期刊文献+
共找到69篇文章
< 1 2 4 >
每页显示 20 50 100
吸烟者外周血不同T淋巴细胞亚群在体外扩增中的异常增殖及功能研究 预览
1
作者 葛汝村 李培培 +4 位作者 李安娜 徐林 戴晓宇 王换换 李栋 《中国医药生物技术》 2019年第2期149-154,共6页
目的检测吸烟对外周血T淋巴细胞体外扩增培养过程中免疫杀伤细胞和调节性T细胞增殖和功能的不同影响。方法选择平均年龄30岁的男性吸烟者27例与不吸烟男性健康对照组16例,采用密度梯度离心法从外周血中分离淋巴细胞,添加抗CD3和抗CD28抗... 目的检测吸烟对外周血T淋巴细胞体外扩增培养过程中免疫杀伤细胞和调节性T细胞增殖和功能的不同影响。方法选择平均年龄30岁的男性吸烟者27例与不吸烟男性健康对照组16例,采用密度梯度离心法从外周血中分离淋巴细胞,添加抗CD3和抗CD28抗体,以及IL-2和IFN-γ等多种细胞因子扩增培养15d,计算细胞的增殖率,并利用流式细胞术检测扩增后各组淋巴细胞中免疫杀伤细胞(CD3^+CD8^+细胞、CD3^+CD56^+细胞)以及调节性T细胞(CD4^+CD25^+细胞)的比率;CCK8法检测扩增后的免疫杀伤细胞对HeLa细胞的杀伤力,PCR方法检测扩增后淋巴细胞部分功能相关基因的表达。结果吸烟者外周血淋巴细胞增殖能力减弱,且免疫杀伤细胞所占比例低,调节性T细胞所占比例高;吸烟者细胞免疫杀瘤细胞的杀伤力明显低于不吸烟对照组,吸烟组淋巴细胞表达的TNF-α、颗粒酶、穿孔素和IFN-γ等均有不同程度降低,其中颗粒酶和颗粒溶解素下调较为明显;但吸烟组TGF-β1的表达量显著上调,约为对照组的7倍。结论吸烟导致扩增后的外周血淋巴细胞中免疫杀伤细胞所占比例减少,调节性T细胞比例增加,吸烟组TGF-β1的表达增加进一步抑制了免疫杀伤细胞的活化和增殖。 展开更多
关键词 吸烟 T淋巴细胞 调节性 转化生长因子-Β 免疫杀伤细胞
在线阅读 下载PDF
3D培养脐带间充质干细胞治疗1型糖尿病及其免疫调控机制 预览
2
作者 刘可娜 李栋 杨光升 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第5期692-697,共6页
背景:脐带间充质干细胞可分化成胰岛β细胞用于移植治疗1型糖尿病,但需要进一步提高疗效,并研究其免疫调节机制。目的:观察3D培养的脐带间充质干细胞移植对1型糖尿病小鼠的疗效及免疫调节机制。方法:组织贴壁法分离脐带间充质干细... 背景:脐带间充质干细胞可分化成胰岛β细胞用于移植治疗1型糖尿病,但需要进一步提高疗效,并研究其免疫调节机制。目的:观察3D培养的脐带间充质干细胞移植对1型糖尿病小鼠的疗效及免疫调节机制。方法:组织贴壁法分离脐带间充质干细胞并进行3D培养,扫描电镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志物;采用链脲佐菌素诱导1型糖尿病小鼠模型,2D干细胞移植组和3D干细胞移植组于造模7 d后尾静脉注射脐带间充质干细胞(5×106/只),对照组和模型组小鼠注射等体积生理盐水。移植后每周检测各组小鼠空腹血糖,连续4周;移植后30 d,制备小鼠单个脾细胞悬液,流式细胞术检测T细胞亚群变化;移植后30 d,ELISA试剂盒检测各组小鼠血清中细胞因子白细胞介素4,白细胞介素10,白细胞介素2,γ-干扰素水平。结果与结论:①3D培养体系下脐带间充质干细胞生长良好,高表达细胞表面标志物CD44,CD73、CD90和CD105;②细胞移植2-4周后,小鼠血糖水平显著下降,与模型组相比差异有显著性意义(P<0.05);3D干细胞移植组血糖水平低于2D干细胞移植组,第4周差异有显著性意义(P<0.05);③与模型组相比,干细胞移植组Th1细胞百分比下降,Th2细胞与Treg细胞百分比显著升高(P<0.01);与2D干细胞移植组相比,3D干细胞移植组Th1细胞亚群百分比降低,Th2细胞亚群和Treg细胞百分比升高(P<0.05);④与模型组相比,干细胞移植组白细胞介素2和γ-干扰素水平降低,而白细胞介素4和白细胞介素10水平明显升高;与2D干细胞移植组相比,3D干细胞移植组白细胞介素2水平降低,白细胞介素4和白细胞介素10水平升高(P<0.05);⑤结果表明,3D培养的脐带间充质干细胞移植治疗1型糖尿病小鼠效果优于2D培养的脐带间充质干细胞,其机制可能与上调调节性T细胞,维护体内Th1/T 展开更多
关键词 干细胞 3D培养 脐带间充质干细胞 表面标志物 1型糖尿病 血糖 免疫调节 T细胞亚群 调节性T细胞 细胞因子
在线阅读 下载PDF
脂肪间充质干细胞条件培养基制备温敏凝胶外用治疗皮肤烫伤 预览 被引量:3
3
作者 刘培 胡振生 +2 位作者 马玲 王换换 李栋 《中国组织工程研究》 北大核心 2017年第30期4853-4860,共8页
背景:有研究显示脂肪干细胞参与烫伤后皮肤组织的修复,但利用脂肪干细胞分泌物制备水凝胶,并治疗皮肤烫伤的研究尚未见报道。目的:分析人脂肪干细胞条件培养基水凝胶外用治疗小鼠皮肤烫伤模型的疗效。方法:采用酶解联合贴壁培养法... 背景:有研究显示脂肪干细胞参与烫伤后皮肤组织的修复,但利用脂肪干细胞分泌物制备水凝胶,并治疗皮肤烫伤的研究尚未见报道。目的:分析人脂肪干细胞条件培养基水凝胶外用治疗小鼠皮肤烫伤模型的疗效。方法:采用酶解联合贴壁培养法,从脂肪组织培养获得脂肪干细胞并进行鉴定。取稳定增殖期细胞,收集其条件培养基,加入壳聚糖、甘露醇、β-甘油磷酸钠和透明质酸等制备温敏水凝胶,同时用新鲜脂肪干细胞完全培养基制备水凝胶。24只C57BL/6小鼠背部脱毛后用95℃铝块烫伤10s快速建立3度皮肤烫伤模型,右侧以脂肪干细胞条件培养基水凝胶每天涂抹2次;左侧使用脂肪干细胞新鲜培养基水凝胶每天涂抹2次,连续涂抹7d,观察愈合时间与愈合进程,计算愈合率,在烫伤后第4,14,28天取材进行苏木精-伊红染色观察组织病理学变化。结果与结论:①人脂肪间充质干细胞为成纤维状,增殖旺盛,平均倍增时间为55h,可被诱导分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞,高表达CD29、CD44、CD90和CD105,低表达CD31和CD34,证明其符合间充质干细胞的标准;②用人脂肪间充质干细胞条件培养基制备的温敏水凝胶在4-20℃呈现为清凉透明的黏稠液体,放入37℃15min变为半固态凝胶;③95℃铝块烫伤小鼠表皮、真皮及皮下脂肪和肌肉组织的正常结构完全破坏,符合严重的3度烫伤标准,伤口面积均大致为3cm2;④在修复过程中发现,与新鲜培养基水凝胶对照组相比,脂肪干细胞条件培养基水凝胶组创口愈合时间短,伤口整洁,瘢痕增生少,创面组织结构恢复好;⑤脂肪干细胞条件培养基水凝胶组炎症浸润深度、炎症浸润细胞密度、肉芽组织厚度、成纤维细胞密度、新生血管密度和表皮厚度等指标显著好于新鲜培养基水凝胶组,差异有显著性意义(P< 展开更多
关键词 生物材料 缓释材料 皮肤烫伤 脂肪间充质干细胞 条件培养基 温敏水凝胶
在线阅读 下载PDF
复方黄柏液涂剂对脂肪间充质干细胞免疫抑制的影响 被引量:3
4
作者 李栋 胡勤峰 蔡大幸 《中国皮肤性病学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期819-824,共6页
目的 探讨复方黄柏液涂剂对人脂肪间充质干细胞(A-MSC)免疫调控能力的影响情况。方法 从人皮下脂肪样本分离间充质干细胞,观察形态学改变和细胞表型,用A-MSC完全培养基按梯度稀释后进行流式细胞术凋亡检测,按1:100稀释后,用CCK-8法... 目的 探讨复方黄柏液涂剂对人脂肪间充质干细胞(A-MSC)免疫调控能力的影响情况。方法 从人皮下脂肪样本分离间充质干细胞,观察形态学改变和细胞表型,用A-MSC完全培养基按梯度稀释后进行流式细胞术凋亡检测,按1:100稀释后,用CCK-8法检测复方黄柏液涂剂处理24h后的A-MSC对淋巴细胞增殖能力的影响,实时定量PCR法检测复方黄柏液涂剂处理后免疫调控相关基因在A-MSC中的表达情况。结果 所得A-MSC具有典型成纤维细胞形态和显著增殖能力,阳性表达CD29,CD44,CD73,CD90和CD105,不表达CD31,CD45和CD133等血细胞标记,复合MSC国际标准。予低浓度复方黄柏液涂剂处理后,A-MSC对淋巴细胞增殖的抑制作用明显增强,且A-MSC中细胞免疫抑制相关基因表达增加,促炎相关基因表达减弱。结论 复方黄柏液涂剂可通过加强脂肪间充质干细胞免疫抑制能力影响创伤局部炎性微环境。 展开更多
关键词 脂肪间充质干细胞 复方黄柏液涂剂 免疫 淋巴细胞
GDF-9转染的脂肪间充质干细胞治疗化疗性卵巢早衰大鼠
5
作者 陈英霞 王换换 +4 位作者 戴晓宇 袁明 安敏 王国云 李栋 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2017年第11期822-828,共7页
目的:研究上调生长分化因子-9(GDF-9)表达的大鼠脂肪间充质干细胞(ASC)输注治疗化疗性卵巢早衰(POF)大鼠的效果。方法:酶解贴壁法从大鼠脂肪中培养ASC,脂质体法转染p EGFP-N3-GDF-9质粒入ASC,并验证GDF-9表达。腹腔注射顺铂建... 目的:研究上调生长分化因子-9(GDF-9)表达的大鼠脂肪间充质干细胞(ASC)输注治疗化疗性卵巢早衰(POF)大鼠的效果。方法:酶解贴壁法从大鼠脂肪中培养ASC,脂质体法转染p EGFP-N3-GDF-9质粒入ASC,并验证GDF-9表达。腹腔注射顺铂建立大鼠POF模型,1周后通过尾静脉分别回输ASC和ASC-GDF-9细胞,观察大鼠体重、卵巢重量、血清中雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)和促黄体激素(LH)值,并分析卵泡形成情况。结果:ASC细胞生长旺盛能向成骨和脂肪细胞分化,转染后可顺利表达GDF-9蛋白,转染效率为(43±9.68)%。顺铂腹腔注射可降低大鼠体重伴随卵巢体积缩小,各级卵泡减少,E_2降低,FSH和LH明显升高。输注ASC-GDF-9细胞4次后,可显著增加各级卵泡数目和基质细胞密度,降低LH和FSH激素水平。结论:转染GDF-9的ASC经尾静脉输注后,可更好地改善卵巢功能,恢复各级卵泡的发育,改善激素紊乱状态。 展开更多
关键词 卵巢早衰 脂肪间充质干细胞 生长分化因子9 细胞治疗
人血管生成素1基因慢病毒表达载体的构建及其在脐带间充质干细胞的表达
6
作者 刘宁 吕欣 +3 位作者 李栋 黄志伟 刘毅 张乐玲 《山东大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2016年第12期1-7,共7页
目的通过基因重组技术构建人血管生成素-1(Ang-1)基因慢病毒表达载体,并检测其在人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的表达及对hUC-MSCs免疫抑制能力的影响。方法应用Trizol法从hUC-MSCs提取总RNA,反转录获取c DNA,PCR扩增获得编码Ang-1... 目的通过基因重组技术构建人血管生成素-1(Ang-1)基因慢病毒表达载体,并检测其在人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的表达及对hUC-MSCs免疫抑制能力的影响。方法应用Trizol法从hUC-MSCs提取总RNA,反转录获取c DNA,PCR扩增获得编码Ang-1的序列克隆到GV287载体中。将重组GV287-Ang-1载体质粒和慢病毒包装质粒pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染293T细胞,收集病毒上清,纯化浓缩测定病毒滴度。采用荧光显微镜观察转染效率,Western blotting法检测Ang-1蛋白表达,并通过CCK8试剂盒检测T淋巴细胞增殖活性。结果 Ang-1基因扩增PCR产物与预期大小一致。重组慢病毒GV287-Ang-1质粒经PCR和DNA测序分析显示,所得结果与目的基因序列一致且插入方向正确。包装慢病毒浓缩悬液滴度为2×10^8TU/mL,最佳感染复数为8。GV287-Ang-1转染组细胞Ang-1表达显著高于未转染组和GV287转染组。过表达Ang-1的hUC-MSCs对T淋巴细胞的增殖抑制显著高于单纯的hUC-MSCs。结论成功构建携带Ang-1基因的慢病毒载体GV287-Ang-1,并可有效转染hUC-MSCs过表达Ang-1蛋白,且能显著提高hUC-MSCs的免疫抑制能力。 展开更多
关键词 血管生成素基因1 293T细胞 人脐带间充质干细胞 慢病毒载体 过表达
不同冷冻保护剂在羊卵巢整体冻存中的效果比较
7
作者 杜天奇 迟令龙 +5 位作者 赵淑芹 时庆 秦睿羲 孙艳艳 李栋 邓晓惠 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期415-421,共7页
目的应用自制梯度浓度混合-程控降温器官灌注仪,灌注羊完整卵巢,并行程序化冷冻,探讨冻融羊完整卵巢的效果并筛选最佳冷冻保护剂组合。方法将收集的28个羊完整卵巢,随机分配到新鲜对照组(A组)、海藻糖组(B组)、甘油组(C组),二甲... 目的应用自制梯度浓度混合-程控降温器官灌注仪,灌注羊完整卵巢,并行程序化冷冻,探讨冻融羊完整卵巢的效果并筛选最佳冷冻保护剂组合。方法将收集的28个羊完整卵巢,随机分配到新鲜对照组(A组)、海藻糖组(B组)、甘油组(C组),二甲基亚砜(DMSO)组(D组)。冻融后组织切片行HE染色及原位缺口末端转移酶标记技术(TUNEL)检测,并通过RT-PCR技术检测组织Bcl-2相关X蛋白(Bax)及冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)的mRNA表达。结果 B组正常卵泡形态比率与A组差异无显著性(P〉0.05),C组及D组正常形态卵泡比率显著低于A组,差异有统计学意义(P〈0.05)。B、C、D 3组冻存组基质细胞密度均低于A组,其中D组最低,差异具有统计学意义(P〈0.05)。冻存组中,B组TUNEL反应阳性的细胞数目显著少于C组及D组,差异具有统计学意义(P〈0.05),且均显著多于新鲜组。A组及B组bax基因mRNA的表达量明显低于C组及D组(P〈0.05);B组CIRP基因mRNA的表达量明显高于C组及D组,差异均具有统计学意义(P〈0.05)。结论羊卵巢整体冻存后可较好保存组织学形态,海藻糖组的冷冻保护剂在组织结构保存及抑制细胞凋亡方面优于甘油组及DMSO组。 展开更多
关键词 卵巢 冷冻 海藻糖 甘油 二甲基亚砜 原位缺口末端标记
脐血源MHC限制性杀伤T细胞的扩增及功能研究 预览 被引量:2
8
作者 明奕 张海燕 +5 位作者 王哲 刘小盾 臧传宝 宋航 戴晓宇 李栋 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期195-201,共7页
目的:本研究通过不同细胞因子的组合定向诱导脐血单个核细胞分化扩增杀伤性T细胞(CTL)并探讨其功能。方法:利用密度梯度离心法获得脐血单个核细胞(MNK),添加IL-2、IL-15、PHA-P和IFN-γ等多种因子,诱导分化并扩增CTL细胞;通过流... 目的:本研究通过不同细胞因子的组合定向诱导脐血单个核细胞分化扩增杀伤性T细胞(CTL)并探讨其功能。方法:利用密度梯度离心法获得脐血单个核细胞(MNK),添加IL-2、IL-15、PHA-P和IFN-γ等多种因子,诱导分化并扩增CTL细胞;通过流式细胞术、细胞杀伤实验及定量PCR技术检测其生物学功能。结果:经过15 d的培养细胞数量明显增多,细胞增殖率平均为(1 522±137)%。流式细胞仪检测显示,直接分离的脐血单个核细胞流式分型的结果为95%以上属CD3-CD8-,体外培养15 d后CD3+CD8+细胞的比例高达82.77±5.61,具有良好的杀瘤活性,直接提取的MNC细胞对He La细胞及K562细胞的杀伤效果平均值为(61.88±1.08)%,培养后的CTL细胞杀伤效果均能达到80%以上,平均值为(90.33±2.02)%,与对照组相比有显著提高;同时颗粒酶(Granzyme)A、颗粒酶B、GM-CSF、颗粒溶素(Granulysin)、IFN-γ、TGF-β、TNF-α和穿孔素(perforin))等相关细胞因子的mRNA表达水平均有不同程度增加,与对照组相比IFN-γ和TGF-β的表达显著上调(P〈0.05),其余因子的表达极显著上调(P〈0.01)。结论:脐血造血单个核细胞能体外分化为杀伤性T淋巴细胞,并可以大量扩增,脐血可以作为肿瘤过继免疫治疗所需T淋巴细胞的来源。 展开更多
关键词 脐血 杀伤性T细胞 细胞扩增 肿瘤过继免疫治疗
在线阅读 下载PDF
胎儿骨髓间充质干细胞对成人外周血淋巴细胞体外增殖及免疫相关因子表达的影响 被引量:3
9
作者 李芳 吕军强 +5 位作者 段永娟 孙仪 李栋 汪运山 胡晓 肖东杰 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期891-896,共6页
目的 观察胎儿骨髓间充质干细胞(FBM-MSC)对成人外周血淋巴细胞的免疫调控作用及机制.方法 取妊娠14~ 22周龄胎儿骨髓,分离、培养FBM-MSC,通过观察细胞形态、细胞表面分子标志及成骨、成脂分化潜能等进行鉴定;将FBM-MSC与用荧光染料C... 目的 观察胎儿骨髓间充质干细胞(FBM-MSC)对成人外周血淋巴细胞的免疫调控作用及机制.方法 取妊娠14~ 22周龄胎儿骨髓,分离、培养FBM-MSC,通过观察细胞形态、细胞表面分子标志及成骨、成脂分化潜能等进行鉴定;将FBM-MSC与用荧光染料CFSE标记的成人外周血单个核细胞,在PHA刺激条件下共培养5d后,用流式细胞术分析刺激活化后的淋巴细胞增殖情况;用ELISA法检测共培养上清中IFN-γ和TNF-α等炎性因子水平;用荧光实时定量RT-PCR法检测IDO、TSG-6和TGF-β等免疫抑制性因子表达水平.结果 分离的FBM-MSC表面高表达CD29、CD44、CD49e、CD73、CD90、CD105;低表达CD31、CD34、CD45、HLA-DR,具有分化为脂肪和成骨细胞的能力;与单纯PHA刺激后的淋巴细胞相比较,与FBM-MSC共培养抑制淋巴细胞活化增殖,抑制率可高达96%; FBI-MSC共培养还可抑制淋巴细胞分泌炎性因子,对IFN-γ和TNF-α因子分泌的抑制率分别达90.9%和58.4%;与单独培养的FBM-MSC相比较,共培养后的FBM-MSC中重要的免疫调节因子如IDO、TSG-6和TGF-β的表达水平显著上调.结论 胎儿骨髓来源的FBM-MSC对外周血淋巴细胞体外增殖具有明显抑制作用;由MSC分泌的抑制性细胞因子如IDO、TSG-6和TGF-β等在FBM-MSC介导的免疫抑制中可能起重要调节作用. 展开更多
关键词 胎儿骨髓 间质干细胞 细胞增殖 免疫调节 细胞因子类
尾加压素Ⅱ通过ERK1/2途径诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和上调Egr-1表达 预览
10
作者 孟庆红 蔡直峰 +4 位作者 赵翠芬 李福海 孔清玉 夏伟 李栋 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期2093-2097,共5页
目的:研究不同浓度尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体拮抗剂urantide对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响,探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径及早期生长反应因子1(Egr-1)在UⅡ诱导大鼠PASMCs增殖中的作用。方法:以组织贴块法... 目的:研究不同浓度尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体拮抗剂urantide对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响,探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径及早期生长反应因子1(Egr-1)在UⅡ诱导大鼠PASMCs增殖中的作用。方法:以组织贴块法原代培养大鼠PASMCs:(1)采用Brd U掺入实验测定不同浓度(1μmol/L、0.1μmol/L和0.01μmol/L)UⅡ及其受体拮抗剂对大鼠PASMCs增殖的影响;(2)采用real-time PCR检测UⅡ及其受体拮抗剂对细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、应激活化蛋白激酶(SAPK)、p38 MAPK及Egr-1mRNA表达的影响;(3)采用Western blotting检测UⅡ、urantide及ERK1/2抑制剂PD98059对PASMCs磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、p-SAPK、p-p38 MAPK和Egr-1蛋白表达的影响。结果:(1)UⅡ在一定浓度范围(1μmol/L、0.1μmol/L和0.01μmol/L)呈浓度依赖性地促进肺动脉平滑肌细胞增殖(P〈0.01或P〈0.05),这种增殖作用可被urantide拮抗(P〈0.05);(2)UⅡ上调ERK1/2、SAPK及Egr-1 mRNA表达(P〈0.01或P〈0.05),PD98059和(或)urantide可拮抗UⅡ诱导的ERK1/2、SAPK和Egr-1 mRNA的表达(P〈0.01或P〈0.05),但对p-p38 MAPK无影响;(3)UⅡ可增加PASMCs p-ERK1/2、p-SAPK及Egr-1蛋白表达(P〈0.01或P〈0.05),urantide及PD98059可拮抗UⅡ诱导的p-ERK1/2、p-SAPK和Egr-1蛋白表达(P〈0.01,P〈0.05)。结论:UⅡ可能通过ERK1/2途径诱导PASMCs增殖和上调Egr-1表达,Egr-1可能通过激活ERK1/2途径参与了PASMCs的增殖。 展开更多
关键词 尾加压素Ⅱ 肺动脉平滑肌细胞 丝裂原活化蛋白激酶 早期生长反应因子-1 肺血管重构
在线阅读 免费下载
儿童B系急性淋巴细胞白血病树突状细胞的生物学特性 被引量:1
11
作者 庄泳 李栋 +2 位作者 付金秋 时庆 鞠秀丽 《山东大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2014年第11期60-64,共5页
目的:体外诱导培养正常儿童与B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)儿童的树突状细胞(DC),比较二者的生物学特性。方法分离10例B-ALL初诊患儿(ALL组)和10例正常儿童(对照组)的外周血单个核细胞,以rhGM-CSF(20 ng/mL)、rhIL-4(10 ... 目的:体外诱导培养正常儿童与B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)儿童的树突状细胞(DC),比较二者的生物学特性。方法分离10例B-ALL初诊患儿(ALL组)和10例正常儿童(对照组)的外周血单个核细胞,以rhGM-CSF(20 ng/mL)、rhIL-4(10 ng/mL)及TNF-α(10 ng/mL)联合培养8 d,显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞免疫表型(CD11c、CD80、CD83、CD86),ELISA检测培养上清中 IL-12的浓度,混合淋巴细胞反应(MLR)检测抗原递呈功能,电化学法检测上清中葡萄糖浓度。结果 ALL组细胞未表现出 DC 的典型形态, CD11c、CD80、CD83、CD86表达均较对照组细胞低(P<0.05),分泌IL-12的能力弱于对照组细胞(P<0.05),刺激T淋巴细胞增殖的能力弱于对照组细胞,ALL组细胞培养上清中的葡萄糖浓度高于对照组(P<0.05)。结论B-ALL 来源的DC 成熟度异常,功能减弱,葡萄糖代谢异常可能是其成熟异常的原因之一。 展开更多
关键词 白血病 急性 淋巴系 树突状细胞 葡萄糖代谢
三维培养对脐带间充质干细胞表型及造血因子基因表达的影响 预览 被引量:1
12
作者 李芳 李栋 +4 位作者 刘欢 张坤 汪运山 高济凡 肖东杰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1408-1414,共7页
本研究探讨三维立体培养条件下脐带间充质干细胞(UC-MSC)的细胞表型变化及部分造血相关因子的基因表达,为下一步研究三维立体条件下的造血扩增及诱导分化提供基础.从脐带中分离出MSC,分别在二维及三维条件下培养,通过流式细胞术检测MS... 本研究探讨三维立体培养条件下脐带间充质干细胞(UC-MSC)的细胞表型变化及部分造血相关因子的基因表达,为下一步研究三维立体条件下的造血扩增及诱导分化提供基础.从脐带中分离出MSC,分别在二维及三维条件下培养,通过流式细胞术检测MSC表面抗原的表达水平,通过成血管试验比较了两种细胞的成血管能力,并通过实时定量PCR检测两种培养条件下造血相关细胞因子的基因表达情况.结果表明:从脐带中成功地分离出了MSC,在三维培养条件下其内皮细胞、内皮祖细胞和间充质原始干细胞的表面标记CD31、CD133和CD271等阳性细胞百分比显著增加,体外成血管能力增强;骨架蛋白β-actin基因在三维培养条件下表达上调,G-CSF、LIF、SCF、IL-1 α、IL-1β、IL-3、IL-7和IL-11等与造血调控有关的细胞因子基因表达也有不同程度的增高,其中LIF、IL-3和IL-7升高尤为明显;免疫调控相关的细胞因子IL-10的表达也增高,而SDF-1和IL-6的表达虽有轻微的降低,但无显著性差异.结论:三维培养条件下UC-MSC的CD31、CD133和CD271表达上调,体外成血管能力增强,并且多个造血相关因子的基因表达水平上调. 展开更多
关键词 脐带 间充质干细胞 三维培养 细胞表型 细胞因子
在线阅读 下载PDF
体外诱导人类诱导性多能干细胞分化为造血干/祖细胞的研究 预览 被引量:1
13
作者 张坤 黄可 +2 位作者 李栋 潘光锦 汪运山 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期136-141,共6页
本研究探讨体外诱导人诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)分化为造血干/祖细胞的能力.在体外用小鼠骨髓基质细胞OP9与人类iPSC共培养的方法,将iPSC诱导分化为造血干/祖细胞;用流式细胞术检测造血干/祖细胞表面标... 本研究探讨体外诱导人诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)分化为造血干/祖细胞的能力.在体外用小鼠骨髓基质细胞OP9与人类iPSC共培养的方法,将iPSC诱导分化为造血干/祖细胞;用流式细胞术检测造血干/祖细胞表面标志物的表达水平;用实时定量PCR检测分化过程中iPSC及造血干/祖细胞的相关基因mRNA表达水平的变化;用免疫磁珠法分离CD34+造血干/祖细胞并进行半固体集落形成实验检测细胞的集落形成能力.结果表明,iPSC与OP9细胞共培养诱导造血分化的第4天即可观察到iPSC形态变化;流式细胞术检测显示,分化得到的细胞表达已知的造血干/祖细胞相关表面标志物CD34和CD43分子.在体外分化过程中多能性的标志基因Oct4的表达逐渐下降,造血相关转录因子Gata-2的表达逐渐升高,而Runx-1的表达量则呈波浪式变化,CD34表达量逐渐升高.集落培养14 d能够得到红系集落(CFU-E),粒系集落(CFU-G),巨核系集落(CFU-M),粒-巨核系集落(CFU-GM)和混合系集落(CFU-GEMM).结论:iPSC细胞能够在体外通过与OP9细胞共培养分化为造血干/祖细胞. 展开更多
关键词 诱导性多能干细胞 骨髓基质细胞 造血干细胞 造血祖细胞 诱导分化
在线阅读 下载PDF
IFN-γ增强人脐带间充质干细胞的免疫抑制能力 预览 被引量:2
14
作者 刘小盾 刘东 +5 位作者 臧传宝 张海燕 明奕 迟令龙 沈柏均 李栋 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期605-611,共7页
本研究旨在探讨IFN-γ对脐带间充质干细胞免疫抑制能力的影响。利用细胞因子刺激细胞表面受体的方法改变MSC的免疫抑制能力。用MSC与淋巴细胞共培养实验检测激活后MSC对淋巴细胞增殖抑制的变化。用荧光定量PCR实验和ELISA实验检测激活后... 本研究旨在探讨IFN-γ对脐带间充质干细胞免疫抑制能力的影响。利用细胞因子刺激细胞表面受体的方法改变MSC的免疫抑制能力。用MSC与淋巴细胞共培养实验检测激活后MSC对淋巴细胞增殖抑制的变化。用荧光定量PCR实验和ELISA实验检测激活后MSC基因和蛋白的表达变化情况。结果表明:IFN-γ可以增强脐带MSC的免疫抑制能力,IFN-γ激活后的MSC能更有效的抑制淋巴细胞的增殖,上调MSC细胞内免疫抑制基因IDO1,COX2和HM—G等的表达和可溶性免疫抑制蛋白HLA-G、KYN、IL-10、PGE2等的分泌,并在细胞共培养实验中将间充质干细胞的免疫抑制功能提高2—7倍。结论:IFN-γ可有效提高MSC的免疫抑制能力。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 免疫抑制 IFN-Γ
在线阅读 下载PDF
储运条件对脐带间充质干细胞存活率的影响 预览 被引量:1
15
作者 汪大琨 王芝辉 +1 位作者 郭红 张乐玲 《中国组织工程研究》 CSCD 2013年第36期6430-6435,共6页
背景:国内外尚无对脐带间充质干细胞运输过程中相关活力指标的全面评估。目的:检测白蛋白和储运时间等不同条件对脐带间充质干细胞存活率的影响。方法:体外培养的脐带间充质干细胞分为实验组和对照组,每组将3.15×10^9L-1细胞... 背景:国内外尚无对脐带间充质干细胞运输过程中相关活力指标的全面评估。目的:检测白蛋白和储运时间等不同条件对脐带间充质干细胞存活率的影响。方法:体外培养的脐带间充质干细胞分为实验组和对照组,每组将3.15×10^9L-1细胞悬浮在3mL生理盐水中。其中实验组加入1%白蛋白并避光保存,对照组分为不加白蛋白避光保存组和加白蛋白光照保存组,在0,2,4,8和24h分别测定各组细胞数、锥虫蓝拒染率和细胞存活率。结果与结论:与对照组相比,实验组(保存液中加白蛋白且避光)的8h细胞损失率几乎为零,细胞存活率接近90%。对照中不加白蛋白组8h细胞损失率高达38.5%,细胞存活率为86%。在脐带间充质干细胞的长途运输中,加入1%白蛋白可以有效保证细胞存活量。运输时间超出8h后,细胞损失率上升且存活率下调。实验数据表明,16℃、避光和1%白蛋白生理盐水的保存条件下,脐带间充质干细胞在8h内符合临床输注要求。 展开更多
关键词 干细胞 脐带 间质干细胞 血清白蛋白
在线阅读 下载PDF
骨髓源与脐带源间充质干细胞的基本生物学特征比较 预览 被引量:5
16
作者 韩振霞 时庆 +2 位作者 汪大琨 李栋 吕明 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期1248-1255,共8页
骨髓(bone marrow,BM)和脐带(umbilical cords,UC)是治疗用间充质干细胞(MSC)的主要来源.本研究旨在比较骨髓源和脐带源间充质干细胞的基本生物学特征和体外免疫抑制能力.采用相同培养条件,原代扩增培养UC-MSC和BM-MSC,比较它们... 骨髓(bone marrow,BM)和脐带(umbilical cords,UC)是治疗用间充质干细胞(MSC)的主要来源.本研究旨在比较骨髓源和脐带源间充质干细胞的基本生物学特征和体外免疫抑制能力.采用相同培养条件,原代扩增培养UC-MSC和BM-MSC,比较它们的生长动力学、细胞表型和免疫抑制能力.采用基因芯片技术比较这两种来源的间充质干细胞的表达基因组差异.结果表明,UC-MSC与BM-MSC在细胞形态和细胞表型上相似,但UC-MSC生长更快,可以在体外培养30代以上并不发生可见的形态改变,而BM-MSC生长缓慢,在培养6代以后倍增时间就显著增加.UC-和BM-MSC均可抑制PHA刺激的外周血单个核细胞增殖,其中BM-MSC的抑制能力稍强.基因芯片显示,BM-MSC表达更多的免疫相关基因,而UC-MSC高表达的基因更多地集中于器官发育和生长类基因方面.结论:UC-MSC的高增殖率、低HLA-ABC表达和免疫抑制能力促进了其在细胞治疗中的潜在应用.BM-MSC和UC-MSC差异表达的基因是由它们的组织来源决定的,这将影响在细胞治疗中的选择. 展开更多
关键词 骨髓 脐带 间充质干细胞 免疫抑制 基因表达芯片
在线阅读 下载PDF
两种冷冻方法对人大块卵巢组织卵泡活性的影响 被引量:3
17
作者 赵硕 赵淑琴 +4 位作者 时庆 秦晓敏 韩亦龙 晁岚 邓晓惠 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期427-432,共6页
目的探讨两种冷冻方法冻融人类大块卵巢组织的冷冻效果及对卵泡活性的影响。方法收集15例人卵巢组织,每例修剪成3块卵巢组织(约15mm×15mm×2mm),分别随机分配到新鲜对照组(A组)、玻璃化冷冻组(B组)、两步法冷冻组(c... 目的探讨两种冷冻方法冻融人类大块卵巢组织的冷冻效果及对卵泡活性的影响。方法收集15例人卵巢组织,每例修剪成3块卵巢组织(约15mm×15mm×2mm),分别随机分配到新鲜对照组(A组)、玻璃化冷冻组(B组)、两步法冷冻组(c组),组织学分析3组卵泡形态学变化,并进行卵巢组织体外培养后测定培养液上清中雌激素、孕激素浓度,免疫组织化学染色测定培养后的卵巢组织细胞核增殖相关抗原Ki67及B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)表达水平,评估卵泡增殖及凋亡活性。结果A组正常形态卵泡比率(91.9%)显著高于B组(71.3%)和c组(82.9%),差异有统计学意义(P〈0.05),C组高于B组,差异有统计学意义(P〈0.05)。C组的始基卵泡和初级卵泡的正常形态率分别为86.8%、54.4%,均分别高于B组73.8%、44.4%,差异有统计学意义(P〈0.05)。同一时期3组激素测定结果差异不显著(P〉0.05)。C组Ki67的阳性率为73%,分别显著高于A组50%和B组55%(P〈0.05),A组低于B组(P〈0.05)。Bel-2阳性率,A组为57%和C组61%相比无差异(P〉0.05),但B组42%阳性率分别低于A组和C组(P〈0.05)。结论人体大块卵巢组织冻融后仍具有活性,并且两步法冻存效果优于玻璃化冷冻法。 展开更多
关键词 卵巢组织 KI67 冷冻保存 玻璃化冻存 两步法冷冻
Aiolos基因过表达对白血病细胞生物学特性及化疗敏感性的影响 被引量:1
18
作者 卢园园 李栋 +3 位作者 庄泳 付金秋 时庆 鞠秀丽 《山东大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2013年第12期46-50,共5页
目的研究Aiolos基因过表达对白血病细胞周期、凋亡及化疗敏感性的影响并探讨其机制。方法将Jurkat细胞分为Aiolos过表达组、转染GFP组和未转染组,构建Aiolos基因慢病毒载体,感染Jurkat细胞并检测3组细胞的细胞周期、凋亡、相关基因表... 目的研究Aiolos基因过表达对白血病细胞周期、凋亡及化疗敏感性的影响并探讨其机制。方法将Jurkat细胞分为Aiolos过表达组、转染GFP组和未转染组,构建Aiolos基因慢病毒载体,感染Jurkat细胞并检测3组细胞的细胞周期、凋亡、相关基因表达及对依托泊苷敏感性。结果Aiolos转染Jurkat细胞4d后,Aiolos过表达组和转染GFP组的GFP表达量达80%以上,且Aiolos过表达组的Aiolos蛋白表达较转染GFP组和未转染组明显上升(P〈0.05)。Aiolos过表达组细胞凋亡比例较转染GFP组和未转染组明显增加(P〈0.05),细胞周期由G0/G1进入S期比例明显减少(P〈0.05)。周期相关基因CyclinD3和Skp2表达下调(P〈0.05),细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P21和P27表达上调(P〈0.05);凋亡相关基因Bax表达无明显变化,Bcl-2表达下调(P〈0.05),Bax/Bcl-2比例增加(P〈0.05)。Aiolos过表达组细胞在依托泊苷浓度40μg/mL作用36、48h后,细胞存活百分率较转染GFP组和未转染组均明显降低(P〈0.05)。结论在Jurkat细胞系中介导Aiolos基因过表达能够促进细胞凋亡、抑制细胞周期并提高细胞对化疗药物的敏感性。 展开更多
关键词 Aiolos 白血病 淋巴细胞 急性 基因转染 JURKAT细胞 化疗敏感性
间充质干细胞的衰老对其免疫调控能力的影响 预览 被引量:1
19
作者 韩燕 李栋 +2 位作者 时庆 汪大琨 鞠秀丽 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期1010-1014,共5页
本研究旨在探讨人脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UB-MSC)的衰老对其免疫调控能力的影响。从人脐带中分离MSC并进行传代培养,通过形态学观察其核质比的变化。分别选取第5代(对照组)及第13代(衰老组)MSC... 本研究旨在探讨人脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UB-MSC)的衰老对其免疫调控能力的影响。从人脐带中分离MSC并进行传代培养,通过形态学观察其核质比的变化。分别选取第5代(对照组)及第13代(衰老组)MSC进行研究,运用细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒进行衰老检测,并采用CCK-8细胞计数试剂盒检测MSC对淋巴细胞增殖能力的影响,最后通过RT-PCR方法检测免疫调控相关基因在衰老MSC的表达情况。研究结果表明,随传代次数增加,MSC的长宽比增大,核质比减小。细胞衰老检测结果显示,第13代MSC的衰老细胞比例明显增加,但在体外混合淋巴细胞培养体系中,第13代MSC对淋巴细胞增殖的抑制作用与第5代相比明显增强(P〈0.05),且第13代细胞免疫抑制相关基因表达增加,促炎相关基因表达减弱。结论:脐带间充质干细胞随体外培养代数增加而逐渐衰老,但免疫抑制能力逐渐加强。 展开更多
关键词 间充质干细胞 衰老 免疫调控
在线阅读 下载PDF
尾加压素Ⅱ对大鼠肺动脉平滑肌细胞胶原合成的影响 被引量:4
20
作者 孟庆红 赵翠芬 +3 位作者 孔清玉 李福海 李栋 夏伟 《山东大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2013年第5期15-19,共5页
目的研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体拮抗剂Urantide(UR)对培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。方法以组织贴块法培养的大鼠PASMCs为研究对象,采用BrdU掺入实验观察不同浓度UⅡ(1×10-10~1×... 目的研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体拮抗剂Urantide(UR)对培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。方法以组织贴块法培养的大鼠PASMCs为研究对象,采用BrdU掺入实验观察不同浓度UⅡ(1×10-10~1×10-7mol/L)及Urantide对PASMCs增殖的影响;采用Western blotting及Real-timePCR法,分别在蛋白和基因水平检测不同浓度UⅡ及Urantide对Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。结果 UⅡ(1×10-9~1×10-7mol/L)浓度依赖性地促进PASMCs增殖(P〈0.05,P〈0.001,P〈0.001),增加PASMCs中Ⅰ、Ⅲ型胶原基因及蛋白表达(P〈0.01,P〈0.001),而1×10-10mol/L UⅡ对PASMCs增殖及Ⅰ、Ⅲ胶原基因和蛋白表达无明显作用(P〉0.05);UⅡ受体拮抗剂Urantide可拮抗UⅡ的上述作用(P〈0.01)。结论 UⅡ通过与大鼠PASMCs的UⅡ受体UT结合而发生一系列诱导作用,最终引起PASMCs增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成增加,Urantide通过竞争性结合UT而阻断UⅡ与UT的结合,使UⅡ无法发挥诱导作用。 展开更多
关键词 尾加压素Ⅱ 肺动脉平滑肌细胞 胶原合成 URANTIDE 肺动脉高压 大鼠 Wistar
上一页 1 2 4 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈