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孕烷X受体配体结合结构域蛋白晶体的X线衍射结构解析 预览
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作者 冯帆 姜棋予 +4 位作者 孙慧伟 王祥喜 申立军 辛绍杰 李伯安 《生物技术通讯》 CAS 2019年第3期365-370,共6页
目的:利用X线衍射技术解析孕烷X受体(PXR)配体结合结构域(LBD)蛋白晶体的3维结构。方法:对PXR蛋白LBD(130~434氨基酸残基)序列进行密码子优化并化学合成后克隆至pRSFDuet-1表达载体,再将载体导入大肠杆菌BL21(DE3),对PXR-LBD蛋白进行原... 目的:利用X线衍射技术解析孕烷X受体(PXR)配体结合结构域(LBD)蛋白晶体的3维结构。方法:对PXR蛋白LBD(130~434氨基酸残基)序列进行密码子优化并化学合成后克隆至pRSFDuet-1表达载体,再将载体导入大肠杆菌BL21(DE3),对PXR-LBD蛋白进行原核表达与分离纯化;采用晶体筛选试剂盒筛选蛋白结晶条件,采用悬滴法获得目标蛋白的晶体;对获得的蛋白晶体进行X线晶体衍射检测,并收集相关数据建立PXR-LBD的三维结构。结果:获得了PXR-LBD的高质量晶体并利用X线衍射解析了该蛋白质晶体的结构数据,使用Phenix.refine软件和COOT软件等对结构进行修正,最终获得了高分辨率的3维结构数据。结论:完成了孕烷X受体配体结合结构域蛋白晶体的X线衍射结构解析,为研究和开发PXR相关药物奠定了基础。 展开更多
关键词 孕烷X受体 X线衍射 蛋白质晶体 三维维结构解析
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瑞戈非尼抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的研究 预览
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作者 武瑾 赵鹏 +5 位作者 姜棋予 马燕 张木子荷 王威 李树 郭妤姝 《生物技术通讯》 CAS 2019年第1期10-14,19共6页
目的:利用裸鼠皮下成瘤动物模型及裸鼠肝脏原位多发与弥散模型,探索新型分子靶向药物瑞戈非尼对三阴性乳腺癌MDA-MB-231增殖的抑制作用,确定其分子机制。方法:培养获得人高侵袭性三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,经BALB/c裸鼠皮下注射形成... 目的:利用裸鼠皮下成瘤动物模型及裸鼠肝脏原位多发与弥散模型,探索新型分子靶向药物瑞戈非尼对三阴性乳腺癌MDA-MB-231增殖的抑制作用,确定其分子机制。方法:培养获得人高侵袭性三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,经BALB/c裸鼠皮下注射形成皮下肿瘤,或经肝门静脉注射形成肝脏多发、弥散的肿瘤模型。给予瑞戈非尼灌胃给药治疗,3周后解剖,测量肿瘤体积并称重;或进行PET/CT检测,对核素强度、散发肿瘤占肝脏面积进行定量。通过定量PCR(qPCR)实验验证上皮-间质转化标志物与转移、侵袭相关标志物的表达水平。结果:在裸鼠皮下成瘤模型以及裸鼠肝脏原位多发与弥散肿瘤模型中,瑞戈非尼隔日灌胃给药持续3周能够显著抑制MDA-MB-231的增殖;皮下肿瘤体积、重量,以及裸鼠肝脏PET/CT检测显示瑞戈非尼持续给药组的相对核素强度均明显低于对照组;qPCR实验反映出瑞戈非尼能够抑制MDA-MB-231的上皮-间质转化与转移、侵袭作用。结论:揭示了瑞戈非尼对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231的增殖抑制作用,初步探索了其分子机制,为瑞戈非尼应用于三阴性乳腺癌的治疗提供参考。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 分子靶向药物 瑞戈非尼 上皮-间质转化 转移侵袭
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利用长距离PCR扩增国内肠道病毒流行株基因组方法的建立和评价 预览
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作者 姜棋予 冯帆 +4 位作者 柴燕涛 孙慧伟 貌盼勇 侯俊 伯晓晨 《生物技术通讯》 CAS 2019年第3期326-331,共6页
目的:通过调查近年来我国肠道病毒EV-71型和柯萨奇病毒A16型流行株的全基因组序列,建立一种能够获得我国肠道病毒序列的通用扩增方法,为今后的手足口病流行病学分析、致病机理研究等打下基础。方法:收集我国近5年各地报道的肠道病毒流... 目的:通过调查近年来我国肠道病毒EV-71型和柯萨奇病毒A16型流行株的全基因组序列,建立一种能够获得我国肠道病毒序列的通用扩增方法,为今后的手足口病流行病学分析、致病机理研究等打下基础。方法:收集我国近5年各地报道的肠道病毒流行株全基因组序列作为参考序列进行比对分析,在保守区设计通用引物,利用3'RACE、长距离PCR扩增及简并引物扩增肠道病毒全基因组序列,采用IonTorrentPGM二代测序仪对扩增产物进行深度测序,以对扩增方法进行验证和评价。结果:通过比对肠道病毒流行株序列设计了通用扩增引物,经二代测序实验获得了肠道病毒全基因组序列;以系列比例模拟混合病毒感染,该扩增方法能够同时获得2株肠道病毒的全基因组序列;能够完整地揭示肠道病毒重组情况。结论:建立了针对我国近年来肠道病毒流行株的通用全基因组扩增方法,在病毒培养液中肠道病毒的提取与扩增中显示了较高的灵敏度,能够反映混合病毒感染、重组病毒的情况。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒 二代测序 全基因组
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血清白细胞介素-6和γ-谷氨酰转移酶联合检测对TACE治疗AFP阴性肝癌患者的疗效与预后评价 预览
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作者 王京艳 王华明 +5 位作者 刘妍 杨锐创 周霖 杨慧银 刘春梓 徐东平 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期394-399,共6页
目的分析多个血清标志物联合检测对甲胎蛋白(AFP)阴性原发性肝癌患者经导管肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗后疗效及预后的临床价值。方法纳入解放军总医院第五医学中心2016年9月至2018年3月接受TACE治疗的120例肝细胞癌(HCC)患者,其中44例... 目的分析多个血清标志物联合检测对甲胎蛋白(AFP)阴性原发性肝癌患者经导管肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗后疗效及预后的临床价值。方法纳入解放军总医院第五医学中心2016年9月至2018年3月接受TACE治疗的120例肝细胞癌(HCC)患者,其中44例AFP水平正常(AFP阴性),76例AFP水平增高(AFP阳性),分别检测患者TACE术前、术后1个月和3个月的血清AFP、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原-199(CA199)、CA125、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α等指标水平。随访至2018年7月,观察患者肿瘤活性情况,分析不同标志物组合对AFP阴性HCC患者TACE术后疗效及预后的临床价值。结果 AFP阴性和阳性患者术前各项指标水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。IL-6联合GGT检测AFP阴性和阳性HCC患者TACE术后疗效及预后的灵敏度、特异度、阴性预测值、阳性预测值分别为95.2%、87.0%、87.0%、95.2%和85.7%、59.6%、70.1%、79.1%;IL-6对AFP阴性及阳性HCC患者预后的ROC曲线下面积分别为0.839和0.666。结论血清IL-6联合GGT检测可作为一种预测AFP阴性HCC患者TACE术后疗效及肿瘤活性的有效指标。 展开更多
关键词 甲胎蛋白 白细胞介素-6 Γ-谷氨酰转移酶 肝细胞癌
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贝氏柯克斯体九里株Ⅱ相突变体的克隆与鉴定 预览
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作者 何泽民 孙志会 +5 位作者 于永慧 罗声栋 王益清 王景林 姜永强 宋立华 《生物技术通讯》 CAS 2019年第2期170-174,共5页
目的:克隆分离国内贝氏柯克斯体九里株Ⅱ相突变体,并利用基因组测序方法进行鉴定,为贝氏柯克斯体研究提供参考依据。方法:用半固体平板法克隆分离贝氏柯克斯体,对随机选择的克隆株CB01进行全基因组测序分析,将测序结果与国外贝氏柯克斯... 目的:克隆分离国内贝氏柯克斯体九里株Ⅱ相突变体,并利用基因组测序方法进行鉴定,为贝氏柯克斯体研究提供参考依据。方法:用半固体平板法克隆分离贝氏柯克斯体,对随机选择的克隆株CB01进行全基因组测序分析,将测序结果与国外贝氏柯克斯体不同克隆株的基因组进行比较分析。结果:CB01的基因组全长2.024Mb,包含1个1.987Mb的环状染色体和1个37.321kb的质粒。与九里株Ⅰ相菌(RSA493克隆)基因组相比,CB01多出5个重复序列,有1个25997bp的删除区,23个单核苷酸多态性位点(SNP)差异。与九里株Ⅱ相菌(RSA439克隆)基因组相比,CB01同样多出5个重复序列,但仅有6个SNP差异。CB01与RSA439的CBU_0533基因序列完全相同,可解释CB01缺失O抗原从而成为Ⅱ相菌。结论:贝氏柯克斯体九里株Ⅱ相菌克隆CB01与国外Ⅱ相菌RSA439高度同源,CB01可用做国内贝氏柯克斯体研究用参考菌株。 展开更多
关键词 贝氏柯克斯体 Q热 全基因组测序 适应性变异
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阿霉素载药微球在免疫缺陷大鼠肝脏原位肿瘤组织内缓释作用与长效抗肿瘤活性研究 预览
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作者 武瑾 赵鹏 +5 位作者 姜棋予 马燕 张木子荷 李树 王威 郭妤姝 《生物技术通讯》 CAS 2018年第6期809-813,共5页
目的:建立免疫缺陷大鼠肝脏原位肿瘤模型,以阿霉素为模型药物,在肿瘤组织注射吸附有阿霉素的载药微球,建立肿瘤组织内抗肿瘤药物缓释与长效作用的研究方法。方法:利用MHCC-97H高侵袭肝细胞癌细胞系在免疫缺陷裸鼠皮下成瘤后,解剖瘤块并... 目的:建立免疫缺陷大鼠肝脏原位肿瘤模型,以阿霉素为模型药物,在肿瘤组织注射吸附有阿霉素的载药微球,建立肿瘤组织内抗肿瘤药物缓释与长效作用的研究方法。方法:利用MHCC-97H高侵袭肝细胞癌细胞系在免疫缺陷裸鼠皮下成瘤后,解剖瘤块并切割,种植于免疫缺陷大鼠肝脏原位;进行开腹给药,将阿霉素载药微球精准注射进大鼠肝脏原位肿瘤组织中;收集大鼠血液、肿瘤组织标本等,检测药物在大鼠体内特别是肿瘤组织内的留存情况,最后进行PET/CT小动物活体成像,确定阿霉素载药微球在免疫缺陷大鼠肝脏原位肿瘤组织内缓释作用与长效抗肿瘤活性。结果:通过大鼠肝脏原位接种肝细胞癌瘤块可建立免疫缺陷大鼠肝脏原位肿瘤模型;使用阿霉素载药微球对病灶进行精准给药可实现阿霉素载药微球在体内的缓释作用;索拉非尼(Sorafenib)联用阿霉素载药微球可更显著地抑制大鼠肝脏原位肿瘤的生长。结论:建立了免疫缺陷大鼠肝脏原位肿瘤模型,建立了肿瘤组织内抗肿瘤药物缓释与长效作用的研究方法。 展开更多
关键词 阿霉素缓释 免疫缺陷大鼠肿瘤模型 精准给药 长效抗肿瘤作用
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奥美拉唑诱导非小细胞肺癌细胞对新型分子靶向药物仑伐替尼的耐受 预览
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作者 王琳琳 姜棋予 +1 位作者 秦萌萌 马壮 《生物技术通讯》 CAS 2018年第6期802-808,共7页
目的:检测奥美拉唑对新型分子靶向药物仑伐替尼杀伤非小细胞肺癌(NSCLC)的影响并阐明其分子机制。方法:体外培养人NSCLC细胞系A549和H460,用奥美拉唑处理细胞,检测奥美拉唑对芳香烃受体(AhR)转录因子活性及下游基因表达的影响;在此基础... 目的:检测奥美拉唑对新型分子靶向药物仑伐替尼杀伤非小细胞肺癌(NSCLC)的影响并阐明其分子机制。方法:体外培养人NSCLC细胞系A549和H460,用奥美拉唑处理细胞,检测奥美拉唑对芳香烃受体(AhR)转录因子活性及下游基因表达的影响;在此基础上用奥美拉唑及仑伐替尼处理A549、H460细胞,检测奥美拉唑对仑伐替尼杀伤A549、H460细胞的影响;培养A549、H460细胞接种免疫缺陷裸鼠后,灌胃给予动物奥美拉唑和仑伐替尼,确定奥美拉唑对仑伐替尼抑制A549、H460细胞皮下肿瘤形成的影响。结果:奥美拉唑能够在A549、H460细胞中上调AhR的转录因子活性及下游基因表达;仑伐替尼能够剂量依赖地杀伤A549、H460细胞,用奥美拉唑处理A549、H460细胞能够显著下调仑伐替尼对细胞的杀伤作用;裸鼠成瘤实验显示,口服给予裸鼠奥美拉唑能够下调仑伐替尼对A549、H460细胞在裸鼠皮下的成瘤的杀伤作用;分子机制实验显示,奥美拉唑以AhR依赖的方式诱导A549、H460细胞对仑伐替尼的耐受作用。结论:奥美拉唑诱导非小细胞肺癌细胞A549、H460对分子靶向药物仑伐替尼的耐受。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 仑伐替尼 奥美拉唑 芳香烃受体 药物耐受
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C基因型多重耐药乙型肝炎病毒稳定复制表达小鼠模型的建立 预览
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作者 刘璐洁 杨悦 +7 位作者 余双庆 许智慧 赵丽 刘新光 吴小兵 徐东平 董小岩 刘妍 《传染病信息》 2018年第6期532-536,共5页
目的建立高嗜肝性重组8型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus8,rAAV8)介导的C基因型多重耐药乙型肝炎病毒(multidrug resistant hepatitis B virus,MDR HBV)稳定复制表达小鼠模型.方法分别构建rAAV8-1.3倍C基因型多重耐药型... 目的建立高嗜肝性重组8型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus8,rAAV8)介导的C基因型多重耐药乙型肝炎病毒(multidrug resistant hepatitis B virus,MDR HBV)稳定复制表达小鼠模型.方法分别构建rAAV8-1.3倍C基因型多重耐药型(HBV逆转录酶区含有rtL180M+S202G+M204V+N236T位点)和野生型HBV重组质粒,然后包装纯化并筛选高滴度重组病毒(rAAV8-1.3HBV-C-MDR和rAAV8-1.3HBV-C-WT),将病毒经尾静脉注射至6~8周龄的C57BL/6小鼠,建立C基因型多重耐药型(实验组,n=6)和野生型(对照组,n=6)HBV稳定复制表达小鼠模型,监测病毒复制和抗原表达至9周并于第9周末处死小鼠,取肝脏组织进行HE染色和免疫组化染色,观察肝组织病理改变并分析HBsAg和HBcAg的表达.结果小鼠注射重组病毒后第2、3、5、7、9周,血清HBV DNA表达较稳定,实验组和对照组小鼠血清HBV DNA波动范围分别为3.67~4.06lg IU/ml和4.36~5.11lg IU/ml.血清HBsAg和HBeAg在观察期间均高表达,第2周实验组和对照组血清HBsAg和HBeAg OD值分别为3.501±0.230和2.989±0.250,3.967±0.230和3.384±0.230.2组小鼠肝组织未见明显的炎性细胞浸润及组织结构异常,但可检测到HBsAg和HBcAg蛋白表达.结论利用高嗜肝性rAAV8载体携带1.3倍C基因型MDR HBV基因组体内转导C57BL/6小鼠,成功建立了稳定复制并持续表达C基因型MDR HBV的小鼠模型,为后续评价抗MDR HBV药物疗效提供实验平台. 展开更多
关键词 多重耐药突变 乙型肝炎病毒 病毒复制 抗原表达 小鼠模型
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