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miR-153-3p调控神经突的生长
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作者 郭静 吴琦 +2 位作者 蔡旖斐 余涛 万峻 《中华实用诊断与治疗杂志》 2019年第7期650-653,共4页
目的探讨miR-153-3p在大、小鼠神经突生长中的作用.方法对数生长期C57BL/6小鼠N2A细胞和Rattus norvegicus大鼠PC12细胞,随机分为miR-153-3p过表达组(转染miR-153-3p过表达试剂miR-153-3p mimic)、miR-153-3p抑制组(转染miR-153-3p表达... 目的探讨miR-153-3p在大、小鼠神经突生长中的作用.方法对数生长期C57BL/6小鼠N2A细胞和Rattus norvegicus大鼠PC12细胞,随机分为miR-153-3p过表达组(转染miR-153-3p过表达试剂miR-153-3p mimic)、miR-153-3p抑制组(转染miR-153-3p表达抑制剂miR-153-3p inhibitor)、过表达对照组(转染miR-153-3p mimic空白对照试剂miR-153-3p mimic NC)、抑制剂对照组(转染miR-153-3p inhibitor空白对照试剂miR-153-3p inhibitor NC).转染48 h,采用实时荧光定量PCR法检测4组细胞miR-153-3p mRNA相对表达量,免疫荧光法检测神经突生长情况.结果 miR-153-3p过表达组N2A细胞、PC12细胞miR-153-3pmRNA相对表达量(28.98±1.63、19.67±0.88)均高于miR-153-3p抑制组(0.94±0.19、0.89±0.05)、过表达对照组(0.99±0.08、1.00±0.09)、抑制剂对照组(1.00±0.04、1.00±0.14)(P<0.05),miR-153-3p抑制组、过表达对照组、抑制剂对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);miR-153-3p过表达组N2A细胞、PC12细胞神经突总长度[(31.13±3.85)、(38.08±2.12)μm]和最长神经轴突长度[(18.04±2.58)、17.48±1.75)μm]均较miR-153-3p抑制组[N2A细胞:(54.53±1.83)、(31.74±2.36)μm;PC12细胞:(64.46±12.85)、(29.46±7.36)μm]、过表达对照组[N2A细胞:(42.53±6.29)、(24.99±3.47)μm;PC12细胞:(53.58±4.88)、(25.31±3.66)μm]、抑制剂对照组[N2A细胞:(41.33±2.77)、(24.57±3.86)μm;PC12细胞:(44.44±7.59)、(23.04±4.31)μm]短(P<0.05),且过表达对照组、抑制剂对照组PC12细胞、N2A细胞神经突总长度和最长神经轴突长度较miR-153-3p抑制组短(P<0.05),过表达对照组、抑制剂对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 miR-153-3p可抑制小鼠N2A细胞、大鼠PC12细胞神经突生长. 展开更多
关键词 神经突生长 miR-153-3p N2A细胞 PC12细胞
原钙黏蛋白7对小鼠皮层神经元细胞凋亡的影响
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作者 张一丹 何英 +2 位作者 李佳娜 陈小帆 熊轶 《中华实用诊断与治疗杂志》 2019年第9期857-859,共3页
目的探讨原钙黏蛋白7(protocadherin 7,Pcdh7)基因在促进小鼠皮层神经元细胞凋亡中的作用及可能机制。方法原代培养的C57BL/6小鼠皮层神经元细胞,随机分为空载组(转染空白质粒)、Pcdh7过表达组(转染Pcdh7过表达质粒)、Ca^2+通道阻滞组(... 目的探讨原钙黏蛋白7(protocadherin 7,Pcdh7)基因在促进小鼠皮层神经元细胞凋亡中的作用及可能机制。方法原代培养的C57BL/6小鼠皮层神经元细胞,随机分为空载组(转染空白质粒)、Pcdh7过表达组(转染Pcdh7过表达质粒)、Ca^2+通道阻滞组(转染Pcdh7过表达质粒及Ca^2+通道抑制剂西尼地平)。转染48h,采用流式细胞仪检测3组神经元细胞内Ca^2+荧光强度,CCK-8法检测3组神经元细胞存活率,荧光探针法检测3组神经元细胞凋亡率。结果Pcdh7过表达组神经元细胞内Ca^2+荧光强度[(30.57±4.34)MFI]高于空载组[(18.60±0.57)MFI]和Ca^2+通道阻滞组[(18.63±1.97)MFI](P<0.05),空载组与Ca^2+通道阻滞组比较差异无统计学意义(P>0.05);Pcdh7过表达组神经元细胞存活率吸光度值(0.64±0.04)低于空载组(1.01±0.03)和Ca^2+通道阻滞组(0.84±0.02)(P<0.05),且Ca^2+通道阻滞组低于空载组(P<0.05);Pcdh7过表达组神经元细胞凋亡率[(34.10±4.00)%]高于空载组[(13.56±2.48)%]和Ca^2+通道阻滞组[(13.98±3.00)%](P<0.05),空载组与Ca^2+通道阻滞组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达Pcdh7基因可诱导小鼠皮层神经元细胞凋亡,其机制可能与促进细胞内Ca^2+内流有关。 展开更多
关键词 原钙黏蛋白7 皮层神经元细胞 凋亡 CA^2+ 小鼠
环状RNA circRtn4对小鼠成肌细胞增殖和分化功能的影响
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作者 王海霞 陈小帆 张伟 《中华实用诊断与治疗杂志》 2019年第10期953-957,共5页
目的探讨circRtn4在小鼠成肌细胞C2C12细胞中的表达情况及其对成肌细胞增殖和分化功能的影响。方法对数生长期小鼠成肌细胞C2C12细胞,采用PCR检测C2C12细胞中circRtn4表达情况,采用实时荧光定量PCR法检测分化前及分化第1、2、3、4天circ... 目的探讨circRtn4在小鼠成肌细胞C2C12细胞中的表达情况及其对成肌细胞增殖和分化功能的影响。方法对数生长期小鼠成肌细胞C2C12细胞,采用PCR检测C2C12细胞中circRtn4表达情况,采用实时荧光定量PCR法检测分化前及分化第1、2、3、4天circRtn4相对表达量,采用核质分离实验确定细胞内定位。对数生长期C2C12细胞分为沉默组和对照组,分别转染特异性靶向circRtn4的siRNA和阴性对照siRNA,采用实时荧光定量PCR检测2组细胞circRtn4沉默效率和脱靶情况,采用CCK-8法检测培养前及培养第1、2、3、4天2组细胞增殖率,采用免疫荧光法和Western blot法检测2组分化第2天MYOG蛋白和分化第4天MHC蛋白表达情况。结果 C2C12细胞分化第3天circRtn4相对表达量(3.72±0.32)高于分化前(1.00±0.01)及分化第1天(0.76±0.03)、第2天(1.21±0.12)和第4天(2.51±0.33)(P<0.05),分化第4天高于分化前及分化第1、2天(P<0.05),分化第1天低于分化前(P<0.05);circRtn4在C2C12细胞质中占67.93%,细胞核中占32.07%;沉默组circRtn4相对表达量(0.03±0.02)低于对照组(0.97±0.03)(P<0.05),Rtn4 mRNA相对表达量(1.11±0.11)与对照组(0.99±0.03)比较差异无统计学意义(P>0.05);培养前及培养第1、2、3、4天,2组细胞增殖率比较差异均无统计学意义(P>0.05);沉默组分化第2天表达MYOG蛋白的细胞数减少,分化第4天表达MHC蛋白的细胞肌纤维化不明显,细胞极化和融合不明显;沉默组分化第2天MYOG蛋白(0.68±0.05)和分化第4天MHC蛋白(0.75±0.06)相对表达量明显低于对照组(1.00±0.09、1.00±0.13)(P<0.05)。结论 circRtn4在成肌细胞C2C12细胞中表达,在成肌细胞分化中后期表达量明显增加;circRtn4表达被沉默后,C2C12细胞增殖无明显变化,但其分化受到抑制。 展开更多
关键词 circRtn4 成肌细胞 增殖 分化 小鼠
屋尘螨变应原Der p 5在大肠埃希菌中的表达及纯化
4
作者 王罗 贺鹏飞 +3 位作者 窦侠 张杰 张伟 魏准 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第12期1264-1268,1273共6页
目的 克隆表达屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus,Der p)第5组变应原Der p5基因,在E.c oli中表达、纯化重组Der p5蛋白,并分析其血清IgE反应原性。方法 以合成的Der p5核酸序列为模板进行PCR扩增,产物经双酶切后与载体pCold-TFM... 目的 克隆表达屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus,Der p)第5组变应原Der p5基因,在E.c oli中表达、纯化重组Der p5蛋白,并分析其血清IgE反应原性。方法 以合成的Der p5核酸序列为模板进行PCR扩增,产物经双酶切后与载体pCold-TFM连接,构建重组表达质粒pCold-TFM-Der p5,转化E.c oliBL21(DE3),IPTG诱导表达。用镍离子亲和层析柱和凝胶过滤层析柱纯化目的蛋白,尘螨过敏患者血清鉴定其IgE反应原性。结果 重组表达质粒pCold-TFM-Der p5经双酶切、PCR及测序鉴定证明构建正确;在E.coliBL21(DE3)中实现了目的蛋白的可溶性高表达,毎升细菌表达产物经纯化可得到纯度95%以上的Der p5蛋白〈6 mg。纯化的重组Der p5蛋白与尘螨过敏患者血清IgE有结合活性。结论 成功构建了Der p5原核表达载体,高效表达并纯化了目的蛋白,纯化的重组Der p5蛋白具有良好的IgE反应原性,为屋尘螨变态反应性疾病的特异性诊断和治疗以及致敏蛋白的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 屋尘螨 第5组变应原 原核细胞 基因表达 特异性免疫治疗 反应原性
实验兔骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定 被引量:1
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作者 马笃军 彭力平 +5 位作者 王立新 余阗 裴军宇 李明华 徐宁达 肖伟 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期99-104,共6页
探讨建立兔骨髓间质干细胞(BMSCs)的体外分离纯化、扩增和鉴定的方法,为BMSCs的进一步诱导分化和应用奠定基础。首先抽取兔髂骨骨髓,采用Percoll密度梯度离心法得到骨髓单个核细胞,接种后形成单层贴壁细胞,经胰蛋白酶消化后传代... 探讨建立兔骨髓间质干细胞(BMSCs)的体外分离纯化、扩增和鉴定的方法,为BMSCs的进一步诱导分化和应用奠定基础。首先抽取兔髂骨骨髓,采用Percoll密度梯度离心法得到骨髓单个核细胞,接种后形成单层贴壁细胞,经胰蛋白酶消化后传代培养扩增,倒置相差显微镜观察细胞生长状态,细胞免疫组化检测CD73、CD34。结果表明,成功建立了兔BMSCs体外分离及培养扩增的方法,发现BMSCs表现贴壁生长,P0代时呈集落生长,细胞呈梭形,传代后细胞增殖速度加快,形态开始多样化;细胞免疫组化显示BMSCs表达CD73,未表达CD34,反复传代后CD73表达效率增高。上述研究表明,Percoll密度梯度离心联合骨髓贴壁法,能有效分离、纯化和扩增BMSCs,提取的细胞具有BMSCs的生长特性和抗原表型,其中P3~P6代细胞增殖能力强,可用于进一步的研究工作。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞培养 密度梯度离心法
青年人群冷加压试验血压反应性的影响因素
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作者 智翠娜 霍冰清 +4 位作者 王晓岗 史欣然 贾叶青 杨鹏 李云 《心脏杂志》 CAS 2017年第6期664-666,675共4页
目的 探讨青年人群冷加压试验(cold pressor test,CPT)血压反应性的影响因素。方法 对483例17~28岁的青年进行问卷调查及身高、体质量测量、CPT检测,分析影响青年人群CPT血压反应性的因素。结果 总人群收缩压(SBP)高反应率为8.9%... 目的 探讨青年人群冷加压试验(cold pressor test,CPT)血压反应性的影响因素。方法 对483例17~28岁的青年进行问卷调查及身高、体质量测量、CPT检测,分析影响青年人群CPT血压反应性的因素。结果 总人群收缩压(SBP)高反应率为8.9%(43/483),舒张压(DBP)高反应率为6.0%(29/483)。多因素分析显示,男性、饮酒与CPT血压反应性呈正相关(P〈0.05),其中男性SBP高反应风险是女性的2.9倍(OR=2.916,OR95%CI 1.382~6.152,P〈0.05),饮酒者DBP高反应性风险是不饮酒者的12.6倍(OR=12.600,OR95%CI 2.236~70.994,P〈0.01)。而较高的基线血压与CPT高反应性负相关(P〈0.05),基线DBP较高者DBP高反应风险是基线DBP较低者的0.9倍(OR=0.877,OR95%CI 0.834~0.923,P〈0.001)。结论 在青年人群中,男性、饮酒与CPT血压反应性正相关,较高的基线血压与CPT血压反应性负相关。 展开更多
关键词 冷加压试验 青年人群 影响因素
FoxO1和FoxO3a在内皮细胞凋亡过程中的作用 预览
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作者 曲环 李芳 《广东医学》 CAS 北大核心 2016年第21期3162-3164,共3页
目的探索肝细胞生长因子(HGF)在内皮细胞中是否通过磷酸化FoxO1及FoxO3a的机制发挥其抗凋亡活性。方法分离与原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),由100μmolH2O2诱导损伤,分空白对照组、100μmolH2O2组和HGF预处理30min后加100μmol... 目的探索肝细胞生长因子(HGF)在内皮细胞中是否通过磷酸化FoxO1及FoxO3a的机制发挥其抗凋亡活性。方法分离与原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),由100μmolH2O2诱导损伤,分空白对照组、100μmolH2O2组和HGF预处理30min后加100μmolH2O2组,通过流式细胞仪判定细胞凋亡程度及Western blot检测蛋白含量变化。结果H2O2处理对数生长期的HUVEC24h会导致(82.74±1.53)%的细胞凋亡,HGF预处理细胞后,细胞凋亡比例降至(25.4±3.69)%,两组相比差异有统计学意义(P〈0.05);HGF可时间依赖性地磷酸化FoxO1及FoxO3a。结论HGF通过提高细胞内FoxO1和FoxO3a磷酸化水平,抑制H2O2所引起的HUVEC酌凋亡. 展开更多
关键词 FOXO1 FOXO3A 肝细胞生长因子 内皮细胞
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果蝇钙调蛋白和肌球蛋白NINAC相互作用分析
8
作者 游霞 刘海洋 刘伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期798-806,共9页
果蝇的视觉信号转导途径是已知的最快的G-蛋白偶联信号通路。这其中涉及到TRP/TRPL通道的开放以及钙离子的内流等一系列反应的形成。NINAC(neither inactivation nor afterpotentialC)是一种特异性存在于果蝇感光细胞中的第3类肌球... 果蝇的视觉信号转导途径是已知的最快的G-蛋白偶联信号通路。这其中涉及到TRP/TRPL通道的开放以及钙离子的内流等一系列反应的形成。NINAC(neither inactivation nor afterpotentialC)是一种特异性存在于果蝇感光细胞中的第3类肌球蛋白(Myosin III),其在终止果蝇的视觉信号转导通路中起着非常重要的作用。NINAC蛋白具有两种亚型:一种是132 kD的蛋白亚型(p132),另一种则是174 kD的蛋白亚型(p174)。这两种不同的蛋白亚型都具有相同的激酶催化结构域(kinase domain),以及与肌球蛋白相似的马达结构域(motor domain)。但是,它们在C末端却存在着非常大的差异,这其中包括了钙调蛋白结合基序(IQ motif)。NINAC的这两种蛋白亚型在果蝇的感光细胞中的定位以及作用有很大不同,尤其是在与钙调蛋白的相互作用方面。钙调蛋白结合基序与钙调蛋白(CaM)之间的相互作用对于果蝇的视觉信号通路具有重要的意义:NINAC结合钙调蛋白能力的缺失将导致果蝇的视觉传导缺陷。本文通过蛋白共表达的方法,成功表达并纯化得到了不同版本的NINAC与钙调蛋白的蛋白复合物。静态光散射的结果表明,在Ca2 +存在情况下,p174蛋白可以结合2个Ca2 +-CaM,而p132只结合1个Ca2 +-CaM。通过分析型凝胶过滤以及等温量热滴定技术,进一步鉴定了p174及p132的IQ2(第2个钙调蛋白结合基序)序列与Ca2 +-CaM的相互作用。通过序列分析及进一步的突变实验发现,p174 IQ2中的3个疏水氨基酸(F1083,F1086和L1092)对于钙调蛋白的结合非常重要,并导致了p174与p132蛋白和Ca2 +-CaM结合能力的差异。本文的研究提供了NINAC与Ca2 +-CaM相互作用的生化机制,将为进一步在果蝇视觉信号通路中深入研究CaM是如何调节NINAC的体内功能实验打下基础。 展开更多
关键词 钙调蛋白 NINAC蛋白 IQ结合基序
大鼠MUPP1蛋白PDZ8结构域的生化及晶体结构特性 被引量:2
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作者 吕颜宏 李健潮 +1 位作者 朱海丽 刘伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1049-1056,共8页
多重PDZ结构域蛋白1型(MUPP1)是一种存在于上皮细胞和神经细胞内含有13个PDZ结构域的重要支架蛋白.在上皮细胞中,MUPP1蛋白在紧密连接结构的形成和上皮细胞的极化过程中发挥重要作用.而在中枢神经系统中,MUPP1基因的1个提前终止突变... 多重PDZ结构域蛋白1型(MUPP1)是一种存在于上皮细胞和神经细胞内含有13个PDZ结构域的重要支架蛋白.在上皮细胞中,MUPP1蛋白在紧密连接结构的形成和上皮细胞的极化过程中发挥重要作用.而在中枢神经系统中,MUPP1基因的1个提前终止突变导致了其最后12个PDZ结构域的缺失,以及严重的先天性脑积水.此外,MUPP1蛋白的表达水平与酒精依赖性和药物戒断的严重性也具有显著的相关性.因此,对MUPP1蛋白所含的PDZ结构域进行纯化和性质鉴定,将有助于深入研究MUPP1蛋白的功能和分子机制.在本文研究中,利用亲和纯化和分子筛技术,对大鼠来源的MUPP1蛋白的第8个PDZ结构域进行了表达和纯化.多角度激光光散射的数据表明:MUPP1-PDZ8结构域在溶液中为单体,分子量为16.4 k D.圆二色谱结果表明,MUPP1-PDZ8结构域具有较好的二级结构折叠,测得其熔解温度为71.6摄氏度,暗示该PDZ结构域在溶液中非常稳定.最后,MUPP1-PDZ8结构域的晶体结构显示,该结构域属于I型PDZ结构域,包含3个α螺旋和6个β折叠.其中GLGL模块、β折叠B上的1 351位亮氨酸,以及α螺旋B上的1 405位异亮氨酸/1 398位组氨酸形成的PDZ结合口袋,可以特异性地与其目标蛋白质的羧基末端相结合.综上所述,本文的研究提供了MUPP1-PDZ8结构域的生化特性,以及该结构域与其目标蛋白质相互作用的分子机制,这将为MUPP1蛋白的功能研究提供生物化学与结构生物学的理论基础. 展开更多
关键词 多重PDZ结构域蛋白1型 PDZ结构域 晶体结构
携带HSV-1TK基因的逆转录病毒载体构建及在HeLa细胞中的表达 被引量:1
10
作者 张巨峰 樊东升 +5 位作者 张超 卢彦欣 王俊伟 牟艳芳 陈艳娜 万峻 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第2期205-207,共3页
目的:构建携带单纯疱疹病毒脱氧胸腺嘧啶激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)的逆转录病毒,用于宫颈癌的治疗研究。方法:用限制性内切酶从质粒pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z-TK切下HSV-1TK cDNA序列,亚克隆入逆转... 目的:构建携带单纯疱疹病毒脱氧胸腺嘧啶激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)的逆转录病毒,用于宫颈癌的治疗研究。方法:用限制性内切酶从质粒pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z-TK切下HSV-1TK cDNA序列,亚克隆入逆转录病毒载体pLXSN得到重组质粒pLXSN-TK,鉴定正确的阳性重组质粒经PA317细胞包装,G418筛选,在NIH3T3细胞进行病毒滴度测定。然后用病毒感染人宫颈癌细胞HeLa。PCR、RT-PCR和Western blotting方法检测HSV-1TK基因在HeLa中的整合和表达情况。结果:重组质粒pLXSN-TK经PA317细胞包装后收获病毒上清,感染HeLa细胞,检测发现HSV-1TK基因整合到细胞基因组DNA中,并且能有效的转录和翻译。结论:成功构建了逆转录病毒pLXSN-TK,该病毒能有效感染HeLa细胞,并使携带的治疗基因HSV-1TK在细胞中表达,为今后HSV-1TK基因治疗宫颈癌的研究奠定基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒脱氧胸腺嘧啶激酶基因 逆转录病毒 宫颈癌
人IL-12重组逆转录病毒载体在HeLa细胞中的表达
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作者 张巨峰 陈艳娜 +3 位作者 张文峰 王俊伟 牟艳芳 黄树林 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第7期1205-1207,共3页
目的:包装携带人白细胞介素12(IL-12)的逆转录病毒,用于宫颈癌的治疗研究。方法:携带IL-12的逆转录病毒重组质粒pL35P40SN经PA317细胞包装,G418筛选,在NIH3T3细胞进行病毒滴度测定。然后用病毒感染人宫颈癌细胞HeLa。PCR、RT-PCR方... 目的:包装携带人白细胞介素12(IL-12)的逆转录病毒,用于宫颈癌的治疗研究。方法:携带IL-12的逆转录病毒重组质粒pL35P40SN经PA317细胞包装,G418筛选,在NIH3T3细胞进行病毒滴度测定。然后用病毒感染人宫颈癌细胞HeLa。PCR、RT-PCR方法检测IL-12基因在HeLa中的整合和表达情况。结果:重组质粒pL35P40SN经PA317细胞包装后收获病毒上清,感染HeLa细胞,检测发现IL-12基因整合到细胞基因组DNA中,并且能有效的转录。结论:成功包装了携带IL-12基因的逆转录病毒,该病毒能有效感染HeLa细胞,并使携带的基因IL-12在细胞中表达,为今后IL-12基因治疗宫颈癌的研究奠定基础。 展开更多
关键词 IL-12基因 逆转录病毒 宫颈癌
皮肤癌中原钙黏蛋白10基因启动子甲基化水平及意义
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作者 王聪 刘妍 +1 位作者 黎满慧 万峻 《中华实用诊断与治疗杂志》 2018年第9期833-835,共3页
目的探讨皮肤癌组织中原钙黏蛋白10(protocadherin 10,PCDH10)基因的甲基化水平及临床意义。方法取67例皮肤鳞状细胞癌、85例皮肤基底细胞癌患者手术切除癌组织和癌旁正常组织标本,43例光化性角化病患者活检病变组织及正常组织标本... 目的探讨皮肤癌组织中原钙黏蛋白10(protocadherin 10,PCDH10)基因的甲基化水平及临床意义。方法取67例皮肤鳞状细胞癌、85例皮肤基底细胞癌患者手术切除癌组织和癌旁正常组织标本,43例光化性角化病患者活检病变组织及正常组织标本,提取DNA进行甲基化修饰。高分辨率熔解曲线法检测各浓度标准品荧光信号强度,运用软件分析得到甲基化分型图谱,判断样本曲线在标准曲线上的位置,获得样本甲基化程度的数据。结果鳞状细胞癌、基底细胞癌组织中PCDH10基因启动子高甲基化比率(89.6%、87.1%)均高于癌旁组织(11.9%、8.2%)(P〈0.05);光化性角化病病变组织PCDH10基因启动子高甲基化比率(51.2%)高于癌旁正常组织(9.3%)(P〈0.05);鳞状细胞癌、基底细胞癌组织中PCDH10基因启动子高甲基化比率高于光化性角化病病变组织(P〈0.05);鳞状细胞癌组织中PCDH10基因启动子超甲基化比率为23.9%。结论高水平的PCDH10基因甲基化可能被用作皮肤癌的标志物,其中超甲基化可作为鳞状细胞癌的标志,而低水平的PCDH10甲基化可作为皮肤病早期发现的指标。 展开更多
关键词 皮肤癌 原钙黏蛋白10 高分辨率熔解曲线 甲基化
ICR小鼠脑发育过程中原钙黏蛋白7a表达及意义 被引量:1
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作者 肖华娟 亓月 +1 位作者 李佳娜 熊轶 《中华实用诊断与治疗杂志》 2017年第11期1072-1075,共4页
目的探讨ICR小鼠不同发育阶段脑组织原钙黏蛋白7a(protocadherin 7a,Pcdh7a)基因表达及临床意义。方法取胚胎期第16.5、18.5天,出生即刻及出生后第3、7、14、21、30、60天ICR小鼠脑组织,采用实时荧光定量PCR法检测海马和小脑组织Pcdh7a... 目的探讨ICR小鼠不同发育阶段脑组织原钙黏蛋白7a(protocadherin 7a,Pcdh7a)基因表达及临床意义。方法取胚胎期第16.5、18.5天,出生即刻及出生后第3、7、14、21、30、60天ICR小鼠脑组织,采用实时荧光定量PCR法检测海马和小脑组织Pcdh7a基因表达,采用原位杂交法检测ICR小鼠不同部位脑组织Pcdh7a基因表达。结果小脑组织Pcdh7amRNA相对表达量在胚胎期第18.5天(3.26±0.27),出生即刻及出生后第3、7、14、21、30、60天(4.45±0.23、5.13±0.33、3.47±0.39、5.22±0.75、5.74±0.38、6.48±0.29、6.20±0.29)均明显高于胚胎期第16.5天(1.00±0.03)(P<0.05);胚胎期第16.5、18.5天,出生即刻及出生后第3、7、14、21、30、60天海马组织Pcdh7amRNA相对表达量(1.00±0.04、0.94±0.07、1.06±0.08、0.96±0.08、0.93±0.03、0.82±0.01、0.84±0.01、1.00±0.03、1.00±0.02)比较差异均无统计学意义(P>0.05);原位杂交结果显示,胚胎期第16.5天、出生后第7天Pcdh7amRNA主要在嗅球、海马、皮层和小脑中高表达,出生后第21天主要在海马、小脑、延髓、脑桥高表达,出生后第30天主要在海马、皮层和小脑高表达,且在海马中主要表达于CA1区和DG区。结论 Pcdh7a基因在ICR小鼠不同发育阶段不同部位脑组织呈高表达,可能参与ICR小鼠神经系统发育过程中学习记忆、嗅觉系统及运动功能的调节。 展开更多
关键词 原钙黏蛋白7a 实时荧光定量PCR 原位杂交 神经系统发育 ICR小鼠
CCK-8法检测牛膝醇提物体外诱导兔BMSCs增殖活性的研究
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作者 马笃军 彭力平 +4 位作者 裴军宇 李明华 徐宁达 王立新 余阗 《湖南中医杂志》 2016年第10期187-189,共3页
目的:研究牛膝醇提物含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖的影响。方法:采用高、中、低剂量牛膝醇提物以及等体积生理盐水对SD级新西兰大白兔进行灌胃,从中提取含药血清,同时采用贴壁筛选法培养兔骨髓间充质干细胞,并以4种... 目的:研究牛膝醇提物含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖的影响。方法:采用高、中、低剂量牛膝醇提物以及等体积生理盐水对SD级新西兰大白兔进行灌胃,从中提取含药血清,同时采用贴壁筛选法培养兔骨髓间充质干细胞,并以4种不同浓度的含药血清及胎牛血清分别干预第三代骨髓间充质干细胞。于干预后第3、6、9天分别3次采用CCK-8法测定细胞光密度值(OD),比较各组间的差异。结果:高剂量组牛膝醇提物含药血清刺激骨髓间充质干细胞增殖,并促进细胞分化,其OD均值与其他组相比较最高,差异均具有统计学意义(P〈0.05)。结论:牛膝醇提物含药血清具有促进BMSCs增殖作用,其中高剂量作用最强。 展开更多
关键词 牛膝醇提物 骨髓间充质干细胞 CCK-8法 细胞增殖与分化
特应性皮炎患者血清microRNA的差异性表达
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作者 张李娟 陈小帆 +1 位作者 张杰 张伟 《中华实用诊断与治疗杂志》 2016年第8期757-759,共3页
目的 探讨深圳地区特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)患者血清microRNA(miRNA)表达差异,为AD的早期诊断提供生物标志物。方法 提取500例AD患者(AD组)和200例正常人(正常对照组)血清总RNA并进行miRNA测序,用实时荧光定量PCR验证... 目的 探讨深圳地区特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)患者血清microRNA(miRNA)表达差异,为AD的早期诊断提供生物标志物。方法 提取500例AD患者(AD组)和200例正常人(正常对照组)血清总RNA并进行miRNA测序,用实时荧光定量PCR验证差异表达的miRNA。结果 与正常对照组相比,AD组患者血清中发现28个具有2倍以上差异的miRNA,其中21个miRNA在外周血血清中含量升高,7个miRNA在外周血血清中含量降低;对28个差异表达的miRNA采用实时荧光定量PCR进行验证,发现hsa-miR-186-5p、hsa-miR-409-3p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-6852-5p表达在AD患者外周血血清中升高。结论hsa-miR-186-5p、hsa-miR-409-3p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-6852-5p在AD的发病过程中可能起关键作用,对AD早期临床诊断有重要意义。 展开更多
关键词 特应性皮炎 MICRORNA 血清标志物
PDZ支架蛋白PDZK1通过PDZ1与PDZ3结构域与磷脂酶Cβ2羧基末端PDZ结合模块相互作用 被引量:2
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作者 严瑾 刘伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期991-998,共8页
磷脂酶Cβ(PLCβ)在G蛋白偶联受体(GPCR)介导的细胞信号转导中发挥重要作用.通过水解磷脂酰肌醇4,5二磷酸(PIP2),磷脂酶Cβ可以产生3种重要的第二信使分子:二乙酰甘油(DAG)、三磷酸肌醇(IP3)和质子.在果蝇中,磷脂酶Cβ通过... 磷脂酶Cβ(PLCβ)在G蛋白偶联受体(GPCR)介导的细胞信号转导中发挥重要作用.通过水解磷脂酰肌醇4,5二磷酸(PIP2),磷脂酶Cβ可以产生3种重要的第二信使分子:二乙酰甘油(DAG)、三磷酸肌醇(IP3)和质子.在果蝇中,磷脂酶Cβ通过它的羧基末端盘状同源区域结合模块(PBM)与盘状同源区域(PDZ)支架蛋白—失活无后电位D蛋白(INAD)相互作用,从而调节果蝇的光信号传导.在哺乳动物中,磷脂酶Cβ家族有4个亚型,每1个亚型的羧基末端都有1个典型的盘状同源区域结合模块.这一结构特点提示我们,磷脂酶Cβ可能通过其羧基末端的盘状同源区域结合模块与盘状同源区域支架蛋白相互作用,进而调节它们自身的细胞定位和功能.然而,目前仍对哺乳动物磷脂酶Cβ家族的盘状同源区域结合蛋白知之甚少.本文运用分析型凝胶过滤和等温滴定量热技术,系统地研究了不同磷脂酶Cβ亚型的羧基末端盘状同源区域结合模块与不同盘状同源区域蛋白质的结合.结果表明,磷脂酶Cβ2的羧基末端盘状同源区域结合模块,可以特异地与含有4个盘状同源区域的支架蛋白—盘状同源区域蛋白1(PDZK1)以2∶1的方式相互结合.进一步的测定显示,磷脂酶Cβ2羧基末端盘状同源区域结合模块在盘状同源区域蛋白1上的结合位点为第1和第3个盘状同源区域,而它们与磷脂酶Cβ2的解离常数分别为11.8±3.4μmol/L和33.3±8.7μmol/L. 展开更多
关键词 磷脂酶Cβ 盘状同源区域 盘状同源区域蛋白1
牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞软骨定向分化的实验研究 被引量:3
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作者 马笃军 彭力平 +5 位作者 王立新 余阗 裴军宇 李明华 徐宁达 肖伟 《中国中医骨伤科杂志》 CAS 2017年第2期6-11,共6页
目的:观察牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)软骨定分化的作用。方法:密度梯度离心联合骨髓贴壁法分离培养新西兰大白兔BMSCs,取P3代细胞随机分成5组(空白组、完全诱导组、牛膝醇提物低剂量组、牛膝醇提物中剂量组、牛膝醇... 目的:观察牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)软骨定分化的作用。方法:密度梯度离心联合骨髓贴壁法分离培养新西兰大白兔BMSCs,取P3代细胞随机分成5组(空白组、完全诱导组、牛膝醇提物低剂量组、牛膝醇提物中剂量组、牛膝醇提物高剂量组),连续诱导培养21d,倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫细胞学检测Ⅱ型胶原蛋白荧光表达,qRT-PCR检测软骨分化标记基因Sox9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA表达情况,Western Blot检测Sox9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白表达水平。结果:牛膝醇提物高、中、低剂量组与空白组相比Ⅱ型胶原蛋白荧光阳性表达明显;牛膝醇提物高、中剂量组与空白组相比软骨分化标记基因Sox9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原明显增加(P〈0.05),Western Blot验证Sox9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白表达明显(P〈0.05),其中牛膝醇提物高剂量组效果最佳(P〈0.01),与完全诱导组比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:牛膝醇提物能够诱导兔BMSCs成软骨分化,其具体作用机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 牛膝醇提物 怀牛膝 骨髓间充质干细胞 软骨分化
果蝇TRP离子通道C端一个新钙调蛋白结合位点的鉴定和分析 被引量:1
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作者 郑云华 刘伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期790-797,共8页
瞬时受体电位(TRP)通道是一类钙离子透过性的阳离子通道蛋白家族,参与了视觉、味觉、温度感受等重要的生物学过程。之前的研究表明,钙离子既能够正反馈也能够负反馈地调节瞬时受体电位通道的活性,而这种调节可能是通过钙调蛋白(calmo... 瞬时受体电位(TRP)通道是一类钙离子透过性的阳离子通道蛋白家族,参与了视觉、味觉、温度感受等重要的生物学过程。之前的研究表明,钙离子既能够正反馈也能够负反馈地调节瞬时受体电位通道的活性,而这种调节可能是通过钙调蛋白(calmodulin,CaM)与TRP通道的相互作用来进行的。为了阐明这一调控机制,我们首先需要对钙调蛋白与瞬时受体电位通道之间的相互作用进行详细的生化研究。在此项研究中,通过大肠杆菌表达系统,表达和纯化了果蝇瞬时受体电位通道羧基末端不同长短的蛋白片段,并发现了一个新的钙调蛋白结合位点。通过快速蛋白液相色谱、静态光散射以及等温量热滴定技术,鉴定了这一钙调蛋白结合位点与果蝇瞬时受体电位通道之间的相互作用,发现它们在钙离子依赖的条件下,可以形成亲和力非常强的稳定的蛋白复合物(解离常数在0.1~1微摩尔范围)。此外,通过合成多肽的方法,鉴定了果蝇瞬时受体电位通道913~939片段为该钙调蛋白结合位点的核心区域。最后,通过突变实验,进一步明确了果蝇瞬时受体电位通道922位的酪氨酸以及923位的缬氨酸为其钙调蛋白结合位点的关键氨基酸。总而言之,本研究发现和鉴定了果蝇瞬时受体电位通道上一个新的钙依赖的钙调蛋白结合位点,这一发现将为研究瞬时受体电位通道的体内功能提供生化基础,为阐明钙离子通过钙调蛋白调节瞬时受体电位通道的分子机制做出贡献。 展开更多
关键词 瞬时受体电位通道 钙调蛋白结合位点 钙调蛋白
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