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Cytomics FC500与ImageStream^X MarkⅡ检测大鼠脾脏T、B细胞亚群TDO_2表达的比较 认领
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作者 张冰洁 李丝雨 +2 位作者 赵英杰 常艳 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第9期1455-1459,共5页
用常规方法制备大鼠脾脏细胞悬液,分别用Cytomics FC500流式细胞仪(FC500)和ImageStream^X MarkⅡ成像流式细胞仪(MarkⅡ)检测大鼠脾脏辅助性T细胞(CD3^+CD4^+)、细胞毒性T细胞(CD3^+CD8^+)、B细胞(CD45R^+)色氨酸2,3双加氧酶(TDO2)的... 用常规方法制备大鼠脾脏细胞悬液,分别用Cytomics FC500流式细胞仪(FC500)和ImageStream^X MarkⅡ成像流式细胞仪(MarkⅡ)检测大鼠脾脏辅助性T细胞(CD3^+CD4^+)、细胞毒性T细胞(CD3^+CD8^+)、B细胞(CD45R^+)色氨酸2,3双加氧酶(TDO2)的表达水平,并观察2种检测技术检测结果的相关性和一致性。结果显示,2种流式细胞仪测得的CD3^+CD4^+T细胞、CD3^+CD8^+T细胞和CD45R^+B细胞表达TDO2的相关性较好(R^2均>0.8)。Bland-Altman法分析2种检测技术测得CD3^+CD4^+细胞、CD3^+CD8^+细胞和CD45R^+细胞表达TDO2的偏倚较小,分别为-1.3%、-8.2%、7.4%。TDO2在大鼠脾脏T、B细胞中均有表达。FC500和MarkⅡ检测结果的相关性和一致性较好。FC500操作方便,速度快。MarkⅡ将传统流式细胞术的高通量分析与细胞形态学分析相结合,精确度高,可获得细胞具体图片。 展开更多
关键词 流式细胞术 T、B细胞 TDO_2 相关性 一致性
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性别对咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型建立的影响 认领
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作者 罗婷婷 韩陈陈 +4 位作者 崔东倩 张雨 刘倩 马旸 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第4期634-639,共6页
建立咪喹莫特(IMQ)诱导的小鼠银屑病模型,对模型进行评价并探究性别对IMQ诱导小鼠银屑病模型建立的影响。BALB/c小鼠,雌雄各半,随机分为正常对照组、模型组1(雄性)、模型组2(雌性),将IMQ涂抹于小鼠背部皮肤建立小鼠银屑病模型。每天对... 建立咪喹莫特(IMQ)诱导的小鼠银屑病模型,对模型进行评价并探究性别对IMQ诱导小鼠银屑病模型建立的影响。BALB/c小鼠,雌雄各半,随机分为正常对照组、模型组1(雄性)、模型组2(雌性),将IMQ涂抹于小鼠背部皮肤建立小鼠银屑病模型。每天对小鼠皮肤进行银屑病皮损面积和严重程度(PASI)评分,HE染色观察皮肤组织病理学改变,计算脾脏指数、胸腺指数,免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和免疫荧光法检测内披蛋白的表达情况。与对照组小鼠相比,IMQ诱导的雄性和雌性小鼠皮肤均表现出鳞屑、红斑和增厚现象并持续加重,PASI评分也呈相同的结果。HE染色发现与对照组小鼠相比,IMQ诱导的雄性和雌性小鼠表皮均增厚(P<0.001),表皮浅层可见毛细血管扩张、炎症细胞浸润、角质层可见角化不全、颗粒层变薄甚至消失、棘层肥厚、并有表皮突下延。IMQ诱导的小鼠脾脏指数增大(P<0.001),雌雄小鼠脾脏指数变化差异无统计学意义。IMQ诱导的雄性和雌性小鼠角质形成细胞表达数量增多(P<0.05),且存在异常分化现象,雌雄小鼠PCNA和内披蛋白的表达差异无统计学意义。IMQ诱导的小鼠银屑病模型与人类银屑病具有许多相似性,且性别对IMQ诱导小鼠银屑病模型的建立几乎没有影响。 展开更多
关键词 性别 银屑病 咪喹莫特 动物模型
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新媒体时代临床药理学教学模式探索 认领
3
作者 马旸 汪庆童 +2 位作者 张玲玲 严尚学 魏伟 《卫生职业教育》 2020年第17期60-61,共2页
新媒体时代,临床药理学面临教学资源有限、教师主体地位受多方挑战等方面问题。对新媒体时代本科临床药理学教育体系发生的变化及新媒体在教学中的融入途径进行探讨,提出利用新媒体整合临床药理学教学资源;传授知识搜索技巧,鼓励学生参... 新媒体时代,临床药理学面临教学资源有限、教师主体地位受多方挑战等方面问题。对新媒体时代本科临床药理学教育体系发生的变化及新媒体在教学中的融入途径进行探讨,提出利用新媒体整合临床药理学教学资源;传授知识搜索技巧,鼓励学生参与教案更新;创建网络课堂,丰富临床药理学教学内容;开展翻转课堂教学,提高学生课堂参与度等措施,提升教学质量。 展开更多
关键词 新媒体时代 临床药理学 教育体系
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诱导多能干细胞来源间充质干细胞对大鼠骨关节炎的治疗作用 认领
4
作者 何继晨 严君逸 +4 位作者 程琢玉 程润 赵英杰 魏伟 严尚学 《安徽医药》 CAS 2019年第8期1496-1500,I0001,I0002共7页
目的研究诱导多能干细胞来源间充质干细胞(iPSC-MSCs)对大鼠骨关节炎(OA)的治疗作用。方法采用Hulth法建立大鼠OA模型,编号后运用Excel表格随机分组功能将其分为模型组、iPSC-MSCs组、人脐带来源间充质干细胞(hUC-MSCs)组、玻璃酸钠(HA... 目的研究诱导多能干细胞来源间充质干细胞(iPSC-MSCs)对大鼠骨关节炎(OA)的治疗作用。方法采用Hulth法建立大鼠OA模型,编号后运用Excel表格随机分组功能将其分为模型组、iPSC-MSCs组、人脐带来源间充质干细胞(hUC-MSCs)组、玻璃酸钠(HA)阳性对照组,另设假手术组作为对照,每组10只。除HA组动物多次给药(每周1次,共给药5次)外,其它各组均单次给药,每次每只动物在术侧关节腔注射50μL药物iPSC-MSCs和hUC-MSCs,假手术组和模型组同法给予生理盐水。给药5周后处死动物,观察iPSC-MSCs对关节直径差值、关节腔结构及评分、关节面评分、病理学评分等指标的影响;检测膝关节基质金属蛋白酶(MMP)-13、Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)及解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS)-5表达情况。结果 iPSCMSCs和hUC-MSCs给药均可显著降低膝关节面Pelletier评分、关节直径和病理Mankin评分,改善关节腔结构,降低X线评分和关节肿胀,且iPSC-MSCs较hUC-MSCs给药在降低Pelletier评分[(1.22±0.67)比(2.00±0.71),P=0.021]方面差异有统计学意义;相比于模型组,iPSC-MSCs关节腔注射给药可显著增加软骨层CollagenⅡ表达[(35.87±8.52)比(69.90±7.65),P<0.01],降低MMP-13[(59.25±5.56)比(33.75±5.85),P<0.01]和ADAMTS-5[(52.25±10.47)比(22.25±6.13),P<0.01]表达水平,且与hUC-MSCs给药差异有统计学意义,iPSC-MSCs组与hUC-MSCs组CollagenⅡ、MMP-13、ADAMTS-5值分别为[(69.90±7.65)比(61.00±5.52),P=0.010]、[(33.75±5.85)比(43.25±6.02),P=0.028]、[(22.25±6.13)比(36.50±4.65),P=0.011]。结论关节腔注射iPSC-MSCs可显著改善OA大鼠关节病理,具有明显的软骨保护作用。 展开更多
关键词 骨关节炎 脐血干细胞移植 注射 关节内 诱导多能干细胞 间质干细胞 软骨损伤 大鼠
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β-榄香烯诱导人结肠癌细胞DLD-1的增殖抑制和凋亡研究 认领 被引量:5
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作者 汪国玉 张蕾 +5 位作者 耿亚迪 冯晓俊 陈昭琳 赵晓晓 姜玲 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第4期491-497,共7页
目的研究β-榄香烯对人结肠癌细胞DLD-1的增殖、凋亡及对活性氧(ROS)的影响。方法体外培养人结肠癌细胞DLD-1,采用MTS法、克隆形成实验检测不同浓度β-榄香烯对DLD-1细胞增殖的影响,使用Hoechst 33342染色、流式细胞术检测β-榄香烯对... 目的研究β-榄香烯对人结肠癌细胞DLD-1的增殖、凋亡及对活性氧(ROS)的影响。方法体外培养人结肠癌细胞DLD-1,采用MTS法、克隆形成实验检测不同浓度β-榄香烯对DLD-1细胞增殖的影响,使用Hoechst 33342染色、流式细胞术检测β-榄香烯对DLD-1细胞凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白表达水平的变化,DCFH-DA荧光染色检测ROS水平。结果 MTS法和克隆形成实验显示β-榄香烯对DLD-1细胞具有增殖抑制作用;Hoechst 33342染色显示β-榄香烯可使细胞出现细胞核聚缩和致密浓染的表现,Annexin V/PI双染结果显示,β-榄香烯可诱导DLD-1细胞出现凋亡;Western blot结果显示β-榄香烯作用后Cleaved PARP、Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-3表达明显上调;ROS的测定结果显示β-榄香烯可使细胞内ROS水平显著升高。结论β-榄香烯能显著抑制人结肠癌细胞DLD-1增殖并能够促进细胞凋亡,ROS升高可能是其发挥作用的机制之一。 展开更多
关键词 Β-榄香烯 人结肠癌细胞 增殖 凋亡
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CBL教学模式在医学留学生临床药理学教学中的应用研究 认领 被引量:1
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作者 孙妩弋 张玲玲 +2 位作者 陈镜宇 汪庆童 魏伟 《齐齐哈尔医学院学报》 2018年第1期97-99,共3页
目的探讨案例教学法(case-based learning,CBL)在医学留学生临床药理学课程教学中的应用效果。方法选取2017年3月—6月授课的安徽医科大学国际教育学院2013级医学留学生两个班共86名学生进行研究,分为观察组和对照组,每组各43名学生... 目的探讨案例教学法(case-based learning,CBL)在医学留学生临床药理学课程教学中的应用效果。方法选取2017年3月—6月授课的安徽医科大学国际教育学院2013级医学留学生两个班共86名学生进行研究,分为观察组和对照组,每组各43名学生。对照组采用传统的教学模式,观察组在传统教学方式的基础上引入CBL教学,在课程学习结束后,对学生进行问卷调查,并通过综合考试成绩,评估CBL教学模式的教学效果。结果在传统教学方法基础上引入CBL教学法后,可激发留学生的学习兴趣,提高学生发现问题、解决问题、综合应用知识的能力,与对照组相比,观察组学生的综合成绩明显提高(P〈0.01),且学生对CBL教学的主观评价和满意度较高。结论 CBL教学法在医学留学生临床药理学的课堂教学中优于传统的教学方法,能提高学生的学习兴趣,有助于培养留学生的知识应用能力。 展开更多
关键词 CBL教学法 临床药理学 教学方法
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人参皂苷CK活化糖皮质激素受体抑制佐剂型关节炎大鼠T细胞活化 认领 被引量:1
7
作者 司敏 陈镜宇 +2 位作者 马旸 常艳 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第10期1567-1573,共7页
目的 探讨人参皂苷CK对活化的T细胞的抑制作用及机制。方法 完全弗氏佐剂(CFA)诱导大鼠佐剂型关节炎(AA),分离纯化正常和AA大鼠的T细胞,分离培养AA大鼠的成纤维样滑膜细胞(FLS)和骨髓来源的树突细胞(DC)。体外分别以刀豆蛋白A... 目的 探讨人参皂苷CK对活化的T细胞的抑制作用及机制。方法 完全弗氏佐剂(CFA)诱导大鼠佐剂型关节炎(AA),分离纯化正常和AA大鼠的T细胞,分离培养AA大鼠的成纤维样滑膜细胞(FLS)和骨髓来源的树突细胞(DC)。体外分别以刀豆蛋白A(ConA)、AA大鼠FLS、AA大鼠DC诱导T细胞活化,以不同浓度的人参皂苷CK(1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L、10μmol/L)以及糖皮质激素受体(GR)拮抗剂(RU48610μmol/L)预处理,CCK法检测T细胞增殖能力,流式细胞术检测T细胞CD25、DC表面分子(CD40、CD80、CD86、MHCⅡ)的表达。结果 CK(10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L、10μmol/L)体外给药能明显抑制刀豆蛋白A(ConA)诱导的AA大鼠T细胞的增殖,GR拮抗剂RU486可以阻断CK(10、100nmol/L)的作用,但是对CK(1、10μmol/L)引起的T细胞增殖的抑制作用没有影响。AA大鼠FLS和DC可以诱导正常大鼠T细胞表面CD25的表达增加,CK(1μmol/L)预处理的AA大鼠FLS和DC与分离纯化的正常大鼠T细胞进行共培养,T细胞表面分子CD25表达明显减少,而RU486可以阻断CK(1μmol/L)的这种作用。CK(1μmol/L)体外给药能明显抑制上述(CD40、CD80、CD86、MHCⅡ)DC表面分子的表达,RU486可以阻断CK对上述分子(CD40、CD86)表达的抑制作用。结论 CK可能通过多个环节发挥对T细胞活化的抑制作用,包括直接抑制T细胞的活化,以及抑制FLS和DC对T细胞的活化,CK的这些作用与其活化GR有关,GR可能是CK发挥作用的靶点之一。 展开更多
关键词 人参皂苷CK 佐剂型关节炎 T细胞活化 糖皮质激素受体
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G蛋白偶联受体与肝损伤的研究现状 认领 被引量:1
8
作者 孙家昌 孙妩弋 +2 位作者 厉歆然 彭文婷 魏伟 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1000-1004,共5页
G蛋白偶联受体(GPCRs)是涉及信号转导的细胞膜最大的受体超家族,介导产生多种生理效应,激活相应的信号级联系统,在肝损伤过程中发挥关键作用,是一类非常重要的药物作用靶标。该文就肾上腺素受体、血管紧张素受体、趋化因子受体、蛋白... G蛋白偶联受体(GPCRs)是涉及信号转导的细胞膜最大的受体超家族,介导产生多种生理效应,激活相应的信号级联系统,在肝损伤过程中发挥关键作用,是一类非常重要的药物作用靶标。该文就肾上腺素受体、血管紧张素受体、趋化因子受体、蛋白酶激活受体等参与急慢性肝损伤调节的GPCRs相关研究进展做一综述。 展开更多
关键词 G蛋白偶联受体 肝损伤 信号转导
IgD对人外周血Th1/Th2、Th17/Treg亚群及核转录因子的影响 认领 被引量:2
9
作者 董小洁 吴育晶 +3 位作者 张静 陈文生 黄琼 魏伟 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2018年第5期488-497,共10页
目的:研究免疫球蛋白D(immunoglobulin D,IgD)对人T细胞亚群Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡的影响。方法:不同浓度的IgD(终浓度1、3、10μg/mL)刺激人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)24 h后,流式细胞... 目的:研究免疫球蛋白D(immunoglobulin D,IgD)对人T细胞亚群Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡的影响。方法:不同浓度的IgD(终浓度1、3、10μg/mL)刺激人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)24 h后,流式细胞术检测CD69、CD154的表达、Th1、Th2、Th17、Treg细胞亚群的百分比,实时定量PCR(qPCR)技术检测核转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3和ROR-γt mRNA的表达。结果:IgD可增加T细胞表面活化标志物CD69、CD154的表达(P〈0.05),显著减少Th1、Treg细胞亚群的百分比且可显著增加Th17的百分比,对Th2细胞亚群无显著影响;IgD可显著下调核转录因子T-bet、Foxp3mRNA的表达且可显著上调核转录因子ROR-γt mRNA的表达,对核转录因子GATA-3 mRNA的表达无显著影响。结论:IgD能促进T细胞活化,引起T细胞亚群Th1/Th2、Th17/Treg比例失衡。 展开更多
关键词 免疫球蛋白D(IgD) T细胞亚群 核转录因子 表达 失衡
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β-榄香烯对人胃癌细胞SGC7901的抑制作用及部分机制 认领 被引量:7
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作者 赵晓晓 张蕾 +4 位作者 史天陆 邓明影 汪国玉 姜玲 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第12期1717-1722,共6页
目的研究β-榄香烯对胃癌细胞SGC7901的增殖、凋亡、迁移及赖氨酰氧化酶(LOX)的影响。方法体外培养人胃癌SGC7901细胞,MTS法及流式细胞术检测不同浓度β-榄香烯对SGC7901细胞增殖与凋亡的影响,划痕实验、Transwell小室迁移实验检测β... 目的研究β-榄香烯对胃癌细胞SGC7901的增殖、凋亡、迁移及赖氨酰氧化酶(LOX)的影响。方法体外培养人胃癌SGC7901细胞,MTS法及流式细胞术检测不同浓度β-榄香烯对SGC7901细胞增殖与凋亡的影响,划痕实验、Transwell小室迁移实验检测β-榄香烯对细胞迁移的影响,酶标仪法检测β-榄香烯对LOX酶活性的影响,Western blot法检测LOX蛋白表达的变化。结果β-榄香烯(50~800μmol/L)对SGC7901细胞的抑制作用呈时间依赖和浓度依赖性。β-榄香烯(100、200、400、800μmol/L)处理SGC7901细胞24 h后,凋亡率分别为8.1%、8.2%、18.7%、41.9%,与对照组(4.9%)比较,凋亡率明显升高(P〈0.05)。划痕实验、Transwell实验结果显示β-榄香烯对SGC7901细胞的迁移有明显抑制作用(P〈0.05)。β-榄香烯浓度依赖性地降低SGC7901细胞LOX酶活性(P〈0.05)。Western blot结果显示β-榄香烯可下调SGC7901细胞LOX的蛋白表达。结论β-榄香烯对胃癌细胞SGC7901有明显抑制增殖、迁移及促进凋亡作用,抑制LOX酶活性和蛋白表达可能是其发挥作用的机制之一。 展开更多
关键词 Β-榄香烯 SGC7901细胞 增殖 凋亡 迁移
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归芍颗粒对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的保护作用 认领 被引量:1
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作者 翟巧利 陈象青 +1 位作者 姜玲 魏伟 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期150-155,共6页
目的:观察归芍颗粒(Guishao granules,GG)对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的SD大鼠肝纤维化的作用。方法:90只雄性SD大鼠,除正常组15只不造模外,其余大鼠背部ih CCl4(1 m L·kg-1),每周2次,共13周制备肝纤维化模... 目的:观察归芍颗粒(Guishao granules,GG)对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的SD大鼠肝纤维化的作用。方法:90只雄性SD大鼠,除正常组15只不造模外,其余大鼠背部ih CCl4(1 m L·kg-1),每周2次,共13周制备肝纤维化模型,随机分为5组,分别为模型组,GG低、中、高剂量组(3.5,7.0,14 g·kg-1)和秋水仙碱组(0.1 mg·kg-1),每组15只。13周后,测定大鼠肝脏指数;取部分肝组织做苏木素-伊红(HE)和马松三色(Masson)染色;取血测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;放射免疫法检测血清中透明质酸(HA)和层粘连蛋白(LN)的水平;分光光度法检测大鼠肝脏中羟脯氨酸(Hyp)含量;免疫组化法检测肝脏中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝损伤,肝纤维化程度明显,肝纤维化大鼠血清中ALT,AST和HA,LN水平明显升高,肝组织中Hyp的含量明显升高,肝组织中α-SMA蛋白的表达明显升高(P〈0.05,P〈0.01);GG能明显改善大鼠肝损伤,减轻肝纤维化程度,同时显著降低肝纤维化大鼠血清中ALT,AST和HA,LN水平,GG能降低肝组织中Hyp的含量,抑制肝组织中α-SMA蛋白的表达(P〈0.05,P〈0.01)。结论:GG可以明显改善CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能与GG抑制肝星状细胞活化有关。 展开更多
关键词 归芍颗粒 肝纤维化 四氯化碳 保护作用
TGF-β Ⅲ型受体介导的信号通路及其在纤维化疾病中的作用 认领 被引量:4
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作者 厉歆然 孙妩弋 +2 位作者 谷元婧 彭文婷 魏伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1629-1634,共6页
转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)在细胞的自我调控包括细胞增殖、分化、凋亡、胚胎发育、免疫监督、血管再生等过程中发挥重要作用。TGF-βⅢ型受体(TβRⅢ)是TGF-β超家族的辅助受体之一,TβRⅢ不仅能介导T... 转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)在细胞的自我调控包括细胞增殖、分化、凋亡、胚胎发育、免疫监督、血管再生等过程中发挥重要作用。TGF-βⅢ型受体(TβRⅢ)是TGF-β超家族的辅助受体之一,TβRⅢ不仅能介导TGF-β超家族配体依赖的Smad经典通路,还可以介导非Smad依赖的信号通路,参与调控细胞的多种信号通路,在纤维化、肿瘤、心血管系统等疾病中发挥重要作用。该文就TβRⅢ参与的信号通路及其在纤维化疾病中的作用作一综述。 展开更多
关键词 TGF-βⅢ型受体 纤维化疾病 信号通路 β-arrestin2 SMAD MAPK
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免疫球蛋白受体作为药物靶点的研究 认领 被引量:5
13
作者 黄琼 陈文生 +2 位作者 董进 吴育晶 魏伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期155-158,共4页
免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)是体内体液免疫的重要组成部分.Ig与免疫球蛋白受体(immunoglobulin recep-tor,IgR)结合触发相应的生物学活性.不同的Ig亚型有不同的生物学功能,且IgR可作为炎症免疫相关疾病的治疗靶点,该文综述了Ig... 免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)是体内体液免疫的重要组成部分.Ig与免疫球蛋白受体(immunoglobulin recep-tor,IgR)结合触发相应的生物学活性.不同的Ig亚型有不同的生物学功能,且IgR可作为炎症免疫相关疾病的治疗靶点,该文综述了IgR功能及在炎症免疫相关疾病治疗与药物研究中的作用. 展开更多
关键词 免疫球蛋白 免疫球蛋白受体 功能 炎症 治疗 靶点
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pIRES-EGFP-GRK2-S670A突变质粒真核表达载体的构建与表达 认领
14
作者 马旸 韩陈陈 +2 位作者 李亦凡 汪扬 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第10期1547-1551,共5页
GRK2-S670A突变体导入pI RES-EGFP真核表达载体,为寻找GRK2磷酸化GPCR的位点提供研究基础。利用PCR定点突变试剂盒,获得pG EM-T-GRK2-S670A,用Sal I/Apa I分别对pG EM-T-GRK2-S670A和EGFP-C3双酶切,构建EGFP-C3-GRK2-S670A,Sal I/BamH ... GRK2-S670A突变体导入pI RES-EGFP真核表达载体,为寻找GRK2磷酸化GPCR的位点提供研究基础。利用PCR定点突变试剂盒,获得pG EM-T-GRK2-S670A,用Sal I/Apa I分别对pG EM-T-GRK2-S670A和EGFP-C3双酶切,构建EGFP-C3-GRK2-S670A,Sal I/BamH I双酶切EGFP-C3-GRK2-S670A和pI RES-EGFP,得到pI RES-EGFP-GRK2-S670A。将构建的质粒转染HEK293细胞,荧光显微镜下观察和Western blot法检测融合蛋白的表达。酶切鉴定显示pI RES-EGFP-GRK2-S670A质粒条带大小符合,测序结果正确,成功构建pI RES-EGFP-GRK2-S670A真核表达质粒,转染HEK293细胞后可见融合蛋白表达,为后续研究奠定基础。 展开更多
关键词 pIRES-EGFP-GRK2-S670A突变质粒 重组质粒 细胞转染
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新型蒽环类衍生物HYY-014大鼠体内药代动力学和组织分布的研究 认领 被引量:1
15
作者 赵明霞 鲁晓蓉 +3 位作者 张俊东 刘胜利 王界永 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第4期472-476,共5页
目的:研究新型蒽环类衍生物HYY-014在大鼠体内的药代动力学和组织分布特征,为临床研究提供实验依据。方法大鼠单次尾静脉注射1.5 mg/kg的HYY-014后,采用LC-MS/MS法测定各时间点血浆和组织中HYY-014及其代谢物HYY-M3的浓度,药代动... 目的:研究新型蒽环类衍生物HYY-014在大鼠体内的药代动力学和组织分布特征,为临床研究提供实验依据。方法大鼠单次尾静脉注射1.5 mg/kg的HYY-014后,采用LC-MS/MS法测定各时间点血浆和组织中HYY-014及其代谢物HYY-M3的浓度,药代动力学参数经DAS 3.0统计软件计算获得。结果采用统计矩方法处理药物浓度时间数据, HYY-014药代动力学参数 Cmax、T1/2、Vd、CL、AUC0-t、MRT0-t分别为(1628.6±618.6)μg/L、(24.4±3.6) h、(23.4±5.2) L/kg、(0.66±0.08) L/kg/h、(2219.5±276.9)μg/L &#183;h、(15.1±2.4) h;HYY-M3药代动力学参数Cmax、AUC0-t分别为(2.2±0.6)μg/L、(103.1±13.7)μg/L&#183;h。静脉注射该药后,很快向机体的各组织广泛分布,且具有明显的靶向性,主要分布在脾、肾、肺、心脏、肝等组织,脑组织中浓度极低。结论静脉注射HYY-014组织分布广泛,具有明显的靶向性,肺、肝组织中的药物浓度均较高,不能通过血脑屏障。 展开更多
关键词 HYY-014 蒽环类衍生物 药代动力学 组织分布 大鼠 液相色谱-串联质谱
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CP-25通过调控T细胞亚群治疗大鼠胶原性关节炎 认领 被引量:2
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作者 汤小雨 王琛 +6 位作者 韩乐 张贤政 疏金玲 蔡小雨 朱悦 张玲玲 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第7期1001-1008,共8页
目的研究芍药苷-6-氧-苯磺酸酯(CP-25)对大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)治疗作用及对T细胞亚群的影响。方法建立大鼠CIA模型,给予CP-25(50 mg/kg)治疗,艾拉莫德(10 mg/kg)为阳性对照药。测定足爪容积、肿胀关节数、关节和脾脏组织病理学和T... 目的研究芍药苷-6-氧-苯磺酸酯(CP-25)对大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)治疗作用及对T细胞亚群的影响。方法建立大鼠CIA模型,给予CP-25(50 mg/kg)治疗,艾拉莫德(10 mg/kg)为阳性对照药。测定足爪容积、肿胀关节数、关节和脾脏组织病理学和T细胞亚群等。结果 CP-25(50 mg/kg)可以显著降低CIA大鼠足爪体积和关节肿胀;减少脾脏白髓增生和滑膜组织炎性细胞浸润等;抑制T细胞增殖;减少CD3^+T细胞、CD3^+CD4^+T细胞、CD3^+ CD4^+ CD25^+ T细胞亚群,下调Th1、Th2和Th17细胞比率,且上述指标与阳性对照组差异无统计学意义。结论 CP-25对大鼠CIA有治疗作用,该作用可能与其调节活化T细胞亚群和分化T细胞亚群有关。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 胶原诱导性关节炎 CP-25 T细胞
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类风湿关节炎患者与血糖和脂质代谢异常的相关性研究 认领
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作者 王琛 汤小雨 +3 位作者 韩乐 张贤政 疏金玲 张玲玲 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期106-108,125共4页
目的研究类风湿关节炎(RA)患者中血糖与脂质代谢异常的发生情况及与炎症的相关性。方法入选200例RA患者作为试验组和200例健康受试者作为对照组。试验组口服以下药物:甲氨蝶呤每次10 mg,qw;甲泼尼龙每次4mg,bid;白芍总苷每次600 mg,bid... 目的研究类风湿关节炎(RA)患者中血糖与脂质代谢异常的发生情况及与炎症的相关性。方法入选200例RA患者作为试验组和200例健康受试者作为对照组。试验组口服以下药物:甲氨蝶呤每次10 mg,qw;甲泼尼龙每次4mg,bid;白芍总苷每次600 mg,bid;牡蛎碳酸钙咀嚼片,150 mg,tid;阿法骨化醇软胶囊每次0.5μg,qd。对照组无治疗。比较2组血清中抗环瓜氨酸肽抗体(Anti-CCP)、C-反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、三酰甘油、总胆固醇(TC)、血糖(BG)、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL)水平,分析RA患者的CRP、ESR、DAS28与血糖、血脂的相关性。结果治疗后,试验组与对照组的AntiCCP分别为(539.92±466.31)和(11.24±56.70)RU·m L^-1;这2组的CRP分别为(39.10±61.73)和(20.16±36.66)mg·L^-1;这2组的ESR分别为(55.86±33.14)和(19.96±19.02)mm·h^-1;这2组的三酰甘油分别为(1.34±0.86)和(1.18±0.52)mmol·L^-1;这2组的TC分别为(4.52±1.06)和(4.34±0.73)mmol·L^-1;这2组的BG分别为(5.66±1.58)和(5.22±0.62)mmol·L^-1,组间比较上述指标差异均有统计学意义(均P<0.05)。试验组的Anti-CCP抗体水平与三酰甘油和VLDL水平呈正相关。试验组血糖、总胆固醇和三酰甘油异常率与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05,P<0.05)。结论RA患者存在血糖异常和明显脂质代谢紊乱。RA患者异常免疫应答和炎症反应可能参与了血糖异常和脂质代谢紊乱。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 血糖 血脂异常 炎症指标
人脐带来源间充质干细胞对大鼠佐剂性关节炎的治疗和免疫调节作用 认领
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作者 程润 丁文溪 +4 位作者 程琢玉 何继晨 赵英杰 严尚学 魏伟 《中国基层医药》 CAS 2019年第19期2327-2331,共5页
目的明确人脐带来源间充质干细胞(hUC-MSCs)对佐剂性关节炎大鼠的治疗和免疫调节作用。方法将24只雄性SD大鼠以完全弗氏佐剂法建立佐剂性关节炎模型(AA),采用随机数字表法分为模型组、hUC-MSCs组(组1:2×10^6 cells/mL,组2:5×1... 目的明确人脐带来源间充质干细胞(hUC-MSCs)对佐剂性关节炎大鼠的治疗和免疫调节作用。方法将24只雄性SD大鼠以完全弗氏佐剂法建立佐剂性关节炎模型(AA),采用随机数字表法分为模型组、hUC-MSCs组(组1:2×10^6 cells/mL,组2:5×10^6 cells/mL,尾静脉注射)和益赛普组(2.8 mg/kg,皮下注射),每组6只;另取6只雄性SD大鼠作为对照组。造模后每周记录大鼠体质量、足爪容积、进行全身评分和关节炎指数评分、计算关节肿胀数;造模d35处死动物,称量胸腺、脾脏重量,计算相应指数;苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠踝关节组织病理学变化;流式细胞术检测AA大鼠脾脏中(CD4^+CD44^+)T细胞和(CD4^+CD62L^+)T细胞百分比;酶联免疫吸附法(ELISA)检测AA大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素1β(IL-1β)的水平。结果hUC-MSCs静脉注射可降低AA大鼠的足爪容积、全身评分、关节炎指数评分以及关节肿胀数量(F=20.573、89.092、14.161、10.914,均P<0.01);降低胸腺指数[(0.120±0.032)、(0.120±0.031)]和脾脏指数[(0.250±0.070)、(0.240±0.018)](F=6.339、4.105,均P<0.01);改善踝关节病理;hUC-MSCs静脉注射可调节脾脏中T细胞亚群(CD4^+CD62L^+)[(7.0±1.4)%、(7.9±2.2)%],(CD4^+CD44^+)[(15.0±3.6)%、(12.0±1.9)%]的百分比(F=6.331、12.719,均P<0.01),降低AA大鼠血清中TNF-α[(172.0±13.0)ng/L、(150.0±12.0)ng/L]和IL-1β[(75.0±36.0)ng/L、(74.0±20.0)ng/L]水平(F=8.221、3.581,均P<0.05)。结论hUC-MSCs静脉注射可调节大鼠T细胞亚群比例和功能,发挥对大鼠AA的治疗作用。 展开更多
关键词 关节炎 实验性 间质干细胞 脐带 免疫调节 T淋巴细胞 肿瘤坏死因子Α 白细胞介素β
不同浓度四氯化碳诱导小鼠肝纤维化模型的比较 认领 被引量:8
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作者 孙家昌 孙妩弋 +3 位作者 厉歆然 彭文婷 杜佳佳 魏伟 《实验动物与比较医学》 CAS 2018年第4期255-260,共6页
目的对比观察不同剂量四氯化碳(CCl4)诱导小鼠肝纤维化模型的效果,探索一种稳定可行且较为高效的肝纤维化小鼠造模方法。方法将60只C57BL/6J小鼠随机分为正常组和模型组,模型组小鼠分别腹腔注射体积分数10%的CCl4(5 mL/kg)以及体积... 目的对比观察不同剂量四氯化碳(CCl4)诱导小鼠肝纤维化模型的效果,探索一种稳定可行且较为高效的肝纤维化小鼠造模方法。方法将60只C57BL/6J小鼠随机分为正常组和模型组,模型组小鼠分别腹腔注射体积分数10%的CCl4(5 mL/kg)以及体积分数20%的CCl4(1 mL/kg),每周2次,连续8周。分别在造模2周、4周、6周、8周注射后处死小鼠,进行HE染色和Masson染色,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,以及肝匀浆氧化/抗氧化指标,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)和超氧化物岐化酶(SOD)变化,Western blotting法检测肝组织中胶原表达情况。结果随着造模时间的延长,病理染色显示肝纤维化程度不断加重,胶原表达逐步增加,血清ALT、AST水平逐渐升高,肝匀浆SOD、GSH活性降低,氧化产物MDA含量升高。在造模的相同时间点,体积分数10%CCl4、5 m L/kg剂量组相比于体积分数20%CCl4、1 m L/kg剂量组,病理染色显示肝纤维化程度更加严重,血清ALT、AST水平明显升高,肝脏中SOD、GSH活性明显降低,氧化产物MDA含量明显升高,肝纤维化形成的时间更短,效果更好。结论两种造模方法都能形成肝纤维化小鼠模型,但体积分数10%CCl4(5 m L/kg)剂量组的纤维化形成时间更短且效果更好。因此,每周2次,连续8周腹腔注射10%CCl4(5 m L/kg)可作为一种较为理想的纤维化小鼠造模方法。 展开更多
关键词 肝纤维化 四氯化碳(CCl40) 小鼠 模型
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Arrb2基因敲除小鼠的繁育及基因型鉴定 认领
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作者 孙妩弋 孙家昌 +2 位作者 厉歆然 彭文婷 魏伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期878-881,共4页
目的 探讨Arrb2基因敲除鼠的繁育和基因型分析,验证聚合酶链式反应(PCR)法对Arrb2基因敲除鼠基因型检测的适用性。方法 将引进的Arrb2纯合♂小鼠和野生型♀鼠进行交配繁殖出子一代,获得的F1代杂合子小鼠继续进行交配,待小鼠2周龄时... 目的 探讨Arrb2基因敲除鼠的繁育和基因型分析,验证聚合酶链式反应(PCR)法对Arrb2基因敲除鼠基因型检测的适用性。方法 将引进的Arrb2纯合♂小鼠和野生型♀鼠进行交配繁殖出子一代,获得的F1代杂合子小鼠继续进行交配,待小鼠2周龄时剪尾部组织提取DNA,PCR法扩增目的基因片段,琼脂糖凝胶电泳进行基因型结果判定。将获得的纯合子小鼠与异性杂合子交配,以获得更多的基因敲除纯合子小鼠。Western blot检测验证获得的Arrb2基因敲除纯合子小鼠的主要脏器中β-arrestin2蛋白的表达情况。结果 Arrb2基因敲除鼠的繁育和鉴定取得了成功,获得了一批基因敲除鼠。F1代杂合子小鼠交配获得的F2代小鼠出现3种基因型:Arrb2+/+、Arrb2+/-、Arrb2-/-,使用PCR法成功鉴别了子代鼠的基因型。Western blot结果表明,Arrb2基因敲除纯合子小鼠肝、肾组织中几乎不表达β-arrestin2蛋白。结论 正确的繁殖和鉴定是得到纯合Arrb2基因敲除鼠的重要途径,PCR法鉴别小鼠基因型具有简便、快捷、可靠的特点。 展开更多
关键词 Arrb2 基因敲除 基因型鉴定 聚合酶链式反应 繁育 蛋白表达
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