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慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白载体转染大鼠心肌成纤维细胞 被引量:1
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作者 朱占占 侯宾 +3 位作者 孙雯雯 院慧芳 张永春 蔡新华 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期43-47,共5页
目的探讨慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白(LV-SDF-1α-GFP)对心肌成纤维细胞影响,最佳感染条件及目的蛋白表达和分泌特点。方法差速贴壁法分离培养乳大鼠心肌成纤维细胞,观察和免疫荧光鉴定。不同滴度及条件的LV-SDF-1α-GF... 目的探讨慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白(LV-SDF-1α-GFP)对心肌成纤维细胞影响,最佳感染条件及目的蛋白表达和分泌特点。方法差速贴壁法分离培养乳大鼠心肌成纤维细胞,观察和免疫荧光鉴定。不同滴度及条件的LV-SDF-1α-GFP转染心肌成纤维细胞,观察荧光表达,探索最佳转染条件。LV-SDF-1α-GFP目的基因病毒以及阴性对照CON145病毒的转染心肌成纤维细胞,绘制生长曲线,探索转染对心肌成纤维细胞的增殖有无明显影响。利用最佳转染剂量组转染心肌成纤维细胞,斑点印迹法(Dot blotting)检测SDF-1α目的蛋白分泌。计量资料进行统计学分析。结果心肌成纤维细胞具很高活性,传至4代纯度高,折光度好,无自发性搏动。LV-SDF-1α-GFP最佳转染感染复数(MOI)值为10,添加感染增强液,聚凝胺组感染效果最好,效率达80%。LV-SDF-1α-GFP组以及阴性对照CON145组对心肌成纤维细胞毒性作用小,细胞形态无明显变化,与非转染组生长曲线相似,差异无统计学意义(P〉0.05)。转染LV-SDF-1α-GFP的心肌成纤维细胞培养至第4天SDF-1α蛋白分泌量达最高值,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论 LV-SDF-1α-GFP载体对心肌成纤维细胞具很高的转染效率,细胞毒性小,并能够分泌SDF-1α目的蛋白。 展开更多
关键词 心肌成纤维细胞 慢病毒-基质细胞衍生因子-1α绿色荧光蛋白载体 转染 斑点印迹法 乳大鼠
N-乙酰半胱氨酸通过海马区Notch1/hes1通路改善丙戊酸孤独症模型鼠的学习和记忆能力
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作者 项哲 张应花 +2 位作者 何雪玲 王丽君 崔卫刚 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第4期390-396,共7页
目的探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)能否改善孤独症模型鼠的学习和记忆能力及其作用机制。方法利用丙戊酸(valproic acid,VPA)建立孤独症模型,通过三箱实验鉴定造模成功,Western blotting技术检测模型鼠海马区Notch1/hes1通... 目的探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)能否改善孤独症模型鼠的学习和记忆能力及其作用机制。方法利用丙戊酸(valproic acid,VPA)建立孤独症模型,通过三箱实验鉴定造模成功,Western blotting技术检测模型鼠海马区Notch1/hes1通路信号分子Notch1、Notch1胞内活性结构域(Notch intracellular domain,NICD)、Hes1、Jagged1变化,免疫荧光技术检测该通路信号下游靶基因Hes1的表达;然后用NAC干预,检测模型鼠学习和记忆能力的变化及Notch1/hes1信号通路关键信号分子的改变。结果与对照组相比,VPA组大鼠找到平台的时间增加,跨越平台的次数及在靶象限的时间均减少,同时Notch1、NICD、Hes1、Jagged1的蛋白表达水平增加;而NAC干预以后,与VPA组相比,VPA+NAC组大鼠找到平台的时间减少,跨越平台的次数及在靶象限的时间均增加,同时海马脑区NICD、Hes1的蛋白表达均下降。结论 NAC可以改善VPA孤独症模型鼠学习和记忆能力,其作用机制可能与降低Notch1/hes1信号通路的过度活化有关。 展开更多
关键词 孤独症 N-乙酰半胱氨酸 NOTCH1 丙戊酸 学习记忆能力
刺梨黄酮对阿霉素所致心肌细胞毒性的保护作用
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作者 院慧芳 张永春 +2 位作者 蔡新华 徐萍 陈辉 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期49-55,共7页
目的探讨刺梨黄酮(FRRT)对阿霉素(DOX)所致心肌细胞凋亡的影响及机制。方法利用1~3 d新生大鼠(每次26只)原代分离培养心肌细胞和H9C2心肌细胞系,5μmol/L DOX孵育心肌细胞,建立心肌细胞毒性模型,并用FRRT干预,透射电子显微镜观察各组H9C... 目的探讨刺梨黄酮(FRRT)对阿霉素(DOX)所致心肌细胞凋亡的影响及机制。方法利用1~3 d新生大鼠(每次26只)原代分离培养心肌细胞和H9C2心肌细胞系,5μmol/L DOX孵育心肌细胞,建立心肌细胞毒性模型,并用FRRT干预,透射电子显微镜观察各组H9C2心肌细胞株超微结构。利用免疫荧光技术和Western blotting检测Bax、P53和Bcl-2蛋白的表达,并对Western blotting检测结果进行半定量分析。结果透射电子显微镜观察显示,DOX组细胞内呈现大量的自噬泡和脂褐素,细胞状态差;FRRT干预后,心肌细胞未见脂褐素的结构,有少量自噬泡。免疫荧光检测显示,DOX组Bax和P53呈阳性表达,Bcl-2呈弱阳性表达;FRRT+DOX组Bax和P53表达不明显,Bcl-2呈强阳性表达。Western blotting检测结果显示,5μmol/L DOX孵育心肌细胞18 h时,Bax蛋白表达水平达到最高,组间比较,差异有统计学意义(*P<0.01)。Bax蛋白在DOX组表达增加,FRRT+DOX组表达减少,组间比较,差异具有统计学意义(*P<0.05);P53蛋白在DOX组表达增加,FRRT+DOX组表达减少,组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);Bcl-2蛋白在DOX组表达减少,FRRT+DOX组表达增加,组间比较,差异具有统计学意义(*P<0.05,**P<0.01)。结论 FRRT通过下调DOX引起的心肌细胞凋亡作用,进而发挥对心肌细胞的保护作用。 展开更多
关键词 心肌细胞 刺梨黄酮 阿霉素 免疫荧光 免疫印迹法 大鼠
大鼠心肌细胞和心肌细胞系H9C2表达弹性蛋白
4
作者 韩贝 任明芬 +1 位作者 常玉巧 郭志坤 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期292-296,共5页
目的检测弹性蛋白在大鼠心肌细胞和H9C2心肌细胞系内的表达。方法取新生和成年SD大鼠各5例的新鲜心脏,冷冻切片;取20只新生3 d SD大鼠心脏,通过0.05%胰蛋白酶和0.075%Ⅱ型胶原酶消化法,获取原代心肌细胞;免疫组织化学和免疫荧光技术检... 目的检测弹性蛋白在大鼠心肌细胞和H9C2心肌细胞系内的表达。方法取新生和成年SD大鼠各5例的新鲜心脏,冷冻切片;取20只新生3 d SD大鼠心脏,通过0.05%胰蛋白酶和0.075%Ⅱ型胶原酶消化法,获取原代心肌细胞;免疫组织化学和免疫荧光技术检测大鼠心肌组织、原代心肌细胞和H9C2心肌细胞系的弹性蛋白表达;ELISA法检测培养的H9C2心肌细胞系上清中的弹性蛋白。结果在大鼠心肌细胞、H9C2心肌细胞系和新生、成年大鼠心肌组织上均发现心肌肌钙蛋白T和弹性蛋白的共表达。免疫组织化学结果发现,弹性蛋白在成纤维细胞、平滑肌细胞和细胞间质内均有表达。H9C2心肌细胞培养液的上清中检测到少量的弹性蛋白。结论大鼠心肌细胞表达弹性蛋白,可能参与心肌细胞的势能和细胞间质弹性纤维的构建。 展开更多
关键词 弹性蛋白 心肌细胞 心肌细胞系H9C2 免疫组织化学 免疫荧光 酶联免疫吸附测定 大鼠
大鼠心包组织存在C-kit、Sca-1和Nanog阳性细胞 预览
5
作者 付海鹏 李铎 郭志坤 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2019年第3期211-215,共5页
目的观察大鼠心包组织中C-kit,Sca-1,Nanog阳性细胞的表达及分布,为治疗心肌损伤寻找新的干细胞来源。方法取大鼠新鲜心包,利用石蜡切片和铺片技术,HE和Masson染色,观察其组织结构;利用免疫组织化学染色技术,观察C-kit、Scal-1、Nanog... 目的观察大鼠心包组织中C-kit,Sca-1,Nanog阳性细胞的表达及分布,为治疗心肌损伤寻找新的干细胞来源。方法取大鼠新鲜心包,利用石蜡切片和铺片技术,HE和Masson染色,观察其组织结构;利用免疫组织化学染色技术,观察C-kit、Scal-1、Nanog阳性细胞在心包组织中的表达;利用免疫荧光双标技术观察C-kit、Scal-1、Nanog之间的共表达情况;利用免疫印迹法检测心包组织中C-kit、Scal-1、Nanog的表达。结果大鼠心包组织中存在大量散在的小而圆或椭圆形细胞,广泛分布于成纤维细胞之间和小血管周围。免疫组织化学染色显示,这些细胞分别阳性表达C-kit、Sca-1、Nanog。免疫荧光双标染色显示,部分细胞共表达C-kit和scal-1两种表面抗原,部分细胞共表达scal-1和Nanog表面抗原,而C-kit与Nanog共表达于血管弹力膜。结论大鼠心包组织中存在C-kit、Scal-1和Nanog阳性细胞,一种细胞可表达两种表面标记。 展开更多
关键词 大鼠心包 C-KIT Scal-1 NANOG 共定位
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CD73在临床疾病中的研究进展 预览
6
作者 王琰 赵育洁 +1 位作者 李琼 郭志坤 《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》 2019年第1期58-64,共7页
CD73又称5'-核苷酸酶,普遍存在人体多种细胞,是通过糖基-磷酰肌醇介导连接在胞膜上的糖蛋白。CD73有水解酶活性,可降解5'-磷酸腺苷成腺苷,进而通过腺苷与各种腺苷受体亚型作用发挥血管生成、旁分泌和免疫抑制等作用;此外CD73可... CD73又称5'-核苷酸酶,普遍存在人体多种细胞,是通过糖基-磷酰肌醇介导连接在胞膜上的糖蛋白。CD73有水解酶活性,可降解5'-磷酸腺苷成腺苷,进而通过腺苷与各种腺苷受体亚型作用发挥血管生成、旁分泌和免疫抑制等作用;此外CD73可发挥非酶作用,介导细胞间结合和信号传递。CD73与肿瘤、心肌损伤、脑损伤、糖尿病、弓形虫入侵、系统性红斑狼疮和器官移植等多种临床疾病相关,影响疾病的发生发展,CD73及其水解产生的腺苷与腺苷受体作用,影响机体的生理和病理过程。本文综述近年来CD73的基础和临床研究,以明晰CD73基础研究和临床应用的联系,加快CD73的临床应用。 展开更多
关键词 CD73 肿瘤 心肌损伤 脑损伤 弓形体感染 器官移植
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Notch信号通路在孤独症谱系障碍中的研究进展
7
作者 项哲 何雪玲 +1 位作者 崔卫刚 张应花 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期357-359,共3页
孤独症谱系障碍(Autism spectrum disorders,ASDs)是一组病因复杂、发病机制尚不明确的神经发育障碍性疾病。ASDs包括典型孤独症、阿斯伯格综合症、Rett综合征、童年瓦解性障碍及其它待分类的非特异性广泛发育障碍。其主要的行为表现... 孤独症谱系障碍(Autism spectrum disorders,ASDs)是一组病因复杂、发病机制尚不明确的神经发育障碍性疾病。ASDs包括典型孤独症、阿斯伯格综合症、Rett综合征、童年瓦解性障碍及其它待分类的非特异性广泛发育障碍。其主要的行为表现有社交障碍、语言发育障碍以及重复刻板的兴趣或行为等。近年来,ASDs由于发病率在不同国家均有所上升,而成为研究的一大热点。 展开更多
关键词 信号通路 WNT 信号传导 神经系统发育 神经系统疾病 孤独症谱系障碍 NOTCH
金黄色葡萄球菌类肠毒素K与GFP融合蛋白工程菌的构建及其表达蛋白生物学活性分析
8
作者 何亚南 孙钰椋 +4 位作者 任雅坤 梁盛英 杨芬 刘彦礼 林俊堂 《中国生物工程杂志》 CSCD 北大核心 2018年第12期14-20,共7页
目的构建携带金黄色葡萄球菌类肠毒素K(staphylococcal enterotoxin-likeK,SElK)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)融合基因的工程菌,并对SElK-GFP融合蛋白进行初步生物学活性分析。方法利用PCR和OverlapPCR克隆获得SElK-... 目的构建携带金黄色葡萄球菌类肠毒素K(staphylococcal enterotoxin-likeK,SElK)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)融合基因的工程菌,并对SElK-GFP融合蛋白进行初步生物学活性分析。方法利用PCR和OverlapPCR克隆获得SElK-GFP融合基因,并插入pET28a表达载体中,通过菌落PCR,质粒双酶切及测序验证后,将构建成功的pET28a-SElK-GFP质粒转化到E.coliBL21菌株中进行诱导表达,通过Ni+亲和磁珠试剂盒纯化获得SElK-GFP融合蛋白;并利用MTT法检测SElK-GFP刺激小鼠脾淋巴细胞增殖;ELISA法检测SElK-GFP尾静脉注射后小鼠血清中细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌水平。结果成功构建能够表达SElK-GFP融合蛋白的工程菌,纯化获得高纯度的SElK-GFP融合蛋白可观测到明显的绿色荧光,融合蛋白生物学活性分析表明,SElK-GFP能够呈剂量依赖性地显著刺激小鼠脾淋巴细胞增殖;同时ELISA检测发现SElK-GFP可显著增加小鼠血清中细胞因子IL-2及IFN-γ的分泌水平。结论成功克隆、表达及纯化获得高纯度的SElK-GFP融合蛋白,其不仅保留了SElK的超抗原活性,同时兼具GFP绿色荧光的可视性,为深入研究SElK生物学活性提供有利工具。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌类肠毒素K 超抗原 T淋巴细胞 原核表达
新生大鼠心肌成纤维细胞的内皮细胞分化潜能
9
作者 张俊悦 殷国田 郭志坤 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期443-449,共7页
目的探讨心肌成纤维细胞(CFs)向内皮细胞分化以及成血管潜能。方法新鲜左心室组织,体外分离、培养、纯化CFs,利用内皮细胞诱导液对第3代CFs诱导培养,连续诱导培养28 d后,换用内皮细胞培养基(ECM),并消化传代扩增至第3代。观察诱导... 目的探讨心肌成纤维细胞(CFs)向内皮细胞分化以及成血管潜能。方法新鲜左心室组织,体外分离、培养、纯化CFs,利用内皮细胞诱导液对第3代CFs诱导培养,连续诱导培养28 d后,换用内皮细胞培养基(ECM),并消化传代扩增至第3代。观察诱导细胞生长情况和形态变化,利用免疫细胞化学法、流式细胞术和血管形成分析实验对诱导后细胞的内皮细胞标志物的表达和功能特性进行评价。结果新生大鼠第3代CFs,呈三角形、梭形和多边形,增殖速度迅速;波形蛋白(vimentin)、盘状结构受体2(DDR2)均呈阳性表达。诱导第3天细胞开始汇合,21 d部分细胞形成串珠样连接,28 d出现细胞汇集成环状样形状;免疫组织化学标记vWF和CD31呈阳性表达;细胞免疫荧光标记vWF、CD34、CD105均呈阳性表达;流式细胞术检测诱导后细胞表面标志物CD31表达率为50.5%,对照组CD31表达率为5.82%。结论血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)体外定向诱导CFs可使其向血管内皮细胞分化,并表现其功能特征。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 碱性成纤维生长因子 心肌成纤维细胞 内皮细胞分化 细胞培养 大鼠
不同发育时段大鼠心肌组织中超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4阳性细胞的分布特征
10
作者 张亚南 任明芬 郭志坤 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期752-758,共7页
目的探讨超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCN4)在不同发育时期大鼠心肌组织中各类细胞的表达规律,为进一步研究HCN4对心肌的作用提供形态学依据。方法出生1 d、1月、3月、6月健康SD大鼠各15只。取新鲜心脏,石蜡切片和冷冻切片,利... 目的探讨超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCN4)在不同发育时期大鼠心肌组织中各类细胞的表达规律,为进一步研究HCN4对心肌的作用提供形态学依据。方法出生1 d、1月、3月、6月健康SD大鼠各15只。取新鲜心脏,石蜡切片和冷冻切片,利用免疫组织化学和荧光技术观察不同发育时段大鼠心肌组织HCN4阳性细胞的表达分布情况及形态学特征。利用Western blotting技术观察左右心室HCN4的蛋白含量。结果免疫组织化学和荧光染色结果显示,HCN4阳性细胞在出生后1 d、1月、3月、6月的血管平滑肌细胞,心内膜和血管的内皮细胞,心外膜的间皮细胞、成纤维细胞,大量心房肌细胞和少量心室肌细胞、传导组织细胞均有表达,但不同部位的表达细胞数量不均;Western blotting结果显示,心室HCN4蛋白随着月龄的增加表达逐渐降低。结论 HCN4在大鼠心肌组织中的表达随年龄的增加逐渐下降,但增殖能力较强的细胞持续存在,提示HCN4可能对心肌组织中的多种细胞的生存起调控作用。 展开更多
关键词 心脏 超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4 免疫组织化学 免疫荧光 免疫印迹法 大鼠
心肌脂肪酸代谢和心肌脂毒性损伤研究进展 预览
11
作者 孙晓鹏 李辞霞 郭志坤 《新乡医学院学报》 CAS 2018年第7期646-650,共5页
健康成年人50%~70%的心肌三磷腺苷来自于长链脂肪酸的β氧化,获取的脂肪酸除供线粒体氧化功能外多余的部分以三酰甘油的形式储存于心肌细胞的脂滴中,并在需要时由三酰甘油酯酶水解为脂肪酸和甘油。正常心肌脂肪酸的摄取和氧化维持在一... 健康成年人50%~70%的心肌三磷腺苷来自于长链脂肪酸的β氧化,获取的脂肪酸除供线粒体氧化功能外多余的部分以三酰甘油的形式储存于心肌细胞的脂滴中,并在需要时由三酰甘油酯酶水解为脂肪酸和甘油。正常心肌脂肪酸的摄取和氧化维持在一个动态平衡,过多的脂质在心肌内聚集会造成心肌脂毒性,心肌脂毒性可以造成心肌胰岛素抵抗、心肌细胞凋亡和心脏收缩功能障碍,实验和临床数据表明,减少毒性脂质可以改善心肌代谢和功能。目前临床上对心肌的脂毒性损伤尚未引起足够重视。本文查阅近年来国内外文献,就心肌脂肪酸代谢途径和心肌脂毒性、潜在性的脂毒性物质以及与临床的关系进行综述。 展开更多
关键词 脂肪酸 脂质代谢 脂毒性 心肌
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心脏成纤维细胞生物表型多样性
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作者 常玉巧 李辞霞 +1 位作者 贾阳阳 郭志坤 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期317-323,共7页
目的探讨心脏成纤维细胞(CFs)生物表型多样性。方法新生1-3天SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新60只生大鼠CFs,比较原代和传代培养细胞形态学变化,免疫组织化学学检测鉴定常见成纤维细胞标记波形蛋白(vimentin)、成... 目的探讨心脏成纤维细胞(CFs)生物表型多样性。方法新生1-3天SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新60只生大鼠CFs,比较原代和传代培养细胞形态学变化,免疫组织化学学检测鉴定常见成纤维细胞标记波形蛋白(vimentin)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1)和盘状结构域受体(DDR2)的表达,细胞免疫荧光检测CFs干细胞标记nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90的表达,细胞免疫荧光三标技术检测CFs干细胞标记间的共表达情况。结果酶联合消化法分离培养的CFs收获细胞量大,第3代细胞活力好、纯度高。Vimentin、FSP1和DDR2在CFs中均表达,但DDR2在CFs中呈强表达。部分CFs分别表达nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90,部分nanog阳性的CFs分别和CD73、CD90和sca-1,及其CD90和sca-1存在共表达,nanog-+/CD73-+共表达阳性率最高(59.02%±8.39%),与其他3组相比差异均有极显著性(P〈0.01);而nanog-+/CD90-+共表达阳性率与nanog-+/sca-1-+之间差异无显著性(P〉0.05),但这两组与CD90-+/sca-1-+相比差异均有极显著性(P〈0.01);CD90-+/sca-1-+共表达阳性率均低于其他3组,差异具有极显著意义(P〈0.01)。结论 CFs是具有干细胞特征混合细胞群,在表型上具有多样性。 展开更多
关键词 心脏成纤维细胞 干细胞标记 细胞培养 免疫组织化学 新生大鼠
着丝粒蛋白A在大鼠心脏的表达及增龄变化
13
作者 冯颖 殷国田 +1 位作者 李爱荣 郭志坤 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期512-517,共6页
目的探讨着丝粒蛋白A(CENP-A)在大鼠心脏中的表达部位及增龄变化。方法取新生1 d、1周龄、2周龄、3周龄、4周龄、3月龄、6月龄大鼠各10只,采用免疫组织化学、免疫荧光、Western blotting、Real-time PCR技术,观察心脏不同部位CENP-A... 目的探讨着丝粒蛋白A(CENP-A)在大鼠心脏中的表达部位及增龄变化。方法取新生1 d、1周龄、2周龄、3周龄、4周龄、3月龄、6月龄大鼠各10只,采用免疫组织化学、免疫荧光、Western blotting、Real-time PCR技术,观察心脏不同部位CENP-A的分布和增龄变化;利用图像分析系统对CENP-A进行定量分析,并对不同年龄组心脏CENP-A含量进行对比。结果大鼠心脏中CENP-A的表达主要分布在血管壁、心外膜及外膜下组织。随着年龄增长血管壁中CENP-A表达基本稳定,心外膜及外膜下组织中CENP-A表达逐渐减少,新生1 d表达最多,3月龄、6月龄明显减少。血管壁中CENP-A主要是在平滑肌细胞表达,且各年龄段表达基本不变。在靠近心外膜的组织中也有少量心肌细胞表达,且随增龄变化而减少。结论大鼠心脏CENP-A的表达随增龄变化逐渐减少,血管壁CENP-A的表达稳定不变。 展开更多
关键词 着丝粒蛋白 心肌组织 心外膜 心脏 免疫组织化学 免疫荧光 大鼠
心肌弹性纤维的研究进展 预览 被引量:1
14
作者 余悦欣 郭志坤 《国际心血管病杂志》 2018年第2期73-75,共3页
弹性纤维是细胞外基质必需的生物大分子。弹性纤维尤其是弹性蛋白的主要结构组分发生变化时,常会引起器官功能减退。弹性纤维是心脏的重要间质成分,其生物学结构和功能复杂,对心脏的生理功能和心肌修复有重要作用。
关键词 弹性纤维 心肌组织 大鼠 心肌梗死
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大鼠急性心肌梗死后干细胞抗原-1和Nanog阳性细胞的动态变化 被引量:1
15
作者 杨黎晓 任明芬 郭志坤 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期457-462,共6页
目的观察大鼠急性心肌梗死后心肌干细胞在梗死病程中的动态变化。方法成年SD大鼠50只,结扎冠状动脉前降支制备急性心肌梗死模型,在术前及术后1周、2周、3周和4周分别检测心功能指标:左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左... 目的观察大鼠急性心肌梗死后心肌干细胞在梗死病程中的动态变化。方法成年SD大鼠50只,结扎冠状动脉前降支制备急性心肌梗死模型,在术前及术后1周、2周、3周和4周分别检测心功能指标:左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室舒张末期容积(LVEDV)和左室后壁舒张末期厚度(LVPWT)。取各组大鼠新鲜心脏,石蜡切片、Masson染色,确定心肌梗死的病理变化。利用免疫组织化学技术对各组心脏切片进行免疫染色,观察干细胞抗原-1(Sca-1)、Nanog阳性心肌干细胞的动态变化。对每组切片阳性表达的细胞数进行定量分析。利用Western blotting技术观察Sca-1、Nanog的蛋白含量。结果大鼠心功能于术后1周开始降低,自第3周稳定于较低水平;Masson染色显示心肌梗死区域瘢痕组织明显,证实模型制备成功;免疫组织化学结果显示,Sca-1、Nanog阳性心肌干细胞数量在2周时上升至高峰,随后下降。结论 Sca-1、Nanog阳性心肌干细胞在心肌梗死病理演变过程中呈先上升后下降的趋势,提示心肌干细胞在心肌损伤和修复过程中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 心脏 干细胞抗原-1 NANOG 心肌梗死 免疫组织化学 大鼠
c-kit与miR-21在心衰大鼠心肌中表达下降 预览
16
作者 刘振 李硕 +2 位作者 刘玲玲 郭志坤 王鹏飞 《基础医学与临床》 CSCD 2017年第1期76-79,共4页
目的研究c-kit与miR-21基因在大鼠左室重构中的动态表达及其作用机制。方法将大鼠140只随机分为正常对照组15只和心衰模型组125只。心衰模型制作:4 mg/kg腹腔注射阿霉素。在8周时对大鼠进行心功能检测,验证心衰模型。取心脏组织冰冻切... 目的研究c-kit与miR-21基因在大鼠左室重构中的动态表达及其作用机制。方法将大鼠140只随机分为正常对照组15只和心衰模型组125只。心衰模型制作:4 mg/kg腹腔注射阿霉素。在8周时对大鼠进行心功能检测,验证心衰模型。取心脏组织冰冻切片。利用免疫组化及免疫荧光显色等技术检测心肌组织中miR-21和c-kit的基因表达。结果 1)心衰组的呈现心肌梗死后心肌细胞的病理学变化。2)在正常和心衰心肌中miR-21阳性细胞主要表达于血管内皮,少量心肌细胞和干细胞,而心衰心肌组织中的表达量明显减少;c-kit阳性细胞常成群分布,主要聚集于心外膜及其附近。在两组心肌组织中均有少数细胞存在miR-21和c-kit共表达。结论 c-kit和miR-21在心衰大鼠心肌中表达下降与心力衰竭和左室重构呈高度相关。 展开更多
关键词 C-KIT MIR-21 免疫组织化学 免疫荧光 心力衰竭 大鼠心脏
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心肌微环境与5-氮杂胞苷诱导脂肪间充质干细胞心肌分化的差异 被引量:1
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作者 郭志坤 常丹阳 +1 位作者 刘玲玲 李琼 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期538-544,共7页
目的 探讨体内心肌微环境及体外5-氮杂胞苷(5-aza)诱导脂肪间充质干细胞分化为心肌样细胞的作用差异。方法 取小鼠腹股沟的皮下脂肪组织,分离培养脂肪间充质干细胞(ADMSCs),对其进行表面标记和成骨、成脂分化能力鉴定。选取生长状... 目的 探讨体内心肌微环境及体外5-氮杂胞苷(5-aza)诱导脂肪间充质干细胞分化为心肌样细胞的作用差异。方法 取小鼠腹股沟的皮下脂肪组织,分离培养脂肪间充质干细胞(ADMSCs),对其进行表面标记和成骨、成脂分化能力鉴定。选取生长状态良好的第3代ADMSCs,分为5-aza体外诱导组、体内心肌移植组,体外诱导3周以及体内移植1周后,采用免疫荧光技术检测特异性心肌肌钙蛋白T(cT nT)的表达。结果 两种诱导方法ADMSCs均表达cT nT,5-aza诱导组3周表达率(33.33±3.79)%,移植组1周表达率(42.93±4.04)%,移植组1周较5-aza诱导组3周具有更高的分化效率(P〈0.05)。结论 体外5-aza化学诱导和体内心肌微环境均可使ADMSCs分化为心肌样细胞,但心肌微环境的诱导分化效率明显高于5-aza的作用。 展开更多
关键词 心肌肌钙蛋白T 5-氮杂胞苷 脂肪间充质干细胞 心肌微环境 免疫荧光 小鼠
不同年龄大鼠急性心肌梗死后早期胶原纤维变化与心功能的关系 预览
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作者 胡春阳 殷国田 余悦欣 《广东医学》 北大核心 2017年第z2期13-16,共4页
目的 探讨不同年龄大鼠急性心肌梗死后早期胶原纤维变化与心功能的关系。方法 SD大鼠共30只,分为幼年组(20~25日龄)、青年组(3~5月龄)和老年组(13~15月龄),每组10只,采用左冠状动脉结扎法制备急性心肌梗死模型,Visual Sonic小动物超声... 目的 探讨不同年龄大鼠急性心肌梗死后早期胶原纤维变化与心功能的关系。方法 SD大鼠共30只,分为幼年组(20~25日龄)、青年组(3~5月龄)和老年组(13~15月龄),每组10只,采用左冠状动脉结扎法制备急性心肌梗死模型,Visual Sonic小动物超声成像系统测定术后1周左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)和左室舒张/收缩末期内径(LVIDd,LVIDs)。石蜡切片行Masson染色,免疫组织化学检测梗死区Ⅰ型胶原纤维(COLⅠ)、Ⅲ型胶原纤维(COLⅢ)表达。结果 随着年龄增长,梗死区域COLⅠ、COLⅢ表达逐渐增多,其间的心肌细胞逐渐减少;梗死后1周LVEF幼年组(59.63±3.21)%、青年组(41.46±4.16)%和老年组(39.38±2.60)%(P<0.01)。结论 急性心肌梗死后早期心功能的降低与梗死区胶原纤维的增多有关,且年龄越大越显著。 展开更多
关键词 心肌梗死 心功能 Ⅰ型胶原纤维 Ⅲ型胶原纤维 大鼠
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CD73对骨髓间充质干细胞增殖与衰老的影响
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作者 王琰 李琼 +1 位作者 张三林 郭志坤 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期669-674,共6页
目的 探讨CD73对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与衰老的影响。方法 培养小鼠BMSCs,构建慢病毒CD73过表达载体和CD73 RNAi干扰载体,分别转染BMSCs,实验分组:CD73过表达组(OE组)、CD73RNAi干扰组(RNAi组)和对照组(CON组)。衰老相... 目的 探讨CD73对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与衰老的影响。方法 培养小鼠BMSCs,构建慢病毒CD73过表达载体和CD73 RNAi干扰载体,分别转染BMSCs,实验分组:CD73过表达组(OE组)、CD73RNAi干扰组(RNAi组)和对照组(CON组)。衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞的衰老情况;MTT法检测细胞增殖能力变化;流式细胞术检测细胞周期变化;透射电子显微镜观测转染后细胞的超微结构;非损伤细胞功能分析仪检测细胞生长曲线。结果 慢病毒转染BMSCs后72 h和168 h,衰老细胞数量RNAi组〉CON组〉OE组(P〈0.05);转染后3~4d BMSCs的增殖能力为OE组较RNAi组和CON组细胞增殖速度快(P〈0.05);转染后3d各组细胞周期的变化是:OE组、RNAi组和CON组的G1期细胞所占比例分别为25.9%、44.1%和51.7%;S期细胞所占比例分别为48.8%、30.9%和26.9%;G2期细胞所占比例分别为25.2%、25.0%和21.4%;透射电子显微镜观察结果显示,OE组细胞质内粗面内质网和核糖体增多;细胞生长曲线显示OE组高于CON组和RNAi组。结论 CD73促进BMSCs增殖且抑制BMSCs衰老。 展开更多
关键词 CD73 增殖 衰老 骨髓间充质干细胞 超微结构 流式细胞术 小鼠
6-羟多巴损伤黑质导致弓状核离子钙接头蛋白1和阿片-促黑素皮质素原表达的变化 预览 被引量:4
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作者 张毅敏 连辉 +3 位作者 宋海岩 周立 蔡君艳 王志勇 《中国病理生理杂志》 CSCD 北大核心 2017年第6期975-980,共6页
目的:观察6-羟多巴(6-OHDA)损伤大鼠黑质(SN)后下丘脑弓状核(Arc)中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙接头蛋白1(Iba1)和阿片-促黑素皮质素原(POMC)的表达变化,为帕金森病(PD)患者消瘦的发生机制提供线索。方法:20只SD大鼠随机... 目的:观察6-羟多巴(6-OHDA)损伤大鼠黑质(SN)后下丘脑弓状核(Arc)中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙接头蛋白1(Iba1)和阿片-促黑素皮质素原(POMC)的表达变化,为帕金森病(PD)患者消瘦的发生机制提供线索。方法:20只SD大鼠随机分为6-OHDA大鼠组(双侧SN内注射6-OHDA)和对照组(注射等体积生理盐水)。免疫荧光染色和Western blot检测SN内TH,以及Arc内TH、Iba1和POMC的表达。结果:与对照组比较,6-OHDA大鼠组体重无明显变化,但腹膜后脂肪重量从(7.550±0.670)g减少到(3.895±0.465)g(P〈0.01)。SN内TH阳性细胞数量从56±5减少至14±2(P〈0.05);蛋白表达水平从0.75±0.11降低至0.41±0.09(P〈0.01)。Arc中TH阳性细胞数量从21±2减少到10±3(P〈0.05);Iba1阳性细胞数量从12±2增加到30±5(P〈0.05);POMC阳性细胞数量从16±4增加到31±2(P〈0.05)。下丘脑内TH蛋白的表达水平从0.35±0.05降低到0.21±0.02(P〈0.01);Iba1蛋白的表达水平从0.23±0.06增加至0.51±0.04(P〈0.01);POMC的蛋白表达水平从0.37±0.05增加至0.65±0.03(P〈0.01)。结论:Arc中TH、Iba1和POMC表达变化可能与PD脂肪减少存在一定的联系。 展开更多
关键词 6-羟多巴 弓状核 酪氨酸羟化酶 离子钙接头蛋白1 阿片-促黑素皮质素原
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