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表达Omp31基因重组牛布鲁菌的构建及鉴定
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作者 梁佳茗 钱晶 +7 位作者 卜昭阳 郎需龙 王莉 王秀然 杨艳玲 王晓旭 屈海龙 王兴龙 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期260-264,共5页
为提高布鲁菌疫苗株的免疫保护效果,本试验以牛布鲁菌疫苗株S19为研究对象,将羊布鲁菌Omp31基因克隆、扩增并插入至广宿主质粒pBBR1MCS-2中,构建重组质粒pBBR1MCS-Omp31;通过电转化的方式转入S19感受态细胞中,经抗性基因筛选和PCR验证,... 为提高布鲁菌疫苗株的免疫保护效果,本试验以牛布鲁菌疫苗株S19为研究对象,将羊布鲁菌Omp31基因克隆、扩增并插入至广宿主质粒pBBR1MCS-2中,构建重组质粒pBBR1MCS-Omp31;通过电转化的方式转入S19感受态细胞中,经抗性基因筛选和PCR验证,获得重组牛布鲁菌S19-Omp31株;该重组菌株连续传25代未发现重组质粒和Omp31基因丢失,表明其遗传稳定性良好;进一步经SDS-PAGE检测可见约26 000相对分子质量的目的条带,采用Western blot法检测显示目的蛋白可与His单克隆抗体及Omp31蛋白高免血清反应。本研究构建的重组牛布鲁菌S19-Omp31株能够稳定表达目的基因,为进一步开展S19-Omp31株的免疫效果评价奠定基础。 展开更多
关键词 牛布鲁菌 Omp31基因 重组细菌活载体 疫苗候选株
过表达UGPase基因和BCSP31基因的重组流产布氏杆菌的构建与鉴定
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作者 梁佳茗 钱晶 +7 位作者 卜昭阳 郎需龙 王莉 王秀然 杨艳玲 王晓旭 屈海龙 王兴龙 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期44-49,共6页
为提高流产布氏杆菌S19疫苗株的免疫保护效果,分别扩增流产布氏杆菌UGPase基因和BCSP31基因,将其插入含有双启动子pR/pL序列的广宿主穿梭质粒pBBR1MCS-PT中,电转至流产布氏杆菌S19感受态细胞并经抗性基因筛选,采用PCR法对重组菌株的遗... 为提高流产布氏杆菌S19疫苗株的免疫保护效果,分别扩增流产布氏杆菌UGPase基因和BCSP31基因,将其插入含有双启动子pR/pL序列的广宿主穿梭质粒pBBR1MCS-PT中,电转至流产布氏杆菌S19感受态细胞并经抗性基因筛选,采用PCR法对重组菌株的遗传稳定性进行检测,利用蛋白分析手段对目的基因的表达情况进行分析。PCR检测结果显示,构建的重组流产布氏杆菌S19-UGPase株和S19-BCSP31株的遗传性状稳定。SDS-PAGE与Western-blot结果显示,在33和31ku处可见明显条带,且与His标签抗体的反应位置一致,表明目的蛋白获得正确表达。结果表明,构建的过表达重组流产布氏杆菌S19-UGPase株和S19-BCSP31株能够稳定表达目的基因,为下一步开展S19-UGPase株和S19-BCSP31株免疫效果的评价奠定了基础。 展开更多
关键词 流产布氏杆菌 UGPase基因 BCSP31基因 疫苗候选株
猪链球菌4型分离株生物学特性研究 预览
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作者 孙珂 倪艳秀 +7 位作者 祝昊丹 王丹丹 关琳 俞正玉 周俊明 吕立新 王春凤 何孔旺 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第1期80-88,共9页
为分析猪链球菌4型(Streptococcus suis type 4,SS4)分离株的病原生物学特性,试验对来自中国不同地区的10株猪链球菌4型进行了多位点序列分型,通过PCR方法对猪链球菌7个保守管家基因aroA、gki、dpr、mutS、recA、thrA、cpn60进行扩增,... 为分析猪链球菌4型(Streptococcus suis type 4,SS4)分离株的病原生物学特性,试验对来自中国不同地区的10株猪链球菌4型进行了多位点序列分型,通过PCR方法对猪链球菌7个保守管家基因aroA、gki、dpr、mutS、recA、thrA、cpn60进行扩增,测序后将结果上传至MLST数据库查找序列型,然后制作聚类分析图来阐明菌株之间的亲缘关系;采用PCR方法对7种主要的毒力基因gdh、mrp、epf、sly、fbps、gapdh与orf2进行鉴定,通过毒力因子谱来分析猪链球菌4型毒力因子的分布;以纯化的10株细菌对BALB/c小鼠进行动物致病性试验,根据小鼠致死数量筛选出最强毒株,并进行新西兰兔致病性试验。结果显示,10株猪链球菌4型经多位点序列分型,6株为ST850型,3株为ST1006型,1株为ST94型;结合菌株分离地区分析发现,广东和江苏地区菌株有较高的同源性,江沪地区菌株出现分化现象,表现为遗传多样性;10株菌株均检测到了gdh、gapdh和orf2毒力基因,7株检测到sly基因,4株检测到fbps基因,根据毒力因子谱发现共有3个毒力基因型,gdh+sly+gapdh+orf2+型有6株,gdh+fbps+gapdh+orf2+型有3株,gdh+sly+fbps+gapdh+orf2+型仅有1株。动物致病性试验表明,10株细菌均能使BALB/c小鼠死亡,其中SH1510的半数致死量低至1×108 CFU,对小鼠的致病性最强,将纯化的SH1510菌液接种新西兰兔,可使新西兰兔出现典型的神经症状并死亡。以上结果为猪链球菌的遗传进化、毒力研究提供了新的数据,丰富了猪链球菌病的研究。 展开更多
关键词 猪链球菌4型(SS4) 多位点序列分型 毒力因子 致病性
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NO自由基对猪圆环病毒2型复制的体外抑制作用研究 预览
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作者 李基棕 张冬霞 +2 位作者 李丽 薛涛 刘传敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期924-930,共7页
试验旨在探讨NO自由基(NO·)对猪圆环病毒2型(PCV2)复制的抑制作用。硝普钠(SNP)和抗坏血酸(VC)联合加入培养基中可产生NO·,而单独使用SNP产生NO的形式为NO^+。本研究采用MTT法测定药物的细胞毒性,通过Griess反应测定供体药物... 试验旨在探讨NO自由基(NO·)对猪圆环病毒2型(PCV2)复制的抑制作用。硝普钠(SNP)和抗坏血酸(VC)联合加入培养基中可产生NO·,而单独使用SNP产生NO的形式为NO^+。本研究采用MTT法测定药物的细胞毒性,通过Griess反应测定供体药物产生NO的水平。分别用SNP、VC、SNP+VC和对照药物乙酰青酶胺(NAP)处理PK-15细胞,6h后接种1MOI的PCV2病毒液,72h后收获培养上清和细胞,通过间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting分析、病毒效价和实时荧光定量PCR试验检测病毒增殖水平。结果显示:SNP、VC和SNP+VC对PK-15细胞的最大安全浓度分别为500、62.5和31.25μmol/L;60μmol/LSNP和30μmol/LSNP+30μmol/LVC两种供体产生的NO量极显著高于非药物处理组和对照药物NAP处理组(P<0.01);与阳性对照组相比,60μmol/LSNP+30μmol/LVC处理组中的PCV2毒价和DNA拷贝数极显著下降(P<0.01),且PCV2Cap蛋白的表达也受到明显抑制,而SNP和VC单独处理组上述指标无显著变化(P>0.05)。以上结果表明,SNP+VC产生的NO·对PCV2增殖有显著抑制作用,SNP产生的NO^+不影响PCV2增殖,NO体外抑制PCV2增殖主要是通过NO·实现。 展开更多
关键词 NO NO自由基(NO·) 猪圆环病毒2型(PCV2) 抑制
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基于物联网的病死猪无害化处理山区运输监控系统设计 预览
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作者 沈印 高绪 +4 位作者 李光林 谢菊芳 陆昌华 胡肄农 尹彦鑫 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第9期165-174,共10页
目前,大多数无害化处置运输车辆使用全球定位系统(global positioning system,GPS)来确定病死猪的消毒站位置和运输路线。然而,当车辆在偏远山区运行时,定位信息传递不连续和不完整。为了解决这个问题,设计了一套病死猪无害化处理监控系... 目前,大多数无害化处置运输车辆使用全球定位系统(global positioning system,GPS)来确定病死猪的消毒站位置和运输路线。然而,当车辆在偏远山区运行时,定位信息传递不连续和不完整。为了解决这个问题,设计了一套病死猪无害化处理监控系统,系统结合北斗导航系统、全球定位系统、无线射频识别技术(radio frequency identification,RFID)、通用分组无线服务技术和地理信息系统等技术。利用北斗/GPS 双模用户机双模定位和双向通信的功能,一方面,它可以解决单一定位时出现的定位信息不稳定的问题;另一方面,当BDS导航定位系统数据似乎显示出偏差,将 WGS-84坐标系的GPS定位数据转换为BDS定位系统的CGCS2000坐标系,以提高运输车辆位置信息采集精度的目的。利用GAMIT软件计算观测点的三维坐标,并对组合导航和单导航的定位精度进行分析。采用Floyd算法对运输路线进行优化,寻找最短的运输距离。利用北斗卫星的信息通信功能代替全球移动通信系统(global system for mobile communications,GSM),短消息业务,实现无害化运输车辆与控制中心之间的信息远程传输。控制中心通过对接收到的数据进行分析,得到病死猪收运车的运输路线和定点消毒监测信息。系统试验表明:采集的数据能够准确及时地传输到控制中心,北斗/GPS 双模接收机定位精度比北斗卫星定位精度高 55.13%,比GPS卫星定位精度高 52.71%。北斗通信的网络丢包率为0.26%,消毒点的车辆定点识别误差率 0.97%,结果表明,满足病死猪无害化处理监控管理的要求,系统运行可靠、稳定。该系统的构建与应用,为其他病死动物无害化处理的综合管理与监控提供参考。 展开更多
关键词 监控 设计 物联网 无害化处理 北斗卫星 FLOYD 算法 运输线路图
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山羊副流感病毒3型感染MDBK细胞的转录组分析 预览
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作者 钟纯燕 李基棕 +9 位作者 毛立 李文良 郝飞 孙敏 刘茂军 主性 嵇辛勤 肖芳 杨蕾蕾 张纹纹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期364-372,共9页
本研究旨在探究山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞后的转录组基因变化情况,丰富CPIV3转录组信息。取1MOI CPIV3 JSHA2014-1病毒液感染MDBK细胞,设非感染正常细胞为对照,于24h后收获细胞,提取总RNA,利用Illumina HiSeq^TM 2500对感... 本研究旨在探究山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞后的转录组基因变化情况,丰富CPIV3转录组信息。取1MOI CPIV3 JSHA2014-1病毒液感染MDBK细胞,设非感染正常细胞为对照,于24h后收获细胞,提取总RNA,利用Illumina HiSeq^TM 2500对感染组与对照组进行高通量测序,并用测序评估、基因注释等生物信息学方法进行分析。结果显示,差异表达基因共261个,其中表达上调140个,表达下调121个,经RT-qPCR方法验证8个差异表达的干扰素信号通路相关基因,结果与高通量测序一致。进一步GO分类结果显示,差异表达基因主要涉及细胞生物学进程、构成细胞的组分以及实现的分子功能三个方面,KEGG分析显示这些基因参与代谢、生物系统、细胞进程、基因信息进程和环境信息进程。本研究为深入探究CPIV3的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 山羊副流感病毒3型 MDBK细胞 高通量测序 转录组
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大中型猪场阻断非洲猪瘟的三道防线 预览
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作者 邵国青 《北方牧业》 2019年第3期16-18,共3页
欧洲爆发原因:一是野猪作为非洲猪瘟病毒的天然储主,将疾病传播到家养猪场。高加索地区带毒野猪的运动导致疫情不断扩散;当地的狩猎习惯使野猪带毒废弃物被动转移;波兰死亡和腐烂的疣猪,尸体仍然有感染性。二是各国不能合作完成广泛的... 欧洲爆发原因:一是野猪作为非洲猪瘟病毒的天然储主,将疾病传播到家养猪场。高加索地区带毒野猪的运动导致疫情不断扩散;当地的狩猎习惯使野猪带毒废弃物被动转移;波兰死亡和腐烂的疣猪,尸体仍然有感染性。二是各国不能合作完成广泛的监测、报告和扑杀,导致疫情扩散,非洲猪瘟的快速诊断和彻底监测对于其控制是必不可少的。三是横穿欧洲的汽车交通威胁欧洲全境。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 生物安全 三道防线
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猪场最有效的盈利之道 预览
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作者 孙华伟 袁朗 张小飞 《猪业科学》 2019年第1期129-130,共2页
猪场盈利是复杂因素共同作用的结果,而亏损是一票否决制,猪场实现盈利没有固定路径,众多专家学者、猪场老板宣扬的成功秘诀,往往是自相矛盾的。失败比成功更具有普遍意义;最重要的一点——成功案例非常容易带有“幸存者偏差”,而这恰是... 猪场盈利是复杂因素共同作用的结果,而亏损是一票否决制,猪场实现盈利没有固定路径,众多专家学者、猪场老板宣扬的成功秘诀,往往是自相矛盾的。失败比成功更具有普遍意义;最重要的一点——成功案例非常容易带有“幸存者偏差”,而这恰是所谓“成功学”最根本的缺陷。与其挂一漏万地总结成功秘诀,不如从猪场破产者那里吸取教训,避免犯错,自然也就通向了成功。 展开更多
关键词 靠谱 盈利 避免 失败
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鉴别牛5种重要病毒的LAMP-基因芯片方法的建立 预览
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作者 高峰 华利忠 +5 位作者 于伯华 王建峰 张丹 张琳 唐泰山 张常印 《动物医学进展》 北大核心 2019年第5期7-12,共6页
为建立牛的主要疫病的快速、准确及高通量鉴别诊断技术,以赤羽病病毒(AKV)、牛白血病病毒(BLV)、蓝舌病病毒(BTV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)5种牛传染病病原为研究对象,将LAMP技术与微流控芯片技术有机结合,建立... 为建立牛的主要疫病的快速、准确及高通量鉴别诊断技术,以赤羽病病毒(AKV)、牛白血病病毒(BLV)、蓝舌病病毒(BTV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)5种牛传染病病原为研究对象,将LAMP技术与微流控芯片技术有机结合,建立了相应的基因芯片检测技术,并优化了该基因芯片的反应条件。结果表明,建立的基因芯片可同时检测上述5种病原,特异性好,60min反应时间即可给出检测结果。其中AKV和PPRV的敏感性为103copies/μL,BLV的敏感性为105copies/μL,BTV和BVDV的敏感性为102copies/μL,与LAMP检测的敏感性一致。成功建立了基于LAMP技术的5重RT-LAMP基因芯片,可同时快速准确检测上述5种病毒,为口岸检疫探索出一种能快速、高通量检测动物疫病的方法。 展开更多
关键词 环介导等温扩增技术 高通量 微流控芯片 牛的病毒鉴别检测
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2016年江苏省类猪圆环病毒P1分子流行病学回顾性调查
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作者 盛少阳 温立斌 +4 位作者 茅爱华 朱雪姣 李彬 任子利 何孔旺 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第3期97-100,共4页
旨在了解2016年江苏省类猪圆环病毒P1流行及毒株变异情况。运用PCR技术对江苏省9个县级市送检的330份血清进行检测,并进行全基因组测序,应用BioEdit和DNAStar对获得的P1全长基因组及ORF1与GenBank中的参考毒株进行序列比对及同源性分析... 旨在了解2016年江苏省类猪圆环病毒P1流行及毒株变异情况。运用PCR技术对江苏省9个县级市送检的330份血清进行检测,并进行全基因组测序,应用BioEdit和DNAStar对获得的P1全长基因组及ORF1与GenBank中的参考毒株进行序列比对及同源性分析,并进行系统进化树分析。共检出阳性样品43份,占总样品数的13%;9个地级市P1检出率差异显著,其中,沛县检出率最高为38.2%,其余各地0%~20%不等。选取9个县级市的代表毒株进行全基因组测序,共获得12株P1全长序列,12株毒株核苷酸同源性在99.4%~100%,ORF1核苷酸同源性在99.1%~100%;与参考毒株相比,ORF1核苷酸同源性在99.4%~100%,氨基酸同源性在99.1%~100%。研究表明,2016年江苏省各地区P1感染率差异显著,但整体感染率较高,毒株变异较小。 展开更多
关键词 类猪圆环病毒P1 序列分析 江苏
抗原浓缩技术研究进展
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作者 田宇杰 李银 +8 位作者 章丽娇 刘青涛 韩凯凯 杨婧 刘宇卓 赵冬敏 刘娜 王梦瑶 嵇辛勤 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期40-45,共6页
动物疫病是危害养殖业发展的重要因素,而疫苗免疫又是目前防控动物疫病最有效的手段之一。为了提高兽用多联疫苗的免疫效力,去除杂质,减少临床上的免疫不良反应,需要对抗原进行浓缩。疫苗的抗原浓缩技术主要是通过物理或化学方法去除杂... 动物疫病是危害养殖业发展的重要因素,而疫苗免疫又是目前防控动物疫病最有效的手段之一。为了提高兽用多联疫苗的免疫效力,去除杂质,减少临床上的免疫不良反应,需要对抗原进行浓缩。疫苗的抗原浓缩技术主要是通过物理或化学方法去除杂质以提高单位体积抗原含量,同时要防止抗原的免疫原性受到破坏,对整个浓缩条件要求较高,因此如何选择合适且高效的抗原浓缩方法尤为重要。文章对近年来抗原浓缩技术的研究及现状进行总结,旨在为选择抗原浓缩技术提供参考。 展开更多
关键词 抗原 蛋白质 浓缩 纯化 疫苗
一株携带犬细小病毒VP2融合基因的重组狂犬病毒的构建 预览
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作者 谭业平 赵静 +1 位作者 郭霄峰 何孔旺 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期866-870,共5页
为构建预防狂犬病毒和犬细小病毒的疫苗候选毒株,将编码狂犬病毒G蛋白的中和抗原表位的碱基序列插入犬细小病毒VP2基因中,再将VP2融合基因插入狂犬病毒全基因组的G和L基因之间,然后应用反向遗传操作技术构建重组狂犬病毒。直接免疫荧光... 为构建预防狂犬病毒和犬细小病毒的疫苗候选毒株,将编码狂犬病毒G蛋白的中和抗原表位的碱基序列插入犬细小病毒VP2基因中,再将VP2融合基因插入狂犬病毒全基因组的G和L基因之间,然后应用反向遗传操作技术构建重组狂犬病毒。直接免疫荧光染色结果显示成功获得重组狂犬病毒r HEP-r VP2;生物学特性研究结果显示重组病毒随着在BHK-21细胞上传代次数的增加,病毒滴度逐渐升高,呈现良好繁殖特性;RT-PCR结果显示携带VP2融合基因的重组病毒具有良好遗传稳定性,重组病毒免疫小鼠可诱导产生保护性抗狂犬病毒和犬细小病毒抗体。 展开更多
关键词 狂犬病毒 犬细小病毒VP2基因 反向遗传技术
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不同处理方式对发酵床模式下猪主要寄生虫病防治效果
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作者 李健 华利忠 +7 位作者 蔡梦 杨杰 徐小波 宦海琳 邵乐 秦枫 潘孝青 顾洪如 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第12期108-112,共5页
探讨发酵床养猪模式下寄生虫病防控效果,构建寄生虫病防控规程。将发生寄生虫病的表层垫料混匀,添加4组发酵床表层,将60头35日龄苏钟猪随机分为4组:A组(垫料翻耙后进猪,定期药物驱虫2次)、B组(垫料堆积发酵后进猪)、C组(垫料发酵后进猪... 探讨发酵床养猪模式下寄生虫病防控效果,构建寄生虫病防控规程。将发生寄生虫病的表层垫料混匀,添加4组发酵床表层,将60头35日龄苏钟猪随机分为4组:A组(垫料翻耙后进猪,定期药物驱虫2次)、B组(垫料堆积发酵后进猪)、C组(垫料发酵后进猪,定期药物驱虫2次)、D组(垫料翻耙后进猪,感染寄生虫时药物治疗1次),试验期120 d。垫料堆积发酵组垫料发酵温度极显著高于垫料翻耙组(P<0.01),并且堆积发酵后垫料中未检出寄生虫卵,试验第45、90天在垫料和粪便中的蛔虫卵、鞭虫卵、球虫卵数量均处于低水平;采用药物驱虫程序可有效降低猪粪便中的蛔虫卵、鞭虫卵、球虫卵数量和对应寄生虫的感染率,但不能避免垫料中寄生虫的重复感染; B、C组末重、总增重、平均日增重均显著高于A组(P<0.05)和D组(P<0.01),A组末重、总增重、平均日增重也均显著高于D组(P<0.05)。综上所述,在发酵床养猪模式下,采用进猪前药物驱虫、垫料堆积发酵,猪群饲养阶段定期驱虫,同时注意养殖管理器具消毒,可有效降低寄生虫感染率。 展开更多
关键词 发酵床 发酵方法 寄生虫虫卵 防治
2014-2016年我国江苏地区猪流行性腹泻病毒S基因的序列分析 预览
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作者 焦点 孙杰 +8 位作者 茅爱华 俞正玉 郭容利 朱琳 范宝超 袁万哲 李郁 何孔旺 李彬 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第6期8-11,15共5页
2010年以来,猪流行性腹泻给我国养猪业造成了严重的经济损失。为分析PEDV在我国最新的遗传变异情况,本研究对2014-2016年江苏地区20株PEDV野毒株的S基因进行克隆和测序,并对其遗传进化、序列变化、抗原表位等情况进行分析。遗传进化树显... 2010年以来,猪流行性腹泻给我国养猪业造成了严重的经济损失。为分析PEDV在我国最新的遗传变异情况,本研究对2014-2016年江苏地区20株PEDV野毒株的S基因进行克隆和测序,并对其遗传进化、序列变化、抗原表位等情况进行分析。遗传进化树显示,所测的PEDV毒株可分为G1、G2两大分支,12株流行野毒株位于G2b分支上,8株属于G1群S-Indel型,而与疫苗毒株亲缘关系较远。序列对比发现,氨基酸变化主要集中于S1区N端,所测毒株JSCZ1601出现了特异性的缺失。20株毒株的核苷酸(氨基酸)同源性为95. 1%-99. 8%(94. 6%-99. 9%),与我国流行毒株AH2012、疫苗毒株Attenuated DR13、欧美毒株CV777的同源性为95. 5%-99. 3%(94. 6%-99. 0%)、93. 5%-96. 0%(92. 5%-96. 3%)、93. 6%-95. 8%(93. 0%-96. 5%)。表位分析表明,主要变异位于COE、SS2区域,两个线性表位(SS6和against2C10)相对保守;跨膜螺旋区域的预测得知毒株之间存在部分差异。这些结果表明,江苏省流行的PEDV毒株发生较明显的变异,需研发新的疫苗来控制PEDV的暴发。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S基因 序列分析
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我国禽产品追溯技术构建与进程分析
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作者 黄胜海 陆俊贤 +5 位作者 陈大伟 胡肄农 张小燕 唐梦君 高玉时 李宝东 《中国家禽》 北大核心 2018年第20期52-56,共5页
为加快我国禽产品追溯技术的研究、建设与应用进程,根据我国公开和发表的禽产品追溯方面的相关文献,概述了我国禽产品追溯技术研究、建设与应用进程,从追溯技术研究和应用进程两个方面对我国禽产品追溯体系进行了分析;指出我国追溯... 为加快我国禽产品追溯技术的研究、建设与应用进程,根据我国公开和发表的禽产品追溯方面的相关文献,概述了我国禽产品追溯技术研究、建设与应用进程,从追溯技术研究和应用进程两个方面对我国禽产品追溯体系进行了分析;指出我国追溯技术方面存在信息获取和共享难度大、追溯技术研究覆盖面窄等问题;提出在完善追溯技术标准体系的基础上,以强化企业主体责任和创新商业发展模式为建设重点,以标准化为基础进行追溯技术顶层设计和追溯模型构建,为追溯技术研究核心的发展策略。 展开更多
关键词 禽产品 追溯技术 追溯模型 标准体系
鸽新城疫流行新特点及免疫程序 预览
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作者 葛东红 房玉红 《中国畜禽种业》 2018年第10期21-22,共2页
近年来, 鸽新城疫的流行表现出新特点, 已免疫新城疫疫苗的鸽群仍时有新城疫病例的发生, 疫苗紧急免疫效果不佳等, 为此制订鸽新城疫污染区与非污染区的免疫程序, 并在试验场应用取得了良好的效果, 为江苏省乃至全国鸽新城疫的防控提供... 近年来, 鸽新城疫的流行表现出新特点, 已免疫新城疫疫苗的鸽群仍时有新城疫病例的发生, 疫苗紧急免疫效果不佳等, 为此制订鸽新城疫污染区与非污染区的免疫程序, 并在试验场应用取得了良好的效果, 为江苏省乃至全国鸽新城疫的防控提供了科学参考. 展开更多
关键词 鸽新城疫 新特点 免疫程序
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血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的原核表达及鉴定 预览
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作者 刘娜 刘青涛 +2 位作者 李银 杨婧 李祥瑞 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期106-110,共5页
通过原核表达的方法得到血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白;根据GenBank中血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的基因序列,设计一对特异性引物,利用普通PCR方法扩增得到hexon基因的全长序列。将PCR扩增得到的血清4型禽腺病毒六邻体基因片... 通过原核表达的方法得到血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白;根据GenBank中血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的基因序列,设计一对特异性引物,利用普通PCR方法扩增得到hexon基因的全长序列。将PCR扩增得到的血清4型禽腺病毒六邻体基因片段,在其两端插入酶切位点后克隆至载体pMD18T中,经PCR鉴定和测序分析正确后,与原核表达载体pET-32a进行连接,构建pET-32a-hexon原核表达载体,并对其进行双酶切和测序鉴定。将构建成功的表达载体转化至BL21(DE3)中,用1 mmol/L的IPTG进行诱导表达,对得到的重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western Blot鉴定;经双酶切鉴定和测序鉴定,pET-32a-hexon原核表达载体构建成功,插入的六邻体蛋白基因片段大小为2 814 bp,在1 mmol/L浓度IPTG诱导3 h时重组蛋白表达量最高,且重组蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中。SDS-PAGE分析结果显示,融合蛋白分子量为118 ku。免疫印迹分析结果显示,融合蛋白可被抗FAdV-4的血清和HIS标签抗体特异性识别;成功表达了血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白,且得到的重组蛋白具有良好的反应原性,可用于血清4型禽腺病毒的进一步研究中,为血清4型禽腺病毒病的预防和治疗奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 六邻体蛋白 原核表达
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血清15与21型蓝舌病病毒的分离与鉴定 预览 被引量:1
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作者 李文良 毛立 +8 位作者 杨蕾蕾 许宝军 唐朝忠 杨恒 郝飞 张纹纹 邵坤 李华春 江杰元 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期630-634,共5页
【目的】蓝舌病病毒是一种重要的虫媒病毒,血清型较多,为了解近年来江苏省盱眙县蓝舌病病毒流行情况及血清型分别情况。【方法】本研究于2015-2016年在盱眙县桂五镇建立了5头蓝舌病血清学阴性山羊作为监控动物群。从2015年5-10月,每周采... 【目的】蓝舌病病毒是一种重要的虫媒病毒,血清型较多,为了解近年来江苏省盱眙县蓝舌病病毒流行情况及血清型分别情况。【方法】本研究于2015-2016年在盱眙县桂五镇建立了5头蓝舌病血清学阴性山羊作为监控动物群。从2015年5-10月,每周采血1次,2015年11月至2016年4月,每月采血1次,用BTV C-ELISA试剂盒进行血清学监测。用RT-PCR检测转阳前2周、1周和转阳本周的血液样品,选择阳性样品处理后接种鸡胚,收获死亡鸡胚肝脏,用PBS悬浮捣碎的鸡胚肝脏,上清接种于C6/36细胞一代、BHK-21 3代进行病毒分离。阳性样品采用RT-PCR进行血清型鉴定。【结果】6月开始部分动物血清抗体转阳性,至12月,监控动物全部转为阳性。通过鸡胚、细胞传代培养共获得5个出现细胞病变的细胞培养物,经RT-PCR检测VP7基因均扩增出1156 bp片段。进一步通过RT-PCR检测VP2基因对5个分离毒株进行血清型鉴定。结果表明2株为BTV-15、3株为BTV-21。【结论】上述结果丰富了江苏省蓝舌病的流行病学资料,为蓝舌病的防控提供科学依据。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 分离 血清型 监控
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肝片吸虫Fh8标签融合表达口蹄疫O型病毒结构蛋白
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作者 孙小涵 张雪寒 +2 位作者 张碧成 张强 何孔旺 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期727-730,共4页
口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)的结构蛋白VP1难以实现体外的高效表达。本研究为获得良好免疫原性的VP1蛋白,选用肝片吸虫Fh8小肽段作为新型融合表达标签,构建重组Fh8-VP1免疫原,以期获得大肠杆菌中的高效表达。... 口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)的结构蛋白VP1难以实现体外的高效表达。本研究为获得良好免疫原性的VP1蛋白,选用肝片吸虫Fh8小肽段作为新型融合表达标签,构建重组Fh8-VP1免疫原,以期获得大肠杆菌中的高效表达。分别合成VP1的20440aa和129~169aa之间的核苷酸片段,并用2个甘氨酸(GG)连接2个片段,合成的核苷酸片段(△VP1)克隆入Fh8标签之后,构建重组菌BL21(DE3)/pCold I—Fh8-△VP1,SDS-PAGE分析蛋白表达形式,Westernblot方法检测重组His—Fh8-△VP1的抗原性。结果显示,成功构建重组质粒BL21(DE3)/pCold I—Fh8-△VP1,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,且以包涵体形式存在于菌体蛋白,可与猪源FMDV阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 VP1 肝片吸虫Fh8 可溶性表达
江苏及周边地区猪流行性腹泻病毒的检测及其ORF3基因序列分析
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作者 焦点 孙杰 +6 位作者 俞正玉 郭容利 朱琳 范宝超 李郁 何孔旺 李彬 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第10期88-94,共7页
根据江苏省及周边地区猪场2014年出现的临床腹泻病例,对发病猪送检病料进行了猪流行性腹泻病病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、轮状病毒(RV)这3种重要病毒进行检测,同时分析PEDV的ORF3基因序列。结果显示:建立的三重RT-PC... 根据江苏省及周边地区猪场2014年出现的临床腹泻病例,对发病猪送检病料进行了猪流行性腹泻病病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、轮状病毒(RV)这3种重要病毒进行检测,同时分析PEDV的ORF3基因序列。结果显示:建立的三重RT-PCR检测方法,检测下限可达10^4拷贝/μL的混合质粒,特异性好,没有扩增出其他病毒。PEDV感染率高达36.3%,TGEV与RV的感染率均不足1%,此外还存在1例PEDV与TGEV混合感染的情况。对部分PEDV阳性病料的ORF3基因进行序列分析,发现核苷酸(氨基酸)的同源性为95.9%-100%(96.9%-100%),且与疫苗毒株遗传关系较远。该结果明确了江苏及周边地区的仔猪病毒性腹泻病原,为该病的防控提供参考依据。 展开更多
关键词 猪病毒性腹泻 猪流行性腹泻病病毒 ORF3基因 序列分析
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