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塞尼卡谷病毒3ABC蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备 预览
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作者 连凯琪 周玲玲 +4 位作者 张明亮 张慢 王英杰 林正丹 宋玉伟 《河南农业科学》 北大核心 2020年第1期123-127,共5页
为了开发塞尼卡谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)的检测试剂盒,克隆3 ABC基因进行原核表达和纯化,并将纯化的3ABC蛋白免疫大鼠,制备抗3ABC蛋白的多克隆抗体。通过Western blot鉴定制备的多克隆抗体与表达的3ABC蛋白的特异性识别能力,通... 为了开发塞尼卡谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)的检测试剂盒,克隆3 ABC基因进行原核表达和纯化,并将纯化的3ABC蛋白免疫大鼠,制备抗3ABC蛋白的多克隆抗体。通过Western blot鉴定制备的多克隆抗体与表达的3ABC蛋白的特异性识别能力,通过ELISA测定多克隆抗体的效价。结果显示,3 ABC基因在大肠杆菌中大量表达,且主要以包涵体形式表达,重组蛋白分子质量约为55 ku,经纯化后得到单一条带。免疫大鼠制备的多克隆抗体效价大于1∶64000,且与表达的3ABC重组蛋白发生特异性反应。综上,在大肠杆菌中成功表达了SVV 3ABC蛋白,且表达的重组蛋白具有免疫原性。 展开更多
关键词 塞尼卡谷病毒 3ABC蛋白 原核表达 蛋白质纯化 多克隆抗体
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猪IgG1-Fc与圆环病毒3型Cap融合基因的原核表达与分析
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作者 周玲玲 连凯琪 +4 位作者 张明亮 王英杰 张慢 宋玉伟 张福良 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第17期97-100,共4页
为了探索猪Ig G1-Fc(pIgG1-Fc)与猪圆环病毒3型(PCV-3) Cap融合基因在大肠杆菌中的表达效果,试验采用PCR方法扩增pIgG1-Fc-Cap136~645融合基因,通过PCR和双酶切技术鉴定重组质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc-Cap136~645,使用SDS-PAGE和Western-b... 为了探索猪Ig G1-Fc(pIgG1-Fc)与猪圆环病毒3型(PCV-3) Cap融合基因在大肠杆菌中的表达效果,试验采用PCR方法扩增pIgG1-Fc-Cap136~645融合基因,通过PCR和双酶切技术鉴定重组质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc-Cap136~645,使用SDS-PAGE和Western-blot方法对该重组质粒进行原核表达与鉴定,并进行可溶性分析。结果表明:PCR扩增得到pIgG1-Fc-Cap136~645融合基因,大小为1 221 bp,共编码407个氨基酸,并成功构建重组质粒pET30a(+)-p IgG1-Fc-Cap136~645;该重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中获得表达,表达的融合蛋白分子质量约为53. 0 ku,在25℃、IPTG终浓度为0. 5 mmol/L、诱导8小时时,重组蛋白pIgG1-Fc-Cap136~645的表达量最高,且主要以包涵体形式表达。 展开更多
关键词 Fc片段 猪圆环病毒3型 Cap融合基因 原核表达 可溶性
罗斯308肉鸡Gompertz生长模型的建立 预览
3
作者 马发顺 景园园 +2 位作者 宋玉伟 张明亮 李进萍 《安阳工学院学报》 2019年第2期89-91,99共4页
为掌握罗斯308肉鸡生长发育的特点和规律,测量了0~5周龄罗斯308肉鸡的体重,计算了标准差、变异系数和均匀度等指标,建立了Gompertz生长模型,获得了生长发育参数和生长发育指标。结果表明:Gompertz生长模型能很好地模拟罗斯308肉鸡的生... 为掌握罗斯308肉鸡生长发育的特点和规律,测量了0~5周龄罗斯308肉鸡的体重,计算了标准差、变异系数和均匀度等指标,建立了Gompertz生长模型,获得了生长发育参数和生长发育指标。结果表明:Gompertz生长模型能很好地模拟罗斯308肉鸡的生长过程,模型参数A、B、k分别为6098.92、4.68、0.26,R2为0.9995;根据该模型计算的拐点周龄为5.94周,拐点日龄为41.55d,拐点体重为2243.67g,最大周增重为583.35g,最大日增重为83.34g;累积生长、绝对生长和相对生长都符合肉鸡生长发育的一般规律。此研究结果可以作为合理饲养和优化管理的重要参考。 展开更多
关键词 罗斯308肉鸡 体重 Gompertz生长模型 生长参数 生长发育指标
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冬瓜栽培技术 预览
4
作者 路志强 路志芳 《上海蔬菜》 2019年第1期27-27,30共2页
该文介绍了冬瓜的特征特性,并从播种、定植、肥水管理、病虫害防治、采收等方面总结了冬瓜的栽培技术,供广大农户参考。
关键词 冬瓜 特征特性 栽培技术
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栎空腔瘿蜂虫瘿内天敌调查及其优势天敌生物学特性 预览
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作者 张元臣 苏山玉 +3 位作者 刘苹 张玉晓 张坤朋 王景顺 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第2期137-142,共6页
【目的】栎空腔瘿蜂(膜翅目:瘿蜂科)危害栓皮栎及麻栎的重要害虫,该虫形成虫瘿并在虫瘿内取食危害,隐蔽性强,导致对其进行化学防治非常困难,而用寄生性天敌进行防治可能成为一种非常有效的方法。本研究旨在明确栎空腔瘿蜂虫瘿内天敌的... 【目的】栎空腔瘿蜂(膜翅目:瘿蜂科)危害栓皮栎及麻栎的重要害虫,该虫形成虫瘿并在虫瘿内取食危害,隐蔽性强,导致对其进行化学防治非常困难,而用寄生性天敌进行防治可能成为一种非常有效的方法。本研究旨在明确栎空腔瘿蜂虫瘿内天敌的种类和生物特性,为进一步利用天敌防治栎空腔瘿蜂提供科学依据。【方法】本文通过对栎空腔瘿蜂越冬期和生长期虫瘿进行田间调查和室内解剖,调查虫瘿内天敌种类及其优势天敌生活史和行为特性。【结果】栎空腔瘿蜂虫瘿内主要有3种优势天敌,均以幼虫在无性虫瘿内越冬。长尾小蜂Torymus sp. 1年发生2代,越冬成虫5月上旬开始出现,产卵于无性虫瘿内,7月上旬第1代成虫出现;广肩小蜂1年发生2代,越冬成虫5月上旬开始羽化,成虫产卵于无性虫瘿内,6月下旬第1代成虫羽化;金小蜂1年发生3代,越冬成虫4月上旬羽化,成虫产卵于有性虫瘿内,第1代成虫5月上旬羽化,成虫羽化后将卵产于无性虫瘿内,第2代成虫6月下旬开始羽化。【结论】栎空腔瘿蜂虫瘿内主要优势天敌为长尾小蜂、广肩小蜂和金小蜂,可作为栎空腔瘿蜂幼虫生物防治的有效手段。 展开更多
关键词 栎空腔瘿蜂 寄生性天敌 生物防治 生物学特性 森林昆虫
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豫北地区猪源大肠杆菌耐药性及基因多态性分析 预览
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作者 张明亮 周玲玲 +3 位作者 连凯琪 周孝蕊 宋玉伟 王双山 《中国兽药杂志》 2019年第4期16-22,共7页
为了解豫北地区规模化养殖场猪源大肠杆菌的耐药性及基因多态性,对分离的21株猪源大肠杆菌进行药物敏感实验,采用PCR技术对其耐药基因进行检测,RAPD技术进行基因多态性分析。结果表明:豫北地区规模化养殖场分离的猪源性大肠杆菌菌株对常... 为了解豫北地区规模化养殖场猪源大肠杆菌的耐药性及基因多态性,对分离的21株猪源大肠杆菌进行药物敏感实验,采用PCR技术对其耐药基因进行检测,RAPD技术进行基因多态性分析。结果表明:豫北地区规模化养殖场分离的猪源性大肠杆菌菌株对常见16种抗生素存在不同情况的耐药性。其中对四环素、红霉素、麦迪霉素、阿莫西林、磺胺异恶唑、环丙沙星、新生霉素、复方新诺明、恩诺沙星、甲氧苄啶的耐药率均为100%,对庆大霉素、洛美沙星的耐药率为85%以上,对其他药物的耐药率相对较低;PCR检测得到8种耐药基因的条带;对菌株进行RAPD分析得到7种不同的基因型。大肠杆菌极易产生耐药性,耐药基因广泛存在于耐药菌株中,但耐药表型与耐药基因之间无绝对相关性。豫北地区猪源大肠杆菌感染多重耐药十分严重,严重影响了该地区猪源大肠杆菌病的诊治和预防。 展开更多
关键词 猪源大肠杆菌 药物敏感实验 耐药基因 RAPD技术
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郑州市猫皮肤病流行病学调查报告
7
作者 景园园 张明亮 +1 位作者 师航 王双山 《当代畜牧》 2019年第8期39-41,共3页
皮肤病是兽医临床上常见病症之一,发病率较高,约占临床病例的25%。皮肤病能引起猫皮肤瘙痒、脱毛、结痂和皮肤异常等症状。笔者收集了郑州市8家宠物医院966只患病猫,通过临床诊断和实验室诊断最终确诊193只猫患有皮肤病。对193只患病猫... 皮肤病是兽医临床上常见病症之一,发病率较高,约占临床病例的25%。皮肤病能引起猫皮肤瘙痒、脱毛、结痂和皮肤异常等症状。笔者收集了郑州市8家宠物医院966只患病猫,通过临床诊断和实验室诊断最终确诊193只猫患有皮肤病。对193只患病猫的研究表明:患病猫以寄生虫性皮肤病发病率最高;从年龄趋势来看,年龄越高患皮肤病的猫越少;从发病部位来看,耳朵发病最多。本研究为郑州市猫皮肤病的防治提供了理论依据。 展开更多
关键词 调查 皮肤病 寄生虫性皮肤病
禽大肠杆菌研究进展
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作者 曹岩岩 张明亮 +2 位作者 连凯琪 周开运 王双山 《当代畜牧》 2019年第10期11-13,共3页
近年来,禽类的集约化、规模化养殖越来越普遍,与此同时,禽类大肠杆菌病的感染率和死亡率也逐年上升,该病已成为危害养禽业的主要细菌性传染病之一。本文就禽大肠杆菌病病原的现状、耐药机制以及防控方法等方面进行了介绍,以期为禽大肠... 近年来,禽类的集约化、规模化养殖越来越普遍,与此同时,禽类大肠杆菌病的感染率和死亡率也逐年上升,该病已成为危害养禽业的主要细菌性传染病之一。本文就禽大肠杆菌病病原的现状、耐药机制以及防控方法等方面进行了介绍,以期为禽大肠杆菌病的防治提供理论依据。 展开更多
关键词 大肠杆菌 大肠杆菌病 耐药性
黄芪多糖生物活性检测模型的建立
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作者 元雪浈 马发顺 +5 位作者 段沙沙 王军红 司慧民 吴志明 李华岑 常钰江 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第11期134-136,共3页
为了提高黄芪多糖生物活性检测的精确性和灵敏性,试验采用《中华人民共和国兽药典(二部)》(2015版)提供的检测方法,对河南省多家兽药厂提供的黄芪多糖样品进行生物活性检测,并建立黄芪多糖生物活性检测模型。结果表明:黄芪多糖试验组昆... 为了提高黄芪多糖生物活性检测的精确性和灵敏性,试验采用《中华人民共和国兽药典(二部)》(2015版)提供的检测方法,对河南省多家兽药厂提供的黄芪多糖样品进行生物活性检测,并建立黄芪多糖生物活性检测模型。结果表明:黄芪多糖试验组昆明鼠的体重与胸腺质量之间具有极显著的相关性(P<0.01),并且脾脏质量和脾脏指数之间呈强正相关(P<0.01);而对照组昆明鼠的胸腺质量与体重、脾脏质量之间均为负相关(P>0.05),但脾脏质量与脾脏指数之间呈强正相关(P<0.01);试验组的检测模型为Y1=5.5927-0.2255X(11)+0.0392X12+0.0021X13(R^2为0.9990),对照组的检测模型为Y2=4.5066-0.1723X21+0.0382X22+0.0005X23(R^2为0.9993)。说明所建立的检测模型可应用于黄芪多糖生物活性的检测。 展开更多
关键词 黄芪多糖 生物活性 体重 脾脏质量 胸腺质量 检测模型
棉花果枝节间伸长规律研究 预览
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作者 王俊宜 陈伟 +9 位作者 姚金波 李燕 赵兰杰 郭岩 袁黎 房圣涛 李夏轩 李秋琳 吕有军 张永山 《中国棉花》 2019年第9期19-21,35共4页
棉花果枝节间长度性状是棉花株型的重要组成部分,适宜的节间长度能够为棉花群体提供良好的光能条件,降低蕾铃脱落比例,提高棉花产量,也能提高棉花机械采收适应性。通过对Ⅲ式果枝材料TM-1和Ⅰ式果枝材料川农72318的节间长度调查,发现Ⅲ... 棉花果枝节间长度性状是棉花株型的重要组成部分,适宜的节间长度能够为棉花群体提供良好的光能条件,降低蕾铃脱落比例,提高棉花产量,也能提高棉花机械采收适应性。通过对Ⅲ式果枝材料TM-1和Ⅰ式果枝材料川农72318的节间长度调查,发现Ⅲ式果枝其节间伸长速率符合“慢-快-慢”生长规律,分析TM-1和川农72318的节间长度差异是由于川农72318果枝节间伸长速率慢并且没有明显的快速伸长期造成的,这一结果对解释棉花Ⅰ式果枝形成原因具有重要意义。 展开更多
关键词 棉花 节间长度 株型 伸长速率
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角鲨烯/γ-环糊精包合物制备及分子模拟 预览
11
作者 张光杰 谷令彪 +2 位作者 周民生 袁超 刘金洲 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第20期28-33,共6页
采用水溶液法结合冷冻干燥法制备角鲨烯/γ-环糊精包合物,应用相溶解度法、傅里叶变换红外光谱及氢谱核磁共振对包合物进行表征,并对包合物分子结构进行模拟.结果表明,当角鲨烯过量时,形成的包合物主客物质的量比大多为1:1;而当γ-环糊... 采用水溶液法结合冷冻干燥法制备角鲨烯/γ-环糊精包合物,应用相溶解度法、傅里叶变换红外光谱及氢谱核磁共振对包合物进行表征,并对包合物分子结构进行模拟.结果表明,当角鲨烯过量时,形成的包合物主客物质的量比大多为1:1;而当γ-环糊精过量时,可形成平均主客物质的量比为3.45:1的包合物.包合物的分子结构为角鲨烯链状分子将γ-环糊精环状分子均匀地"串联"在一起,且随着主客物质的量比增加,包合物分子结构趋于稳定.由于角鲨烯分子链长所限,理论上最佳主客物质的量比为4:1.包合物的包合常数随温度升高而增大,在55℃条件下最大可达1778.086 L/mol,且在此温度下最大可使角鲨烯的水溶性提高为原来的309倍.根据能量变化推断,熵增加是角鲨烯分子进入γ-环糊精空腔的主要驱动力. 展开更多
关键词 角鲨烯 Γ-环糊精 包合物 分子模拟
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不同环糊精对角鲨烯的包合作用
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作者 张光杰 杜磊 +2 位作者 路志芳 袁超 陈笛 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第4期703-707,共5页
角鲨烯是一种含有6个非共轭双键的直链三萜,其生理功能显著,但因水溶性及稳定性较差,限制了其应用。采用相溶解度法,在25、40和55℃下,考察了α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、羟丙基-β-环糊精及甲基-β-环糊精对角鲨烯的包合作用,绘... 角鲨烯是一种含有6个非共轭双键的直链三萜,其生理功能显著,但因水溶性及稳定性较差,限制了其应用。采用相溶解度法,在25、40和55℃下,考察了α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、羟丙基-β-环糊精及甲基-β-环糊精对角鲨烯的包合作用,绘制相溶解图并计算包合过程中的热力学参数。结果表明:各相溶解图均为AL型,且γ-环糊精的包合效果及增溶效果最为显著。γ-环糊精对角鲨烯的包合常数(K)最大可达1778.0860 L/mol,最大可将角鲨烯的溶解度增大至原来的309.0935倍。包合过程中的热力学参数焓变(ΔH)及熵变(ΔS)均为正值,而吉布斯自由能(ΔG)均为负值,表明包合过程为吸热的自发反应,且无序化增加(熵增加)是环糊精空腔包封角鲨烯分子的主要驱动力。 展开更多
关键词 相溶解度 环糊精 角鲨烯 包合作用 食品化学品
猪圆环病毒3型Rep蛋白的表达与多克隆抗体制备
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作者 连凯琪 周玲玲 +4 位作者 张明亮 张杰 王英杰 宋玉伟 王双山 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2107-2111,共5页
为研究猪圆环病毒3型(PCV3)Rep基因在大肠杆菌中表达产物的反应原性和免疫原性,本试验对Rep基因进行原核表达和纯化,鉴定表达产物与PCV3阳性血清的反应性;制备重组Rep蛋白的多克隆抗体,Western blot鉴定多克隆抗体与重组Rep蛋白的特异... 为研究猪圆环病毒3型(PCV3)Rep基因在大肠杆菌中表达产物的反应原性和免疫原性,本试验对Rep基因进行原核表达和纯化,鉴定表达产物与PCV3阳性血清的反应性;制备重组Rep蛋白的多克隆抗体,Western blot鉴定多克隆抗体与重组Rep蛋白的特异性识别能力,通过ELISA测定多克隆抗体的效价。结果显示,Rep在大肠杆菌中获得大量表达,且主要以包涵体形式存在,重组蛋白相对分子质量约为32000,经纯化后得到单一条带。表达的重组Rep蛋白可以与PCV3阳性血清发生反应。制备的大鼠抗Rep血清与表达的重组Rep蛋白发生特异性反应,且效价大于1∶32000。表明本试验表达的Rep具有良好的免疫原性和反应原性,为PCV3的ELISA诊断试剂盒研制提供依据。 展开更多
关键词 PCV-3 REP蛋白 包涵体 原核表达 蛋白纯化
鼠伤寒沙门菌LH430株asd基因缺失株平衡致死系统的构建及生物学特性分析 预览
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作者 张明亮 孙长江 +2 位作者 顾敬敏 崔子寅 韩文瑜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第11期3341-3349,共9页
本研究旨在构建基于减毒鼠伤寒沙门菌的平衡致死系统。将打靶基因片段Cat基因重组入鼠伤寒沙门菌LH430株asd基因位置,之后将温敏型质粒pCP20转入菌体中用以消除Cat基因片段,通过PCR技术两步法筛选出缺失株Δasd LH430;将asd+的原核表达... 本研究旨在构建基于减毒鼠伤寒沙门菌的平衡致死系统。将打靶基因片段Cat基因重组入鼠伤寒沙门菌LH430株asd基因位置,之后将温敏型质粒pCP20转入菌体中用以消除Cat基因片段,通过PCR技术两步法筛选出缺失株Δasd LH430;将asd+的原核表达质粒pYA3493转入Δasd LH430,经PCR及测序鉴定表明鼠伤寒沙门菌平衡致死系统Δasd LH430(pYA3493)构建成功。对构建的基因缺失株研究表明,该缺失株失去了在二氨基庚二酸(DAP)阴性环境中生存的能力;糖发酵试验表明,缺失菌株在利用碳源的能力方面与亲本菌株保持一致;9种生化试验结果显示,缺失菌株遗传了亲本菌株的生化特性;遗传稳定性试验表明,缺失菌株能够稳定遗传缺失的423 bp的基因片段;将绿色荧光基因转入所构建的平衡致死系统,成功构建携带绿色荧光基因的重组菌Δasd LH430(pYA-gfp),对其研究表明该重组菌能够有效表达绿色荧光蛋白。本研究成功构建了鼠伤寒沙门菌平衡致死系统Δasd LH430(pYA3493),能够有效表达所携带的基因,该系统可作为疫苗活载体来携带外源基因。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 平衡致死系统 活疫苗载体 生物学特性
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貂源铜绿假单胞菌耐药性及生物学特性 预览
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作者 张明亮 张淼丹 +4 位作者 闫新武 孙长江 顾敬敏 崔子寅 韩文瑜 《河南农业科学》 北大核心 2019年第5期122-129,共8页
为了解貂源铜绿假单胞菌流行株基本特性,对分离的20株铜绿假单胞菌进行药物敏感性试验、血清型鉴定、 ToxA 基因检测、强毒株筛选及绝对致死量(LD 100 )测定。结果表明,铜绿假单胞菌分离株耐药现象比较严重,对氨苄西林、头孢呋辛、头孢... 为了解貂源铜绿假单胞菌流行株基本特性,对分离的20株铜绿假单胞菌进行药物敏感性试验、血清型鉴定、 ToxA 基因检测、强毒株筛选及绝对致死量(LD 100 )测定。结果表明,铜绿假单胞菌分离株耐药现象比较严重,对氨苄西林、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻吩、头孢噻肟、头孢西丁、头孢唑林和四环素不敏感,对妥布霉素敏感率为95%;铜绿假单胞菌分离株的血清型为G型和B型,分别占85%和15%;20株铜绿假单胞菌均能检测出毒素基因 ToxA;小鼠致死性试验表明,铜绿假单胞菌分离株之间毒力差异很大,少数菌株如ZHDL9、ZHDL6等均表现出较强的毒力。以菌株ZHDL9为代表株建立小鼠鼻腔感染模型,采用建立的感染模型测定得菌株ZHDL9对小鼠的LD 100 为5×10 7 cfu。由此可见,分离的20株铜绿假单胞菌对临床常用抗生素耐药严重,对妥布霉素的敏感率为95%,提示该种抗生素可用于临床治疗水貂出血性肺炎,而菌株ZHDL9可作为生物制品研发的候选菌株。 展开更多
关键词 水貂 铜绿假单胞菌 出血性肺炎 耐药性 生物学特性
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罗斯308肉鸡最佳生长模型的建立
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作者 马发顺 温艳洁 +1 位作者 梁秀丽 宋玉伟 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第7期24-27,共4页
为了掌握罗斯308肉鸡的生长发育规律,随机抽测0~5周龄罗斯308肉鸡60只,进行了体重测量、生长模型拟合和生长发育指标计算。结果表明:Gompertz模型为最佳模型,von Bertalanffy模型次之,Logistic模型拟合效果最差。建立的Gompertz模型参数... 为了掌握罗斯308肉鸡的生长发育规律,随机抽测0~5周龄罗斯308肉鸡60只,进行了体重测量、生长模型拟合和生长发育指标计算。结果表明:Gompertz模型为最佳模型,von Bertalanffy模型次之,Logistic模型拟合效果最差。建立的Gompertz模型参数A、B、k分别为6594.35、4.69、0.25(R^2为0.9994),获得的拐点日龄为42.05d,拐点周龄为6.01周,拐点体重为2425.93g,最大日增重为89.27g,最大周增重为624.92g。此研究结果可作为合理饲养罗斯308肉鸡的重要参考。 展开更多
关键词 罗斯308肉鸡 体重 最佳生长模型 生长参数 生长发育指标
铜绿假单胞菌F190-342-I21-83基因重组鼠伤寒沙门氏杆菌生物学特性研究
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作者 张明亮 孙长江 +2 位作者 顾敬敏 崔子寅 韩文瑜 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第21期1-5,共5页
为了研究载体菌株Δasd LH430(pYA3493)携带外源基因的能力,试验采用分子生物学方法构建了携带铜绿假单胞菌的保护性抗原基因F190-342-I21-83(F1I2)的重组表达质粒pYA-F1I2,将其重组到减毒的鼠伤寒沙门氏杆菌Δasd LH430(pYA3493)中,成... 为了研究载体菌株Δasd LH430(pYA3493)携带外源基因的能力,试验采用分子生物学方法构建了携带铜绿假单胞菌的保护性抗原基因F190-342-I21-83(F1I2)的重组表达质粒pYA-F1I2,将其重组到减毒的鼠伤寒沙门氏杆菌Δasd LH430(pYA3493)中,成功构建重组菌株Δasd LH430(pYAF1I2),并研究了重组菌株的遗传稳定性、表型、毒力。结果表明:构建的重组菌株Δasd LH430(pYAF1I2)能够稳定遗传所携带的F190-342和I21-83基因;重组菌株生长速度略低于亲本菌株,且遗传了亲本菌株的糖利用能力,在碳源利用方面没有改变;与亲本菌株相比,重组菌株毒力略有下降,对动物更加安全。说明重组菌株Δasd LH430(pYA-F1I2)可作为铜绿假单胞菌-沙门氏杆菌二联疫苗的候选菌株。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门氏杆菌 铜绿假单胞菌 减毒 活载体 疫苗 生物学特性
猪圆环病毒3型Cap蛋白多克隆抗体的制备 预览
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作者 王英杰 周玲玲 +3 位作者 林正丹 张慢 时志琪 马园园 《今日畜牧兽医》 2019年第4期9-9,2共2页
为制备猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白的多克隆抗体,本试验将重组质粒pCold-Cap导入含有pG-Tf2伴侣质粒的感受态细胞E.coliBL21中,通过异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,表达的融合蛋白进行切胶纯化后与氟氏佐剂乳化免疫大鼠。结果表... 为制备猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白的多克隆抗体,本试验将重组质粒pCold-Cap导入含有pG-Tf2伴侣质粒的感受态细胞E.coliBL21中,通过异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,表达的融合蛋白进行切胶纯化后与氟氏佐剂乳化免疫大鼠。结果表明,pCold-Cap重组质粒被成功构建,且在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,其大小为29ku,免疫大鼠制备的多克隆抗体血清效价大于1︰32000,且与表达的重组Cap蛋白发生特异性反应。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 CAP蛋白 多克隆抗体 冷休克表达体系
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猪IgG1-Fc基因的克隆、原核表达及表达条件优化 预览
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作者 连凯琪 周玲玲 +3 位作者 王英杰 李翠 宋玉伟 张明亮 《江苏农业科学》 2019年第15期91-94,共4页
为了探索猪IgG1-Fc(pIgG1-Fc)基因在大肠杆菌中的高效表达,首先通过反转录PCR(RT-PCR)扩增pIgG1-Fc基因,并构建重组表达质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,然后通过优化异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度... 为了探索猪IgG1-Fc(pIgG1-Fc)基因在大肠杆菌中的高效表达,首先通过反转录PCR(RT-PCR)扩增pIgG1-Fc基因,并构建重组表达质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,然后通过优化异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、菌体培养温度及菌体培养时间,实现pIgG1-Fc重组蛋白的高效表达。结果表明,成功克隆了pIgG1-Fc的基因666bp,共编码222个氨基酸;重组原核表达质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc经过酶切和测序证明构建正确,重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中能够表达,表达的融合蛋白分子量约为36ku。其最佳表达条件如下:在25℃条件下加入终浓度为1mmol/L的IPTG诱导6h可形成大量包涵体蛋白。pIgG1-Fc基因被成功克隆并原核表达,为进一步研究该蛋白的功能及实现其他蛋白与pIgG1-Fc融合后原核表达奠定了基础,为制备能与猪IgG1结合的二抗提供了材料。 展开更多
关键词 FC 原核表达 包涵体 融合蛋白
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豫北新发猪圆环病毒3型的鉴定及全基因序列分析
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作者 连凯琪 周玲玲 +4 位作者 张明亮 张慢 王英杰 宋玉伟 关现军 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第5期5-9,共5页
为了对疑似新发猪圆环病毒3型(PCV-3)感染病例进行确诊,试验采用PCR技术鉴定1例疑似感染PCV-3的猪,并将鉴定得到的PCV-3毒株的全基因组分成2个片段进行PCR扩增,分别构建到pMD18-T载体上测序,通过MegAlign软件对全基因序列进行同源性和... 为了对疑似新发猪圆环病毒3型(PCV-3)感染病例进行确诊,试验采用PCR技术鉴定1例疑似感染PCV-3的猪,并将鉴定得到的PCV-3毒株的全基因组分成2个片段进行PCR扩增,分别构建到pMD18-T载体上测序,通过MegAlign软件对全基因序列进行同源性和遗传进化分析,利用在线生物信息学软件预测Cap和Rep蛋白的信号肽、核定位信号和B细胞表位。结果表明:成功鉴定出1株豫北新发PCV-3毒株,将此毒株命名为PCV-3/CN/HNAY-201806;对2个基因片段测序后拼接发现其基因组长度为2 000 bp(登录号为MH683051);同源性和遗传进化分析显示,PCV-3/CN/HNAY-201806与吉林长春毒株PCV-3/CHN/JLCC2016 (登录号为KY421348. 1)核苷酸同源性(99. 6%)较高,与广西毒株PCV-3/GXFC2017-7(登录号为MG250186. 1)同源性(98. 8%)较低,不同地区间PCV-3基因组有差异但较小;对该毒株Cap和Rep蛋白序列分析显示,2个蛋白都没有信号肽序列,但都有核定位信号,Cap蛋白有9个B细胞表位,Rep蛋白有14个B细胞表位。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 基因组 序列分析 Cap基因 Rep基因 B细胞表位
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