外养殖业广泛使用。泰乐菌素高产菌种选育是泰乐菌素发酵技术研究的重点。物理诱变、化学诱变等传统育种方法虽然发展成熟、操作简单,但诱... 泰乐菌素是一类十六元大环内酯类禽畜专用抗生素,因其抗茵谱广及对动物生长的促进作用而被国内外养殖业广泛使用。泰乐菌素高产菌种选育是泰乐菌素发酵技术研究的重点。物理诱变、化学诱变等传统育种方法虽然发展成熟、操作简单,但诱变效率低下,且后续筛选过程繁琐。随着遗传学、分子生物学等学科的发展,利用分子育种技术定向改造泰乐菌素产生菌的生产能力成为高产菌种选育的一种最有效手段。以分子育种为重点,结合各种菌种选育方法,对近年来秦乐菌素高产菌株选育的进展情况进行综述。 展开更多
关键词 泰乐菌素 生物合成 链霉菌 抗生素 育种
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牛结核分枝杆菌溶血磷脂酶真核表达载体的构建及在Hela细胞中的表达
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作者 贾浩 徐广贤 +2 位作者 周萍 张艳 王玉炯 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期215-218,共4页
为了研究牛结核分枝杆菌溶血磷脂酶基因(Lip)的生物学特性及其功能,试验构建了Lip-pEGFP融合基因的真核表达载体,利用脂质体(lipofectamine2000)将其转染到Hela细胞中,用荧光显微镜检测GFP在细胞中的表达情况。结果显示,重组Lip... 为了研究牛结核分枝杆菌溶血磷脂酶基因(Lip)的生物学特性及其功能,试验构建了Lip-pEGFP融合基因的真核表达载体,利用脂质体(lipofectamine2000)将其转染到Hela细胞中,用荧光显微镜检测GFP在细胞中的表达情况。结果显示,重组Lip—pEGFP载体在Hela细胞中获得了高效表达,且能够稳定传代,为进一步研究Lip的生物学功能及其在牛结核分枝杆菌中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 溶血磷脂酶 HELA细胞
大肠杆菌耐热性肠毒素STI三重串联突变体与黏附素K99融合基因的表达研究
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作者 郭乐 李敏 王玉炯 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期26-32,共7页
产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是一种导致仔畜和婴儿腹泻的主要病原之一,它的毒力因子主要有两类:黏附素(CFAs)和耐热性肠毒素(ST)或不耐热性肠毒素(LT)。通过PCR技术及双酶切连接技术,成功构建了含有3个STI突变体和1个黏附素K99基... 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是一种导致仔畜和婴儿腹泻的主要病原之一,它的毒力因子主要有两类:黏附素(CFAs)和耐热性肠毒素(ST)或不耐热性肠毒素(LT)。通过PCR技术及双酶切连接技术,成功构建了含有3个STI突变体和1个黏附素K99基因的重组表达质粒pE3S(S)LK和pE3S(G)LK。重组菌株BL21(DE3)(pE3S(S)LK)和BL21(DE3)(pE3S(G)LK)的表达产物经SDS-PAGE和免疫印迹分析,表明以上两种重组菌株均能高效表达3STI(S)-K99和3STI(G)-K99融合蛋白,且融合蛋白能够被产肠毒素性大肠杆菌强毒株C83922抗血清特异性识别。其次,利用乳鼠灌胃实验检测重组蛋白的生物学毒性,结果均为阴性(G/C值≤0.083),这表明该菌株已无STI生物学毒性。这些为研发预防大肠杆菌性腹泻的新型高效多价基因工程疫苗提供了基本素材和理论指导。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 黏附素 耐热性肠毒素
奶牛结核分枝杆菌的分离与鉴定 预览
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作者 韩坤 谢琴 +5 位作者 王玉炯 李敏 王东 徐广贤 周栋 郭邦成 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第8期 82-83,共2页
牛结核病(bovine tuberculosis)是由牛分枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病。该病能通过奶制品传染给人和其他动物,危害严重。作者通过借鉴分离培养人临床样品的方法,摸索出从奶牛鼻拭子临床样品分离、培养结核分枝杆菌... 牛结核病(bovine tuberculosis)是由牛分枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病。该病能通过奶制品传染给人和其他动物,危害严重。作者通过借鉴分离培养人临床样品的方法,摸索出从奶牛鼻拭子临床样品分离、培养结核分枝杆菌的方法,现报道如下。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 分离培养 奶制品 鉴定 临床样品 牛分枝杆菌 牛结核病 人畜共患
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