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新医学模式下生物化学实验教学改革实践探 预览
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作者 华娟 秦宜德 《科技创新导报》 2019年第9期210-212,共3页
生物化学与分子生物学是医学专业的一门重要的基础学科,又是生命科学领域的一门前沿课程。传统的生物化学与分子生物学实验教学模式多数侧重于老师对实验原理、实验步骤的讲解,而忽略了学生的积极性、主动性和创造性。这与新医学模式下... 生物化学与分子生物学是医学专业的一门重要的基础学科,又是生命科学领域的一门前沿课程。传统的生物化学与分子生物学实验教学模式多数侧重于老师对实验原理、实验步骤的讲解,而忽略了学生的积极性、主动性和创造性。这与新医学模式下,医学院校应培养面向社会、面向临床的复合型医学人才的目标大相径庭。因此需要不断对生物化学与分子生物学实验教学的方式、教学目标与教学内容进行深入的探索与改革,激发学生的学习热情,培养医学生的分析、解决问题的能力,提高医学院校生物化学与分子生物学实验教学质量。 展开更多
关键词 生物化学实验 创新能力 教学改革 新医学模式
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转录因子GRHL3促进皮肤鳞癌细胞迁移和侵袭 预览
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作者 邓庆梅 周利利 +4 位作者 郭思佳 陈津津 郭立钰 曾凡军 周海胜 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第2期236-241,共6页
目的研究转录因子果蝇头状因子3(GRHL3)对皮肤鳞癌(SCC)细胞系A431细胞迁移和侵袭的影响。方法利用免疫组织化学检测皮肤癌组织GRHL3表达,分析皮肤鳞状细胞癌中GRHL3表达水平与临床病理分期的关系;利用脂质体介导GRHL3过表达载体转染A43... 目的研究转录因子果蝇头状因子3(GRHL3)对皮肤鳞癌(SCC)细胞系A431细胞迁移和侵袭的影响。方法利用免疫组织化学检测皮肤癌组织GRHL3表达,分析皮肤鳞状细胞癌中GRHL3表达水平与临床病理分期的关系;利用脂质体介导GRHL3过表达载体转染A431细胞,建立过量表达GRHL3的A431细胞系;通过Transwell检测GRHL3对A431细胞迁移和侵袭能力的影响;利用表达谱芯片技术分析过量表达GRHL3对A431细胞迁移、侵袭等相关基因表达变化;采用染色质免疫共沉淀-测序(ChI P-seq)的方法分析GRHL3调控的靶基因及GRHL3的结合位点;比较基因表达谱芯片和染色质免疫共沉淀-测序的结果,以确定GRHL3参与调控细胞迁移和侵袭相关的靶基因。结果免疫组化结果显示SCC组织及癌旁组织GRHL3表达水平较正常皮肤组织明显增加,且与临床病理分期有关;Western blot结果证实GRHL3在A431细胞过量表达,由此成功建立稳定过量表达GRHL3的A431细胞株;Transwell侵袭和迁移试验显示GRHL3过量表达增强了A431细胞迁移和侵袭能力;表达谱芯片结果显示有128个基因与细胞运动和黏附相关;ChI Pseq结果显示GRHL3结合基因组DNA的主要位置是在基因间区(55. 65%),而只有2. 49%分布于结构基因的启动子区域;表达谱芯片显示差异表达的128个基因和ChI P-seq显示的GRHL3调控149个候选基因,均与细胞迁移和侵袭有关,其中有26个基因具有一致性。提示GRHL3通过调控26个候选基因促进皮肤鳞癌细胞的迁移和侵袭。结论 GRHL3通过调控皮肤鳞癌细胞的与迁移和侵袭相关基因表达,促进细胞迁移和侵袭,有助于后续研究GRHL3调控肿瘤细胞迁移和侵袭的分子机制。 展开更多
关键词 皮肤鳞癌 GRHL3 A431 迁移 侵袭
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胃癌组织中GRHL3的表达及其临床意义 预览
3
作者 许易诚 郭立钰 +3 位作者 蔡文文 涂珍珍 周海胜 熊茂明 《临床与实验病理学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期1068-1071,共4页
目的 探讨GRHL3在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化EnVision两步法检测100例胃癌组织及40例癌旁组织中GRHL3蛋白的表达,分析其与胃癌临床病理特征及预后的关系。结果 GHRL3在胃癌组织中的高表达率为64.0%(64/100),在癌... 目的 探讨GRHL3在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化EnVision两步法检测100例胃癌组织及40例癌旁组织中GRHL3蛋白的表达,分析其与胃癌临床病理特征及预后的关系。结果 GHRL3在胃癌组织中的高表达率为64.0%(64/100),在癌旁组织中高表达率为25.0%(10/40);GRHL3蛋白阳性与患者性别(χ2=0.794,P=0.373)、年龄(χ2=1.500,P=0.211)、肿瘤位置(χ2=0.568,P=0.451)、肿瘤大小(χ2=1.145,P=0.285)、分化程度(χ2=1.382,P=0.240)均无关;与肿瘤临床TNM分期(χ2=7.545,P=0.006)显著相关。GRHL3表达水平与胃癌患者预后有相关性。结论 GHRL3在胃癌中的高表达率高于癌旁组织,GRHL3的表达与临床分期有相关性,且GRHL3高表达影响患者预后,检测胃癌组织中GRHL3基因的表达水平有助于分辨肿瘤的恶性程度,并对患者术后治疗和预后分析有一定的指导意义。 展开更多
关键词 胃肿瘤 GRHL3 免疫组织化学 预后
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内质网应激在高糖培养加重神经细胞缺氧-复氧损伤中的作用
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作者 林慕雅 陈立建 +3 位作者 凌军 耿兴强 谢秀秀 都建 《临床麻醉学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期583-586,共4页
目的研究内质网应激在高糖培养加重神经细胞缺氧-复氧损伤中的作用。方法在含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养小鼠神经瘤母细胞N2a,按照接种密度每毫升105个将细胞接种于培养板中。采用随机数字分组法将细胞分为四组:正常糖对照组... 目的研究内质网应激在高糖培养加重神经细胞缺氧-复氧损伤中的作用。方法在含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养小鼠神经瘤母细胞N2a,按照接种密度每毫升105个将细胞接种于培养板中。采用随机数字分组法将细胞分为四组:正常糖对照组(NC组)、正常糖缺氧-复氧组(NH组)、高糖对照组(HC组)、高糖缺氧-复氧组(HH组)。待细胞贴壁后,将DMEM/F12培养基更换为高糖培养基,孵育48h,造高糖孵育模型。在缺氧小室中缺氧3h后,再转入正常氧孵育箱中复氧2h,造缺氧-复氧损伤模型。NC组未作处理;NH组行缺氧-复氧处理;HC组行高糖孵育处理;HH组先行高糖孵育48h后,再作缺氧-复氧处理。采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞GRP78、CHOP蛋白含量。结果与NC组和HC组比较,NH组和HH组细胞活力明显减弱,凋亡率明显升高,GRP78、CHOP蛋白含量明显增多(P〈0.01);与NH组比较,HH组细胞活力明显减弱,凋亡率明显升高,GRP78、CHOP蛋白含量明显增多(P〈0.05)。结论高糖培养加重神经细胞缺氧-复氧损伤,可能与内质网应激标志性蛋白GRP78蛋白含量增多和促凋亡转录因子CHOP介导的细胞凋亡相关。 展开更多
关键词 高糖 缺氧-复氧损伤 内质网应激 凋亡
乳源免疫调节肽对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用 预览 被引量:1
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作者 顾芳 席浩 +3 位作者 阮昕 徐恰 汪慎燚 秦宜德 《中国药理学通报》 CSCD 北大核心 2018年第5期712-716,共5页
目的研究乳源免疫调节肽对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用。方法将60只清洁级♂昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、乳源免疫调节肽(PGPIPN)低、中、高剂量组和阳性对照谷胱甘肽(GSH)组。连续灌胃2周,最后3 d,采用白酒(56度)给小鼠连... 目的研究乳源免疫调节肽对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用。方法将60只清洁级♂昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、乳源免疫调节肽(PGPIPN)低、中、高剂量组和阳性对照谷胱甘肽(GSH)组。连续灌胃2周,最后3 d,采用白酒(56度)给小鼠连续灌胃建立急性酒精性肝损伤模型,测定各组小鼠体质量、肝脏指数及相关生化指标;取肝脏制作组织切片HE染色,观察肝组织的病理学变化。结果模型组小鼠血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)明显高于正常对照组,肝组织出现了肝索排列紊乱,肝细胞坏死,炎性细胞浸润。与模型组相比,PGPIPN高剂量组肝脏指数、血清ALT、AST水平较模型组明显降低。PGPIPN高剂量组TNF-α含量较模型组明显减少,肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide 展开更多
关键词 乳源免疫调节肽 小鼠 急性酒精性肝损伤 生化指标 氧化应激 保护作用
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弓形虫感染可能引起“路怒” 预览
6
作者 李厚都 安然 《科技视界》 2018年第3期206-207,共2页
路怒症是一种汽车综合症,在一些不文明驾驶行为时,驾驶员由于开车压力和挫折感而导致的愤怒情绪,路怒的出现会引起交通事故,给社会带来不稳定因素。弓形虫是重要的食源性寄生虫之一,严重危害人类身体健康,弓形虫偏向损害中枢神经系统,... 路怒症是一种汽车综合症,在一些不文明驾驶行为时,驾驶员由于开车压力和挫折感而导致的愤怒情绪,路怒的出现会引起交通事故,给社会带来不稳定因素。弓形虫是重要的食源性寄生虫之一,严重危害人类身体健康,弓形虫偏向损害中枢神经系统,与成年人一系列神经精神症状(特别是精神分裂症)密切相关,而间歇性暴发性障碍(IED)的精神疾病患者存在突发性的攻击冲动,包括容易“路怒”。因此本文综述弓形虫感染与路怒的关系. 展开更多
关键词 弓形虫 路怒 精神分裂症 中枢神经系统
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TLR7激活上调细胞周期蛋白表达促进Hela细胞增殖 预览
7
作者 刘莉 李磊 +3 位作者 顾亚男 周宏 罗欣 张胜权 《安徽医科大学学报》 北大核心 2018年第2期167-170,共4页
目的 探讨Toll样受体7(TLR7)信号通路激活对人宫颈癌Hela细胞周期蛋白表达及对细胞增殖的影响。方法使用不同浓度的Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞,采用MTS比色法分析其对Hela细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测同一浓度的TLR... 目的 探讨Toll样受体7(TLR7)信号通路激活对人宫颈癌Hela细胞周期蛋白表达及对细胞增殖的影响。方法使用不同浓度的Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞,采用MTS比色法分析其对Hela细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测同一浓度的TLR7激动剂Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞后对Hela细胞周期的影响;Western blot分析Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞后对细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E表达水平的影响。结果 TLR7的激活促进Hela细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;Gardiquimod可时间依赖性增加细胞周期在S期的比例;Cyclin B1、Cyclin E的表达水平随着Gardiquimod作用时间的增加而增加。结论 TLR7激动剂Gardiquimod可能通过上调细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E表达水平,进而促进Hela细胞增殖。 展开更多
关键词 TLR7 HELA细胞 Gardiquimod 细胞周期蛋白 细胞增殖
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雷帕霉素对肾小管上皮细胞生物学行为的影响及其治疗糖尿病肾病分子机制的初步研究 预览 被引量:2
8
作者 成芳 涂珍珍 +3 位作者 周利利 苏超 王德光 周海胜 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第1期1-6,共6页
目的 研究雷帕霉素(RAPA)对肾小管上皮细胞生物学行为的影响及其治疗糖尿病肾病分子机制。方法 体外培养肾小管上皮细胞(HK-2),使用转化生长因子β1(TGF-β1)处理HK-2细胞,以建立肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转化(EMT)的细胞模... 目的 研究雷帕霉素(RAPA)对肾小管上皮细胞生物学行为的影响及其治疗糖尿病肾病分子机制。方法 体外培养肾小管上皮细胞(HK-2),使用转化生长因子β1(TGF-β1)处理HK-2细胞,以建立肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转化(EMT)的细胞模型,并联合RAPA处理HK-2细胞,通过Transwell迁移实验和侵袭实验观察HK-2细胞的迁移和侵袭等细胞生物学行为变化;通过RT-PCR、Western blot法观察EMT分子标志物表达的变化;结合前期建立的糖尿病肾病小鼠模型的肾组织及通过腹腔注射RAPA[1mg/(kg·d)]处理后的模型小鼠肾组织,利用HE染色分析肾组织的病理变化;利用免疫组化检测EMT分子标志物的表达变化。结果 Transwell实验结果表明,TGF-β1诱导HK-2细胞发生迁移和侵袭能力明显增加;联合应用RAPA后,迁移和侵袭能力明显抑制。RT-PCR、Westernblot和免疫组化结果显示TGF-β1可以促进间质细胞标志分子Vimentin的表达,而上皮标志分子E-cadherin的表达明显降低;联合应用RAPA后可以抑制TGF-β1诱发的EMT作用。HE染色显示,RAPA治疗后,能显著改善糖尿病肾病小鼠肾小管形态病变。结论 RAPA具有抑制肾小管上皮细胞发生EMT作用。 展开更多
关键词 雷帕霉素 转化生长因子β1 糖尿病肾病 上皮-肌成纤维细胞转分化
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肿瘤细胞的EMT与免疫逃逸的研究进展 被引量:1
9
作者 鲍子戌 周海胜 《生命的化学》 CAS CSCD 2017年第6期980-985,共6页
上皮-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是胚胎发育过程中的生理现象,同时也参与创伤修复、器官纤维化以及肿瘤细胞的迁移、浸润及转移等多种生物学过程。近年来研究表明,肿瘤细胞发生EMT过程中可发生免疫抑制作用... 上皮-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是胚胎发育过程中的生理现象,同时也参与创伤修复、器官纤维化以及肿瘤细胞的迁移、浸润及转移等多种生物学过程。近年来研究表明,肿瘤细胞发生EMT过程中可发生免疫抑制作用,使其逃逸机体免疫系统的识别和杀伤。本文拟对EMT与肿瘤免疫逃逸的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 上皮-间质细胞转化 肿瘤 免疫逃逸
PDX1真核表达载体的构建及其对PANC-1细胞PI3K/AKT信号途径的影响 预览
10
作者 栾康 金锐 +2 位作者 刘莉 罗欣 张胜权 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第2期186-189,共4页
目的 构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX1)基因真核表达载体并转染至PANC-1细胞,观察其对PI3K/AKT信号通路的影响。方法 从Hela细胞中提取总RNA,逆转后PCR扩增PDX1编码区片段,然后将PDX1的CDS插入PCMV6-Entry质粒构建PCMV6-Entry-PDX1... 目的 构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX1)基因真核表达载体并转染至PANC-1细胞,观察其对PI3K/AKT信号通路的影响。方法 从Hela细胞中提取总RNA,逆转后PCR扩增PDX1编码区片段,然后将PDX1的CDS插入PCMV6-Entry质粒构建PCMV6-Entry-PDX1表达重组体。重组体转染至PANC-1细胞中通过G418筛选出稳定表达细胞株。Westernblot分析PDX1蛋白水平表达及p-AKT水平变化。结果 PDX1基因成功在PANC-1中表达。利用West-ernblot检测验证获得了稳定的PDX1过表达细胞株。West-ernblot结果显示:过表达PDX1的细胞株AKT表达含量与正常细胞及对照细胞没有区别而p-AKT水平降低。结论 PDX1基因过表达能够降低PANC-1细胞的p-AKT水平。 展开更多
关键词 PDX1 基因重组 PI3K/AKT信号通路 PANC-1
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微型制备型电泳比较从细胞中提取蛋白质的3种方法 预览
11
作者 顾芳 汪慎燚 秦宜德 《实验室研究与探索》 北大核心 2017年第10期21-23,79共4页
为探索建立适用于从人卵巢癌细胞株SKOV3中提取蛋白质的最优化方法,通过培养人卵巢癌细胞株SKOV3,分别采用Pull-Down Lysis、RIPA裂解法和加有硫脲的细胞裂解液提取细胞总蛋白,使用Bradford法测定蛋白质浓度,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-P... 为探索建立适用于从人卵巢癌细胞株SKOV3中提取蛋白质的最优化方法,通过培养人卵巢癌细胞株SKOV3,分别采用Pull-Down Lysis、RIPA裂解法和加有硫脲的细胞裂解液提取细胞总蛋白,使用Bradford法测定蛋白质浓度,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,然后使用微型制备型电泳分离蛋白,根据色谱图上的吸收峰比较从人卵巢癌细胞株SKOV3细胞中提取蛋白质的3种方法。结果表明:不同方法提取人卵巢癌细胞株SKOV3总蛋白的丰度及色谱图存在差异,PullDown Lysis试剂法在分离相对分子质量为15~80 k Da的蛋白质方面具有明显的优势。3种方法中以Pull-Down Lysis试剂法为人卵巢癌细胞株SKOV3蛋白质提取的最优方法,与微型制备型电泳的兼容性更好。 展开更多
关键词 蛋白质提取 SKOV3细胞 制备型电泳 优化方法
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雌激素治疗保护去卵巢对血管内皮细胞损伤的初步机制 预览 被引量:1
12
作者 李朝飞 陈冠军 +3 位作者 朱小欢 朱致祥 章秋 鲁云霞 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第12期1753-1759,共7页
目的探讨雌激素治疗对去卵巢大鼠胸主动脉内皮与雌激素缺乏的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的初步机制。方法将30只雌性SD大鼠随机分为假手术对照(SHAM)组、去卵巢(OVX)组、去卵巢+雌激素治疗[OVX+EST,0.06 mg/(kg·d)雌二醇)... 目的探讨雌激素治疗对去卵巢大鼠胸主动脉内皮与雌激素缺乏的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的初步机制。方法将30只雌性SD大鼠随机分为假手术对照(SHAM)组、去卵巢(OVX)组、去卵巢+雌激素治疗[OVX+EST,0.06 mg/(kg·d)雌二醇)组,6个月后观察血管内皮的病理学变化,血管环张力实验检测血管舒张差异,RT-PCR及Western blot法分析葡萄糖调节蛋白(GRP)78、C/EBP同源蛋白(CHOP)表达的改变。将HUVEC分为正常对照(CON)组、正常+衣霉素对照(TM)组、雌激素缺乏(ES-D)组、雌激素缺乏+梯度浓度雌激素治疗(10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)mol/L雌二醇)组,检测氧化应激及内质网应激指标的变化。结果OVX组大鼠体重增加,胸主动脉内皮出现损伤及脂质沉积,GRP78、CHOP的mRNA与蛋白表达水平上调;OVX+EST组上述指标均显著逆转。HUVEC中ES-D组表现出活性氧簇升高及GRP78、CHOP的表达升高,补充不同浓度雌激素后上述指标均下降,且表现出一定的剂量效应。结论雌激素缺乏可介导大鼠胸主动脉内皮损伤及HUVEC出现氧化应激和内质网应激,补充雌激素后可逆转此效应。 展开更多
关键词 雌激素缺乏 雌激素治疗 内质网应激 氧化应激 血管内皮
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临床医学专业留学生生物化学与分子生物学教学质量评价体系建设 预览 被引量:2
13
作者 张素梅 周青 +1 位作者 汪渊 朱华庆 《安徽医药》 CAS 2016年第2期407-408,共2页
安徽医科大学于2010年开始招收来华学习的全英文教学本科临床医学专业留学生,随着对外交流的进一步加强,留学生的招生数量和招生规模也有所增加。该校高等教育中,留学生教育已成为重要组成部分。在医学专业留学生必修的课程中,生物化学... 安徽医科大学于2010年开始招收来华学习的全英文教学本科临床医学专业留学生,随着对外交流的进一步加强,留学生的招生数量和招生规模也有所增加。该校高等教育中,留学生教育已成为重要组成部分。在医学专业留学生必修的课程中,生物化学与分子生物学是一门非常重要的专业基础课程,如何提高留学生对生物化学与分子生物学课程的学习兴趣并提高学习效果,是该课程教学中要研究的重要方向。根据历年教学中总结的经验和留学生本身的特点,该教研室提出在生物化学与分子生物学教学中建立一套新的适合留学生教学的教学质量评价体系,以提高留学生对该课程学习的兴趣、减轻学习压力,最终达到提高该课程学习效果的目的。 展开更多
关键词 生物化学与分子生物学 留学生教学 教学质量评价体系
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不同CHO工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸化修饰的研究 预览
14
作者 刘培 宋礼华 +4 位作者 范清林 刘道琴 张伟 魏利 赵婷 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第6期778-782,共5页
目的比较中国仓鼠卵巢细胞(CHO)工程细胞株表达的VEGFR-Fc的唾液酸化程度的差异,为CHO工程细胞株的筛选提供参数依据。方法从唾液酸单糖、寡糖链这两个层次分析VEGFR-Fc的唾液酸化程度。唾液酸单糖的定量:酸水解释放出的唾液酸用荧... 目的比较中国仓鼠卵巢细胞(CHO)工程细胞株表达的VEGFR-Fc的唾液酸化程度的差异,为CHO工程细胞株的筛选提供参数依据。方法从唾液酸单糖、寡糖链这两个层次分析VEGFR-Fc的唾液酸化程度。唾液酸单糖的定量:酸水解释放出的唾液酸用荧光试剂1,2-diamino-4,5-methylenedioxybenzene(DMB)衍生后,采用荧光-亲水保留液相色谱(HILIC-FLD)检测。寡糖链的结构分析:糖苷酶PNGase F释放出的寡糖链经邻氨基苯甲酰胺(2-AB)衍生后,一部分利用阴离子交换色谱原理分析寡糖链上唾液酸的平均数;一部分经HILIC原理分析VEGFR-Fc寡糖链指纹图谱。结果 6株工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸含量在3-12 mol NANA/mol蛋白之间,参考品Aflibercept为10.46 mol NANA/mol蛋白;每个寡糖链的唾液酸平均数在0.28-1.0之间;寡糖链的特征指纹谱图显示VEGFR-Fc有12个共有峰,各样品、参考品均有以上共有峰,但各峰的峰高有差异。结论不同的CHO工程细胞株所表达的糖蛋白的唾液酸化程度存在差异。 展开更多
关键词 唾液酸 唾液酸化 糖基化 HILIC-FLD
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综合性实验在医学分子生物学实验教学中的探讨 预览 被引量:2
15
作者 黄海良 张胜权 +2 位作者 罗欣 顾芳 冯婷婷 《科技创新导报》 2016年第18期139-139,141共2页
综合性实验以其连贯性和系统性强、信息量集中,学生的自主性和创造性能够在实验过程中得到充分发挥等优势,受到了越来越多的重视。综合性实验在医学分子生物学实验教学中具有重要的作用,具有“科研小课题”之称。因此,探索综合性实验的... 综合性实验以其连贯性和系统性强、信息量集中,学生的自主性和创造性能够在实验过程中得到充分发挥等优势,受到了越来越多的重视。综合性实验在医学分子生物学实验教学中具有重要的作用,具有“科研小课题”之称。因此,探索综合性实验的教学模式,改革分子生物学实验教学的方式,对于大大提高医学分子生物学实验教学的成效,提高医学生的科研能力具有举足轻重的作用。该文主要针对综合性实验在医学分子生物学实验教学中的模式进行探讨。 展开更多
关键词 综合性实验 分子生物学 实验教学
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重组人生长激素对人胃癌MGC803细胞生长的影响 预览 被引量:1
16
作者 常见荣 魏练平 +1 位作者 王荣海 宋礼华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第10期1411-1416,共6页
目的探究重组人生长激素(rhGH)对人胃癌MGC803细胞生长的影响。方法采用Western blot法检测MGC803与MKN45两种胃癌细胞生长激素受体(GHR)蛋白的表达以及实时定量PCR(qRT-PCR)法检测二者GHR mRNA的相对表达量。采用MTT法检测在无... 目的探究重组人生长激素(rhGH)对人胃癌MGC803细胞生长的影响。方法采用Western blot法检测MGC803与MKN45两种胃癌细胞生长激素受体(GHR)蛋白的表达以及实时定量PCR(qRT-PCR)法检测二者GHR mRNA的相对表达量。采用MTT法检测在无血清同步24 h、3%胎牛血清(FBS)给药培养基条件下,不同浓度rh GH作用不同时间对MGC803细胞增殖的影响。采用流式细胞术及Western blot法测定不同浓度的rh GH对MGC803细胞周期及相关信号通路节点蛋白表达的影响。结果 Western blot与qRT-PCR结果表明,MGC803细胞在蛋白以及mRNA水平都被验证为GHR阳性表达的细胞株,具有发挥作用的生物学基础。MTT结果表明,在含3%FBS的给药培养基条件下,不同浓度的rh GH对MGC803细胞有促增殖作用,但不同rh GH浓度组之间差异无统计学意义。细胞周期的结果表明,与对照组比较,rh GH给药组增殖指数(PI)升高。Western blot结果显示,在rh GH作用下,磷酸化酪氨酸蛋白激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号转导和转录活化因子3(p-STAT3)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)等信号蛋白表达上调。结论在3%FBS培养条件下,rh GH促进MGC803细胞增殖,与激活JAK2-STAT3通路、上调下游p-AKT及p-ERK的表达有关。 展开更多
关键词 重组人生长激素 胃癌 MGC803 生长激素受体 JAK-STAT3通路
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甲羟戊酸激酶基因真核及shRNA表达载体构建及其对BxPC-3细胞周期蛋白表达的影响 预览 被引量:2
17
作者 金锐 王芳 +2 位作者 栾康 罗欣 张胜权 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第1期22-26,共5页
目的 构建甲羟戊酸激酶(MVK)基因真核及shRNA表达载体并转染至BxPC-3细胞中,观察其对细胞周期蛋白的影响。方法 从BxPC-3细胞中提取总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)法获得目的基因MVK以及通过化学合成MVK(751~779)和MVK(1089~1117)位... 目的 构建甲羟戊酸激酶(MVK)基因真核及shRNA表达载体并转染至BxPC-3细胞中,观察其对细胞周期蛋白的影响。方法 从BxPC-3细胞中提取总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)法获得目的基因MVK以及通过化学合成MVK(751~779)和MVK(1089~1117)位点寡核苷酸片段,构建真核表达及shRNA表达载体并转染至BxPC-3细胞,筛选稳定表达细胞系。Westernblot法分析转染后对BxPC-3细胞周期蛋白的影响。结果 成功获得MVK基因真核表达(pcD-NA3.1-mvk)及两个针对MVK shRNA表达载体(piLenti-RNAi-shRNA1/2)。通过抗生素筛选及Westernblot分析获得了稳定的MVK过表达及低表达细胞株。Westernblot分析显示:过表达MVK的细胞株及MVK knockdown的细胞株中细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinE表达量与正常及对照细胞相比均显著降低。结论 MVK过表达及低表达均抑制Bx-PC-3细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E的表达。 展开更多
关键词 甲羟戊酸激酶 基因重组 寡核苷酸 细胞周期蛋白 BXPC-3 SHRNA
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LCE3C在皮肤癌组织中分布和细胞定位及其调控机制的初步研究 预览 被引量:5
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作者 陈琼琼 涂珍珍 +5 位作者 王瑞 张思平 赵盼 成芳 查晓军 周海胜 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第10期1413-1417,共5页
目的 研究LCE3C蛋白在皮肤鳞状细胞癌( SCC)以及基底细胞癌( BCC)中的分布及其调控的分子机制. 方法免疫组织化学法检测LCE3C在SCC和BCC组织中的表达. 构建绿色荧光蛋白融合表达的 LCE3C 重组表达载体pLCE3C-GFP,转染人SCC细胞系A4... 目的 研究LCE3C蛋白在皮肤鳞状细胞癌( SCC)以及基底细胞癌( BCC)中的分布及其调控的分子机制. 方法免疫组织化学法检测LCE3C在SCC和BCC组织中的表达. 构建绿色荧光蛋白融合表达的 LCE3C 重组表达载体pLCE3C-GFP,转染人SCC细胞系A431,采用激光共聚焦显微镜分析LCE3C在A431细胞中的定位. Western blot法检测转录因子GRHL3对LCE3C表达的影响.结果 免疫组化结果显示,与正常皮肤组织比较,LCE3C在SCC和BCC组织中表达明显增加;在皮肤癌组织中LCE3C主要分布在表皮的角质层. 激光共聚焦结果显示,LCE3C主要分布在细胞外基质( ECM )中;Western blot 结果显示,与角质形成细胞( HaCaT)比较, A431 细胞中 GRHL3 表达量显著降低,而LCE3C表达量明显增高;过量表达 GRHL3 的细胞( A431/GRHL3)LCE3C表达量显著降低.结论 与正常皮肤组织比较, LCE3C在皮肤癌中的表达增加,主要分布在皮肤角质层的ECM;转录因子GRHL3与皮肤癌组织LCE3C的表达呈负相关性. 展开更多
关键词 皮肤鳞状细胞癌 基底细胞癌 细胞定位
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蛋白酶体抑制剂诱导t(8;21)急性髓系白血病细胞凋亡
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作者 冯婷婷 秦宜德 +1 位作者 刘莹 余贤军 《湖北医药学院学报》 CAS 2015年第5期443-446,451共5页
目的:探讨蛋白酶体抑制剂(PSI)对t(8;21)急性髓系白血病治疗的分子生物学机制。方法:t(8;21)白血病细胞Kasumi-1经5,8,10,25,50nmol/LPSI处理后,进行细胞计数和MTT检测,并且使用流式细胞分选和蛋白免疫印迹方法检测不... 目的:探讨蛋白酶体抑制剂(PSI)对t(8;21)急性髓系白血病治疗的分子生物学机制。方法:t(8;21)白血病细胞Kasumi-1经5,8,10,25,50nmol/LPSI处理后,进行细胞计数和MTT检测,并且使用流式细胞分选和蛋白免疫印迹方法检测不同浓度的药物处理下细胞的调亡情况。结果:蛋白酶体抑制剂PSI诱导t(8;21)白血病细胞Kasumi-1在5~50nmol/L时间浓度梯度的自血病细胞调亡,以及对患者细胞有抑制增长作用,并发现随着药物作用时间的延长,表征凋亡的caspase.3条带的切割随之愈加的显著。这些结果表明,PSI诱导的细胞凋亡是通过caspase-3激活凋亡途径。结论:PSI可能是一个潜在的治疗t(8;21)白血病,并通过靶向AML1-ETO蛋白和激活凋亡通路治疗白血病的有效药物。 展开更多
关键词 t(8 21)急性髓系白血病 蛋白酶体抑制剂 凋亡
IL-31对人支气管上皮16HBE细胞VEGF、EGF及EGFR表达的影响及作用机制 预览 被引量:1
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作者 黄海良 丁伟伟 +1 位作者 张胜权 罗欣 《基础医学与临床》 CSCD 2015年第10期1346-1350,共5页
目的探讨IL.31对16HBE细胞VEGF、EGF和EGFR表达的影响及作用机制。方法IL一31单独及分别联合P38MAPK信号阻断剂SB203580或JNK信号阻断剂SP600125处理16HBE细胞,分别用real-time PCR和Western blot检测VEGF、EGF和EGFR mRNA及蛋白表达... 目的探讨IL.31对16HBE细胞VEGF、EGF和EGFR表达的影响及作用机制。方法IL一31单独及分别联合P38MAPK信号阻断剂SB203580或JNK信号阻断剂SP600125处理16HBE细胞,分别用real-time PCR和Western blot检测VEGF、EGF和EGFR mRNA及蛋白表达水平;采取Western blot分别检测P38MAPK和JNK的磷酸化表达水平。结果与对照组相比,IL-31显著上调VEGF、EGF和EGFRmRNA和蛋白的表达(P〈0.01),并且能显著上调P38MAPK和JNK的磷酸化表达(P〈0.01)。与IL-31组相比,IL-31+SB203580或SB203580组p-P38MAPK的表达水平均明显下降(P〈0.01),而IL-31+SP600125或SP600125组p-JNK的表达水平均明显下降(P〈0.01)。与IL-31组相比,IL-31联合SB203580或SP600125组VEGF的表达均明显下降(P〈0.01),而EGF和EGFR的表达在IL-31联合SB203580组显著下降(P〈0.01)。结论IL-31可通过激活P38MAPK及JNK信号通路而诱导VEGF表达;而IL-31诱导的EGF和EGFR表达则主要通过P38MAPK信号通路介导。 展开更多
关键词 白细胞介素-31 16HBE 血管内皮生长因子 细胞表皮生长因子 P38 MAPK JNK
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